雄激素对缺氧缺血性脑损伤新生鼠脑组织Bcl-2和Bax表达的影响

目的 探讨雄激素对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的保护作用及其机制.方法 制作新生鼠HIBD模型,随机分为假手术组(8只)、HIBD对照组(32只)、雄激素干预组(32只)(与模型制成后即刻注射丙酸睾丸酮25 mg/kg),与HI后6、24、48 h,7 d取脑组织制作石蜡切片,用免疫组化法观察Bcl-2和Bax蛋白在各组大鼠皮质和海马表达的动态变化.结果 新生大鼠海马及皮层均有Bcl-2和Bax表达,但Bax表达较微弱;在HI后6 h Bcl-2表达开始呈阳性反应,HI后24 h Bcl-2表达明显增多,72 h后达高峰,7 d后逐渐减低;Bax的表达在HI后24 h达高峰,72 h后逐渐降低,7 d后维持在低水平;雄激素干预后Bcl-2和Bax的表达变化时程与缺氧缺血对照组相似;HI后6、24、72 h,Bcl-2在皮层和海马的表达水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P分别＜0.05,0.05,0.01),HI后7 d两组间差异无统计学意义(P＞0.05).雄激素组Bax的表达水平在HI后24h显著低于对照组(P＜0.05);在HI后6、72 h,7 d两组Bax的表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 雄激素可抑制缺氧缺血后神经细胞凋亡而发挥脑保护作用,可能与雄激素上调Bcl-2蛋白,下调Bax蛋白表达有密切关系.     

参附注射液对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠海马神经元凋亡影响

目的研究参附注射液对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠海马神经元凋亡的影响。方法实验分成两部分：1.流式细胞术检测缺氧缺血（HI）前2 h、HI后2、12、24 h,3、7、14和28 d各时间点新生大鼠海马CA1区神经元凋亡率;2.免疫组织化学测HI前2 h、HI后2、12、24 h,3、7、14和28 d各时间点新生大鼠海马CA1区神经元Bcl-2、Bax蛋白表达。建立新生大鼠HIBD模型。每组实验随机分为4组：假手术组（S）,9 g/L盐水对照组（C）,参附预处理组（P）,参附治疗组（SF）。结果SF和P组海马神经元凋亡情况明显低于C组（P〈0.01,〈0.05）,且Bcl-2表达显著增多（P〈0.05,〈0.01）,而Bax表达明显下调（P〈0.05,〈0.01）。结论参附注射液可明显上调新生大鼠HIBD后海马神经元Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,减少HIBD新生大鼠海马神经元凋亡发生。     

新生大鼠脑缺氧缺血模型心肌细胞凋亡的研究

目的　研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)发生后不同时段心肌细胞凋亡情况。方法　结扎新生 7日龄大鼠右颈总动脉后放入 8%低氧舱 2h制成HIBD模型 ,应用AnnexinV/PI双染流式细胞技术检测缺氧缺血 (HI)后 1、4、18、2 4、4 8、72h及 7d心肌细胞凋亡情况。结果　HI后各HI组心肌细胞的凋亡率均明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,72hHI组凋亡率又显著高于其他组 (P <0 .0 5 ) ,表明HI后 7d内各组大鼠心肌均存在超出正常凋亡 ,尤以 72hHI组凋亡率最高。结论　新生大鼠HIBD后 1h～ 7d内心肌细胞均存在明显凋亡 ,以HI后 72h更明显 ,提示对缺氧缺血性脑病新生儿保护心肌减少心肌凋亡的治疗应至少用至生后 7d     

