酶联免疫法监测肝移植术后他克莫司血药浓度

[目的]为使用他克莫司的肝移植患者制定有效的治疗窗浓度.[方法]用酶联免疫法测定全血他克莫司谷浓度,并对他克莫司谷浓度的监测结果进行回顾性分析.[结果]他克莫司治疗窗浓度范围为：第1个月内为10～17 ng/mL,第2～3个月为9～11 ng/mL,4～12个月为5～8 ng/mL.[结论]此浓度既能达到满意的免疫抑制效果,又能减少他克莫司的不良反应.     

IL-31和他克莫司对Hacat细胞NT4表达的影响

目的:探讨白介素-31(interleukin-31,IL-31)、他克莫司对角质形成细胞神经营养素-4(neurotrophin-4,NT4)表达的影响。方法:培养人角质形成细胞株(Hacat细胞),采用不同浓度他克莫司作用24 h,噻唑蓝比色法(MTT法)检测细胞增殖活性。IL-31、他克莫司单独或共同作用于Hacat细胞24 h后,采用real-time PCR法检测NT4 m RNA表达,酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测12、24 h各组细胞上清液中NT4含量。结果:低浓度他克莫司(10、100)ng/ml对细胞活性无明显影响(P>0.05),高浓度(1 000 ng/ml)时细胞活性受到抑制(P=0.002)。IL-31作用Hacat细胞后,其NT4m RNA表达和上清中NT4含量均增加(P<0.05);100 ng/ml他克莫司作用24 h后他克莫司组和联合作用组细胞NT4 m RNA表达量和细胞上清中NT4含量均分别低于对照组和IL-31组(P<0.05)。结论:IL-31可促进角质形成细胞NT4表达,他克莫司可能通过降低角质形成细胞NT4表达水平而发挥其抗瘙痒作用。     

肝移植1例的他克莫司全血浓度监测

目的为了避免他克莫司的不良反应,对使用他克莫司的肝移植患者实施治疗药物监测。方法用微粒子酶免疫法测定肝移植患者口服他克莫司后的全血谷浓度,并观察排斥反应的发生及药物的不良反应。结果他克莫司的血药浓度在术后一月后应维持在15～20μg.L-1。当肝移植患者被给予他克莫司、泼尼松和骁悉,其浓度与剂量存在正相关。结论对于肝移植患者,他克莫司的全血药物浓度监测是很必要的。     

HPLC检测他克莫司软膏剂中他克莫司的含量

目的 建立并验证高效液相色谱法检测他克莫司软膏中他克莫司的含量.方法 Ultimate(R) XB-Diol色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相为正己烷-正丁基氯-乙腈;检测波长 225 nm;流速 1.7 mL/min;温度:室温.结果 他克莫司的线性范围Y=2 600.7X-583.82,相关系数...     

酶增强免疫分析法测定环孢素A和他克莫司血药浓度的质量控制

目的 评价和分析酶增强免疫分析法（EMIT）监测患者全血中环孢素A（Cs A）和他克莫司浓度的室内质控结果。方法 对四川省医学科学院·四川省人民医院药学部实验室2013年6月~2014年9月作Cs A和他克莫司血药浓度监测的随行质控结果进行评价与分析,建立常规中心线及控制限,绘制质控图。结果 Cs A和他克莫司低、中、高3个水平的常规中心线分别为69.19、159.41、388.11 ng/m L和5.21、9.20、19.34 ng/m L;Cs A的低、中、高浓度的日内和日间精密度的RSD分别为10.38%、8.61%、9.40%和16.10%、13.31%、12.64%,相对回收率分别为95.26%、110.65%、107.51%和104.80%、98.30%、98.18%;他克莫司的低、中、高浓度的日内和日间精密度的RSD分别为10.21%、8.69%、4.29%和19.93%、14.02%、13.96%,相对回收率分别为117.20%、107.55%、103.47%和112.20%、105.00%、104.00%,均符合《中国药典》2010年版的要求。运用Westgard多规则控制方法对质控结果进行分析检出Cs A失控2次;他克莫司失控7次。结论 EMIT测定Cs A和他克莫司血药浓度具有较好的精密度和稳定性,适于临床开展治疗药物监测,但应建立质控方法对质控结果进行评估,以保证实验室测定数据的准确性,为临床提供准确的监测结果。     

