长爪沙鼠生物净化技术的研究

目的：为实现长爪沙鼠微生物质量升级和实验动物化目标,我们对长爪沙鼠实施生物净化。方法：在长爪沙鼠生物净化过程中,采取孕鼠选择和临产期判断、无菌剖腹产、仔鼠代乳以及独立通风笼盒（IVC）饲养管理和微生物检测等措施,比较了ICR小鼠、SD大鼠、长爪沙鼠代乳和饲料中添加营养成分对仔鼠代乳的影响。结果：本研究共实施长爪沙鼠无菌剖腹产达85胎次,通过ICR代乳鼠代乳并成功断乳167只。讨论：根据微生物检测结果,本研究顺利实现了长爪沙鼠生物净化,形成的关键技术有望为我国特色实验动物资源的生物净化提供参考。     

普通环境长爪沙鼠种群中病原体携带情况普查

目的对普通环境饲养的长爪沙鼠病原感染情况进行初步调查,为制定长爪沙鼠病原体检测地方标准提供依据。方法参考小鼠、大鼠微生物和寄生虫检测方法,对普通环境饲养的30只长爪沙鼠进行16项细菌、11项病毒和8项寄生虫的检测。结果饲养于普通环境的30只长爪沙鼠有淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒、仙台病毒、小鼠肺炎病毒、呼肠孤病毒III型、小鼠脑脊髓炎病毒、支原体、泰泽病原体、螺杆菌抗体检出,其检出率分别为6.7%、3.3%、100.0%、6.7%、10.0%、6.7%、6.7%和56.7%,同时检出嗜肺巴斯德杆菌感染率为3.3%,金黄色葡萄球菌感染率为10.0%,大肠埃希菌O115 a,C,K(B)感染率为6.7%,鼠三毛滴虫感染率为100.0%,鞭毛虫感染率为100.0%。结论本研究为制定长爪沙鼠等级标准提供了参考数据。     

长爪沙鼠的生物净化技术

目的实现长爪沙鼠微生物质量升级和实验动物化目标,需对长爪沙鼠实施生物净化。方法在长爪沙鼠生物净化过程中,采取孕鼠选择和临产期判断、无菌剖宫产、仔鼠代乳以及独立通风笼盒(IVC)饲养管理等措施,比较了ICR小鼠、SD大鼠、长爪沙鼠代乳和饲料中添加营养成分对仔鼠代乳的影响。结果本研究共实施长爪沙鼠无菌剖宫产达85胎次,通过ICR代乳鼠代乳并成功断乳167只。结论本研究顺利实现了长爪沙鼠生物净化,形成的关键技术有望为我国特色实验动物资源的生物净化提供参考。     

异种动物代乳用于剖宫产长爪沙鼠种群净化

目的探讨长爪沙鼠剖宫产净化种群的代乳方法。方法在超净工作台对妊娠长爪沙鼠进行剖宫取胎,选择有1～2胎哺乳经验的SPF级NIH、SD母鼠代乳,统计沙鼠的胎间隔、胎鼠成活率和离乳率,绘制代乳胎鼠1~4周的生长曲线,并取净化后2月龄的沙鼠按小鼠微生物学和寄生虫学质量控制国家标准进行检测。结果长爪沙鼠的平均胎间隔为30．14士4．40（22-38）d,代乳成活率和离乳率均超过50％,代乳鼠与非代乳鼠的生长曲线在后期无明显差异,微生物学和寄生虫学检测均符合清洁级小鼠的国家标准。结论NIH、SD母鼠代乳剖宫取胎的长爪沙鼠可以净化种群。     

普通环境长爪沙鼠呼吸道菌群的分离鉴定

目的调查普通环境长爪沙鼠呼吸道细菌及支原体携带情况,为制定长爪沙鼠微生物学等级标准提供依据。方法对普通环境饲养的65只长爪沙鼠进行解剖,取气管分泌物接种血琼脂,分别放入普通培养箱和5%CO2培养箱中培养48 h,分离菌株后同时进行生化分析和PCR测序鉴定,以期准确判断分离菌株所属菌属;气管浸液提取DNA,用支原体特异性引物进行PCR检测,并分别计算检出率。结果本研究共检出22种细菌及支原体。不同细菌、支原体感染率相差很大,阳性率在1.5%(1/65)到64.6%(42/65)之间,其中部分细菌为大鼠和小鼠致病菌。结论本研究为长爪沙鼠的微生物学等级标准的制定提供了参考数据。     

