BMP2在SVZa神经干细胞向神经元分化中的作用

目的 研究BMP2在室管膜前下区(SVZa)神经干细胞向神经元分化中的作用，提高SVZa神经干细胞分化为神经元的比例。方法 体外分离培养SVZa神经干细胞，以不同浓度的BMP2诱导SVZa神经干细胞，采用免疫荧光和流式细胞仪技术，检测SVZa神经干细胞分化为神经元的比例。结果 BMP2浓度为1～10ng/ml时SVZa神经干细胞分化为神经元的比例均高于0ng／ml，10ng／ml时达到最高峰，20～100ng／ml时SVZa神经干细胞分化为神经元的比例亦高于0ng／ml，但呈下降趋势。结论 BMP2可以促进SVZa神经干细胞向神经元分化，可以明显提高分化为神经元的比例。     

Mash1在室管膜前下区神经干细胞向GABA能神经元分化中的作用

目的 研究Mash1在室管膜前下区(anterior subventricular zone, SVZa)神经干细胞向γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid, GABA)能神经元分化中的作用.方法 体外分离培养新生0 d昆明小鼠的SVZa神经干细胞,构建Mash1与绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)正义、反义融合蛋白表达质粒,转染SVZa神经干细胞,GFP 活体荧光标记SVZa神经干细胞,采用流式细胞仪检测在Mash1作用下SVZa神经干细胞分化为神经元的比例和分化为GABA能神经元的比例.结果 pEGFP-Mash1-质粒、pEGFP-Mash1 质粒双酶切鉴定构建成功,核转染结果表明:GFP融合蛋白表达阳性;pEGFP-Mash1 组SVZa神经干细胞分化为神经元的比例明显高于空白对照组(P＜0.05);pEGFP-Mash1-组SVZa神经干细胞分化为神经元的比例明显低于空白对照组;pEGFP-Mash1 组SVZa神经干细胞分化为GABA能神经元的比例明显高于空白对照组(P＜0.05);pEGFP-Mash1-组SVZa神经干细胞分化为GABA能神经元的比例明显低于空白对照组(P＜0.05).结论 pEGFP-Mash1-质粒、pEGFP-Mash1 质粒构建成功;Mash1可以促进SVZa神经干细胞向神经元方向分化,而且主要表现为促进SVZa神经干细胞向GABA能神经元分化.     

室管膜前下区神经干细胞诱导分化为γ-氨基丁酸能神经元的实验研究

目的 研究骨形成蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP2)及星形胶质细胞条件培养液(astrocyte-conditioned mediarn.ACM)在室管膜前下区(anterior subventricular zolle,SVZa)神经干细胞分化为γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid,GABA)能神经元中的作用.方法 体外培养SVZa神经干细胞,分为对照组、BMP2组、ACM组、BMP2+ACM组分别予以诱导分化,通过免疫组化和流式细胞技术分别检测各组SVZa神经干细胞分化后GAD67+细胞的比例.结果 各实验组的GAD67+细胞的比例均明显高于对照组,其中BMP2+ACM组尤其显著,差异有显著性(P<0.05).结论 BMP2及ACM可以促进SVZa神经干细胞向GABA能神经元分化,而且BMP2与ACM有正协同作用.     

BMP2在SVZa神经干细胞向TH+神经元分化中的作用

目的 研究BMP2对室管膜前下区（anterior subventricular zone，SVZa）神经干细胞分化为TH^＋（酷氨酸羟化酶）神经元的作用。方法 体外培养SVZa神经干细胞，以0、0．1、1、10、20、100（ng／m1）浓度的BMP2分别诱导SVZa神经干细胞分化，通过免疫组化和流式细胞仪技术检测不同浓度下SVZa神经干细胞分化为TH^＋神经元的比例。结果0．1—100（ng／ml）组的TH^＋细胞比例均明显高于0ng／ml组，10ng／ml组达最高峰，各组间差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论 BMP2可以促进SVZa神经干细胞向TH^＋神经元分化，可以明显提高分化比例。     