转化生长因子β1对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠Bcl-2及Bax蛋白表达的影响

目的观察新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后,外源性转化生长因子β1(TGF-β1)对脑组织Bcl-2及Bax蛋白表达的影响。方法48只7日龄新生大鼠随机分为假手术组、HIBD组、生理盐水对照组,TGF-β1干预组,其中TGF-β1干预组又分大、中、小剂量三组。建立HIBD模型2 h后,侧脑室注入不同剂量(20 ng、10 ng5、ng)的TGF-β1,免疫组织化学方法观察给药24 h后脑组织Bcl-2及Bax蛋白表达的变化。结果HIBD组及生理盐水对照组较假手术组Bcl-2及Bax蛋白表达均显著增高,Bcl-2/Bax比值显著降低,TGF-β1干预组较HIBD组及生理盐水对照组Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/Bax比值显著增高,Bax蛋白表达显著降低。结论TGF-β1可以通过上调Bcl-2蛋白表达及下调Bax蛋白表达,改变Bcl-2与Bax蛋白表达比例,抑制细胞凋亡,从而起神经保护作用,为TGF-β1临床治疗HIBD提供了理论依据。     

脐血单个核细胞侧脑室移植对HIBD新生大鼠脑神经元凋亡及Bax、Bcl-2蛋白的影响

目的 探讨脐血单个核细胞移植对缺氧缺血性脑损伤 （HIBD）新生大鼠脑神经元凋亡及Bax、Bcl-2蛋白的影响。方法 7日龄Sprague-Dawley新生大鼠制备缺氧缺血性脑损伤 （HIBD）模型,随机分为正常对照 （N）+生理盐水 （NS）、HIBD+NS、N+脐血单个核细胞 （UCBMC）及HIBD+UCBMC组。N+UCBMC与HIBD+UCBMC组侧脑室注入3×106个UCBMC,N+NS与HIBD+NS组注入等体积NS。移植后7 d采用NeuN/活性Caspase-3免疫荧光双标染色法、TUNEL法观察大脑皮层神经元凋亡,Western blot观察脑组织Bax、Bcl-2蛋白表达。结果 HIBD+NS组的NeuN+活性Caspase-3+DAPI+细胞及TUNEL+DAPI+细胞均多于N+NS和N+UCBMC组 （P < 0.01）;HIBD+UCBMC组的NeuN+活性Caspase-3+DAPI+细胞及TUNEL+DAPI+细胞均少于HIBD+NS组 （P < 0.01）。HIBD+NS组的Bax蛋白表达高于N+NS与N+UCBMC组,Bcl-2蛋白低于N+NS与N+UCBMC组 （P < 0.01）;而HIBD+UCBMC组的Bax蛋白较HIBD+NS组降低 （P < 0.01）,Bcl-2蛋白则高于HIBD+NS组、N+NS和N+UCBMC组 （P < 0.05）。结论 HIBD新生大鼠侧脑室移植UCBMC可以减轻神经元凋亡,其机制可能与Bcl-2蛋白表达上调,Bax蛋白表达下调有关。     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑神经细胞凋亡及脑组织中Rho GDP解离抑制因子和Bcl-2表达的变化

目的 研究Rho GDP解离抑制因子(Rho GDP dissociation inhibitor 2,RhoGDI2)mRNA 及Bcl-2 mRNA的表达在缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)中的作用和机制.方法 30只新生7日龄SD大鼠按照完全随机化方法分为假手术组及HIBD 6 h和48 h组,每组10只.采用流式细胞仪检测脑细胞凋亡情况,并用Real-time RT-PCR方法测定脑组织中RhoGDI2和Bcl-2mRNA表达水平.结果 (1)新生大鼠HIBD后48h结扎侧大脑半球脑水肿明显.(2) HIBD6 h出现典型的凋亡细胞峰,细胞凋亡率为(1.40±0.12)％.HIBD 48 h凋亡峰更为明显,细胞凋亡率达到( 15.86±0.98)％.缺氧缺血后与假手术组相比,差异有统计学意义(P＜0.01).(3)假手术组大鼠RhoGDI2和Bcl-2 mRNA表达水平较高(4.12±0.74、2.55±0.65),在HIBD 6 h后二者表达开始下降(3.19±0.77、1.96±0.36),48 h降低更加明显(1.04±0.18、1.06±0.17),与假手术组比较,HIBD各时间点RhoGDI2和Bcl-2 mRNA的表达均明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01).(4)缺氧缺m后各时间点RhoGDI2 mRNA的表达和Bcl-2 mRNA的表达呈正相关(r=0.831,P＜0.05).结论 脑缺氧缺血后,随着凋亡的出现,RhoGDI2和Bcl-2 mRNA表达水平降低,提示Rh0GDI2表达失衡可能通过Bcl-2参与新生大鼠HIBD中凋亡的发生.     

