LC-MS/MS法测定人血浆中利培酮和9-羟基利培酮的浓度及临床应用

目的：建立简单快速的液相串联质谱法（LC-MS/MS）测定人血浆中利培酮及其代谢物9-羟基利培酮的浓度。方法：血浆样本采用甲醇沉淀蛋白法处理,以地西泮为内标,采用ES Industries Sonoma C₁₈（2）色谱柱（100 mm×2.1 mm,3 μm）分离化合物;流动相包括A-50%甲醇水溶液（含6 mmol·L^-1乙酸铵）、B-0.1%甲酸乙腈溶液;梯度洗脱,总流速0.60 mL·min^-1;进样量10 μL;柱温30℃。采用正离子MRM模式扫描,电喷雾电离,利培酮、9-羟基利培酮及地西泮内标离子通道分别为m/z411.3→m/z191.1、m/z427.2→m/z207.0和m/z285.1→m/z193.1。依据《中国药典》（2015年版）通则中9012"生物样品定量分析方法验证指导原则"对所建方法进行验证。结果：利培酮在0.16~101.40 μg·L^-1的浓度范围内线性关系良好（r>0.999）,9-羟基利培酮在0.40~256.80 μg·L^-1浓度范围内线性关系良好（r>0.999）;在定量下限,低、中、高浓度批内与批间精密度的标准偏差（RSD）均小于10.9%,准确度符合要求;含分析物血浆样品在不同储存条件下结果稳定。该法已成功应用于临床样本治疗药物监测。运用此方法监测分析一千多份临床样本得出总利培酮临床实际测定浓度范围为13.30~93.22 μg·L^-1。结论：本研究建立了测定血浆中利培酮及其代谢物9-羟基利培酮浓度的快速、简便、实用的LC-MS/MS方法。利培酮临床实际测定浓度范围相比于神经精神药理学与药物精神病学协会专家组推荐治疗浓度范围更宽,且多次监测的患者中女性血药浓度相对于男性更趋于稳定。     

LC-MS／MS法测定人血浆中氯沙坦及其代谢物E-3174的浓度

目的建立LC-MS／MS法测定人血浆中氯沙坦及其代谢物E-3174血药浓度的方法。方法血浆酸化后用乙醚提取,采用同位素内标（氘3-B3174）进行测定。色谱柱：CAPCELLPACKC18Ⅲ（100mm×2．0mm,5μm）,流动相：0．02％甲酸乙腈-水溶液（53：47,v／v）;等度洗脱;流速0．3mL·min-1;进样体积5μL;电喷雾离子化,正离子MRM扫描。结果氯沙坦和E-3174线性范围均为5—500μg·L-1（r〉0．999）,最低定量限均为5μg·L-1,平均提取回收率均〉50％,批内、批间精密度RSD均〈8％。结论本方法灵敏度高、专一性好、操作简单,适用于氯沙坦的药动学研究。     

LC-MS/MS法测定人血浆中利培酮及9-羟基利培酮的浓度

目的:建立同时测定人血浆中利培酮及9-羟基利培酮浓度的方法。方法:血浆样品经液-液萃取后,以AF2672为内标,采用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法测定。色谱柱为Xtimate~(TM) C_(18),流动相为乙腈-10 mmol/L乙酸铵溶液(含0.1%甲酸)(37∶63,V/V,pH=3.2),流速为0.25 mL/min,柱温为40℃,进样量为6μL。采用电喷雾电离源,以多反应离子监测进行正离子扫描,用于定量分析的离子对分别为m/z 411.26→191.02(利培酮)、m/z 427.21→206.91(9-羟基利培酮)、m/z 418.00→175.95(内标)。结果:利培酮、9-羟基利培酮血药浓度分别在0.2~50.0、1.0~200.0 ng/mL范围内线性关系良好(r分别为0.999 7、0.998 7);日内、日间RSD<15%,方法回收率分别为92.42%~104.81%、94.51%~100.57%,基质效应分别为98.33%~107.09%、91.05%~105.80%,提取回收率分别为78.11%~92.62%、76.32%~85.09%。采用该法测得78例精神分裂症患者体内利培酮和9-羟基利培酮的血药浓度分别为(13.58±8.31)、(25.62±15.52)ng/mL。结论:该方法操作简便、专属性强、灵敏度高,可用于口服利培酮患者的常规治疗药物监测和急性中毒分析。     