液质联用法同时测定人血中他克莫司及肌酐的浓度

目的：建立应用液相色谱质谱联用仪（LC-MS/MS）同时测定人血中他克莫司及肌酐含量的方法,并应用于他克莫司的治疗药物监测。方法：以子囊霉素为内标,选择液液萃取法提取样品,以ESI源正离子模式,甲醇-水（85∶15）为流动相进行检测。结果：人血中他克莫司及肌酐的线性范围及定量限均符合测定要求,日内、日间精密度及基质效应<15%,内源性物质对肌酐及他克莫司无干扰。结论：本方法快速、灵敏、专属性强且重现性好,可用于人血中他克莫司及肌酐的同时测定。     

肾病综合征患儿他克莫司血药浓度监测与临床疗效分析

目的观察肾病综合征(NS)患儿他克莫司血药浓度监测并分析其与临床疗效的关系。方法病例源于2015年1月至2019年1月该院收治的60例NS患儿,入组患儿均给予四联免疫抑制方案(他克莫司、强的松以及双嘧达莫、降脂类药物)治疗,观察入组患儿临床治疗疗效并监测他克莫司的血药浓度,分析两者间的关系。结果该组60例NS患儿,总有效率75.00%(45/60),完全缓解(CR)者给药后第1、2、3周他克莫司血药浓度较部分缓解(PR)、未缓解(NR)明显高,且PR者也明显高于NR者(P0.05),不同疗效患儿的总不良反应发生率差异无统计学意义(P0.05),ROC曲线分析提示他克莫司治疗NS有效的血药浓度临界值为4.83 ng/mL;Spearman相关分析显示,NS患儿疗效与他克莫司血液浓度呈明显的正相关(r=0.445, P0.05)。结论他克莫司治疗NS患儿的疗效佳,且其疗效与他克莫司的血药浓度呈明显的正相关。     

他克莫司治疗特发性膜性肾病的临床疗效观察

目的观察他克莫司（Tacrolimus）治疗有肾病综合征表现的特发性膜性肾病的临床疗效和安全性，并与来氟米特（LEF）进行比较。方法将表现为肾病综合征的特发性膜性肾病患者20例随机分为他克莫司治疗组（n=10）和LEF治疗组（n=10），分别给予他克莫司及LEF联合强的松治疗6个月，观察各组的疗效、不良反应以及他克莫司的浓度变化。结果他克莫司治疗组治疗6个月后5例完全缓解，24h尿蛋白量和血清白蛋白的水平完全恢复到正常范围，占50％；4例部分缓解，24h尿蛋白量在0．4～3．0g之间，血清白蛋白〉30g／L，占40％；1例无效，24h尿蛋白定量〉3．0g，占10％；治疗期间他克莫司的平均药物浓度保持在5～7ng／ml的水平。LEF治疗组在疗程结束时，有2例病人获得完全缓解，占20％；3例获得部分缓解，占30％；5例无效，占50％。结论与LEF相比。他克莫司治疗特发性膜性肾病，可明显缓解病情，不良反应少。     

他克莫司与环磷酰胺诱导治疗狼疮肾炎的短期疗效比较

目的比较他克莫司与环磷酰胺诱导治疗狼疮肾炎的短期疗效和安全性。方法选取2013年11月—2016年10月西安141医院肾脏内科治疗的狼疮肾炎患者186例作为研究对象,随机数字表法分为他克莫司治疗组(n=93)与环磷酰胺治疗组(n=93)。他克莫司组予他克莫司静脉滴注,起始剂量为0.05 mg·kg~(-1)·d~(-1),每天2次,间隔12 h,使血药谷浓度达5~10 ng/ml。环磷酰胺组接受环磷酰胺静脉滴注,起始剂量750 mg/m~2,之后每4周调整500~1000 mg/m~2。2组患者均同时服用泼尼松,初始剂量1 mg·kg~(-1)·d~(-1)。2组均治疗6个月。观测比较临床疗效、实验室指标(血清尿蛋白、白蛋白、肌酐、补体C3)、系统性红斑狼疮疾病活动度指数(SLEDAI)及不良反应。结果治疗6个月后,他克莫司组患者完全缓解率与总有效率均显著高于环磷酰胺组(51.6%vs.35.5%,χ~2=6.921,P=0.027;91.4%vs.78.5%,χ~2=7.508,P=0.011)。治疗1个月后,他克莫司组的尿蛋白定量显著低于环磷酰胺组[(2.80±0.64)g/24 h vs.(3.72±0.95)g/24 h,t=7.745,P=0.000]。血清白蛋白显著高于环磷酰胺组[(32.8±5.6)g/L vs.(26.2±4.9)g/L,t=8.554,P=0.000]。诱导治疗6个月后,他克莫司组的血清补体C3水平显著高于环磷酰胺组[(986.0±193.8)mg/L vs.(862.7±146.3)mg/L,t=5.030,P=0.021]。他克莫司组发生白细胞减少症和胃肠道症状的患者比例低于环磷酰胺组(χ~2=6.866、7.359,P=0.026、0.014)。结论他克莫司联合泼尼松诱导治疗狼疮肾炎的疗效优于环磷酰胺联合泼尼松治疗,且安全性更佳。     

