High Expression of the RECK Gene in Breast Cancer Cells is Related to Low Invasive Capacity

OBJECTIVE To investigate the expression of the RECK gene in human breast (cancer) cell lines, and to determine the relationship between RECK gene expression and the invasive capacity of the breast cancer cell lines. METHODS The invasive capacity of breast (cancer) cell lines including HBL-100, MCF-7 and MDA-MB-435S were determined by the Tran-swell method. The protein expression levels of RECK, MMP-2 and MMP-9 genes in these three cell lines were measured by immunocytochemical methods. The expressions of the RECK gene and protein level were measured by RT-PCR and Western blots in the cell lines respectively. RESULTS The order of the invasive capacity of the breast (cancer) cell lines was MDA-MB-435S, being the highest, and HBL-100, being the lowest. The invasive capacity difference between any two groups among the three groups was significant (P<0.01). The protein expression level of the RECK gene in the HBL-100 cell line was highest, and no expression was detected in MDA-MB-435S cells. Moreover, the expression of the RECK gene was negatively correlated with the expression of the MMP-2 and MMP-9 genes. The mRNA level of the RECK gene in HBL-100 cells was the highest, but no expression was found in the MDA-MB-435S cells (P<0.001). CONCLUSION There was a significant negative correlation between the expression level of the RECK gene and invasive capacity in vitro, and the RECK gene expression showed an inverse proportion to that of the MMP-2, MMP-9 genes.     

乳腺癌细胞表面MHCⅡ类抗原和共刺激分子表达的研究

目的研究乳腺癌细胞表面MHCⅡ类抗原与共刺激分子CD40、CD80(B7-1)和CD86(B7-2)的表达.方法采用流式细胞技术检测5株乳腺癌细胞MCF-7、SK-BR-3、T47D、MDA-MB-435s和ZR-75 -30表面MHCⅡ类抗原与共刺激分子CD40、CD80(B7-1)和CD86(B7-2)的表达,并与正常乳腺细胞HBL-100作比较. 结果 5株乳腺癌细胞MHCⅡ类分子表达均与正常乳腺细胞HBL-100差异有显著性(P<0.05), MCF-7细胞表达水平最低,约为HBL-100的1/5.MDA-MB-435s与ZR-75-30细胞表达水平为HBL-100的2倍,MDA-MB-435s荧光强度也比HBL-100及其他乳腺癌细胞高,但MDA-MB -435s细胞表面CD40分子表达水平最低,约为MCF-7与HBL-100 CD40分子表达水平的10%. MDA-MB-435s细胞的CD80和CD86分子表达水平与HBL-100相当(P>0.05),另4株乳腺癌细胞的CD80和CD86分子表达均比HBL-100低(P<0.05). 结论乳腺癌细胞表面MHCⅡ与共刺激分子表达异常,不同细胞表面分子的表达有所差异.乳腺癌细胞可通过这些分子表达异常而发生免疫逃逸.     

高与低表达RSK4基因人乳腺癌细胞株的筛选及鉴定

目的:探讨核糖体S6激酶4(RSK4)抑癌基因在人乳腺癌细胞株MDA-MB-231、T47D、Bcap37和MCF-7中的表达,并筛选出高和低表达RSK4基因的乳腺癌细胞。方法:逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法从mRNA和蛋白水平检测RSK4在MDA-MB-231、T47D、Bcap-37和MCF-7 4种乳腺癌细胞株中的表达。结果:人乳腺癌细胞株MDA-MB-231、T47D、Bcap37和MCF-7中均有RSK4基因表达,其中,MCF-7细胞RSK4表达水平最高,为表达量最低的MDA-MB-231细胞的2.9倍,MCF-7细胞RSK4蛋白表达水平也最高,与其他3种细胞株相比,差异有统计学意义,P<0.001。RT-PCR法和蛋白质印迹法检测结果一致,具有高度相关性,r=0.766,P<0.001。结论:人乳腺癌细胞株MCF-7为高表达RSK4基因的细胞,MDA-MB-231细胞为低表达RSK4基因的细胞,两者均可作为人乳腺癌细胞中研究RSK4基因的实验材料。     