神经生长因子对缺氧缺血新生大鼠一氧化氮合成酶表达的影响

目的探讨缺氧缺血(HI)后神经型一氧化氮合酶(nNOS)的变化及神经生长因子(NGF)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的保护作用。方法夹闭妊娠足月Wistar大鼠子宫血管,制成HIBD新生鼠模型。治疗组给予腹腔注射NGF4000U/kg,1次/d,分别用1、3、7次。在生后不同时间检测nNOS表达、NO含量及细胞凋亡数量。结果治疗组的NO含量明显降低,24h的NO含量(μmol/L)为23.98±2.37,72h为22.17±1.74,而HIBD组24h和72h的含量分别为31.64±3.23和30.31±1.76,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);治疗组nNOS的表达也下降,24h和72h的表达量(个/mm2)为26.8±0.8和29.2±1.8,而同时间点HIBD组nNOS表达量为54.7±2.2和34.5±1.4,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);神经细胞凋亡情况,治疗组72h、7d皮质和海马区的凋亡细胞数(个/mm2),分别为41.4±1.3、5.6±0.6和43.9±1.8、5.8±1.2,而HIBD组72h、7d皮质和海马区的凋亡细胞数分别为51.6±2.5、12.6±1.4和58.7±2.6、15.2±1.7,治疗组的凋亡细胞数明显降低,同时期同部位比较均有统计学意义(P<0.05)。结论本研究证实NGF对新生大鼠HIBD有保护作用,通过抑制nNOS的表达,降低了炎性细胞因子NO的含量,减轻了HIBD后的脑细胞凋亡,证实NGF抗凋亡作用与抑制nNOS的表达从而减少NO生成有关。     

神经生长因子对缺氧缺血新生大鼠一氧化氮合成酶表达的影响

目的 探讨缺氧缺血(HI)后神经型一氧化氮合酶(nNOS)的变化及神经生长因子(NGF)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的保护作用.方法 夹闭妊娠足月Wistar大鼠子宫血管,制成HIBD新生鼠模型.治疗组给予腹腔注射NGF4000 U/kg,1次/d,分别用1、3、7次.在生后不同时间检测nNOS表达、NO含量及细胞凋亡数量.结果 治疗组的NO含量明显降低,24 h的NO含量(μmol/L)为23.98±2.37,72 h为22.17±1.74,而HIBD组24 h和72 h的含量分别为31.64±3.23和30.31±1.76,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);治疗组nNOS的表达也下降,24 h和72 h的表达量(个/mm2)为26.8±0.8和29.2±1.8,而同时间点HIBD组nNOS表达量为54.7±2.2和34.5±1.4,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);神经细胞凋亡情况,治疗组72 h、7 d皮质和海马区的凋亡细胞数(个/mm2),分别为41.4±1.3、5.6±0.6和43.9±1.8、5.8±1.2,而HIBD组72 h、7 d皮质和海马区的凋亡细胞数分别为51.6±2.5、12.6±1.4和58.7±2.6、15.2±1.7,治疗组的凋亡细胞数明显降低,同时期同部位比较均有统计学意义(P＜0.05).结论 本研究证实NGF对新生大鼠HIBD有保护作用,通过抑制nNOS的表达,降低了炎性细胞因子NO的含量,减轻了HIBD后的脑细胞凋亡,证实NGF抗凋亡作用与抑制nNOS的表达从而减少NO生成有关.     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠内质网应激相关因子的表达