HPLC法测定全血中吲达帕胺的浓度

目的建立吲达帕胺全血浓度测定的HPLC法,并用上述方法进行吲达帕胺人全血浓度的测定及药代动力学研究。方法采用Eurospher-100C 150mm×4.6mm I.D.,5μm C18色谱柱;磷酸二氢钠（0.05mol/L,pH3.0）∶甲醇∶异丙醇（54∶40∶6）作流动相,流速：1ml/min;检测波长：241nm;柱温：20℃;以外标法定量。全血样品碱化后加乙酸乙酯萃取,进行HPLC分析。结果本研究建立了吲达帕胺全血浓度测定的HPLC方法,该法在5.0～160.0 ng/ml浓度范围内线性关系良好,r=0.9984,最低定量浓度5.0 ng/ml;精密度试验测得其日内、日间相对标准差（RSD%）均小于6%;低、中、高三个浓度的准确度为100.8%～106.3%;三个浓度的提取回收率为72.6%～80.2%。结论本文建立的测定全血中吲达帕胺浓度的HPLC方法简便易行、方便快捷。     

双抗夹心ELISA法检测骨唾液酸蛋白的初步建立

目的 建立快速检测骨唾液酸蛋白的酶联免疫吸附试验（ELISA）检测方法,为试剂盒的研制奠定基础。方法 用鼠抗人骨唾液酸蛋白（BSP）单克隆抗体包被酶标板,兔抗人BSP检测,辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗鼠二抗与兔抗人BSP相结合,初步建立BSP的双抗夹心ELISA检测方法。结果 自建双抗夹心ELISA法检测骨唾液酸蛋白的灵敏度为1.5ng/ml,标准曲线的线性范围为2-100ng/ml,回归方程y=0.2548x+0.0775 (r=0.992);批内批间变异系数分别为4.6％-5.4％和5.2％-7.1％,对人血清做50、25和10ng/ml三个加标浓度的回收率实验,回收率在47.2％-101％之间;4℃有效期至少360天。结论：成功建立双抗夹心ELISA检测BSP的方法。     

流动注射氢化物原子吸收法测定螺旋藻片中砷的含量

螺旋藻片是由颤藻科原生生物钝顶螺旋藻Spirulinaplaensis的干燥藻体制成的制剂。螺旋藻含有丰富的营养成分，具有益气养血，健脾化痰，调节机体免疫功能。用于病后体虚，血小板低下，高血脂症，以及肿瘤化疗后引致免疫功能低下的辅助治疗。为了更好地控制产品的质量，我们参考文献[1，2]，对其有害元素砷的含量测定方法进行了研究。1实验部分1．1仪器与条件岛津AA－670G原子吸收分光光度计，岛津砷空心阴极灯；WHG－102A型流动注射氢化物发生器以及电加热T型石英管（145mm×8mm）（北京瀚时制作所研制）；0～250V可变交流变压器。检测…     

