人外周血γδT细胞激活后IL-2和IFN-γ表达的特点

目的: 探讨人外周血γδT细胞在不同刺激剂激活后产生Th1型细胞因子IL-2和IFN-γ的不同特点。方法: 健康成人外周血单个核细胞(PBMC)用佛波醇酯(PMA)、离子霉素(ionomycin)和抗CD28单抗(mAb)以不同组合刺激6~8h后;用流式细胞术胞内细胞因子检测法测定γδT细胞和αβT细胞IL-2和IFN-γ的表达;或用结核杆菌抗原(Mtb-Ag)刺激γδT细胞加IL-2扩增3~8天后检测γδT细胞IL-2的表达。结果: PBMC经PMA+ionomycin刺激后,与αβT细胞中产生IL-2细胞(14.0%)相比,γδT细胞中极少数细胞(1.1%)表达IL-2;但分泌IFN-γ细胞在γδT细胞中(56.1%)明显多于αβT细胞(8.5%)。如加抗CD28mAb联合刺激后,IL-2产生细胞在αβT细胞中明显增加,但在γδT细胞中未见增加;而IFN-γ表达细胞在两类细胞中均有明显增加;PBMC用Mtb-Ag激活后扩增3天后在γδT细胞中开始检测到IL-2表达,第5~6天时达高峰,第8天时逐渐下降。结论: 多克隆短时刺激对PBMC中γδT细胞表达IFN-γ能力强于αβT细胞,但产生IL-2很少;MtbAg能诱导γδT细胞表达IL-2,但过程较慢。     

慢性乙型肝炎Th1/Th2失衡分析

目的:探讨慢性乙型肝炎发病过程中Th1/Th2细胞平衡失调的原因. 方法:用CD3和CD28 mAb, LPS分别体外刺激慢性HBV感染者和健康对照者的PBMC,ELISA法检测培养上清液中IL-10, IL-12及IFN-γ的水平. 结果:用mAb诱导刺激PBMC后,慢性HBV感染组IFN-γ和IL-10水平与健康对照组无差异;LPS诱导刺激后,慢性HBV感染组IL-12水平显著低于健康对照组(34±8 vs 77±9, P<0.05),且HBV阳性者IL-10分泌水平显著高于阴性者(975±101 vs 895±97, P<0.05). 结论:慢性HBV感染时Th1/Th2失衡并非T细胞本身缺陷所致,APC功能缺陷可能为Th1/Th2失衡的原因. APC功能缺陷可能与HBV侵犯APC有关.     

细胞因子诱导的人脐血CD4 T细胞Th17极化态的建立

目的建立一个合理的CD4T细胞极化的体外细胞培养方法,研究细胞因子刺激的人脐血CD4T细胞极化时产生IL-17的效应/记忆T细胞（Th17细胞）的表达。方法用TGF-β、抗IL-4、抗IFN-γ、IL-6、IL-1β活化幼稚脐血CD4T细胞,促成Th17细胞表型,IL-23具有维护功能。用流式细胞术分析在Th17极化态和Th0非极化态时CD4T细胞上IL-17和IFN-γ的表达,同时用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定细胞培养上清液中IL-17和IFN-γ的水平。结果IL-17＋IFN-γ-（Th17）细胞比例在Th17极化态时为（28±2.3）%,非极化态时为（3.2±0.4）%;培养上清液中分泌的IL-17浓度在Th17极化态时为（7350±1530）pg/ml,非极化态时为（218±32）pg/ml,两项指标在Th17极化态时都显著高于非极化态时,差异均有高度统计学意义（P〈0.001）。结论多种细胞因子刺激的CD4T细胞极化时促进了IL-17产物的表达,体外Th17极化态的建立为研究IL-17相关的免疫性疾病提供了一个平台。     

内毒素休克性肺损伤与IFN-γ/IL-4失衡

目的:探讨内毒素休克肺损伤与TH1/TH2平衡的关系.方法:采用颈静脉注入LPS复制大鼠急性肺损伤模型,用ELISA法检测其外周血单个核细胞(PBMC)产生IFN-γ、IL-4水平及IFN-γ/IL-4比值.结果:与正常对照组相比,急性肺损伤组外周血PBMC产生IFN-γ水平,IFN-γ/IL-4比值明显升高(P＜0.05;P＜0.001),而IL-4水平差异无显著性(P＞0.05),肺组织病理切片显示大鼠发生ALI.结论:LPS休克肺损伤时,体内存在Th1/Th2类细胞因子水平失衡.     

猪囊尾蚴病患者外周血T细胞亚群比例和产生IFN-γ、IL-4水平研究

目的:检测猪囊尾蚴病患者外周血T细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)体外诱生IFN-γ、IL-4的水平,探讨T细胞亚群在感染免疫中的调控。方法:采用流式细胞仪检测猪囊尾蚴病患者PBMC中T细胞亚群比例和IFN-γ/IL-4水平;用Cellquest软件或WinMDI2.8软件数据分析。结果:猪囊尾蚴病患者T细胞亚群CD3+与CD4+细胞百分率均较正常人升高(P<0.01),CD4+/CD8+比值亦较正常人升高(P<0.01);PBMC中分泌IFN-γ及IL-4的CD3+细胞百分率与正常人差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:猪囊尾蚴病患者PBMC中CD3+、CD4+细胞百分率显著升高,T细胞亚群比例失调,免疫功能紊乱。     