抑癌基因RSK4的表达与乳腺癌细胞体外侵袭力的相关性研究

目的:探讨RSK4 mRNA在4株乳腺癌细胞MDA-MB-231、T47D、Bcap-37、MCF-7中的表达,分析RSK4 mRNA表达情况与4组细胞侵袭力之间的关系,进而探讨RSK4的抑癌机制.方法:通过RT-PCR方法检测4组乳腺癌细胞MDA-MB-231、T47D、Bcap-37、MCF-7中RSK4 mRNA的表达情况,用Transwell小室法检测4组细胞的侵袭力、运动力,分析二者之间的关系.结果:4组乳腺癌细胞株体外侵袭力、迁移力高低顺序依次为:MDA-MB-231＞T47D＞Bcap-37＞MCF-7(P＜0.001),4组细胞两两之间比较,有显著性差异;相关性分析显示,其侵袭力与迁移力呈显著性正相关(r=0.822,P＜0.001＝.RSK4 mRNA表达水平的顺序依次为:MDA-MB-231＜T47D＜Bcap-37＜MCF-7(P＜0.001),4组细胞两两之间比较,有显著性差异.RSK4 mRNA相关表达与乳腺癌细胞体外侵袭能力呈负相关(r=-0.948,P＜0.001),RSK4 mRNA表达越高的细胞其体外侵袭能力越弱.结论:RSK4基因参与乳腺癌的发展过程,并与乳腺癌的生物学行为有关,RSK4 mRNA的表达水平在评价乳腺癌细胞体外侵袭力方面具有重要意义.     

RSK4与TRAF4在不同乳腺细胞中的表达及分子作用通路研究

目的 研究抑癌基因p90核糖体S6蛋白激酶4（p90 ribosomal protein S6 kinase4,RSK4）相互作用蛋白与肿瘤坏死因子受体相关因子4（tumor necrosis factor receptor associated factor 4 ,TRAF4）在不同乳腺细胞株中的表达,探讨RSK4-TRAF4相互作用蛋白所在分子作用通路对乳腺癌侵袭转移的影响。方法 采用实时荧光定量PCR 法检测 RSK4和TRAF4在 HBL-100正常乳腺细胞株和MCF-7、Her-2阳性型、MDA-MB-231人乳腺癌细胞株中的表达情况。用蛋白质免疫印迹法（Western-blot）检测RSK4和TRAF4以及MAPK通路下游蛋白ERK1/2在HBL-100、MCF-7、Her-2阳性型、MDA-MB-231 4种乳腺细胞株中的表达。结果 RSK4 mRNA 、TRAF4 mRNA 在4种细胞中均表达,RSK4 mRNA在HBL-100表达量最高,在MCF-7、Her-2阳性型、MDA-MB-231 细胞中含量依次降低;TRAF4 mRNA在4种细胞中的表达量由低到高依次为HBL-100、MCF-7、Her-2阳性型、MDA-MB-231 细胞,RSK4 mRNA 、TRAF4 mRNA 在4种细胞中两两比较,差异有统计学意义（P<0.05）。RSK4与TRAF4在4种细胞中蛋白表达水平与mRNA表达水平相一致,具有高度相关性（r_RSK4=0.92,P< 0.01;r_TRAF4=0.82,P< 0.01）;ERK1/2蛋白表达量由高到低依次为MDA-MB-231、Her-2阳性型、MCF-7、HBL-100。在mRNA转录水平,RSK4和TRAF4 表现出负相关（r₁=-0.81,P< 0.01）;在蛋白翻译水平,RSK4和TRAF4 同样呈现出高度负相关（r₂=-0.84,P< 0.01）。结论 RSK4和TRAF4具有较高的负相关性,RSK4与TRAF4相互作用后可能通过MAPKs下游信号通路ERK起分子调控作用。     

miR-100抑制乳腺癌细胞迁移的作用和机制

目的:探究miR-100对乳腺癌细胞株MDA-MB-231迁移能力的调节与机制.方法:Real time-PCR检测人正常乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌细胞株MDA-MB-231中miR-100的基础表达水平.应用脂质体法将 miR-100 mimic及阴性对照分别转染乳腺癌细胞株MDA-MB-231,通过real time-PCR检测转染后miR-100的表达水平,细胞划痕实验检测过表达miR-100对MDA-MB-231细胞迁移能力的影响,Western blot方法检测slug、snail和E-cadherin等EMT蛋白表达水平的变化.结果:miR-100在乳腺癌细胞株MDA-MB-231中的表达明显低于人正常乳腺上皮细胞MCF-10A.转染miR-100 mimic的乳腺癌细胞株MDA-MB-231的miR-100表达水平明显增高,细胞划痕实验显示过表达miR-100的MDA-MB-231细胞划痕愈合速度明显减慢.过表达miR-100的MDA-MB-231细胞E-cadherin蛋白表达水平明显增加,而slug和snail蛋白表达水平明显降低.结论:miR-100抑制乳腺癌细胞株MDA-MB-231的迁移能力与其上调E-cadherin,下调slug、snail蛋白表达,抑制EMT有关.     

