细胞凋亡因子Fas配体

Ｆａｓ和Ｆａｓ配体（ＦａｓＬ）是已认识到一对诱导细胞凋亡的膜蛋白分子，它们之间的构成一条独特的细胞凋亡通路。本文对ＦａｓＬ的分子生物学特性和生理功能及其在疾病发生中的作用作一综述。     

Fas基因与细胞凋亡

Fas抗原和Fas配体是细胞表面的两种跨膜蛋白;Fas介导的细胞凋亡对维持机体的正常免疫功能和在某些疾病的发生发展中有十分重要的作用.     

转染mFas配体的COS-7细胞诱导Fas+淋巴瘤细胞系(Yac-1)凋亡

本研究探讨通过Fas配体(Fas ligand,FasL)-Fas途径进行免疫治疗淋巴瘤的可能性。常规转化pBillneo-mFasL至大肠杆菌DH5α,经扩增、质粒抽提和纯化后,进行限制性内切酶酶切、mFasL基因PCR及其产物DNA测序,以鉴定pBillneo-mFasL内mFasL基因一级结构及插入方向;用脂质体法转染 pBillneo-mFasL至猴肾COS-7细胞,G418选择培养后,Western印迹分析外源性mFasL cDNA基因表达水平,将高表达mFasL的COS-7细胞与Fas~+小鼠淋巴瘤细胞系Yac-1以不同比例混合培养,5小时后收集悬浮的Yac-1细胞,用膜联蛋白(annexin)V/PI标记后,借助FCM观察细胞调亡率。结果表明,质粒pBillneo-mFasL的EcoRI酶切获得920 bp和7227 bp产物,Hind Ⅲ酶切获得1293 bp和6807 bp产物,初步证实插入mFasL cDNA片段与理论预计大小一致,并系正向插入;PCR扩增出自起始密码子(ATG)至终止密码子(TAA)后+36 bp的mFasL cDNA全长890 bp序列,DNA测序结果与基因库已知序列完全一致;pBillneo-mFasL转染COS-7细胞,并经G418选择培养后,Western印迹检测到明显mFasL蛋白质表达;当用这种高表达mFasL蛋白质的COS 7细胞与Fas~+ Yac-1细胞以1:1,5:1和10:1混合培养5小时后,用annexin V/PI标记悬浮Yac-1,结果后者调亡率分别为(22±4.8)％,(32.18±7.8)％和(51.8±5.4)％,与     

Fas抗原—配体系统与肝脏疾病研究进展

Ｆａｓ抗原和Ｆａｓ配本是细胞表面的两种跨膜蛋白。当一个细胞的Ｆａｓ与另一细胞的ＦａｓＬ相结合时,可以导致表达Ｆａｓ的细胞凋亡;Ｔ淋巴细胞表达ＦａｓＬ可以使表达Ｆａｓ的肝细胞凋亡,Ｆａｓ诱导的肝细胞凋亡在某些肝脏疾病的发生发展中起重要作用。     

Fas配体在髓系白血病细胞中的表达及功能研究

为了解Fas配体 (FasL)在髓系白血病细胞中的表达水平及其诱导Fas+敏感细胞发生凋亡的功能 ,用流式细胞术检测 38例髓系白血病患者 (外周血白细胞 >10 0× 10 9/L)的白血病细胞在新鲜分离及IL 2和IFN γ刺激后表面膜FasL的表达水平 ,将白血病细胞 ( 1× 10 6/ml)与Jurkat细胞 ( 1× 10 5/ml)混合培养 2 4小时后 ,用DNA电泳和流式细胞术双标法检测Jurkat细胞发生凋亡的情况。结果表明 :白血病细胞表面FasL表达量 ( 3.5 9± 1.0 5 ) %高于正常人 ( 0 .36± 0 .16 ) % ,P <0 .0 0 1,经IL 2和IFN γ刺激后其表达量明显增加 ( 7.78± 3.4 0 ) % ,P <0 .0 1;白血病细胞刺激前后诱导Jurkat细胞发生的凋亡率分别为 ( 8.2 8± 1.6 1) % ,( 10 .73± 2 .16 ) % ,差异具有显著性意义。结论 :FasL在髓系白血病细胞表面高表达且对Fas+的敏感细胞具有杀伤功能 ,推测Fas/FasL途径可能在白血病的“免疫逃逸”中发挥作用     