目的 观察内质网应激相关因子氧调节蛋白150(ORP150)和C/EBP同源蛋白(CHOP)在缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑皮质内的表达,探讨内质网应激在新生大鼠HIBD中的作用.方法 新生7日龄SD大鼠随机分为假手术组和缺氧缺血(HI)组.每组按照观测的时间点不同分为3h、6h、12h、24h、3d、7d6个亚组,每个亚组8只.在每个时间点将大鼠断头后取皮质脑组织匀浆,用Western blot方法检测不同时间点其脑皮质ORP150及CHOP的动态变化.用原位末端标记法检测相应时间点光镜下其脑皮质组织的凋亡细胞数.结果 1.HI组CHOP表达水平在HIBD后各时间点均高于假手术组(P＜0.05),且在24h达到高峰;ORP150表达水平在完成HIBD后3h开始增加,6h达到高峰,后逐渐下降,7d时与假手术组比较差异无统计学意义(P＞0.05).2.HI后3h,HI组即发现结扎侧脑皮质有少量的凋亡细胞,随着HI时间的延长,凋亡细胞逐渐增多,24h达到高峰后下降.3.CHOP的表达变化与神经细胞凋亡时间趋势呈正相关(r=0.911,P＜0.05).结论 HIBD诱发了内质网应激,可能通过上调ORP150表达参与启动末折叠蛋白反应过程,而通过上调CHOP表达诱导神经细胞凋亡的发生.     

Bax/Bcl-2在高体积分数氧致新生大鼠慢性肺疾病肺组织及成纤维细胞中的动态变化

目的 制备高体积分数氧(高氧)诱导新生大鼠慢性肺疾病(CLD)模型,探讨持续吸入高氧对新生大鼠肺组织及成纤维细胞Bax及Bcl-2蛋白表达的影响.方法 足月新生大鼠出生12 h内分别持续吸入氧体积分数为900 mL·L-1的高氧(高氧组)和空气(空气组),于3 d、7 d和14 d随机处死动物后,肺组织取材同时进行肺成纤维细胞的原代培养,应用免疫组织化学半定量法检测其Bax及Bcl-2蛋白水平变化.结果 在肺组织中,高氧组Bcl-2蛋白的表达水平在7 d、14 d有所升高(P<0.001),3 d时表达无变化(P>0.05);而高氧组Bax蛋白的表达水平及Bax/Bcl-2比值在3 d、7 d和14 d均明显高于空气组,且具有时间敏感性(Pa<0.01).在肺成纤维细胞,高氧组3 d、7 d Bcl-2蛋白表达水平无变化(P>0.05),14 d时有所增高(P<0.001),但不如Bax蛋白增加明显;高氧组3 d、7 d和14 d肺成纤维细胞Bax蛋白的表达水平及Bax/Bcl-2比值均明显高于空气组(Pa<0.01).结论 高氧可促进新生大鼠肺组织及成纤维细胞Bax蛋白的表达,从而通过上调Bax/Bcl-2比值促进凋亡发生,参与CLD的发生发展过程.     