LC-MS/MS法分析人血浆中利培酮浓度及健康人体的药动学研究

目的 建立一种简便、灵敏的液相串联质谱（LC-MS/MS）法测定人血浆中利培酮的浓度,并应用于健康人体的药动学研究。方法 血浆样品经乙腈沉淀蛋白后,使用ZORBAX Eclipse XDB-C₁₈ （50 mm×4.6 mm,5 μm）色谱柱分离,以60%乙腈-40%甲醇、0.1%甲酸-5%乙腈-10 mmol/L乙酸铵水溶液作为流动相,梯度洗脱;在电喷雾离子化源（ESI）正离子检测条件下,采用多反应离子监测模式（MRM）对利培酮及内标利培酮-d4进行定量分析,检测离子对分别为m/z 411.3→191.2、m/z 415.3→195.2;进行专属性、系统适用性、准确度、精密度、基质效应、提取回收率、稳定性等方法学验证;8名健康成年受试者（无脱落）空腹单次口服利培酮片1 mg后,分别于给药前0 h和给药后10、20、30、45 min,1.00、1.25、1.50、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00、8.00、12.00、16.00、24.00、36.00、48.00 h采集血样至含有肝素钠的抗凝管中,分离血浆样品,进行LC-MS/MS分析。结果 建立的LC-MS/MS法专属性良好,系统适用性良好,内标与待测物之间不存在交叉影响,人血浆中利培酮的线性范围为0.1～20.0 ng/mL,定量下限（LLOQ）为0.1 ng/mL,利培酮在空腹血浆、餐后血浆及溶血血浆中经内标归一化的基质效应分别为0.991～1.00、1.00～1.01和0.994～0.999,利培酮在人血浆中的平均提取回收率为96.8%～99.7%,准确度、精密度以及稳定性等均符合有关要求。健康受试者单次口服利培酮片1 mg后,主要药动学参数t_max、C_max、AUC_0~t、t_1/2分别为（0.969±0.248）h、（7.83±2.24）ng/mL、（25.5±12.0）h·ng/mL、（3.31±1.74）h。结论 建立的LC-MS/MS法前处理简便快速,灵敏度高,满足生物分析的法规要求,可应用于利培酮在健康人体中的药动学研究。     

大鼠血浆中利培酮及9-羟基利培酮的LC-MS/MS法测定

建立了LC-MS/MS法测定大鼠血浆中的利培酮和9-羟基利培酮.用蛋白沉淀法处理血样,采用C_(18)色谱柱,以0.1%甲酸溶液-甲醇(40:60)为流动相,盐酸苯海拉明为内标,使用多反应监测,检测离子对分别为m/z 411.3→191.4(利培酮)、m/z 427.2→207.1(9-羟基利培酮)和m/z 256.2→167.3(苯海拉明).利培酮和9一羟基利培酮在0.5～1 000 ng/ml范围内线性关系良好,批内、批间RSD均小于5%,回收率为90%～110%.     

LC-MS/MS法测定人血浆中羟基红花黄色素A的浓度

目的建立LC-MS/MS法测定人血浆中羟基红花黄色素A(QA)的浓度。方法血浆样品中加入等体积0.2 mol·L-1的乙酸铵后,采用固相萃取技术进行提取QA,洗脱液直接进行LC-MS/MS分析。QA和内标异鼠李素-3-O-新橙皮苷(SLS)通过Agilent ZORBAX SB C18(3.0 mm×100 mm,3.5μm)色谱柱进行等度洗脱分离,流动相组成为0.2 mmol·L-1乙酸铵水溶液/甲醇=30/70。质谱检测采用负离子模式,扫描方式为多反应检测,QA的目标离子对为m/z 611.131/490.900,SLS的目标离子对为m/z 623.032/298.800。结果 QA和SLS的保留时间分别2.7 min和3.9 min左右,空白血浆无干扰影响含量测定;血浆中QA的线性范围为8.57⁴185μg·L-1(r为0.99494185μg·L-1(r为0.9949⁰.9992),定量下限为8.570μg·L-1,日内日间精密度RSD均小于7%;低、中、高3个浓度下的平均介质效应分别为116.62%、119.06%和115.72%(RSD分别为3.27%、3.42%和4.93%),平均提取回收率分别为77.75%、80.90%和80.76%(RSD分别为1.70%、1.78%和4.15%);血浆样本于室温放置4 h、-70℃反复冻融3次及-70℃冰冻保存31d的情况下均稳定;浓度超出定量上限的QA血浆样本经空白血浆稀释6.25倍后可准确测定。结论建立的测定血浆样本中QA浓度的LC-MS/MS分析方法简便、快速、准确灵敏,适用于QA人体药代动力学的系统研究。     