Fas抗原-配体系统与肝脏疾病研究进展

Fas抗原和Fas配体（FasL）是细胞表面的两种跨膜蛋白。当一个细胞的Fas与另一细胞的FasL相结合时,可以导致表达Fas的细胞凋亡;T淋巴细胞表达FasL可以使表达Fas的肝细胞凋亡。Fas诱导的肝细胞凋亡在某些肝脏疾病的发生发展中起重要作用。     

重组分泌型Fas配体对肝癌细胞株HepG2凋亡的影响

目的 构建重组表达Fas配体(FasL)基因(N端含有IL2信号肽)的慢病毒,探讨其介导肝癌细胞凋亡的可行性及其可能的分子机制。方法 将含有IL2信号肽的FasL基因克隆至慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-GFP+Puro(简称pCDH)中,然后将重组pCDH-IL2sig-FasL与慢病毒辅助质粒共同转染至HEK293细胞中,获得重组慢病毒LV-IL2sig-FasL,阴性对照为LV,分别感染HepG2细胞。最后将成功构建的稳转细胞HepG2-LV-IL2sig-FasL及HepG2-LV同时培养至96 h,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测细胞中相关凋亡信号因子的转录水平,Western blot检测蛋白表达水平,MTT检测细胞增殖抑制水平。结果 HepG2-LV-IL2sig-FasL细胞相对于阴性对照株HepG2-LV,其凋亡因子转录及表达水平均上调;MTT检测结果显示HepG2-LV-IL2sig-FasL细胞生长明显受到抑制。结论 外源表达IL2sig-Fas基因可诱导肿瘤细胞HepG2凋亡,有可能作为肿瘤基因治疗的新途径。     

Fas及其配体与肿瘤免疫

正常情况下,Fas系统涉及到组织细胞的生理性凋亡,Fas/Fas-L表达于淋巴细胞,粒细胞等免疫细胞上,介导了免疫调控和免疫病理,不同肿瘤组织细胞表达Fax/Fas-L水平不一致,不但影响机体抗肿瘤作用,而且对肿瘤的发生和发展有重要作用,本文探讨了Fas系统在正常或肿瘤免疫中的作用。     

胃癌组织中Fas抗原表达与细胞凋亡的关系

目的　研究胃癌组织中Fas抗原表达与细胞凋亡的关系。方法　采用免疫组织化学及脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记 (TUNEL)技术对 40例胃癌组织中Fas抗原表达与细胞凋亡进行了观察和比较。结果　胃癌组织中Fas抗原表达阳性率为 5 2 .5 % ,Fas表达阳性的胃癌细胞凋亡指数显著高于Fas抗原阴性组 (t =3 .3 5 ,P <0 .0 1)。结论　胃癌细胞调亡与Fas抗原表达密切相关 ,细胞凋亡调控的异常在胃癌发病中可能起重要作用     

针对Fas基因RNA抑制作用前后帕金森病细胞相关因子变化的凋亡作用

近年来研究表明，细胞凋亡在帕金森病的病理机制中起重要作用。细胞凋亡涉及多种基因的复杂变化，其中凋亡促进基因Fas与之关系密切。基因干预可通过降低凋亡基因的表达而对细胞凋亡起到干预作用。本实验用6-羟基多巴胺作用于NGF诱导后PC12细胞，建立帕金森病细胞模型，用RNAi方法对Fas基因表达进行抑制，从而观察该方法以帕金森病细胞凋亡的影响。     