Id2在SVZa神经干细胞向神经元分化中的作用

目的研究DNA结合抑制物2(inhibitor of DNA binding2,Id2)在室管膜前下区(anteriorsubventricularzone,SVZa)神经干细胞向神经元分化中的作用。方法体外分离培养P0昆明小鼠SVZa神经干细胞,正义Id2、反义Id2真核表达质粒转染SVZa神经干细胞,采用流式细胞仪检测在Id2作用下SVZa神经干细胞分化为神经元的比例。采用Western blot检测不同浓度的骨形成蛋白2(bonemorphogenenticprotein2,BMP2)诱导下Id2蛋白的表达变化。结果正义Id2真核表达质粒转染组,SVZa神经干细胞分化为神经元的比例小于空白对照组,反义Id2真核表达质粒转染组,SVZa神经干细胞分化为神经元的比例明显高于空白对照组;随着BMP2浓度的增加,Id2的表达增加。结论Id2抑制体外培养的P0SVZa神经干细胞向神经元方向分化,BMP2可以促进SVZa神经干细胞Id2的表达,它们共同参与调控SVZa神经干细胞向神经元分化的过程。     

SVZa神经干细胞诱导分化为多巴胺能神经元的实验研究

目的研究骨形成蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP2)及星形胶质细胞条件培养液(astrocyte-conditioned medium,ACM)在室管膜前下区(anterior subventricular zone,SVZa)神经干细胞分化为多巴胺能神经元中的作用。方法体外培养SVZa神经干细胞,然后分为对照组、BMP2组、ACM组、BMP2 ACM组,通过免疫组化和流式细胞仪技术检测各组中SV-Za神经干细胞分化为TH (酪氨酸羟化酶)细胞的比例。结果各实验组的TH 细胞比例均明显高于对照组,其中BMP2 ACM组分化比例最高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论BMP2及ACM可以促进SVZa神经干细胞向多巴胺能神经元分化,而且BMP2与ACM有正协同作用。     

BMP-2对室管膜前下区神经干细胞向多巴胺能神经元分化及对DLX5表达的影响

目的 探讨骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)对室管膜前下区(anterior subventricular zone,SVZa)神经干细胞(neural stem cells,NSCs)向多巴胺能神经元分化及对DLX5表达的影响.方法 体外培养SVZa NSCs,分为对照组、BMP-2组、BMP-2+Noggin组和Noggin组,通过免疫荧光染色和流式细胞术,观察其分化为酪氨酸羟化酶阳性(TH+)神经元的情况;用RT-PCR检测DIX5 mRNA表达水平.结果 BMP-2组SVZa NSCs向TH+神经元分化的比例和DLX5 mRNA表达水平均显著高于对照组(P<0.05),且这种效应能被其拮抗剂Noggin特异性抑制.结论 BMP-2可能通过上调DLX5表达水平从而促进SVZa NSCs向多巴胺能神经元分化.     

不同浓度GDNF诱导神经干细胞向多巴胺能神经元分化研究

目的观察不同浓度胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对神经干细胞(NSCs)向多巴胺(DA)能神经元分化的影响。方法取新生鼠脑组织体外分离培养NSCs,第2代NSCs诱导培养基中分别加入0、5、10、20 ng/mL GDNF进行诱导。用逆转录-聚合酶链反应检测诱导后细胞酪氨酸羟化酶(TH)mRNA的表达,免疫细胞化学染色鉴定NSCs,检测NSCs向DA能神经元分化率。结果各诱导组均表达TH mRNA。神经球具有自我更新和表达巢蛋白的能力,诱导分化后的细胞能表达神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞特异性抗原。与空白对照组比较,GDNF诱导组TH阳性细胞率均明显升高(P<0.05);且10、20ng/mL GDNF诱导组升高幅度明显高于5 ng/mL GDNF诱导组(P<0.05),10、20 ng/mL GDNF诱导组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论从新生鼠脑组织分离出NSCs。不同浓度的GDNF均能促进NSCs向DA能神经元分化,GDNF浓度从10ng/mL提高到20 ng/mL时TH阳性细胞率无明显变化。     

