活性氧在七氟醚预处理减轻大鼠海马脑片氧糖缺失损伤中的作用

目的 评价活性氧(ROS)在七氟醚预处理减轻大鼠海马脑片氧糖缺失损伤中的作用.方法 雄性SD大鼠,体重80～100 g,断头处死,剥离海马,符合标准的40片海马脑片随机分为4组(n=10):氧糖缺失组(OGD组)、4%七氟醚预处理组(Sevo组)、ROS清除剂组(MPG组)和4%七氟醚预处理+ROS清除剂组(SM组),采用脑片灌流及电生理技术,细胞外记录海马CAI区缺氧期间和复氧1 h期间的顺向群锋电位(OPS);采用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TYC)染色定量比色法分析脑片损伤程度.结果 与OGD组相比,Sevo组OPS消失时间缩短,OPS恢复程度、OPS恢复率均升高,组织损伤百分率降低(P<0.01);与Sevo组相比,MPG组和SM组OPS消失时间缩短,OPS恢复程度、OPS恢复率降低,组织损伤百分率升高(P相似文献   

七氟醚后处理对大鼠海马脑片氧糖剥夺损伤的保护作用

目的观察七氟醚后处理对大鼠海马脑片氧糖剥夺损伤(OGD)的保护作用。方法将符合标准的40片海马脑片随机均分为四组:2%七氟醚后处理组(2%Sev组)、4%七氟醚后处理组(4%Sev组)、6%七氟醚后处理组(6%Sev组)和氧糖剥夺损伤对照组(OGD组)。采用脑片灌注及电生理技术细胞外记录海马CA1区的顺向群锋电位(OPS)。利用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色定量比色方法分析脑片损伤程度。结果 OGD组OPS恢复程度为(3.14±2.56)%,恢复率为10%,组织损伤率为0.63±0.05;2%Sev组OPS恢复程度为(46.24±29.34)%,OPS恢复率为40%,组织损伤率为0.51±0.06;4%Sev组OPS恢复程度为(62.40±34.93)%,OPS恢复率为60%,组织损伤率为0.41±0.07;6%Sev组OPS恢复程度为(75.92±45.31)%,OPS恢复率为70%,组织损伤率为0.37±0.06。与OGD组比较,2%Sev组、4%Sev组、6%Sev组的OPS恢复程度和OPS恢复率均明显升高,组织损伤率明显降低(P<0.01)。结论七氟醚后处理对大鼠海马脑片氧糖剥夺损伤具有一定的保护作用。     

ERK1/2信号转导通路在七氟醚后处理减轻大鼠海马脑片缺氧无糖损伤中的作用

目的 评价细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号转导通路在七氟醚后处理减轻大鼠海马脑片缺氧无糖损伤中的作用.方法 选取符合标准的大鼠海马脑片,采用随机数字表法,将其随机分为5组(n=10):缺氧无糖组(OGD组)海马脑片进行15 min缺氧无糖处理,即将灌流液改为经95％N2-5％ CO2混合气体饱和的无糖人工脑脊液(aCSF);4％七氟醚后处理组(Sevo组)缺氧无糖处理后用4％七氟醚平衡后的aCSF灌流30 min;ERK1/2特异性抑制剂PD98059组(PD组)缺氧无糖处理后用含ERK1/2特异性抑制剂PD98059(50 μmol/L)的aCSF灌流10 min;二甲基亚砜组(DMSO组)缺氧无糖处理后用含1 mol/L DMSO的aCSF灌流10 min;4％七氟醚后处理+PD98059组(SPD组)缺氧无糖处理后用含ERK1/2特异性抑制剂PD98059(50μmol/L)并通人4％七氟醚的aCSF灌流30 min,处理完成 后各组均再用正常aCSF灌流1h.采用脑片灌流及电生理技术,细胞外记录海马CAI区的顺向群峰电位(OPS);采用TTC染色-定量比色法评价海马脑片损伤程度.结果 与OGD组比较,Sevo组OPS恢复程度和恢复率升高,海马脑片损伤程度降低(P＜ 0.01),其余3组各指标差异无统计学意义(P＞0.05);与Sevo组比较,PD组、DMSO组和SPD组OPS恢复程度和恢复率降低,海马脑片损伤程度升高(P＜0.01).结论 ERK1/2信号转导通路参与了七氟醚后处理减轻大鼠海马脑片缺氧无糖损伤的过程.     