肿瘤坏死因子凋亡诱导配体诱导白血病细胞凋亡中抵抗机制的初步探讨

目的初步探讨肿瘤坏死因子凋亡诱导配体(TRAIL)诱导白血病细胞发生凋亡过程中可能存在的抵抗机制。方法用流式细胞仪检测经 TRAIL 处理后,白血病细胞系 K562、CEM 凋亡情况及线粒体跨膜电位的改变;采用 Western blot 检测 TRAIL 处理后细胞凋亡相关蛋白 Bcl-xL、Bax 及内源性半胱天冬酶(caspase)-8表达情况;并用 ELISA 法检测核转录因子(NF)-kB 活性变化。结果经TRAIL 处理后,K562、CEM 细胞出现不同程度的凋亡,其凋亡指数分别为29.98%、14.1%,后者显著低于前者(P<0.001);线粒体跨膜电位下降,分别为73.25%、25.4%(P<0.01);CEM 细胞中内源性caspase-8的表达水平低于 K562细胞,并且两者均表现出 Bcl-xL 表达上升、Bax 表达下降,在 CEM 细胞中 Bcl-xL/Bax 比例为18.8,显著高于 K562细胞 Bcl-xL/Bax 的比值(5.1);并且在 TRAIL 处理 CEM细胞后早期(2 h)即表现出 NF-kB 活性增加(0.48 μmol·L~(-1)·mg~(-1)蛋白),高于 K562细胞(0.326μmol·L~(-1)·mg~(-1)蛋白(P<0.001)。结论 TRAIL 诱导白血病细胞凋亡过程中,CEM 细胞对药物抵抗原因可能与 CEM 细胞内源性 caspase-8表达水平较低、线粒体内膜敏感程度降低、NF-kB 活性早期增加以及 Bcl-2家族蛋白的表达变化有关。     

反义Fas阻断激活T细胞凋亡的研究

目的：探索阻断激活Ｔ细胞凋亡的途径，增加激活的Ｔ细胞数量，提高肿瘤免疫治疗的疗效。方法：应用ＣＤ３诱导Ｊｕｒｋａｔ细胞的凋亡作为激活的Ｔ细胞凋亡模型，应用逆转录病毒载体将反义Ｆａｓ转染Ｊｕｒｋａｔ细胞，观察反义Ｆａｓ对ＣＤ３及抗Ｆａｓ单克隆抗体（单抗）对Ｊｕｒｋａｔ细胞凋亡的影响。结果：构建一个反义Ｆａｓ的逆转录病毒载体ｐＬＸＳＮ－反义Ｆａｓ，并转染Ｊｕｒｋａｔ细胞，发现Ｊｕｒｋａｔ细胞Ｆａｓ蛋白表达量下降，并部分阻断ＣＤ３及抗Ｆａｓ单抗诱导的Ｊｕｒｋａｔ细胞凋亡。结论：应用反义技术阻断Ｆａｓ基因表达，可部分阻断ＣＤ３及抗Ｆａｓ单抗诱导的Ｊｕｒｋａｔ细胞凋亡。     

Fas系统、细胞凋亡与急性胰腺炎

细胞凋亡（Applosis）是指细胞在一定病理生理条件下，激活或启动自身内特殊基因程序，表达Fas蛋白等凋亡抗原而发生的死亡，它与机体内细胞分裂、增殖相对应．共同调节细胞增殖、分化、死亡以保持平衡，维持正常形态和功能，近年有关细胞调亡的报道颇多，表明它与许多人类疾病相关，如癌症，自身免疫性疾病及AIDS等，有关急性胰腺炎的报道也不少见，本文就此作一综述。     

