帕金森病大鼠黑质细胞凋亡与Bax蛋白表达相关性的实验研究

目的：观察6-羟基多巴胺（6-OHDA）能否诱发黑质细胞凋亡以及Bax蛋白表达与黑质细胞凋亡的关系。方法：72只Wistar雄性大鼠随机分为对照组36只及通过脑立体定位注射60HDA的方法建立的大鼠帕金森病模型组（PD）组36只，采用TUNEL方法、免疫组织化学、电镜等观察术后l、7、14及21d时2组大鼠脑黑质细胞凋亡的数量及超微结构变化，并检测黑质细胞Bax蛋白的表达。结果：术后TUNEI．法发现，与对照组比较，PD组存在明显的黑质细胞凋亡（P％0．05），且在1—21d时细胞凋亡数逐渐增高；电镜观察显示，PD组黑质细胞存在典型细胞凋亡，Bax蛋白表达在ld为最高，其后很快下降，但仍显著高于对照组。结论：6-羟基多巴胺能诱发大鼠黑质细胞凋亡，Bax蛋白是黑质细胞凋亡的关键启动因素。     

帕金森病大鼠模型的行为学及神经元形态学评价

背景由于黑质致密部体积狭小,应用6-羟基多巴胺(6-Hydroxydopamine,6-OHDA)损毁黑质多巴胺神经元(Nigral dopaminergic neuron,NDN)制作帕金森病大鼠模型的成功率较低,一般仅为30%～40%左右.目的探讨帕金森病大鼠模型建立后的行为学及神经元形态学改变.设计完全随机的实验研究.地点和材料安徽省药物研究所,SD大鼠,6-OHDA,阿朴吗啡,兔抗TH血清,SR-6N大鼠脑立体定向仪等.干预将6-OHDA立体定向注射于90只SD大鼠的左侧黑质区及黑质纹状体通路,观察大鼠行为及多巴胺神经元形态学变化.主要观察指标旋转行为,震颤及其他异常行为,免疫组织化学观察,电镜观察.结果经阿朴吗啡诱导共筛选出64只成功大鼠模型(占71%);免疫组化观察发现注射侧黑质区NDN较对侧明显减少,电镜观察发现其普遍存在凋亡及坏死样改变.结论本方法是建立帕金森病大鼠模型的有效方法,在行为学和神经元形态学等方面同帕金森病人有许多相似之处.     

帕金森病大鼠模型的行为学及神经元形态学评价

背景：由于黑质致密部体积狭小，应用6-羟基多巴胺(6-Hydroxydopamine，6-OHDA)损毁黑质多巴胺神经元(Nigral dopaminergic neuron，NDN)制作帕金森病大鼠模型的成功率较低，一般仅为30％～40％左右。目的：探讨帕金森病大鼠模型建立后的行为学及神经元形态学改变。设计：完全随机的实验研究。地点和材料：安徽省药物研究所，SD大鼠，6-OHDA，阿朴吗啡，兔抗TH血清，SR-6N大鼠脑立体定向仪等。干预：将6-OHDA立体定向注射于90只SD大鼠的左侧黑质区及黑质纹状体通路，观察大鼠行为及多巴胺神经元形态学变化。主要观察指标：旋转行为，震颇及其他异常行为，免疫组织化学观察，电镜观察。结果：经阿朴吗啡诱导共筛选出64只成功大鼠模型(占71％)；免疫组化观察发现注射侧黑质区NDN较对侧明显减少，电镜观察发现其普遍存在凋亡及坏死样改变。结论：本方法是建立帕金森病大鼠模型的有效方法，在行为学和神经元形态学等方面同帕金森病人有许多相似之处。     