谷氨酸和γ-氨基丁酸对神经干细胞分化的影响

目的 探讨谷氨酸和γ-氨基丁酸对海马神经干细胞诱导分化的影响.方法 取新生Wistar小鼠海马组织,进行体外培养,分成5 μmol/L(A组)、25μmol/L(B组)浓度的谷氨酸和5μmol/L(C组)、25 μmol/L(D组)浓度的γ-氨基丁酸4个组及空白对照组(E组),分别对神经干细胞进行诱导分化,于分化的第7和14天用免疫荧光染色方法观察神经干细胞分化成神经元和神经胶质细胞的比例.结果 在分化的第7天,免疫荧光显示,A、B、C、D组神经元比例即微管相关蛋白2ab(MAP2ab)阳性率均高于E组(P<0.05).且B、D两组神经元比例即MAP2ab阳性率均分别高于A、C组(P<0.05).而分化的第14天,神经元比例明显降低,但仍高于E组(P<0.05),而神经胶质细胞增多,且A、C两组神经元比例即MAP2ab阳性率均分别高于B、D组(P<0.305).结论 谷氨酸、γ-氨基丁酸均促进神经干细胞向神经元方向分化,但最佳浓度可能随分化时间的不同而进行调整.     

bFGF促进大鼠骨髓间充质干细胞向神经元转化及机制

目的探讨碱性成纤维生长因子对大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元的作用及信号通路.方法利用bFGF与不同生长因子和化学诱导剂组合诱导间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)向神经元转化,观察分化过程中细胞形态、数目的变化,观察免疫细胞化学检测分化后细胞神经细胞标志蛋白和部分神经功能相关蛋白以及FGFR的表达情况,并计算转化率.结果①3组不同条件诱导后,MSCs均能分化为具有典型神经元形态的细胞,并明显表达NSE、MAP2和5-HT1D,但不表达GFAP;②bFGF预诱导组的转化率明显高于未预诱导组;③诱导后的神经元样细胞FGFR3表达明显增强.结论以DMSO和BHA为基础诱导剂,bFGF预处理可明显提高MSCs跨胚层分化为神经元样细胞的转化率,浓度为10 ng/ml的bFGF主要是通过FGFR3作用于MSCs.     

脂肪源性神经干细胞诱导分化为γ-氨基丁酸能神经元的体外研究

目的探讨诱导脂肪源性神经干细胞(neural stem cells,NSCs)分化为GABA能神经元的体外培养方法,为细胞移植修复神经系统损伤提供种子细胞。方法贴壁培养C57BL/6小鼠(附睾脂肪垫)脂肪来源的干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs),流式细胞仪进行表型鉴定(CD45、CD90、CD105)及标志物纤连蛋白(fibronectin)鉴定后,在碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)、2%B27的Neuro-basal培养基中诱导成NSCs。用免疫荧光细胞染色法进行NSC特异性标记物Nestin、增殖能力BrdU检测,再次添加脑源性神经营养因子、骨形成蛋白2后,维甲酸(RA)诱导分化为γ-氨基丁酸能神经元,并进行其标志物GABA的检测。结果分离纯化的ADSCs CD90、CD105表达强阳性,CD45表达阴性;诱导后的干细胞球经Nestin及BrdU鉴定为NSCs,且具有较强的增殖能力;神经干细胞诱导分化后的神经元GABA抗体染色呈阳性。结论在特定神经营养因子作用下,ADSCs在体外诱导生成的NSCs可被诱导分化为GABA能神经元。     

Id2在成年大鼠喙侧神经干细胞迁移流通道的表达

目的明确Id2在成年大鼠脑内室管膜前下区(SVZa)、喙侧迁移流(RMS)、嗅脑(OB) 3个不同区域内的表达模式.方法用RT-PCR和免疫荧光染色的方法观察成年大鼠SVZa、RMS、OB 3个区域Id2的表达情况.结果成年大鼠脑内SVZa、RMS、OB 3个区域Id2均有不同程度的表达,且在这3个部位中Id2在OB区表达最弱,在SVZa表达较强, 在RMS表达最强.结论确立Id2在成年大鼠SVZa、RMS、OB 3个区域的表达模式,提示Id2可能对成年SVZa神经干细胞的增殖和定向分化起到一定的调节作用.     