抗树鼩、灰仓鼠和长爪沙鼠IgG抗体的制备及标记

目的 制备抗树鼩、长爪沙鼠和灰仓鼠IgG抗体,并分别用异硫氰酸荧光素和辣根过氧化物酶进行标记.方法 采用Protein G分别提纯树鼩、长爪沙鼠和灰仓鼠血清中的IgG,纯化后免疫家兔,制备兔抗三种动物IgG抗体;采用亲和层析纯化兔抗三种动物IgG抗体,并分别进行FITC和HRP标记.结果 分别获得抗灰仓鼠、树鼩和长爪沙鼠IgG抗体,浓度分别为:2.2 mg/ml、2.3 mg/ml和2.3 mg/ml; FITC标记的兔抗灰仓鼠、树鼩和长爪沙鼠IgG含量分别为:1.19 mg/ml,1.36 mg/ml和1.55 mg/ml; HRP标记的兔抗灰仓鼠、树鼩和长爪沙鼠IgG含量分别为:0.84 mg/ml、1.09 mg/ml和1.31 mg/ml.结论 得到了适合检测用的FITC和HRP标记二抗,为建立这三种动物致病微生物和寄生虫检测方法提供了试剂.     

实验动物微生物、寄生虫抽样调查及分析

目的 监控实验动物微生物、寄生虫质量.方法 细菌检测:常规培养、生化鉴定,免疫荧光试验(IFA)查抗体.病毒检测:酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫酶试验(IEA)、免疫荧光试验(IFA)、血凝试验(HA)、血凝抑制试验(HAI)方法检测抗体.真菌检测:常规培养、镜检.寄生虫检测:涂片镜检、间接血凝试验(IHA)方法查抗体.结果 五年来,SPF级动物检出了绿脓杆菌、嗜肺巴斯德菌、金黄色葡萄球菌、鞭毛虫,另外,泰泽病原体、小鼠细小病毒(MVM),小鼠仙台病毒(M-SC)抗体阳性.清洁级动物检出了蠕虫,且泰泽病原体、大鼠仙台病毒(R-SC)、小鼠仙台病毒(M-SV)、小鼠肝炎病毒(MHV)抗体阳性.普通级动物检出了志贺菌、皮肤病原真菌、体外寄生虫、弓形虫,同时检出兔出血症病毒(RHDV)、犬细小病毒(CPV)、犬瘟热病毒(CDV)、犬肝炎病毒(ICHV)未达抗体保护效价,犬布鲁杆菌、猕猴疱疹病毒Ⅰ型(BV)抗体阳性.不同生产企业动物质量差异很大,有的动物合格率达100%,有的则同一动物有多种病原感染.结论 实验动物微生物、寄生虫质量控制有待加强.     

长爪沙鼠在病原感染研究中的应用

长爪沙鼠对多种病原易感,某些病原感染后的疾病特征与人类相似,因而广泛应用于感染性疾病动物模型,为感染性疾病的病理学特征、发病机制、免疫学诊断和药物研发等研究提供了重要材料.本文简要综述了长爪沙鼠在微生物和寄生虫感染等相关研究中的应用,以期为长爪沙鼠的开发应用提供借鉴.     