应用6-羟基多巴胺建立帕金森病大鼠模型的稳定性评价

背景：应用6-羟基多巴胺(6-Hydroxydopamine，6-OHDA)损毁黑质多巴胺神经元(nigral dopaminergic neuron，NDN)制作的大鼠模型，在目前帕金森病的研究中应用最广，但由于黑质致密部体积狭小，技术难度大，故模型制备成功率一般仅为30％-40％左右。目的：探讨提高6-羟基多巴胺帕金森病大鼠模型成功率的方法，并对模型进行评价。设计：完全随机的实验研究。地点和材料：实验在安徽中医学院第一附属医院中心实验室完成，实验材料包括SD大鼠，6-OHDA，阿朴吗啡，兔抗TH血清，ABC试剂盒，SR-6N大鼠脑立体定向仪，JEM-100CX电镜。干预：取SD大鼠90只，将6-OHDA立体定向微量注射于左侧黑质区及黑质纹状体通路，观察大鼠行为及黑质细胞形态学变化。主要观察指标：旋转行为，免疫组织化学观察多巴胺能神经元数量，电镜观察多巴胺能神经元形态改变。结果：90只大鼠中经阿朴吗啡诱导后有64只(占71％)恒定转向右侧且结果稳定，旋转圈数30min&;gt;210r，被视为成功大鼠模型；免疫组化观察发现注射侧黑质区多巴胺能神经元较对侧明显减少，电镜观察发现其普遍存在凋亡及坏死样改变。结论：应用本方法可较快建立稳定的成功率较高的大鼠模型，但在病理和行为学等方面同自然患者仍有较多差异。     

帕金森病黑质多巴胺神经元的凋亡与其发病机制

目的：研究帕金森病黑质多巴胺神经元的死亡机制。方法：用四唑盐法及流式细胞仪观察囊泡单胺类转运体(Vesicular Monoamine Transporter，VMAT)功能抑制对大鼠嗜铬细胞瘤(pheochromoeytoma cell，PC12)细胞凋亡的影响。结果：多巴胺浓度为0．15，0．30，0．45，0．60mmol／L时，PC12细胞生存率为(89．3&;#177;7．7)％．(62．9&;#177;4．3)％，(42．5&;#177;2．7)％，(37．6&;#177;3．7)％，与对照组100％比较0．30组差异有显著性意义(t=2．373-5．323，P&;lt;0．05)，0．45组与0．60组比较差异有显著性意义(t=4．673-5．323．P&;lt;0．01)，利血平协同多巴胺作用时，其生存率为(73．7&;#177;3．9)％．(49．8&;#177;2．1)％。(31．6&;#177;1．9)％，(20．1&;#177;1．7)％，与对照组100％比较，差异有显著性意义(t=3．043-5．673，P&;lt;0．05)。结论：VMAT功能抑制引发了多巴胺的内源性毒性，进而诱发多巴胺神经元的凋亡，可较好解释帕金森病的发病机制。     

28醇对6-羟基多巴胺致帕金森病大鼠模型行为学的改善作用

目的 检测28醇对6-羟基多巴胺(6-OHDA)致帕金森病(PD)大鼠模型的作用.方法 将大鼠分为假手术组(n=1 5)、模型组(n=15)、低剂量组(n=12)、中剂量组(n=12)和高剂量组(n=12).将6-OHDA注人大鼠右侧纹状体制备PD模型,治疗组分别以28醇17.5 mg/kg、35 mg/kg、70 m...     

6-OHDA致帕金森病大鼠模型疼痛行为学的性别差异

目的 :比较6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)诱导帕金森病(parkinson's disease,PD)模型大鼠在疼痛发生中的性别差异,从行为学角度对比雌、雄大鼠疼痛发生的时间窗口及疼痛时程差异。方法:实验分为正常组、手术组和假手术组,每组12只大鼠(雌雄各6只)。采用脑立体定位仪注射4μl 6-OHDA至成年SD大鼠黑质区(substantia nigra pars reticulata,SNr)建立PD模型。检测机械刺激缩足阈值和热刺激缩足潜伏期。结果:6-OHDA可成功复制PD并引起疼痛。正常组与假手术组无显著性的整体性别差异(机械痛敏:F=1.103,P=0.368>0.05;热痛敏:F=0.939,P=0.510>0.05)。手术组机械痛敏:雌鼠术后24 h出现显著性差异,疼痛持续至56 d;雄鼠术后7 d出现显著性差异,28 d后恢复。手术组热痛敏:雌、雄大鼠发生疼痛的时间窗口与机械痛敏的时间一致。雌鼠比雄鼠疼痛时间更长(雌鼠痛持续56 d;雄鼠痛持续42 d)。结论:(1)6-OHDA致PD模型的雌雄大鼠机械痛敏和热痛敏出现显著的整体性别差异。(2)雌性动物在PD中表现出更敏感、更强的痛样行为。     