BMP-2在成年大鼠脑内SVZa-RMS-OB通路中的表达

目的 明确BMP-2在成年大鼠脑内,SVZa、RMS、OB 3个不同区域内的表达模式.方法 用RT-PCR和免疫荧光染色的方法观察成年大鼠SVZa、RMS、OB 3个区域BMP-2的表达情况.结果 RT-PCR检测在成年大鼠脑内SVZa、RMS、OB 3个区域BMP-2的mRNA均有不同程度的表达,其中OB区表达最高;免疫组化显示BMP-2蛋白在OB区表达也最高,但在SVZa区表达次之,RMS区表达最低.结论 确立BMP-2在成年大鼠SVZa、RMS、OB 3个区域的表达模式,提示BMP-2可能对成年SVZa神经干细胞的增殖和定向分化起到一定的调节作用.     

PD大鼠纹状体提取液诱导中脑神经干细胞分化为多巴胺能神经元的研究

目的研究PD大鼠纹状体提取液诱对中脑神经干细胞的诱导分化作用.方法①体外分离、培养大鼠胚胎的中脑神经干细胞,并诱导其分化,巢素(Nestin)、神经丝-200(NF-200)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组化染色鉴定.②加入纹状体提取液后,分化细胞用抗酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化鉴定,并用流式细胞技术检测分化比例.结果①从大鼠胚胎的腹侧中脑部位分离获得了大量未分化、呈巢状悬浮生长的细胞团,且能分化为神经元和神经胶质细胞.②经纹状体提取液诱导后,能够分化出多巴胺能神经元,分化比例达20%左右.结论纹状体提取液能诱导中脑神经干细胞向多巴胺能神经元的分化.     

神经生长因子诱导神经干细胞分化的作用机制探讨

目的探讨神经生长因子(NGF)对体外培养的小鼠神经干细胞(NSCs)分化为神经元的作用及可能机制。方法以无血清培养法从孕13～14 d的昆明小鼠大脑皮质分离培养获得NSCs,传至3代后,进行NGF处理,并对培养的细胞进行MAP-2免疫细胞化学染色,荧光显微镜下对MAP-2阳性细胞进行计数。同时运用蛋白免疫印迹法(Western blot)考察NGF对TrkA、Akt、Erk磷酸化水平的影响;在研究NGF作用的信号转导通路时,预先给予各种信号通路抑制剂处理,再进行NGF干预,通过MAP-2染色及Western blot考察NGF促进神经干细胞分化为神经元的信号通路。结果 NGF可以显著促使NSCs分化为神经元并可以促进TrkA、Akt和Erk的磷酸化,呈现剂量和时间依赖性;各种通路抑制剂结果显示PI3K/Akt抑制剂可以阻断NGF对Akt的磷酸化作用,同时阻断了NGF对NSCs的促分化作用,MAPK抑制剂处理可以阻断NGF对Erk的磷酸化作用,但未见明显阻断NGF的促分化作用。结论 NGF可以促进NSCs分化为神经元,其作用机制可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。     

神经干细胞增殖分化相关蛋白在左旋单钠谷氨酸大鼠中的变化

目的观察神经干细胞(neural stem cell,NSC)增殖分化相关蛋白在左旋单钠谷氨酸(monosodiumglutamate,MSG)大鼠NSC增殖分化中的作用.方法提取前脑组织蛋白、利用Western blot方法检测NSC增殖分化相关蛋白变化.结果与正常对照组比较,造模后30、60d、MSG大鼠NSC增殖分化相关蛋白Notch1、hes5、Mash1、NeuroD表达水平显著降低,尤以Notch1和hes5更显著(P＜0.01);与实验组比较,左归丸可明显增加Notch1、hes5、Mash1、NeuroD表达水平(P＜0.01).结论MSG显著抑制NSC增殖分化相关蛋白表达水平,左归丸能部份拮抗MSG对NSC增殖分化相关蛋白表达的抑制.Notch和bHLH家族可能与左归丸促进NSC增殖分化作用有关.