HO-1在七氟烷预处理抑制大鼠氧糖剥夺海马神经元凋亡中的作用

目的 探讨血红素氧合酶-1(HO-1)在七氟烷预处理抑制大鼠氧糖剥夺海马神经元凋亡中的作用.方法 出生48 h内的Wistar大鼠,体外培养海马神经元,随机分为6组,每组108孔,正常对照组(C组):不做任何处理;2%七氟烷预处理组(S1组):2%七氟烷预处理60 min后正常培养24 h;OGD组:缺糖缺氧45 min后复糖复氧,再正常培养24 h以制备氧糖剥夺模型;2%七氟烷预处理+OGD 组(S1+OGD组)和4%七氟烷预处理+OGD组(S2+OGD组):分别经2%、4%七氟烷预处理后制备氧糖剥夺模型;4%七氟烷预处理+ZnPPⅨ+OGD(Z组):4%七氟烷预处理同时在培养液中加入ZnPPⅨ(终浓度10 μmol/L),其余处理同S2+OGD组.正常培养24 h时检测神经元存活率、凋亡率和HO-1蛋白及其mRNA的表达水平.结果 与C组比较,OGD组、S1+OGD组、S2+OGD组和Z组海马神经元存活率降低,凋亡率升高,海马神经元HO-1 mRNA及其蛋白表达上调,S1组海马神经元HO-1 mRNA 及其蛋白表达上调(P<0.01),神经元存活率、凋亡率差异无统计学意义(P>0.05);与OGD组比较,S1+OGD组、S2+OGD组海马神经元存活率升高,凋亡率降低,海马神经元HO-1 mRNA及其蛋白表达上调,Z组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与S1+OGD组比较,S2+OGD组海马神经元存活率升高,凋亡率降低,海马神经元HO-1 mRNA及其蛋白表达上调(P<0.01);与S2+OGD组比较,Z组海马神经元存活率降低,凋亡率升高,海马神经元HO-1 mRNA及其蛋白表达下调(P<0.01).结论 HO-1可能参与了七氟烷预处理抑制大鼠氧糖剥夺海马神经元凋亡的机制.     

线粒体KATP通道介导七氟醚后处理的脑保护作用

目的 观察七氟醚后处理对大鼠海马脑片缺氧无糖损伤保护与线粒体ATP敏感性钾通道(mitochondrial ATP-sensitive potassium channels,mitoKATP)的关系. 方法 将符合标准的海马脑片按随机数字表法分为4组(每组10片):缺氧无糖损伤对照组(oxygen-glucose deprivation,OGD组)、4％七氟醚(sevoflurane)后处理组(4％Sevo组)、mitoKATP通道阻滞剂5-羟葵酸盐(5-hydroxydeeanoate,5-HD)组(5-HD组)、4％七氟醚后处理+5-HD组(SHD组),采用脑片灌流及电生理技术,细胞外记录海马CA1区的顺向群锋电位(orthodromic population spike,OPS);利用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride,TTC)染色定量比色方法分析脑片损伤程度. 结果 与OGD组比较,4％Sevo组OPS恢复程度(68±9)％和恢复率(60％)升高,组织损伤百分率(0.40±0.05)降低.与4％Sevo组比较,5-HD组和SHD组OPS恢复程度(6±5)％、(7±7)％和恢复率(10％、20％)降低,组织损伤百分率(0.64±0.08、0.65±0.06)升高. 结论 七氟醚后处理可减轻大鼠海马脑片缺氧无糖损伤,该保护作用与mitoKATP通道的激活有关.     