帕金森病模型大鼠纹状体内氧化应激与细胞凋亡蛋白的表达

目的 观察帕金森病(PD)模型大鼠纹状体内的氧化应激指标及细胞凋亡相关蛋白的表达.方法 大鼠右侧纹状体内注入6-羟基多巴胺(6-OHDA)制备帕金森病模型,4周后观察行为学改变,5周后检测正常对照、假手术和模型组大鼠纹状体内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、还原型谷胱甘肽(GSH)及丙二醛(MDA)含量变化,Western方法检测B8x和Bcl-2蛋白表达.结果 在成功筛选的10只帕金森病模型大鼠右侧纹状体中,与自身对侧、正常对照及假手术组同侧相比,其SOD、GSH-Px活性,GSH含量均下降,而MDA含量升高(均P<0.05);与正常对照及假手术组同侧相比,其Bax蛋白表达增高,而Bel-2蛋白表达下降.结论 氧化应激在帕金森病发病机制中起到重要作用,而Bax和Bcl-2蛋白参与了氧化应激诱导细胞凋亡的调控过程.     

凋亡相关基因bax与Th蛋白在帕金森病大鼠黑质和纹状体细胞中的表达

目的:利用动物模型探讨bax和Th蛋白表达与帕金森病(PD)的关系。方法:60只SD大鼠随机分为6组,即对照组及PD组(PD模型3d、7d、14d、21d、28d组)。PD组均通过脑立体定向注入6-羟基多巴胺,均在处死前腹腔注入阿朴吗啡,观察30min大鼠旋转的次数,连续至第4周每分钟大于7次者为成功的PD模型。对照组立体定向注入抗坏血酸生理盐水。处死后制作石蜡切片,用免疫组化法检测bax、Th蛋白的阳性细胞数。结果:PD组纹状体和黑质神经细胞存在细胞凋亡,与对照组差异存在显著性,且bax蛋白表达在PD组大鼠纹状体和黑质细胞中3d组为最高,其后很快下降,但显著高于对照组。而Th蛋白表达在大鼠纹状体和黑质细胞中对照组为最高,在PD组很快下降。结论:6-羟基多巴胺能诱发大鼠黑质细胞凋亡,bax作为前凋亡蛋白在启动和诱导黑质细胞凋亡方面起着关键性的作用。     

抑颤汤对帕金森病模型大鼠行为学及脑黑质细胞形态学的作用

背景目前治疗帕金森病( Parkinson disease,PD)仍以多巴胺替代疗法为主,但因其副作用多,有效时间短等弊病,使神经保护性治疗的探索日益受到重视,而中药治疗具有良好的效果且不良反应较少,探讨其作用机制将有利于临床应用. 目的观察抑颤汤治疗 PD在保护和促进黑质细胞修复方面的效果及其相关机制. 设计完全随机对照实验研究. 地点和对象解放军总医院医学实验动物中心,实验动物为 SD大鼠,分为正常组、生理盐水组、抑颤汤组. 干预 6-羟基多巴胺诱发建立 PD大鼠模型,抑颤汤组大鼠灌胃法给药,生理盐水组和正常组生理盐水灌胃.给药后第 5周开始观察大鼠行为学改变,连续观察 4周,给药结束后,各组大鼠断头处死,制备大脑切片,经苏木精-伊红染色后,用光学显微镜及电子显微镜观察脑黑质细胞形态的改变. 主要观察指标各组大鼠行为学改变和脑黑质细胞形态. 结果造模后经阿朴吗啡诱发,正常组大鼠旋转次数平均为 22圈 /40 min,无固定旋转方向;造模组大鼠旋转次数平均为 343圈 /40 min,两组相比差异有显著性意义( t=3.390, P< 0.001);治疗后,抑颤汤组大鼠旋转次数为 340圈 /40 min,两组相比差异有显著性意义( t=2.648, P< 0.01).病理形态学观察,抑颤汤组脑黑质细胞数量较生理盐水组明显增多,神经元体积饱满,结构清晰,细胞内高尔基体、线粒体等趋于正常. 结论抑颤汤能明显改善 PD模型大鼠的旋转行为,促进受损脑黑质细胞的修复,提示其疗效具有神经保护性特点.     