ICA和RIA及ELISA法测定CEA的比较

目的:比较测定癌胚抗原(CEA)的3种方法:磁粒子捕获免疫发光法(ICA)、放射免疫法(RIA)与酶联免疫吸附法(ELISA)。方法:分别进行线性、精密度、对比试验比较。结果:3种方法曲线相似但线性范围不同,ICA法最宽。精密度试验中ICA法批内为1.2%,批间为4.4%;RIA法批内为3.5%,批间为8.6%;ELISA法批内为13.6%,批间为20.1%。比较试验显示RIA与ICA的结果相关性比RIA与ELISA好。结论:ICA法测定CEA优于RIA和ELISA法。     

酶联免疫吸附法检测雨生红球藻超临界提取物中微囊藻毒素含量

建立酶联免疫吸附法检测雨生红球藻超临界提取物中微囊藻毒素含量方法,并进行了方法学验证,标准曲线为y=-2．5032x＋2．504,R2=0．9994,检测范围0．1ng／mL～2ng／mL,平均加样回收率为93．3％,结果表明该方法准确可靠。运用该方法对10批20个样品进行了微囊藻毒素含量检测,均未检出囊藻毒素,表明采用超临界方法提取的雨生红球藻产品未受到微囊藻毒素污染,可以安全食用。     

微粒子酶联免疫吸附法测定西罗莫司血药浓度的方法学评价

目的:通过西罗莫司(S irolimous)试剂盒的化学性能测定,评价微粒子酶联免疫吸附法测定的可靠性。方法:用本方法在雅培IMX分析仪上对西罗莫司血药浓度的精密度、回收率、线性、相关性等指标进行评价。结果:本方法的评价表明,批内变异系数分别为2.4%,6.5%,1.8%,批间变异系数分别为8%,10.33%,11.9%,在1.5~30 ng/m l范围内,线性良好。与高效液相色谱法测定相关性良好(r=0.9361)。结论:该方法操作简便、快速、准确,适用于临床上对肾移植患者西罗莫司药谷浓度的监测。     

化学比色法测定血清碳酸氢根的方法学研究

目的建立一种新的血清碳酸氢根（HCO3-）测定方法。方法应用自配试剂建立两步终点测定法,可满足全自动和手工半自动测定,并对本方法进行方法学评价。结果本法比色液吸收峰556~558nm,线性范围1~50 mmol/L,批内CV 2.56%,批间CV 3.55%,回收率96~103%,与血气分析仪（X）相关良好,Y=0.48＋0.989X,r=0.982（n=40）,脂血、溶血、黄疸标本对结果无影响,健康人静脉HCO3-浓度x珋±s=25.76±2.26 mmol/L。结论本法操作简便,结果准确,试剂稳定,成本低廉,适合各级医院常规和急症使用。     

急性中毒患者血液毒鼠强的GC/MS检测及临床应用

目的利用气相色谱-质谱（GC/MS）建立一种快速检测中毒患者血液毒鼠强的方法.方法考察5种有机溶剂液-液法提取血液毒鼠强的回收率,研究毒鼠强的线性方程、最低检测限及精密度.结果乙酸乙酯提取毒鼠强的回收率为90.40%,RSD=2.8%,n=5;毒鼠强线性方程为y=156.5x＋236.1,R=0.9988;最低检测限为4ng/ml;日内精密度为RSD为4.3%,日间精密度为RSD为6.7%.解析了毒鼠强质谱图的主要碎片归属.结论所建方法简单快速,灵敏度高,选择性好,可用于临床中毒患者血液毒鼠强的检测.     

胶乳增强免疫比浊法测定心型脂肪酸结合蛋白的方法学评价

目的 对胶乳增强免疫比浊法定量测定血清心型脂肪酸结合蛋白（H-FABP）的方法进行临床实验评价。方法 分析胶乳增强免疫比浊法测定H—FABP的精密度、线性范围、前带反应、回收率和干扰因素,并考察其与酶联免疫吸附法的相关性。结果胶乳增强免疫比浊法测定血清H—FABP批内精密度的高值与低值变异系数分别为0．54％、1．56％;批间精密度的高值与低值变异系数分别为0．58％、1．8％,回收率为96．2％-99．3％。线性测定良好,可检测范围为2．5ng／mL-160ng／mL,标准品曲线回归方程为Y=1．02X＋0．31,标准品检测相关性R2≥0．995。跟国外同类试剂相比较。曲线回归方程为Y=0．97X＋0．13。检测相关性R2=0．998。实验组血清H—FABP检测结果为（78．3±10．4）ng／mL,与对照组相比差异有统计学意义。结论 胶乳增强免疫比浊法测定血清H—FABP快速、准确、可靠,适用于临床急性心肌梗死的早期诊断。     