P2X受体在大鼠海马氧糖缺失时IL-1β合成和释放中的作用

目的 探讨P2X受体在大鼠海马氧糖缺失时IL-1β合成和释放中的作用.方法 成年雄性SD大鼠,体重150～200 g,制备海马脑片,取160张,随机分为4组(n=40),C组:用95%O2-5%CO2饱和aCSF孵育;OGD组:脑片移至经95%N2-5%CO2饱和的无糖aCSF中,并置于持续通入95%N2-5%CO2的容器内进行氧糖缺失处理;BBG组:脑片移至含P2X7受体特异性拮抗剂亮蓝G(BBG,终浓度1μmol/L)的经95%O2-5%CO2饱和的aCSF中,孵育20 min,随后进行氧糖缺失处理,无糖aCSF中加入终浓度1 μmol/L的BBG;OP组:脑片移至加入P2X4受体单克隆抗体(终浓度1.5μg/ml)的经95%O2-5%CO2饱和的aCSF中孵育60 min,随后进行氧糖缺失处理,无糖aCSF中加入终浓度1.5 μg/ml的P2X4受体单克隆抗体.于氧糖缺失前及氧糖缺失20、40和60 min时测定LDH和IL-1β的释放量,并观察病理学结果.于氧糖缺失60 min时测定细胞内IL-1β前体蛋白(pro-IL-1β)的表达水平.结果 与C组比较,其余各组LDH和IL-1β释放量升高,细胞内pro-IL-1β表达上调(P＜0.05);与OGD组比较,BBG组LDH和IL-1β释放量降低,细胞内pro-IL-1β表达上调(P＜0.05),OP组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 P2X7受体介导了大鼠海马氧糖缺失时IL-1β的合成和释放,而P2X4受体没有介导IL-1β的合成和释放.     

P2X7受体在大鼠海马脑片和神经元突触体氧糖缺失时谷氨酸和γ-氨基丁酸释放中的作用

目的 评价P2X7受体在大鼠海马脑片和神经元突触体氧糖缺失(OGD)时谷氨酸(Glu)和γ-氨基丁酸(GABA)释放中的作用.方法 健康成年雄性SD大鼠,体重150～200 g,制备海马脑片和神经元突触体,放入95%O2-5%CO2预充饱和人工脑脊液(aCSF)中35 ℃下孵育30 min后,取大鼠海马脑片96张,随机分为3组(n=32);取大鼠海马神经元突触体72份,随机分为3组(n=24).对照组(C组)于95%O2-5%CO2预充饱和的aCSF中孵育60 min;OGD组于95%N2-5%CO2预充饱和的乏糖aCSF中35 ℃下孵育60 min;亮蓝G组(BBG组)于预先加入P2X7受体拮抗剂亮蓝G 1 μmol/L、95%O2-5%CO2预充饱和的aCSF中孵育20 min,随后移至2 ml含亮蓝G l μmol/L、95%N2-5%CO2预充饱和的乏糖aCSF中孵育60 min.于OGD即刻、20、40、60 min(T1-4)时,分别随机取海马脑片和神经元突触体各6份,测定Glu和GABA的释放量.各时点分别取海马脑片2张,光镜下观察病理学结果.结果 与C组比较,OGD组和BBG组T2-4时海马脑片Glu和GABA释放量增加(P＜0.05);与OGD组比较,BBG组T3-4时海马脑片Glu释放量减少,T4时GABA释放量减少(P＜0.05),病理学损伤减轻.与C组比较,OGD组和BBG组T2-4时海马神经元突触体Glu和GABA的释放量增加(P＜0.05);与OGD组比较,BBG组T2-4时海马神经元突触体GABA释放量差异无统计学意义(P＞0.05),Glu释放量增加(P＜0.05).结论 P2X7受体介导了大鼠海马OGD时Glu和GABA的释放,其中胶质细胞上的P2X7起主导作用.     