Correlation Between Substantia Nigra Features Detected by Sonography and Parkinson Disease Symptoms

Objective. The aim of this study was to assess the correlation between substantia nigra (SN) echogenic features and area and the clinical symptoms in patients with Parkinson disease (PD). Methods. Clinical examinations and transcranial sonographic evaluations of the SN were performed in 115 consecutive patients with PD. The presence of tremors, rigidity, bradykinesia, gait disorders, speech disorders, and hypomimia was evaluated according to the motor portion of the Unified Parkinson Disease Rating Scale. The Mann‐Whitney U test, the Kruskal‐Wallis test, analysis of variance, and multivariate analysis were applied when assessing statistical significance. Results. An enlarged and hyperechoic SN existed in 84.0% of patients with bilateral rigidity but in only 70.6% of patients with unilateral rigidity (P < .05). Similarly, 85.0% of patients with bilateral bradykinesia in comparison with 65.7% of patients with unilateral bradykinesia had an enlarged and hyperechoic SN (P < .05). A significant correlation was shown between the SN echogenicity and area (r = 0.705; P < .01). Conclusions . An enlarged and hyperechoic SN seems to be a marker of structural involvement of the SN in patients with PD. This structural involvement is expressed more in patients with bilateral rigidity and bradykinesia.     

人羊膜间充质细胞的神经生物学特性及其治疗帕金森模型小鼠的实验研究

目的评价人羊膜组织来源间充质细胞(hAMCs)的神经生物学特性及其脑移植对帕金森病(PD)小鼠的治疗观察。方法应用免疫细胞化学染色,通过间充质干细胞、神经干细胞、多巴胺能神经元和神经发生相关标记物Vimentin、STRO-1、nestin、CD133、β-tubulin、TH、DAT、Ngn2和mash-1抗体,鉴定在hAMCs中的表达;RT-PCR检测神经干细胞标记物Vimentin及nestin mRNA在hAMCs的表达。C57BL/6小鼠MPTP(i.p.)建立PD模型,将hAMCs移植到右侧纹状体内。通过自发运动和转杆实验以及抗人线粒体和TH抗体在脑纹状体免疫组织化学形态学,评价hAMCs对PD小鼠的治疗作用。结果经神经细胞培养基诱导培养后的hAMCs表达间充质干细胞、神经干细胞、多巴胺能神经元和上述所有与神经发生相关的特异性标记物。hAMCs移植后的PD小鼠自发运动次数增加(P0.05),转杆时间延长(P0.05)。结论hAMCs经体外诱导培养后具有神经细胞特性,移植到PD模型小鼠纹状体内能够改善MPTP所致的运动功能损伤。     

Effect of Age on Substantia Nigra Hyper-echogenicity in Parkinson's Disease Patients and Healthy Controls