LC-MS/MS法测定人血浆中的倍他米松17-丙酸酯及其药动学研究

目的:建立人血浆中倍他米松17-丙酸酯（B17P）的LC-MS/MS测定方法,并研究其在健康人体内的药动学特征。方法:采用Agilent Zorbax C18（2.1 mm×100 mm,3.5μm）色谱柱,以甲醇-水（88:12）为流动相,流速0.15 ml·min^-1;电喷雾（ESI）离子源,正离子电离模式,多反应离子监测（MRM）的扫描方式,B17P和二丙酸倍氯米松（内标,IS）的检测离子对分别选择为m/z 471.1→397.1和543.2→433.1。结果:B17P的线性范围为0.02～2.0 ng·ml^-1（r=0.999 3,n=5）,定量下限为0.02 ng·ml^-1,日内和日间精密度（RSD）均小于10.9%,提取回收率在70%左右,方法回收率均在94.5～106.6%范围内。B17P的t_1/2为（82.5±17.3）h,C_max为（0.73±0.18）h,AUC_0～1为（63.9±13.6）ng·h·ml^-1。结论:该法简便、快速、灵敏、准确,适用于B17P血药浓度测定及其人体药动学研究。     

LC-MS/MS法测定甲氯噻嗪血浓度及药动学研究

目的为了获得国产甲氯噻嗪在中国人体内的代谢情况,以便指导临床合理用药,对国产的甲氯噻嗪片在健康中国男性受试者中空腹单剂量口服不同剂量时的药动学特点进行评价。方法采用LC-MS/MS法测定血浆中甲氯噻嗪的浓度并用非房室模型计算药动学参数。结果入选的10名受试者单剂量口服3种不同剂量(2.5、5.0和10mg)的甲氯噻嗪后的AUC0→t分别为:(128.40±20.88)、(257.68±37.10)和(517.27±119.17)μg·h·L~(~(-1));AUC0→∞分别为:(150.47±24.78)、(299.52±45.56)和(602.57±129.67)μg·h·L~(-1);cmax分别为(8.43±2.21)、(16.60±2.53)和(32.08±8.44)μg·L~(-1);tmax分别为(2.60±0.70)、(2.30±0.95)和(3.25±1.27)h;T1/2分别为(17.63±2.61)、(17.37±2.62)和(17.87±2.49)h;Ka分别为(1.195±0.720)、(1.352±0.626)和(1.221±1.152)h~(-1);Ke分别为(0.0344±0.105)、(0.0391±0.0103)和(0.0362±0.0081)h~(-1);Vd分别为(236.36±69.20)、(221.79±87.94)和(299.30±204.72)L;CL分别为(0.0174±0.0039)、(0.0178±0.0035)和(0.0179±0.0036)L·h~(-1)。结论AUC0→t(r=1)和cmax(r=0.9998)在2.5~10mg范围内呈良好的线性关系。tmax和T1/2经ANOVA(SPSS10.0)统计学处理3种不同剂量间差别无统计学意义。剂量校正后AUC0→t和cmax的几何均数分别是:50.69、51.04、50.39μg·h·L~(-1)和3.26、3.28、3.06μg·L~(-1),其值基本相近。     

LC-MS/MS测定人血浆中哌甲酯

目的 建立LC-MS/MS测定人血浆中盐酸哌甲酯的浓度。方法 待测血浆1.0 mL,经1 mol·L^-1的氢氧化钠40 μL碱化后,用4 mL乙醚萃取处理,采用Eclipse XDB-C₁₈ (4.6 mm×150 mm,5 μm)色谱柱,以甲醇和水为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1。以电喷雾正离子源离子化,检测离子对盐酸哌甲酯为234.0/84.0,内标卡马西平为237.0/194.0。结果 血浆中内源性物质对测定无干扰,最低定量限为0.1 ng·mL^-1,在1~100 ng·mL^-1内盐酸哌甲酯线性关系良好(r=0.999 1),日内、日间RSD均小于8%,样品分析时间为10 min。结论 该法专属性强、灵敏度高,操作简便快速,测定结果可靠,适于进行盐酸哌甲酯血药浓度监测。     