慢性乙型肝炎患者PBMC内IL4与IFN-γ mRNA的表达

目的阐明Th1/Th2类细胞因子与慢性乙型肝炎肝脏炎症活动的相关性以及这些细胞因子作为慢性乙型肝炎炎症活动调节剂的作用.方法用RT-PCR法检测慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)内白细胞介素-4(IL-4)及干扰素-γ(IFN-γ)mRNA的表达.结果在静息期,无明显的IL-4及IFN-γ mRNA的表达,在活动期IFN-γ的表达率(100%)明显高于恢复期(50%)(P＜0.05):相反,在恢复期IL-4 mRNA的表达率(87.5%o)明显高于活动期(12.5%)(P＜0.05).结论在慢性乙型肝炎发病机理中,在mRNA水平,IFN-γ作为正向免疫调节性细胞因子,而IL-4作为免疫抑制性细胞因子发挥作用,结果证实Th1细胞因子上调、Th2细胞因子下调慢性乙型肝炎肝脏炎症.     

环孢素对正常人PBMCs产生IFN-γ的抑制作用

[目的]探讨在不同刺激条件下,环孢素(ciclosporine,CsA)对正常人外周血单个核细胞(PBMCs)γ-干扰素(interferon-gamma,IFN-γ)的产生,以及对细胞亚群的影响.[方法]PBMCs在抗CD3单克隆抗体(antiCD3)、抗CD3和抗CD28(anti-CD28)单克隆抗体、IL-12(Th1细胞分化因子)刺激的情况下或在混合淋巴细胞反应中,观察CsA对IFN-γ产生和Th1细胞分化的影响.同时使用流式细胞仪,在单个细胞水平上评价CsA对T淋巴细胞表面活化分子CD25及细胞内细胞因子IFN-γ和IL-2产生的影响.[结果]CsA对由不同条件诱导产生的IFN-γ,均表现为剂量依赖性抑制关系.此外,CsA抑制IL-12诱导的Th1分化.进一步研究结果表明,CsA可抑制CD4 和CD8 T细胞IFN-γ的表达.[结论]CsA剂量依赖性抑制T淋巴细胞的活化,抑制CD4 、CD8 T淋巴细胞产生IFN-γ和Th1细胞的分化,其抑制机理可能与细胞的活化有关.     

流式细胞术检测人和小鼠Th细胞亚群

目的建立人和小鼠Th1和Th2细胞的检测方法,探讨两者在流式细胞仪检测方面的不同.方法采用PMA和离子霉素共同刺激外周血单个核细胞,观察在不同时间和不同剂量的PMA刺激下外周血T淋巴细胞CD3、CD4、CD8表达的变化;采用多色荧光共同标记分析技术检测外周血单个核细胞IL-4和IFN-γ的表达.结果在PMA和离子霉素共同刺激后4 h,人外周血T淋巴细胞表面CD4表达迅速下降,而小鼠T淋巴细胞表面CD4表达仅轻度下降;采用多色分析技术可以有效的检测Th1细胞和Th2细胞;采用CD3、CD8设门分析可以有效的区分人Th细胞;采用CD4设门可以有效区分小鼠Th细胞.结论人Th细胞检测宜采用4色染色分析技术,小鼠Th细胞检测采用3色染色技术即可.     

肺癌患者外周血CD4~+T淋巴细胞Th1/Th2分化情况检测与分析

目的观察肺癌患者外周血CD4+T淋巴细胞中Th1/Th2分化情况与反应状态,为肺癌的诊断和免疫治疗研究提供依据。方法以干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)代表Th1和Th2细胞功能,应用细胞因子诱生技术和流式细胞仪,检测25例肺癌患者及25例健康志愿者外周血CD4+T淋巴细胞诱生的IFN-γ和IL-4水平。结果肺癌患者外周血CD4+T淋巴细胞诱生的IFN-γ水平与健康对照组比较明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),IL-4水平在2组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论肺癌患者外周血CD4+T淋巴细胞向Th1细胞的分化明显减少,向Th2细胞的分化无明显变化,Th1向Th2方向的漂移可能是肺癌细胞生长和免疫逃避的机制之一。     

Graves眼病患者临床活动性评分与细胞免疫关系的探讨

目的:通过研究早期Graves眼病(GO)患者(病程＜2年)的T细胞亚群和其Th1和Th2细胞因子,探讨免疫机制在GO起病中的作用及与眼病炎症活动之间的关系.方法:①采用流式细胞仪检测早期Graves眼病和正常对照组的T细胞亚群和CD8-/IL-4 和CD8-/IFN-γ T细胞的百分含量;②对早期GO的临床活动性评分(CAS,clinical activity score )和T细胞亚群、CD8-/IFN-γ T细胞和CD8-/IL-4 T细胞之间的关系进行相关分析.结果:①在早期GO患者中,CD4 T细胞和CD4 T细胞/ CD8 T细胞比值增高,CD8-/IFN-γ 细胞的百分含量和CD8-/IFN-γ T细胞/CD8-/IL-4 T细胞比值显著增高;②在早期GO患者中,CAS与CD8-/IFN-γ T细胞的百分含量和CD8-/IFN-γ T细胞/CD8-/IL-4 T细胞的比值呈正相关(P＜0.05),与T细胞亚群、CD8-/IL-4 T细胞的百分含量无相关关系(P＞0.05).结论:①在早期GO中,存在着T细胞亚群的失衡,以CD4 Th1细胞介导的细胞免疫在早期GO的发病机制中起了重要作用;②CD8-/IFN-γ T细胞和CD8-/IFN-γ T细胞/CD8-/IL-4 T细胞的比值可以作为反映GO眼球后组织增生及眼病活动性的临床指标.