吗啡预处理对小鼠海马脑片氧糖缺失/复氧复糖时PKCε膜转位的影响

目的 探讨吗啡预处理对小鼠海马脑片氧糖缺失/复氧复糖(OGD/R)时蛋白激酶Cε(PKCε)膜转位的影响.方法 成年近交系BALB/C小鼠40只,体重18～22 g,雌雄不拘,制备海马脑片,将脑片置入无糖无氧的人工脑脊液中,培养20 min后再置于正常人工脑脊液(nACSF)中培养(复氧复糖)2h,以建立小鼠海马脑片OGD/R模型.脑片随机分为5组(n=40),对照组(C组):在nACSF中培养4 h;吗啡预处理组(M组):在含吗啡3μmol/L的nACSF中孵育30 min后用nACSF洗脱,随后制备OGD/R模型;纳洛酮+吗啡预处理组(N+M组):在含纳洛酮50 μmol/L的nACSF中孵育30 min后,加入吗啡至3 μmol/L,孵育30 min,随后制备OGD/R模型;纳洛酮组(N组):在含纳洛酮50μmol/L的nACSF中孵育1h,随后制备OGD/R模型;OGD/R组:制备OGD/R模型.于脑片OGD/R期间测定PKCε膜转位情况和神经元存活情况.结果 与C组比较,其余各组神经元存活率降低,膜相关蛋白中PKCε表达上调,胞溶蛋白中PKCε表达下调(P＜0.05或0.01);与OGD/R组比较,M组神经元存活率升高,膜相关蛋白中PKCε表达下调,胞溶蛋白中PKCε表达上调(P＜0.05),N+M组和N组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与M组比较,N+M组神经元存活率降低,膜相关蛋白中PKCε表达上调,胞溶蛋白中PKCε表达下调(P＜0.05).结论 吗啡预处理诱导小鼠海马脑片缺血耐受的机制可能与抑制PKCε膜转位有关.     

瞬时受体电位阳离子通道M7在海马神经元损伤中的作用

目的探讨瞬时受体电位阳离子通道M7(TRPM7)在七氟醚预处理缓解缺血缺氧性损伤(OGD)后海马神经元损伤中的作用。方法出生1d的SD大鼠,提取海马神经元,将其随机分为五组:对照组(C组)、七氟醚预处理组(Sev组)、OGD组、七氟醚预处理+OGD组(SD组)和七氟醚预处理+缓激肽(TRPM7特异性激动剂)+OGD(B组)。缺糖缺氧1.5h后复糖复氧,再正常培养24h以制备OGD模型。C组海马神经元仅做正常培养;Sev组海马神经元行2%七氟醚预处理1h;OGD组海马神经元仅制备OGD模型;SD组海马神经元行2%七氟醚预处理1h,24h后制备OGD模型;B组神经元于七氟醚预处理前15 min在培养基中加入缓激肽(TRPM7特异性激动剂,终浓度200μmol/L),之后行2%七氟醚预处理1h,24h后制备OGD模型。正常培养24h后,分别采用MTT法检测神经元相对存活指数,TUNEL凋亡染色法检测神经元凋亡率,Western blot检测TRPM7蛋白含量,实时定量PCR法检测TRPM7 mRNA表达水平,ELISA法测定神经元IL-1β和TNF-α蛋白含量。结果 OGD组海马神经元TRPM7蛋白含量及mRNA表达水平、凋亡率、IL-1β、TNF-αmRNA表达水平及上清蛋白含量明显高于C组(P0.05),而相对存活指数明显降低于C组(P0.05)。SD组海马神经元TRPM7蛋白含量及mRNA表达水平、凋亡率、IL-1β、TNF-αmRNA表达水平及上清蛋白含量明显低于OGD组(P0.05),而相对存活指数明显高于OGD组(P0.05)。B组海马神经元TRPM7蛋白含量及mRNA表达水平、凋亡率、IL-1β、TNF-αmRNA表达水平及上清蛋白含量明显高于SD组(P0.05),而相对存活指数明显低于SD组(P0.05)。结论七氟醚预处理可通过缓解神经元TRPM7过度表达,减轻缺血缺氧性损伤后海马神经元凋亡和炎症反应。     