利培酮口腔崩解片的生物等效性研究

目的研究利培酮口腔崩解片的生物等效性。方法采用双周期随机交叉试验设计。40名男性健康受试者分别服用1mg利培酮普通片和口腔崩解片后,采集不同时间点的静脉血样,液相色谱-串联质谱法测定血浆中利培酮和9-羟基利培酮的浓度。结果利培酮的药动学符合有滞后时间的一房室模型,利培酮的药动学参数AUC0-16分别为（23.65±6.23）和（23.20±5.08）ng.h.L-1,AUC0-∞为（25.01±6.63）和（24.44±5.38）ng.h.L-1,Cmax为（4.99±1.26）和（4.96±1.18）ng.L-1,tmax为（1.29±0.43）和（1.42±0.43）h。相对生物利用度为（100±12）%;9-羟基利培酮的药动学参数AUC0-96分别为（99.35±34.77）和（93.96±27.75）ng.h.L-1,AUC0-∞为（104.87±35.20）和（98.39±27.67）ng.h.L-1,Cmax为（4.12±1.62）和（4.20±1.82）ng.L-1,tmax为（5.36±3.63）和（5.40±3.58）h,相对生物利用度为（99±28）%。结论利培酮口腔崩解片与普通片具有生物等效性。     

HPLC-MS/MS测定人体血浆中克拉霉素浓度的方法及方法学确证

目的建立测定人体血浆中克拉霉素浓度的高效液相色谱-串联质谱联法（HPLC-MS/MS）法。方法血浆样本用甲醇沉淀蛋白后,选用色谱柱Agilent-XDB-C8柱（2.1mm×150mm,5μm）,以甲醇（A相）：水（含0.1%甲酸）=85：15（V：V）的比例为流动相,流速为0.2ml/min,选用岛津（SHIMADZU）高效液相色谱系统,串联API3200型三重四极杆质谱仪,采用多重反应监测（MRM）扫描方式进行监测,电喷雾离子化源（ESI源）,正离子方式,用于定量分析的离子反应对分别为质荷比m/z748.4→m/z158.2（克拉霉素）和m/z515.3→m/z276.2（替米沙坦,内标）。结果本方法血浆中克拉霉素的线性范围为10～3000ng/ml（r〉0.99）,定量下限为10ng/ml,批内和批间相对标准偏差均〈15%,准确度（相对回收率）相对标准偏差也均〈15%。稳定性试验中,血浆中克拉霉素在方法学要求的各种贮存条件下均较稳定。结论该方法快速、灵敏、专属性强、重现性好,适用于人体内克拉霉素的药代动力学研究。     

基于UPLC-MS/MS技术的人血清中利培酮及其代谢产物的治疗药物监测

目的建立一种快速测定人血清中利培酮及其代谢产物9-羟基利培酮浓度的超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS)。方法以利培酮-d4为内标,以Waters Acquity UPLC BEH C18(2.1×50 mm,1.7μm)为色谱柱,柱温:50℃,0.1%甲酸水溶液(A)~0.1%甲酸甲醇(B)为流动相,快速进行治疗药物监测。结果在1~100 ng/ml,利培酮和9-羟基利培酮的线性良好(r>0.999),低、中、高质控的日内和日间精密度的RSD均小于6.0%,基质效应在92.4%~106.7%,RSD小于6.5%。结论本方法操作简单,灵敏度高、准确度好,可在4 min中完成一次标本检测,通量高,可满足临床对利培酮和9-羟基利培酮检测的需求。     

液相色谱-串联质谱法测定人血浆中的利培酮

利培酮为苯并异噁唑类化合物,通过阻断5-HT2受体和多巴胺D2受体发挥抗精神病作用.同其他抗精神病药物相比,利培酮所引起的椎体外系副作用更少,药效更为明显 .     