浙江省实验动物中心长爪沙鼠群体遗传状况分析

目的 探讨浙江实验动物中心长爪沙鼠群体的遗传状况。方法 应用生化基因位点遗传检测方法，测定初始和生物净化长爪沙鼠群体27个生化位点等位基因的分布。结果 2个长爪沙鼠群体均具有丰富的遗传多样性；生物净化群体与初始群体比较有17．86％的基因丢失率，但尚未出现明显的遗传分化现象（FST〈0．05）。结论 群体均偏离了哈迪-温伯格平衡（P〈0．05）。     

长爪沙鼠肝星状细胞的分离培养与鉴定

目的探索长爪沙鼠稳定、经济的肝星状细胞分离和培养方法,为深入探讨长爪沙鼠肝纤维化的细胞机制提供技术支撑。方法取成年雄性长爪沙鼠,用链蛋白酶、胶原酶及DNA酶体内门静脉灌注消化长爪沙鼠肝脏细胞,经Nycodenz密度梯度离心,分离肝星状细胞。台盼蓝拒染实验鉴定细胞活力,α-SMA,Desmin免疫细胞化学染色鉴定细胞性质。结果肝星状细胞得率为0.5~1×107/肝。肝星状细胞存活率在90%以上。原代培养3 dα-SMA阳性细胞达75%以上,传代培养后,α-SMA,Desmin阳性达100%。结论成功建立了稳定可靠的长爪沙鼠肝星状细胞分离培养方法,为肝脏相关疾病研究和防治药物的开发提供了技术支持。     

普通环境和清洁级环境中长爪沙鼠寄生虫感染状况观察

目的　了解两种不同环境中饲养的长爪沙鼠寄生虫感染状况。方法　根据 2 0 0 1年中华人民共和国国家标准GB 1 4 92 2 1— 2 0 0 1《实验动物寄生虫学等级及监测》和GB T1 84 4 8 1～ 1 84 4 8 1 0— 2 0 0 1《实验动物寄生虫学检测方法》 ,参考实验动物小鼠、大鼠、豚鼠和地鼠寄生虫等级及检测办法进行检测。结果　饲养于普通环境的 1 5笼 80只长爪沙鼠体表寄生虫感染率为 3 75 % (3 80 ) ,体内寄生虫中卡氏肺孢子虫感染率为 6 2 34% (4 8 77) ,鼠三毛滴虫感染率为 86 2 5 % (6 9 80 ) ;饲养于清洁级环境的 7笼 2 3只长爪沙鼠中 ,卡氏肺孢子虫的感染率为 6 9 5 6 % (1 6 2 3) ,鼠三毛滴虫感染率为 6 9 5 6 % (1 6 2 3)。结论　净化后饲养于普通环境中的长爪沙鼠与净化后饲养于清洁级中的个体相比 ,二者体表寄生虫感染的状况有一定差别。但是 ,卡氏肺孢子虫和鼠三毛滴虫的感染情况似乎无明显差别。     

长爪沙鼠IgG的纯化及抗血清的制备

目的纯化长爪沙鼠血清IgG,制备兔抗长爪沙鼠IgG抗血清。方法采用Hitrap Protein G亲和层析预装柱来纯化长爪沙鼠血清IgG;通过SDS-PAGE电泳和Western-Blotting免疫印迹法对长爪沙鼠血清IgG进行纯度鉴定,免疫兔子制备抗血清。结果7 mL长爪沙鼠血清纯化得到11 mg IgG;电泳和免疫印迹测定,IgG纯度大于95%;用纯化的IgG作抗原制备了兔抗血清,免疫双扩散测定效价达1∶32。结论建立了长爪沙鼠血清IgG的纯化方法,制备了长爪沙鼠IgG抗血清,证实长爪沙鼠血清IgG和Protein G具有较高的亲和性。     

44代Z:ZCLA长爪沙鼠不同生长时期血清中抗氧化性能研究

目的 探讨第44代Z:ZCLA长爪沙鼠在不同生长时期血清中抗氧化作用.方法 选择1月龄、3月龄、24月龄的44代Z:ZCLA长爪沙鼠各16只(雌雄各半),测定44代Z:ZCLA长爪沙鼠血清中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GsH-Px)的含量变化.结果 丙二醛(MDA)在3月龄最低,谷胱甘肽过氧化物酶(GsH-Px)在3月龄最高;超氧化物歧化酶(SOD)随着长爪沙鼠的月龄增长而升高.结论 在44代Z:ZCLA长爪沙鼠在不同的生长过程中丙二醛(MDA)含量变化与谷胱甘肽过氧化物酶(GsH-Px)的含量变化有直接关系,而超氧化物歧化酶(SOD)含量变化与MDA含量变化没有直接关系.     