依托咪酯对大鼠海马脑片突触长时程增强的影响

目的 评价依托咪酯对大鼠海马脑片突触长时程增强(LTP)的影响.方法 雄性SD大鼠,断头后取出海马组织,制备厚400 μm的海马脑片.采用细胞外微电极记录技术,记录海马脑片CA1区细胞外群体峰电位(PS).取42张脑片,随机分为6组(n=7):用正常的人工脑脊液(ACSF)灌流海马脑片记录正常的PS,待其稳定后,对照组继续灌流ACSF,不同浓度依托咪酯组分别用含依托咪酯1μmol/L(依托咪酯 1 μol/L组)、2/μmol/L(依托咪酯2 μmol/L组)、5 μmol/L(依托咪酯5 μmol/L组)、10μmol/L(依托咪酯10 μmol/L组)、20 μmol/L(依托咪酯20 μmol/L组)的ACSF灌流,记录PS幅值.另取84张脑片,随机分为12组(n=7):用正常ACSF灌流海马脑片,记录稳定正常的PS 30 min,LIT组继续灌流ACSF,其余各组分别用含依托咪酯l μmol/L(LTP-依托咪酯 1 μmol/L组)、2 μmol/L(LTP-依托咪酯2μmol/L组)、5 μmol/L(LTP-依托咪酯 5 μmol/L组)、10μmol/L(LTP-依托咪酯 10 μmol/L组)、20 μmol/L(LTP-依托咪酯20 μmol/L组)、印防己毒素50 μmol/L(印防己毒素组)、荷包牡丹碱10 μmol/L(荷包牡丹碱组)、CGP35348 5 μmol/L(CGP35348 组)、印防己毒素50 μmol/L+依托咪酯10 μmol/L(印防己毒素+依托咪酯组)、荷包牡丹碱10 μmol/L+依托咪酯10 μmol/L(荷包牡丹碱+依托咪酯组)、CGP35348 5 μmol/L+依托咪酯10 μmol/L(CGP35348+依托咪酯组)的ASCF灌流,记录PS 30 min后,施以100 Hz的高频刺激(HPS),记录PS幅值.结果 与LTP组比较,LTP-依托咪酯2 μmol/L组、LTP-依托咪酯5 μmol/L组、LTP-依托咪酯10 μmol/L组、LTP-依托咪酯20 μmol/L组和CGP35348+依托咪酯组HIS后PS幅值降低(P＜0.05或0.01),印防己毒素组、荷包牡丹碱组、CGP35348组HFS后PS幅值差异无统计学意义(P＞0.05);与依托咪酯LTP 10μmol/L组比较,印防己毒素+依托咪酯组和荷包牡丹碱+依托咪酯组HIS后PS幅值增加(P＜0.01).结论 依托咪酯可通过激活大鼠海马GABAA受体抑制LTP的形成,从而影响学习和记忆功能.     

低温联合七氟醚对兔心肌单相动作电位及跨室壁复极离散度的影响

目的 评价低温联合七氟醚对兔心室肌单相动作电位和跨室壁复极离散度的影响.方法 成年家兔,体重1.5～2.0 kg,雌雄不拘,成功制备Langendorff 离体心脏灌注模型的48个心脏,随机分为6组(n=8),用K-H液平衡灌注后,正常对照组(C组)继续灌注37℃ K-H液30 min;低浓度七氟醚组(S1组)、高浓度七氟醚组(S2组)分别灌注2.4%及4.8%七氟醚饱和的37℃ K-H液30 min;低温组(H组)灌注30℃ K-H液30 min;低温联合低浓度七氟醚组(HS1组)和低温联合高浓度七氟醚组(HS2组)分别灌注2.4%及4.8%七氟醚饱和的30℃K-H液30 min.灌注期间记录左心室前壁外膜层、中层和内膜层心肌单相动作电位.计算单相动作电位复极90%的时程(MAPD90)和跨室壁复极离散度(TDR).记录早期后除极、延迟后除极及心律失常的发生情况.结果 与C组比较,H组三层心肌MAPD90均明显延长,心律失常的发生率升高(P＜0.05);各组间TDR比较差异无统计学意义(P＞0.05).HS1组和HS2组心律失常的发生率低于H组(P＜0.05).七氟醚与低温无交互作用(P＞0.05),仅表现为低温可延长MAPD90(P＜0.05).结论 低温联合七氟醚对兔心肌单相动作电位及跨室壁复极离散度无明显影响,七氟醚可抑制低温诱发心肌复极时间延长,从而降低了低温诱发心律失常的发生机率.     