内毒素致胎鼠脑白质损伤后Bcl-2和Bax蛋白表达的研究

目的 探讨内毒素致胎鼠脑白质损伤后凋亡蛋白Bcl-2、Bax的表达及其意义.方法 孕鼠随机分为两组:感染组和对照组.感染组:建立宫内感染的动物模型,孕鼠怀孕15 d腹腔注射内毒素;对照组:孕鼠怀孕15 d腹腔注射生理盐水.分别于给药后2、4、12、24、72 h剖腹取胎鼠,取脑组织行组织病理学检查,观察胎盘及胎鼠脑组织病理特点,用免疫组织化学方法检测胎鼠脑组织凋亡蛋白Bcl-2、Bax的表达.结果 感染组胎盘组织见中性粒细胞浸润,胎鼠脑组织病理改变包括脑白质染色减淡,结构疏松等.感染组胎鼠脑组织凋亡蛋白Bcl-2的表达自2 h开始逐渐下降,而Bax的表达自2 h逐渐升高,均于12h达到峰值.2h感染组Bcl-2、Bax的阳性细胞百分数与对照组相比,差异无显著性(P>0.05);而4 h、12 h、24 h和72 h感染组与对照组相比,差异有非常显著性(P<0.01).感染组Bax与Bcl-2的比值均明显高于对照组,在各观察时间点两组相比,差异有非常显著性(P<0.01).结论 内毒素诱导是制备胎鼠脑白质损伤的一种有效形式.在胎鼠脑白质损伤中Bcl-2可能抑制细胞凋亡,Bax可能诱发细胞凋亡,两者的比率变化可能对脑白质损伤后细胞凋亡的调节起重要作用.     

谷氨酰胺对内毒素血症幼年大鼠小肠上皮细胞凋亡的作用及其机制探讨

目的：通过内毒素血症幼年大鼠小肠Bcl-2及BaxmRNA表达的变化,观察谷氨酰胺对小肠细胞凋亡的作用,探讨谷氨酰胺对内毒素血症幼年大鼠小肠的保护机制。方法：用腹腔注射内毒素(4mg/kg大肠杆菌脂多糖O55B5)方法制备18日龄大鼠内毒素血症模型(内毒素组);腹腔注射同等量生理盐水为对照组;腹腔注射内毒素同时注射N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(2g/kg)为谷氨酰胺干预组。分别在注射后2,4,6,24,72h取全部回肠,半定量RT-PCR法测Bcl-2,BaxmRNA的表达。结果：正常对照和内毒素组小肠各时间点的Bcl-2mRNA均无表达,谷氨酰胺组各时间点的Bcl-2mRNA表达增强。正常对照BaxmRNA表达较弱,内毒素组小肠各时间点的BaxmRNA表达均明显增强,而谷氨酰胺组2h亚组的表达较正常明显减弱,其余各时间点的BaxmRNA表达接近对照组。内毒素组Bax,Bcl-2mRNA表达的比值明显高于对照组,谷氨酰胺组Bax,Bcl-2mRNA表达的比值明显低于对照组和内毒素组,其中以2h亚组的变化最显著。结论：谷氨酰胺使内毒素血症小肠Bcl-2基因表达增强,明显高于正常;Bax基因表达减弱至接近正常;Bax,Bcl-2mRNA表达的比值明显下降,从而抑制细胞凋亡,维持肠屏障结构的完整,以对抗内毒素对肠黏膜的损害。     

L-精氨酸对胎儿生长受限胎盘Bcl-2、Bax凋亡蛋白及脐动脉血流的影响

目的 观察L-精氨酸对胎儿生长受限(FGR)脐动脉血流及胎盘Bcl-2、Bax凋亡蛋白表达的影响,探讨L-精氨酸对FGR的疗效.方法 选择FGR患者60例,随机分为常规组30例和L-精氨酸组30例.孕期定期应用B型超声监测二组胎儿脐血流参数;分娩后称新生儿体质量,10 min内取胎盘中央组织,100 g/L甲醛固定后石蜡包埋,免疫组织化学法检测各组胎盘Bcl-2、Bax凋亡蛋白的表达.采用SPSS 11.5软件进行统计学分析.结果 L-精氨酸组新生儿平均出生体质量显著高于常规组(P<0.01).治疗后,与常规组比较,L-精氨酸组快速血流比值较高(P<0.05),搏动指数、阻力指数较低(Pa<0.05).常规组较L-精氨酸组Bax表达量相对增强,而Bcl-2表达相对减弱.结论 L精氨酸可降低胎盘细胞凋亡相关基因Bax蛋白的表达,增加Bcl-2的表达,减少胎盘细胞凋亡,改善胎盘功能,促进胎儿发育.     