Fas抗原分子

Fas抗原，又称APO-1或CD95，是一种319个氨基酸组成的Ⅰ型跨膜糖蛋白，属于肿瘤坏死因子和神经生长因子受体超家庭成员。Fas抗原表达于各种细胞，如活化的T，B细胞，NK细胞，胸腺细胞，恶性的T、B细胞，成纤维细胞等。人与小鼠的Fas基因分别定位于第10号及第19号染色体。Fas抗原的天然配体是一种Ⅱ型跨膜糖蛋白，属于肿瘤坏死因子家族成员，其主要分布于活化的T细胞。Fas抗原及配体系统异常的两种小鼠Lpr与gld表现自身免疫病理变化。抗Fas抗体或表达Fas配体的细胞交联Fas抗原，可诱导细胞凋亡，提示Fas／Apo──1抗原是细胞凋亡过程中重要信号传递分子。Fas抗原诱导的细胞凋亡在调控免疫细胞的发育，增殖及免疫应答中起主导作用。已经证实Fas系统在T细胞的发育，细胞毒作用及细胞毒性T介导自身免疫病中发挥重要作用。而且抗Fas抗体或Fas配体可诱导肿瘤细胞凋亡。Fas抗原系统的研究将有助于阐明自身免疫病发病机制，开辟肿瘤治疗的新途径。     

慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞膜表面Fas配体检测及意义

目的检测慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞（PBMC）膜表面Fas配体（FasL）水平,并探讨其在慢性肝炎发病机制中的作用。方法用免疫组织化学法分别检测42例慢性乙型肝炎患者和20例健康人PBMC细胞膜表面FasL表达,并与其他实验室指标作相关性比较。结果慢性乙型肝炎患者外周血PBMC膜表面FasL阳性百分率为（64．0&#177;7．8）％,明显高于健康对照组（40．7&#177;8．6）％。结论PBMC膜表面FasL表达异常可能在慢性乙型肝炎发病过程中起重要作用。     

Fas抗原电子

Ｆａｓ抗原，又称ＡＰＯ－１ＡＫ和ＣＤ９５，是一种３１９个氨基酸组成的Ⅰ型跨膜糖蛋白，属于肿瘤坏死因子和神经生长因子受体超家庭成员。Ｆａｓ抗原表达于各种细胞，如活化的Ｔ，Ｂ细胞，ＮＫ细胞，胸腺细胞，恶性的Ｔ、Ｂ细胞，成纤维细胞等。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对胶质瘤细胞的诱导凋亡作用

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumor necrosisfactor related apoptosis-inducingligand,TRAIL）可以诱导多种肿瘤细胞发生凋亡,并且对正常细胞没有明显的毒性作用,因此在美国已进入临床Ⅱ期药物开发阶段。     

慢性乙型重症肝炎及肝癌与血清可溶性Fas可溶性Fas配体 …

目的 探讨血清可溶性Ｆａｓ／可溶性Ｆａｓ配体水平与慢性乙型重症肝炎以及乙肝病毒相关性肝细胞癌变之间的关系。方法 用酶联免疫吸附双抗体夹心法检测２１例无症状乙肝病毒携带者,２０例慢性乙型重症肝炎及２２例乙肝病毒相关性肝细胞癌患者血清ｓＦａｓ、ｓＦａｓＬ水平。结果 与无症状乙肝病毒携带者比较,慢性乙肝重症肝炎患者血清ｓＦａｓ、ｓＦａｓＬ水平均增高,其差异有显著意义;乙肝病毒相关性肝细胞癌患者ｓＦａｓ水     

白血病缓解期激活的骨髓细胞Fas配体的表达

激活的骨髓（ＡＢＭ）具有杀伤肿瘤细胞的活性,为了解其作用机制,我们对ＡＢＭ细胞Ｆａｓ配体（ＦａｓＬ）的表达进行了观察,现报告如下。病例和方法１　病例选择　血液系统检查正常者１０名,急性白血病经治疗达完全缓解者２０例,其中急性非淋巴细胞白血病１８例（Ｍ１２例,Ｍ２７例,Ｍ３６例,Ｍ４２例,Ｍ５１例）,急性淋巴细胞白血病２例,男１２例,女８例,中位年龄２９岁。２　试剂　ｒＩＬ２、抗ＣＤ３单抗、羊抗兔免疫球蛋白Ｇ异硫氰酸酯荧光素（ＩｇＧＦＩＴＣ）抗体均为军事医学科学院产品,兔抗鼠ＦａｓＬ抗体为意…