以他克莫司为基础的不同免疫抑制方案在肝移植后应用的比较研究

目的观察以他克莫司（FK506）为基础的免疫抑制方案在肝移植后合理的联用方法及合适的血药浓度。方法本实验为单中心、随机、开放、前瞻性研究。从2001年2月至2004年7月首次肝移植患者94例,初始给予以他克莫司为基础的免疫抑制方案治疗（二联：联用糖皮质激素;三联：联用麦考吗替酚酯（MMF）＋糖皮质激素;四联：联用MMF＋糖皮质激素,用2个剂量赛尼哌诱导治疗）,比较术后6个月各组之间的有效性与安全性。结果术后6个月内急性排斥反应率：二联25．9％,三联11．1％,四联7．5％;二联组与四联组比差异有显著性（P=0．038）。术后6个月人／肝存活率相同,分别为：二联88．9％,三联92．6％,四联92．5％,P=0．67。高血压发病率分别为：二联37．O％,三联18．52％,四联17．50％,P=0．834。高血糖发病率分别为：二联40．7％,三联33．3％,四联35．O％,P=0．573。手震颤发病率分别为：二联59．3％,三联51．9％,四联47．5％。P=0．639。乙肝再感染率分别为：二联12．O％,三联19．2％,四联7．9％,P=0．339;CMV感染率分别为：二联55．6％,三联59．3％,四联67．5％,P=0．586;细菌感染率分别为：二联48．2％,三联44．4％,四联55％,P=0．680。在术后3个月谷氨酸转氨酶（ALT）水平分别为：二联：64．04-50．9,三联：29．34-23．0,四联：30．004-37．4,P=0．030;四联比二联显著低,P=0．011。血胆固醇（Tch）水平分别为：二联：5．244-1．17,三联：4．704-1．06,四联：4．364-1．09,P=0．005;四联组比二联组显著低。P=0．002。结论以他克莫司为基础的免疫抑制方案应选择低剂量联合应用对移植肝有较好的保护作用,减低对机体的毒副作用。     

基质金属蛋白酶9在粒细胞集落刺激因子诱导的造血干/祖细胞动员中的作用

目的探讨基质金属蛋白酶9(MMP-9)在粒细胞集落刺激因子(G-CSF)诱导的造血干/祖细胞(HSPC)动员中的作用。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫组织化学、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)等方法测定了健康供者稳态及G-CSF动员第5天骨髓、外周血MMP-9蛋白及mRNA水平的变化,比较富含MMP-9的细胞系HT1080无血清培养上清孵育前后CD34+细胞表面CXCR4表达及对基质细胞衍生因子1(SDF-1)的迁移能力的变化,将rhMMP-9与rhSDF-1孵育后应用Western印迹检测MMP-9对SDF-1的降解作用,观察注射MMP-9化学抑制剂(MPI)ο-邻二氮杂菲对G-CSF动员BALB/c小鼠外周血成熟白细胞计数(WBC)和干/祖细胞的数量的影响。结果G-CSF动员第5天,骨髓上清MMP-9浓度增加了6.6倍(P<0.01),骨髓组织表达MMP-9的中性粒细胞明显增多。动员后骨髓单个核细胞MMP-9mRNA表达水平上调(P<0.05)。rhSDF-1与rhMMP-9短期孵育后可被后者降解。HT1080无血清培养上清液能够上调脐血和动员外周血富集的CD34+细胞的CXCR4表达水平(均P<0.05)及增强CD34+细胞向SDF-1浓度梯度迁移能力(均P<0.05),该效应可被MPI阻断(P<0.05)。与G-CSF共注射MPI后BALB/c小鼠外周血成熟WBC(12.3×106/L±1.2×106/L)和造血祖细胞集落形成单位(69U/2×105MNC±3U/2×105MNC)数量显著低于对照组(P<0.05)。结论MMP-9可能通过裂解SDF-1、上调CD34+细胞表面SDF-1特异性受体CXCR4的表达及增强CD34+细胞迁移能力在G-CSF介导的HSPC动员中发挥重要作用。