Substantia nigra (SN) hyper-echogenicity (SN+) describes an enlargement (>90th percentile) of the area of echogenicity at the anatomic site of the SN in the midbrain detected by transcranial sonography. This ultrasound sign has proven to be a valuable marker supporting the clinical diagnosis of Parkinson's disease (PD). Although there is considerable variation in the extent of echogenic signals at the anatomic site of the SN among PD patients, previous work suggests that SN+ is a stable marker throughout the course of the disease. The present study focused on two aspects: (i) determining whether SN+ values differ between the sides, mirroring the asymmetric character of the disease; and (ii) determining whether age has an influence on SN echogenicity. This cross-sectional study included 300 PD patients and 200 healthy controls. SN+ was measured planimetrically by transcranial sonography. Echogenicity was analyzed separately for onset and non-onset sides, with onset side defined as the SN contralateral to the side of the body that first manifested PD-related motor impairment. Age of the patients and healthy controls at study time was used for correlation. We found that the onset SN+ contralateral to the side of initial motor symptoms was on average 17.6% larger than its counterpart. However, we also found that contrary to the control group, where an increase in age was associated with an increase in size of SN+, age of PD patients was associated with a decline in size of the onset SN+. Furthermore, SN measured at the onset side of PD patients correlated significantly with patient age and Hoehn and Yahr stage, a scale that grades PD severity, although this was not the case for the non-onset side. The present study indicates that changes in SN echogenicity have a different dynamic depending on the onset side of the disease. The age at study time had a significantly negative effect on the size of onset SN+, the effect on the non-onset side was non-significant. We conclude that for appropriate PD analysis, onset SN+ is a more important marker than the average of both sides of SN. Furthermore, we found that among healthy controls, the size of SN+ increases with age.     

脑深部刺激治疗帕金森病的手术配合

目的探讨脑深部刺激(deep brain stimulation,DBS)治疗帕金森病(Parkinson disease,PD)的手术配合与护理措施。方法回顾性分析174例DBS手术,总结DBS的手术配合和围术期的护理方法。结果手术均获成功,术后随访3~104个月,平均(29.4±10.6)个月,帕金森统一评分改善率为46.2%。手术护士术前应做好患者、环境和物品准备,术中应根据手术不同阶段的特点熟练配合,术后对仪器进行正确和严格的保养。结论 DBS治疗PD是一种创伤小、临床效果好、运动功能恢复较为理想的治疗方法,严格执行无菌操作、熟悉手术步骤、准确熟练地进行手术配合,是手术成功的关键。     

Accuracy of Transcranial Sonography of the Substantia Nigra for Detection of Parkinson's Disease: A Systematic Review and Meta-analysis

A systematic review and meta-analysis were conducted to evaluate the diagnostic accuracy of substantia nigra hyper-echogenicity by transcranial sonography (TCS) for the diagnosis of Parkinson's disease (PD). PubMed, Embase and the Cochrane Library were electronically searched from inception to June 2018 for all relevant studies. The methodological quality of each study was evaluated by two independent reviewers, who used the Quality Assessment of Diagnostic Accuracy Studies 2 tool. Articles reporting information sufficient to calculate the sensitivity and specificity of TCS to diagnose PD were included. Statistical analysis included data pooling, heterogeneity testing, sensitivity analyses and forest meta-regression. Thirty-nine studies (3123 participants with PD) were analyzed. The pooled sensitivity and specificity of TCS were 0.84 (95% confidence interval: 0.81–0.87) and 0.85 (0.80–0.88), respectively, for differentiating PD from normal controls or participants with other parkinsonian syndromes. In the secondary outcome, PD participants exhibited a significant increase in substantia nigra areas than either normal controls (0.14 [0.12–0.16], p < 0.0001) or participants with other parkinsonian syndromes (0.11 [0.08–0.13], p < 0.0001). This meta-analysis revealed the high diagnostic performance of TCS in differentiating patients with PD from both normal controls and participants with other parkinsonian syndromes.     

帕金森大鼠黑质外液和红细胞内Mg2+含量的变化

目的:观察帕金森病(PD)大鼠中脑黑质外液及红细胞内Mg~(2+)浓度的改变。方法:采用6-羟基多巴(6-OHDA)损毁制备偏侧PD大鼠模型24只,分4组各6只,分别于造模后第7、14、21、28天采集大鼠动脉血中的红细胞,采用微透析技术收集中脑黑质细胞外液,火焰原子吸收光谱法测定红细胞内和黑质细胞外液Mg~(2+)含量。选5只健康大鼠作为对照组,进行相同测定。结果:各时点PD组红细胞内Mg~(2+)含量均显著低于对照组(P<0.05),且随病程延长而逐渐下降(P<0.05);但PD组中脑黑质细胞外液Mg~(2+)含量仅在第21、28天明显低于对照组(P<0.05)。结论:Mg~(2+)缺乏与PD的发生及病程进展有一定关联。