清洁级长爪沙鼠病毒抗体ELISA检测法建立

经纯化长爪沙鼠IgG免疫家兔后获得的血清用辛酸法纯化抗体，电泳可见只有一条蛋白带，制备得酶标二抗工作浓度为1：25600。用间接ELISA对开放系统和屏障系统中长爪沙鼠进行淋巴细照脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)，鼠肝炎病毒(MHV)和仙台病毒抗体的检测，发现其血清病毒抗体阳性率开放系统为6．0%(4/67)，22.4%(15／67)和14．9%(10／67)，屏障系统为1．3%(1／79)，1．3%(1／79)和7．6%(6／79)，如用酶标蛋白A取代酶标抗长爪涉鼠IgG抗体进行检测，则无一份血清阳性，结果表明长爪沙鼠可以自然感染LCMV、MHV和仙台病毒或其抗原相关的病毒，酶标蛋白A不宣作为酶标二抗用手长爪沙鼠抗体的检测。     

长爪沙鼠与NIH小鼠、SD大鼠血清雌性激素的对比研究

目的：比较长爪沙鼠、NIH小鼠和SD大鼠的血清雌二醇（E2）和孕酮（P）水平，为长爪沙鼠的生殖和胚胎研究提供基础资料。方法：用放射免疫分析法测定上述动物生产前后血清雌二醇（E2）和孕酮（P）水平，进行统计学分析。结果：不同阶段雌性沙鼠血清E2值差异无显著性（P〉0．05），孕酮值差异有显著性（P〈0．01）；E2值比较，未生育期沙鼠与同期NIH小鼠和SD大鼠差异有显著性（F〉F0.01），而在经产期的动物间水平接近（F〈F0.05）；孕酮值比较，未生育期沙鼠与NIH小鼠接近，与SD大鼠差异有显著性（F〉F0.01）；而经产期沙鼠在三种动物中是最高的（F〉F0.01）。结论：长爪沙鼠血清E2、P的含量具种属特异性，并随动物的生理发育时期而变化。     

长爪沙鼠脑底动脉Willis环变异缺失遗传特性分析及脑缺血模型高发群体的初步培育

目的研究长爪沙鼠脑底动脉Willis环遗传特性,并定向培育脑缺血高发种群。方法通过对5代定向培育的长爪沙鼠高发群动物共398只动物的右侧颈总动脉结扎模型进行观察,比较长爪沙鼠亲代与子代间脑底动脉Willis环的变异缺失类型,探求其遗传特性,并根据该遗传特性将Willis环后交通支缺失且前交通支缺失或细小的同类型的长爪沙鼠父母所生的子代雌雄个体配对繁殖,定向培育长爪沙鼠半脑缺血模型高发生率种群。结果当双亲的Willis环类型一致时,其子代大部分与其父母一致;而当双亲的Willis环类型不一致时,Willis环前交通支与母亲一致率为60.4%,前交通支与父亲的一致率为48.2%,两者的差异有显著性意义(P=0.015)。长爪沙鼠半脑缺血模型高发生率种群定向培育5代后,行单侧颈总动脉结扎时,一侧脑缺血造模成功率由F1代的40%提高到F5代的75%。结论长爪沙鼠脑底动脉Willis环变异有明显的遗传性,初步培育出了长爪沙鼠半脑缺血模型高发生率种群。     

定边县鼠疫疫区周围地区宿主动物及媒介蚤调查

目的了解定边县鼠疫疫区周围地区宿主动物及媒介蚤分布现状。方法以村为单位,通过走访群众和实地考察,了解鼠类分布概况;采用公顷夹日法在长爪沙鼠分布区调查鼠密度;采用5米夹笼法调查夜行鼠密度;采集捕获鼠体表寄生蚤进行种类鉴定;采集鼠血清检测F1抗体。结果石洞沟、贺圈、白泥井3乡(镇)局部地区有长爪沙鼠分布,平均密度为10.00只/公顷,最高密度为66只/公顷;长爪沙鼠染蚤率为19.90%,蚤指数为0.31,秃病蚤为优势种。结论定边县鼠疫疫区周围地区有可能发生动物鼠疫流行,应加强该地区监测工作。     