舒芬太尼后处理和七氟醚后处理对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响

目的 评价舒芬太尼后处理和七氟醚后处理对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响.方法 雄性SD大鼠,体重230～250 g,成功制备Langendorff离体灌注模型的40个心脏随机分为4组(n=10):缺血再灌注组(Ⅰ组)、七氟醚后处理组(Ⅱ组)、舒芬太尼后处理组(Ⅲ组)和七氟醚联合舒芬太尼后处理组(Ⅳ组).采用K-H液平衡灌注(灌注压10 kPa)30 min,全心缺血40 min再灌注120 min.再灌注即刻时Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组进行药物后处理15 min:Ⅱ组K-H液中通入3.0%七氟醚,Ⅲ组K-H液中加入100 nmol/L舒芬太尼,Ⅳ组同时进行七氟醚后处理和舒芬太尼后处理.分别于平衡灌注末(基础状态)、再灌注15 min、30 min、60 min、90 min、120 min时记录左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)、左室发展压(LVDP)、左室内压上升最大速率(+dp/dtmax)、左室内压下降最大速率(-dp/dtmax)、心率(HR)和灌脉流量(CF).再灌注5 min时,收集冠脉流出液,测定肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性.再灌注120 min时取心肌组织,测定心肌梗死体积、Bcl-2和Bax的表达水平,并计算Bcl-2和Bax表达的比值(Bcl-2/Bax).结果 与Ⅰ组比较,Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组LVSP、LVDP、+dp/dtmax、-dp/dtmax和CF升高,LVEDP和LDH、CK的活性降低,心肌梗死体积缩小,Bcl-2表达上调,Bax表达下调,Bcl-2/Bax升高(P＜0.05或0.01);Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组间上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 舒芬太尼后处理可减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,联合七氟醚后处理时心肌保护作用并未增加,其心肌保护的机制与上调Bcl-2表达、下调Bax表达从而抑制细胞凋亡有关.     

异氟烷预处理联合浅低温对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响

目的 评价异氟烷预处理联合浅低温对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响.方法 雄性SD大鼠50只,体重250～300 g,随机分为5组(n=10):正常对照组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)、异氟烷预处理组(P组)、浅低温组(M组)和异氟烷预处理联合浅低温组(PM组).制备离体心脏Langendorff灌注模型,各组经主动脉灌注K-H液,平衡灌注20 min后,C组继续灌注K-H液120 min,其余各组制备缺血再灌注模型;I/R组和P组常温(37 ℃)缺血30 min时进行再灌注;M组和PM组浅低温(31 ℃)缺血30 min时进行再灌注.P组和PM组于缺血前用1.0%异氟烷预充饱和的K-H液灌注15 min,再用K-H液冲洗15 min.分别于平衡灌注20 min、缺血前即刻、再灌注30、60 min时记录左室舒张末期压、左心室收缩压、左室压最大上升速率、左室压最大下降速率和HR.再灌注60min时取心肌组织,测定心肌梗死体积、心肌细胞线粒体和胞浆的细胞色素C水平.电镜下观察心肌细胞线粒体形态.结果 与I/R组比较,P组、M组和PM组再灌注期间心功能改善,心肌梗死体积缩小,心肌细胞胞浆细胞色素C水平降低,心肌细胞线粒体细胞色素C水平升高(P＜0.05或0.01);与P组比较,PM组再灌注期间心功能改善,心肌梗死体积缩小,心肌细胞胞浆细胞色素C水平降低,心肌细胞线粒体胞色素C水平升高(P＜0.05);与M组比较,PM组心肌细胞胞浆细胞色素C水平降低,心肌细胞线粒体细胞色素C水平升高(P＜0.05或0.01).电镜下PM组线粒体损伤轻于I/R组、P组和M组.结论 异氟烷预处理联合浅低温减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的效应强于异氟烷预处理或浅低温,其机制与减少心肌细胞线粒体细胞色素C的扩散,保护心肌细胞有关.     