血管紧张素Ⅱ1型受体阻断剂对心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡及Bax、Bcl-2蛋白表达的影响

目的 观察血管紧张素Ⅱ1型受体阻断剂--氯沙坦对心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡程度的影响,分析促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2在该影响中的变化.方法 选24只雄性SD大鼠(8周龄),分为对照组、心衰组和氯沙坦干预组各8只.采用阿霉素腹腔注射造模,氯沙坦干预组同时灌胃给氯沙坦连续6周.透射电镜观察心肌超微结构改变,检测血清中CPK、CK-MB及LDH的含量.应用原位脱氧核糖核酸酶末端标记法(TUNEL法)检测大鼠心肌细胞凋亡,免疫组化法检测大鼠心肌Bax、Bcl-2蛋白的表达.结果 心衰组血清CPK、CK-MB、LDH活性和心肌细胞凋亡指数均较对照组升高,氯沙坦干预组血清中CPK、CK-MB和LDH的活性和心肌细胞凋亡指数均较心衰组降低,并可见凋亡小体.心衰组和氯沙坦干预组心肌细胞Bax和Bcl-2蛋白表达显著高于对照组;与心衰组相比,氯沙坦干预组明显下调Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达.结论 心力衰竭过程中发生了心肌细胞凋亡,氯沙坦可明显提高Bcl-2蛋白表达,降低Bax蛋白表达,从而达到有效抑制心肌细胞凋亡,减轻心肌超微结构损伤,减少心肌酶外漏,具有积极逆转心肌受损、改善心力衰竭进程的作用.     

尼莫地平对大鼠全脑缺血再灌注后海马区细胞凋亡的影响

目的 研究大鼠全脑缺血再灌注后海马区细胞凋亡情况及尼莫地平处理的影响.方法 选取成年雄性Wistar大鼠54只.实验动物随机分为假手术组、盐水对照组、药物治疗组.假手术组只进行手术操作,不结扎双侧颈动脉.盐水对照组和药物治疗组采用四条血管阻断方法 制备全脑缺血再灌注模型后,分别于0、6、12、24?h时间点开始并累积腹腔注射生理盐水[5ml/(kg·次)]和尼莫地平(1mg/kg).用流式细胞仪检测海马区细胞凋亡率及Bax、Bcl-2基因的表达情况.结果 (1) 缺血再灌注后盐水对照组海马区凋亡细胞比假手术组明显增多,差异具有非常显著性(P<0.01).(2) 缺血再灌注后,药物治疗组海马区凋亡细胞明显比盐水对照组少,差异具有非常显著性(P<0.01);0、6?h细胞凋亡率小于12、24?h,差异具有显著性(P<0.05).(3) 药物治疗组Bcl-2蛋白的表达量大于盐水对照组,而Bax则小于盐水对照组,差异具有显著性(P<0.05).结论 尼莫地平可明显抑制脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡,其抗凋亡作用可能与增加Bcl-2表达有关,早期用药作用显著.     

牛磺酸对宫内生长受限新生大鼠大脑Bcl-2,Bax和Caspase-3蛋白表达的影响

目的 探讨牛磺酸对宫内生长受限(IUGR)新生大鼠大脑皮质Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达的影响.方法 将15只孕鼠随机分为3组:正常对照组(正常组)、IUGR模型组(IUGR组)、牛磺酸治疗组(牛磺酸组)(n=5).IUGR模型组孕鼠自受孕第1天始饲以正常组40%的进食量(10 g/d)制备IUGR模型,牛磺酸组在开始建立IUGR模型第12天喂服牛磺酸300 mg/(kg·d),直至自然分娩.每窝新生大鼠随机抽取2只,采用免疫组织化学方法检测各组仔鼠大脑Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白的表达.应用SPSS 10.0软件进行统计学分析.结果 与正常组相比,IUGR组新生大鼠大脑皮质Bcl-2阳性细胞数减少,Bax和Caspase-3阳性细胞数增多,Bcl-2/Bax显著降低,差异均具有统计学意义(Pa<0.05).与IUGR组比较,牛磺酸组Bcl-2阳性细胞数增加,Bax和Caspase-3阳性细胞数下降,Bcl-2/Bax增高,差异均具有统计学意义(Pa<0.05).牛磺酸组与正常组新生大鼠大脑皮质,Bcl-2、Bax和Caspase-3阳性细胞数比较差异均具有统计学意义(Pa<0.05).结论 牛磺酸可通过上调Bcl-2的表达,下渊Bax和Caspase-3的表达,抑制神经细胞的凋亡,对IUGR幼鼠脑组织起到保护作用.     