长爪沙鼠肝细胞体外分离培养体系的建立

目的：建立长爪沙鼠原代肝细胞分离培养体系。方法：以雄性长爪沙鼠肝细胞为供体,采用组织消化法和Seglen两步灌流法分离肝细胞,以台盼蓝染色检测细胞得率和活率,PAS法鉴定肝细胞,倒置显微镜观察肝细胞形态变化,并使用含有多种细胞因子的培养基维持培养。结果：组织消化法和Seglen两步灌流法平均每只长爪沙鼠肝脏分离获得肝细胞分别为(1.33?.34)?07个、(3.97?.15)?07个,细胞活率分别为(29.4?.05)%、(80.3?.56)%,这两种方法在细胞得率及活率方面存在显著差异。肝细胞内因有大量的糖原颗粒,经PAS法染色后被染成红色。结果表明肝细胞在贴壁后72h内,肝细胞形态发生显著变化。结论：采用胶原酶经肝门静脉灌流分离肝细胞是一种高效获得肝细胞的方法。各种细胞因子有利于维持肝细胞在体外的生长分化,长爪沙鼠原代肝细胞分离培养体系的建立将为肝脏相关疾病研究和防治药物的开发提供技术支持。     

未净化Z:ZCLA长爪沙鼠封闭群繁育及遗传稳定性分析

目的 分析未净化Z:ZCLA长爪沙鼠封闭群繁育和生长指标,并利用直接测序法分析其遗传稳定性.方法 随机选择40对Z:ZCLA长爪沙鼠,记录其繁殖胎次、产子数等指标,分析其仔鼠的生长发育情况.遗传稳定性分析选择Z:ZCLA长爪沙鼠非同胞、非亲代个体33只,提取肝脏基因组DNA,PCR扩增D-Loop序列,产物纯化后双向测序,测序结果与Z:ZCLA长爪沙鼠标准序列比对.结果 Z:ZCLA长爪沙鼠每胎产仔7只,胎间隔多在20～60d间,雄性体重高于雌性.遗传稳定性分析检测发现33只Z:ZCLA长爪沙鼠序列与标准序列完全一致.结论 Z:ZCLA长爪沙鼠群体内未发现遗传多态性,说明该群体具有较好的遗传稳定性.     

活体长爪沙鼠幽门螺杆菌检测方法的建立

目的应用巢式PCR方法通过胃液活体检测长爪沙鼠幽门螺杆菌感染,从而建立可以持续监测长爪沙鼠幽门螺杆菌感染的检测技术。方法体外培养幽门螺杆菌并接种至长爪沙鼠体内,在感染后第10周使用普通PCR方法检测长爪沙鼠胃液,使用巢式PCR方法对长爪沙鼠胃液、胃组织、十二指肠内容物、结肠粪便进行检测;同时还利用快速尿素酶试验和血清ELISA方法等对比分析巢式PCR方法的准确性,上述PCR产物均经过测序验证。结果普通PCR方法检测胃液、巢式PCR方法检测胃液、胃组织、十二指肠内容物,结肠粪便以及快速尿素酶试验、血清ELISA检测方法检验结果阳性率分别为30%、100%、100%、90%、10%、100%和0%。比较不同检测方法的检测结果发现,胃液巢式PCR、胃组织巢式PCR和快速尿素酶试验均有100%的检测率,普通PCR检测胃液的方法、结肠粪便巢式PCR方法及血清学ELISA检测方法检测率均比较低。结论胃液巢式PCR检测方法由于其特异性、准确性及灵敏性较高等特点可以用于长爪沙鼠幽门螺杆菌的长期检测,特别是对于预防和治疗幽门螺杆菌感染的实验具有重要价值。