七氟醚预处理对大鼠内毒素性急性肺损伤的影响

目的 探讨七氟醚预处理对大鼠内毒素性急性肺损伤的影响.方法 健康雄性SD大鼠24只,体重220～250 g,随机分为4组(n=6):对照组(c组)、内毒素组(LPS组)、七氟醚组(Sev组)和七氟醚预处理组(SP组).C组和LPS组机械通气30 min后分别静脉注射生理盐水和脂多糖(LPS)5 mg/kg;Sev组和SP组吸入七氟醚(呼气末浓度2.4%)30 min,洗脱5 min,然后分别静脉注射生理盐水和LPS 5 mg/kg.于给予LPS或生理盐水后6 h时,心脏放血处死大鼠,取肺组织,计算湿重/干重(W/D)比;采用弥漫性肺泡损伤(DAD)评分评价肺组织损伤程度;测定肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性、细胞因子诱导中性粒细胞化学趋化因子-1(CINC-1)含量、CINC-1和CINC-1 mRNA的表达水平.结果 与C组比较,LPS组和SP组肺组织W/D比、DAD评分、MPO活性和CINC-1含量升高,CINC-1和CINC-1 mRNA的表达上调(P<0.01),Sev组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与LPS组比较,SP组肺组织W/D比、DAD评分、MPO活性和CINC-1含量降低,CINC-1和CINC-1 mRNA的表达下调(P<0.01).结论 七氟醚预处理可减轻大鼠内毒素性急性肺损伤,可能与其抑制肺组织炎性反应有关.     

JNK信号通路在异氟醚预处理和七氟醚预处理减轻大鼠海马脑片缺氧无糖损伤中的作用

目的 评价c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在异氟醚预处理和七氟醚预处理减轻大鼠海马脑片缺氧无糖(OGD)损伤中的作用.方法雄性成年SD大鼠,体重270～290 g,断头处死,剥离海马,制备海马脑片.取大鼠海马脑片96张,采用随机数字表法,将其随机分为8组(n=12):对照组(C组)、OGD组、异氟醚预处理组(Iso组)、七氟醚预处理组(Sevo组)、SP600125+异氟醚预处理组(SP+Iso组)、SP600125+七氟醚预处理组(SP+Sevo组)、二甲基亚砜(DMSO)+异氟醚预处理组(DMSO+Iso组)和DMSO+七氟醚预处理组(DMSO+Sevo组).采用电生理技术,细胞外记录CA1区群锋电位(PS)波幅,计算PS恢复程度.采用碘化丙啶染色法,测定细胞活力.结果 与C组比较,其余各组PS恢复程度和细胞活力降低(P＜0.01);与OGD组比较,Iso组、Sevo组、SP+Iso.组、SP+Sevo组、DMSO+Iso组和DMSO+Sevo组PS恢复程度和细胞活力升高(P＜0.01);与180组比较,SP+Iso组PS恢复程度和细胞活力升高(P＜0.01),DMSO+Iso组PS恢复程度和细胞活力差异无统计学意义(P＞0.05);与Sevo组比较,SP+Sevo组PS恢复程度和细胞活力升高(P＜0.01),DMSO+Sevo组PS恢复程度和细胞活力差异无统计学意义(P＞0.05).结论 异氟醚预处理和七氟醚预处理可通过抑制JNK信号通路,减轻大鼠海马脑片缺氧无糖损伤.