Multiple dose pharmacokinetics of risperidone and 9-hydroxyrisperidone in Chinese female patients with schizophrenia

AIM: To study the multiple dose clinical pharmacokinetics of risperidone and its main active metabolite, 9-hydroxyrisperidone, in Chinese female patients with schizophrenia. METHODS: The subjects were 23 Chinese female inpatients aged 18-65 years who met the CCMD-III (third revision of the Chinese Criteria of Mental Disorders) criteria for schizophrenia. Subjects were tested after 17 d of treatment with 2 mg risperidone twice daily. Plasma concentrations of risperidone and 9-hydroxy-risperidone were assayed by using validated high performance liquid chromatography-mass spectrometry (HPLC-MS) methods. RESULTS: Risperidone was rapidly absorbed (Tmax was 1.6 h) and its T1/2 in plasma was short (3.2 h). 9-hydroxy-risperidone was quickly metabolized from the parent drug with a mean Tmax of 2.5 h. It had a long half-life of 24.7 h. The C(ss)(av) of risperidone and 9-hydroxy-risperidone were 36.9+/-33.1 and 110.6+/-30.5 microg x h x L(-1), respectively, and the AUC(ss)0-12 were 443.2+/- 397.4 and 1327.2+/- 402.3 microg x h x L(-1), respectively. CL/F and V/F of risperidone were 8.7+/- 6.2 L/h and 34.1+/- 24.3 L, respectively. Interindividual variations for pharmacokinetic parameters were quite large for risperidone. All 23 subjects experienced high prolactin levels when treated with risperidone. However there was no correlation between prolactin level and the concentration of risperidone, 9-hydroxy-risperidone, or the active moiety. CONCLUSION: Risperidone showed large interindividual variations in pharmacokinetics. Administration of risperidone resulted in high serum prolactin levels. The results indicate that systemic exposure to risperidone and 9-hydroxy-risperidone in female Chinese schizophrenic patients is higher relative to published data for white Caucasian patients. Larger studies regarding the PK/PD relationship may be required to develop a reasonable clinical dosage regimen for Chinese female patients.     

利培酮与9-羟利培酮对精神分裂症患者血药浓度与剂量的关系

目的:探讨口服利培酮的精神分裂症患者利培酮、9-羟利培酮血药浓度、利培酮与9-羟利培酮血药浓度之和及比值与剂量的关系.方法:采用液-质联用法测定利培酮和9-羟利培酮血药浓度;计算利培酮、9-羟利培酮血药浓度及两者之和与剂量的相关系数.结果:利培酮、9-羟利培酮及两者之和与剂量相关系数分别0.766 8,0.980 0和0.979 8.36.6%患者9-羟利培酮血药浓度高于利培酮.结论:9-羟利培酮血药浓度及两者之和比利培酮血药浓度与剂量有更好相关性,9-羟利培酮在精神分裂症治疗中有重要作用.     

液相色谱-串联质谱法测定人血浆中伪麻黄碱及其药动学研究

目的建立人血浆中伪麻黄碱含量的液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）测定法,并对其进行人体药动学研究。方法血样用甲醇沉淀、离心后进行质谱分析,色谱柱：Agilent ZORBAX SB C18（100 mm×3.5 mm,3.0μm）;流动相：甲醇-水（含10 mmol.L-1乙酸铵,0.05%甲酸）=28∶72（v/v）;质谱条件：气动辅助电喷雾离子化（ESI）,正离子检测,选择性多反应检测（SRM）：伪麻黄碱,166.1〉148.1;内标：帕罗西汀,330.1〉192.1。测定20名健康受试者口服受试制剂（单剂量、多剂量）后血浆中伪麻黄碱浓度。结果线性范围1-600μg.L-1,最低定量限（LLOQ）为1.0μg.L-1,绝对回收率为85.8%-87.6%。单剂量口服伪麻黄碱（120、240 mg）后药动学参数：t1/2为（6.8±0.9）、（6.6±1.3）h,tmax为（6.1±1.6）、（7.4±3.8）h,Cmax为（210.44±41.59）、（465.26±87.65）μg.L-1,V为（398.12±91.05）、（353.52±102.34）L,CL为（42.57±9.02）、（39.69±8.87）L.h-1,AUC0-48为（3 256.12±711.26）、（6 954.52±1 955.27）μg.h.L-1,MRT0-48为（11.71±0.89）、（11.87±1.26）h;伪麻黄碱多剂量（120 mg,bid）药动学参数：Cmax为（398.08±102.56）μg.L^-1,V为（309.66±82.37）L,CL为（37.51±7.23）L.h^-1,AUC0-48为（5 463.24±2 256.39）μg.h.L^-1,Cav为（282.11±92.19）μg.L-1,DF为（0.61±0.15）,AUCss为（3 372.85±1 328.78）μg.h.L^-1。结论本方法结果准确、灵敏,伪麻黄碱主要药动学参数与国内外文献报道基本一致。