FRNK对人乳腺癌MDA-MB-435细胞迁移的抑制作用

背景与目的:粘着斑激酶(focaladhesionkinase,FAK)的高表达或过度激活与肿瘤迁移密切相关。粘着斑相关非激酶(FAKrelatednon-kinase,FRNK)是FAK内源性抑制剂,通过与FAK竞争粘着斑结合位点抑制FAK活性。本研究旨在探讨FRNK对人乳腺癌细胞MDA-MB-435迁移的抑制作用及相关机制。方法:RT-PCR法克隆目的基因FRNK,构建pcDNA3.1-FRNK重组质粒;利用脂质体转染MDA-MB-435细胞,经G418筛选抗性单细胞克隆,通过Westernblot鉴定稳定高表达FRNK蛋白的MDA-MB-435细胞并检测其与野生型MDA-MB-435细胞中基质金属蛋白酶-9(matrixmetalloproteinase9,MMP-9)表达水平;采用体外划痕修复实验和Boyden趋化小室比较野生型和稳定高表达FRNK蛋白的MDA-MB-435细胞的非定向及定向迁移运动能力。结果:成功构建真核表达重组质粒pcDNA3.1-FRNK,建立稳定高表达FRNK蛋白的MDA-MB-435细胞。高表达FRNK的细胞较野生型MDA-MB-435细胞MMP-9蛋白表达降低73.1%。在划痕修复实验中,稳定高表达FRNK蛋白的MDA-MB-435细胞移行面积与空白面积之比为0.35±0.02,与野生型MDA-MB-435细胞(0.58±0.06)相比划痕修复能力明显减弱(P<0.05);在趋化小室实验中,高表达FRNK蛋白的MDA-MB-435细胞迁移数为65.15±8.56,仅为野生型MDA-MB-435细胞迁移数(97.86±5.44)的66.57%。结论:FRNK可抑制MDA-MB-435细胞迁移运动,该抑制作用与MDA-MB-435细胞中MMP-9表达下调有关。     

β2肾上腺素能受体在乳腺癌细胞中的表达及对侵袭能力的影响

目的：探讨β2肾上腺素能受体（β2 adrenergic receptor，β2-AR）在人乳腺癌细胞株中的表达以及对乳腺癌细胞侵袭能力的影响。方法：RT—PCR法检测10种乳腺癌细胞株及正常乳腺上皮细胞中β2-AR的表达；用脂质体转染法将卢2“尺基因转入乳腺癌细胞MDA—MB-435；用细胞侵袭实验（Transwell）检测亲本细胞及转染细胞的侵袭能力。结果：β2-AR在正常乳腺上皮细胞HBL-100及乳腺癌细胞BT-549、HCC1937、BCaP-37中表达；在乳腺癌细胞MDA—MB-435、MDA—MB-435HM、MCF-7、T47D中基本无表达；在乳腺癌细胞MDA—MB-231、MDA-MB-231HM、MDA—MB-468中高表达。细胞侵袭实验证实表达B2-AR蛋白的MDA—MB-231及稳定转染卢2-AR基因的细胞克隆MDA—MB-435β2-AR可由β2-AR受体激动剂去甲肾上腺素趋化而定向迁移及侵袭。结论：β2-AR在多种乳腺癌细胞株中表达；转染β2-AR可使乳腺癌细胞的侵袭能力增强。     

黑色素瘤抗原基因A1在乳腺癌组织和四株乳腺癌细胞株中的表达

目的研究乳腺癌组织和细胞株中Mage A1基因的表达情况，为Mage A1基因编码蛋白用于乳腺癌免疫治疗提供依据。方法采用RT—PCR检删33例乳腺癌组织和4株常用乳腺癌细胞株MCF-7、Sk-Br-3，MDA-MB-435s和TM40D中Mage A1基因的表达。结果33例乳腺癌组织中12％(4／33)Mage—A1阳性，细胞株MCF-7和Sk-Br-3中Mage-A1阳性表达，MDA-MB-435s和TM40D中Mage A1基因的表达阴性。结论不同的乳腺癌细胞表达Mage A1基因有差别，Mage A1蛋白可望成为乳腺癌免疫治疗的靶抗原。