Abstract：

Objective To evaluate the role of c-Jun N-terminal kinase (JNK) signaling pathway in the protective effect of isoflurane preconditioning and sevoflurane preconditioning against oxygen-glucose deprivation (OGD) injury in rat hippocampal slices. Methods Male adult SD rats weighing 270-290 g were anesthetized with ether and decapitated. The hippocampi were removed and sagittally sliced (400 μm thick) and placed in artificial cerebral spinal fluid aerated with 95% O2-5% CO2 . Ninety-six hippocampal slices were randomly divided into 8 groups (n = 12 each): control group (group C), OGD group, isoflurane preconditioning group (group Iso),sevoflurane preconditioning group (group Sevo) , SP600125 + isoflurane preconditioning group (group SP + Iso),SP600125 +sevoflurane preconditioning group (group SP + Sevo), DMSO + isoflurane preconditioning group (group DMSO + Iso) and DMSO + sevoflurane preconditioning group (group DMSO + Sevo). Electrophysiological technique was used to record the amplitude of population spike ( PS) in the stratum pyramidale of CA1 region and the degree of recovery of PS was calculated. The cell viability was determined by propidium iodide staining. Results Compared with group C, the degree of recovery of PS and cell viability were significantly decreased in the other groups ( P ＜ 0.01) . Compared with group OGD, the degree of recovery of PS and cell viability were significantly increased in groups Iso, Sevo, SP+Iso, SP+Sevo, DMSO+ Iso and DMSO + Sevo (P＜ 0.01). Compared with group Iso, the degree of recovery of PS and cell viability were significantly increased in group SP+Iso ( P ＜ 0.01) , while no significant change was found in group DMSO + Iso ( P ＞ 0.05) . Compared with group Sevo, the degree of recovery of PS and cell viability were significantly increased in group SP + Sevo ( P ＜ 0.01) , while no significant change was found in group DMSO + Sevo ( P ＞ 0.05). Conclusion Isoflurane preconditioning and sevoflurane preconditioning can attenuate the OGD injury to rat hippocampal slices through inhibiting JNK signaling pathway.     

七氟烷预处理对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠线粒体通透性转换孔的影响

目的 探讨七氟烷预处理对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠线粒体通透性转换孔(mPTP)的影响.方法 成年雄性SD大鼠60只,体重250～300 g,随机分为5组(n=12):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、七氟烷预处理组(Sev组)、线粒体ATP敏感性钾离子通道(mito-KATP通道)阻断剂5-羟癸酸(5-HD)+Sev组和5-HD组.采用大脑中动脉阻断法制备局灶性脑缺血再灌注模型.S组只分离血管不置入线栓;I/R组制备局灶性脑缺血再灌注模型;Sev组吸入2.4%七氟烷60 min行预处理,24 h后制备局灶性脑缺血再灌注模型;5-HD+Sev组腹腔注射5-HD 40mg/kg,30 min后行七氟醚预处理,其余处理同Sev组;5-HD组腹腔注射5-HD 40 mg/kg,30 min后制备局灶性脑缺血再灌注模型.于再灌注24 h时断头取缺血侧顶叶皮层组织,测定mPTP活性,Western blot法测定Bcl-2、Bax表达水平,并计算Bcl-2/Bax比值,采用TUNEL法检测神经元凋亡情况.结果 与S组比较,I/R组、Sev组、5-HD+Sev组和5-HD组凋亡神经元计数升高,Bcl-2和Bax表达上调,Bcl-2/Bax比值升高,mPTP活性升高(P＜0.05);与I/R组比较,Sev组凋亡神经元计数减少,Bcl-2表达上调,Bcl-2/Bax比值升高,mPTP活性降低(P＜0.05);与Sev组比较,5-HD+Sev组和5-HD组Bcl-2表达下凋,Bcl-2/Bax比值降低,mPTP活性升高(P＜0.05);5-HD+Sev组与5-HD组上述指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 七氟烷预处理可能通过激活神经元mito-KATP通道,上调Bcl-2的表达,从而抑制mPTP的大量开放减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注时的神经元凋亡.