泛素蛋白酶体抑制剂MG-132对高氧肺损伤大鼠肺上皮细胞凋亡的影响

目的 观察泛素蛋白酶体抑制剂MG-132对高氧肺损伤大鼠肺上皮细胞凋亡的影响并初步探讨相关机制.方法 实验采用完全随机设计.将26只SD大鼠分为4组:高氧组(n=8)、高氧+MG-132组(n=8)、空气对照组(n=5)、MG-132对照组(n=5).成功制备高氧肺损伤大鼠模型后,观察肺组织病理学改变,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组化法检测Bax、Bcl-2蛋白的表达并计算Bcl.2/Bax值.结果 高氧组SD大鼠肺组织可见明显急性炎症反应.高氧组、高氧+MG-132组的凋亡指数分别为66.76±7.64、34.78±4.40,明显高于空气组与MG-132对照组(14.48±1.75、12.88±1.95),但高氧+MG-132组的凋亡指数要低于高氧组,差异有显著性(P<0.05).高氧+MG-132组Bcl-2/Bax值(1.22±0.15)高于高氧组(0.87±0.11),差异有显著性(P<0.05).结论 高氧诱发肺组织细胞发生凋亡,蛋白酶体抑制剂MG-132可以通过调节Bcl-2与Bax的表达减轻高氧引起的细胞凋亡.     

血糖浓度对缺氧缺血新生大鼠脑内调控凋亡基因表达的影响

目的通过观察缺氧缺血(HI)合并高或低血糖新生大鼠脑内-对调控凋亡基因Bcl-2和Bax基因的表达变化，从分子生物学角度评估葡萄糖对缺氧缺血脑保护效果。方法将7日龄SD新生大鼠分成正常对照组、HI组、HI前低血糖组、HI前高血糖组以及HI后高血糖组，应用竞争性RT-PCR技术，分别于HI后0、2、6、12、24、48、72h及7d对各组新生大鼠脑内Bcl-2基因和Bax基因进行测定。结果正常情况下，Bcl-2基因和Bax基因在脑组织中无明显表达或仅有微弱表达。HI可引起这对调控凋亡基因的表达反应性增强，其中Bcl-2基因的表达高峰在HI后12h，Bax基因的表达高峰在HI后24h，在HI后48～72h，这一对基因的表达分别回落至低水平。血糖浓度对这一对基因的表达时相有明显影响。HI前高血糖组Bax基因的表达呈明显下调；Bcl-2基因的表达呈明显上调，其表达高峰较其余各组晚12h。HI前低血糖组Bax基因的表达呈明显上调；Bcl-2基因的表达则明显下调。HI后高血糖组的表达时相类似HI组，假手术组的基因表达则等同于正常组。结论结合本研究组已完成的脑细胞凋亡形态学结果，本研究进一步提示，通过上调Bcl-2基因和下调Bax基因的表达，高血糖在一定程度上抑制了HI后脑细胞的凋亡；低血糖则通过下调Bcl-2基因和上调Bax基因的表达，一定程度上加剧了HI后脑细胞的凋亡。结合临床，如对重度窒息新生儿在生后早期进行葡萄糖的合宜补充以及高危孕妇在临产前输注足量葡萄糖，有可能减轻窒息儿的脑病变程度，改善高危儿的生存质量。