重复加热对肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的探讨连续10d加热后残留的HepG2细胞的凋亡率改变及Bc l-2和Bax基因/蛋白的表达变化。方法HepG2细胞经43℃加热,每次80m in,2次/d,共10个循环后,检测其细胞凋亡率、Bc l-2和Bax基因/蛋白的表达。结果热处理前、后HepG2细胞的凋亡率分别为(9.0%±0.8%)、(5.8%±1.3%)(P<0.05);热处理后HepG2细胞的Bax基因/蛋白的表达无明显变化,但Bc l-2基因/蛋白的表达增强,且Bc l-2/Bax比值的增加。结论热处理后HepG2细胞的凋亡率降低与其Bc l-2基因/蛋白的强表达及Bc l-2/Bax比值的增加有关。     

核黄素对HepG2细胞抗氧化功能的影响

目的探索不同核黄素水平对HepG2细胞抗氧化功能的影响。方法通过定制无核黄素培养基、紫外线清除胎牛血清(FBS)中核黄素建立核黄素缺乏培养条件,在此基础上,以不同浓度核黄素(0.76、3.76、6.76、12.76、24.76、48.76nmol/L)培养HepG2细胞,共培养96 h,于不同时间点取样测定细胞活力、细胞凋亡率,于72h测定培养上清液的丙二醛(MDA)含量、丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)活性,以及细胞中谷胱甘肽还原酶(GR)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)与超氧化物歧化酶(SOD)活性,细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)与氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量。结果随着核黄素浓度增加,细胞活力显著上升、细胞凋亡率显著下降(P0.05),培养液中ALT、AST活性显著下降、MDA含量显著下降,细胞内SOD活性显著上升、GR活性显著上升、GSH-Px活性显著下降、GSH含量显著增加、GSSG含量显著减少、GSH/GSSG显著升高(P0.05)。上述大部分指标的核黄素剂量效应拐点在12.76nmol/L左右。结论核黄素不足可导致HepG2细胞的抗氧化功能下降,维持正常抗氧化功能的核黄素浓度应高于12.76nmol/L。     

HepG2肝癌细胞行为的PCC实时检测研究

利用压电细胞芯片检测体系对HepG2肝癌细胞的行为进行24h实时监测,得出典型响应曲线,结合组织培养板进行的模拟对照实验和HepG2肝癌细胞的生长特性,将响应曲线分为游离期、黏附期、平台期3个行为时段,并分析和计算在各行为时段的基本特性和平均用时;还利用双胰酶法计算出电极表面的细胞平均贴壁率为76.8%。结果反映了PCC检测信号与细胞行为的对应性及利用PCC探索细胞行为及影响因子的可行性,并验证了PCC技术检测细胞行为的快速和灵敏性能。     

赛莱西布对肝癌HepG2细胞增殖与凋亡影响

目的探讨选择性环氧合酶-2（cox-2）抑制剂赛莱西布（celecoxib）对人肝癌细胞株HepG2细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法用不同浓度的赛来西布处理HepG2细胞，分别应用四甲基偶氮噻唑蓝试验、DNA梯度电泳法、放射免疫法检测赛亚西布对HepG2细胞增殖和凋亡及其COX-2活性的影响；应用免疫印迹法和比色法检测赛莱西布对HepG2细胞胱氨酸蛋白酶3（clasepase-3）蛋白质的表达及活性的影响。结果12．5，25，50μmol／L的赛莱西布作用于HepG2细胞后，HepG2细胞增殖受抑制，与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）；赛莱西布干预组HepG2细胞DNA明显降解，可见细胞凋亡特征性梯状DNA条带；干预组HepG2细胞caspase3蛋白表达及活性均明显升高。与对照组比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）；赛莱西布明显抑制HepG2细胞cox-2活性。与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论赛莱西布可通过cox-2通路和easpase3通路抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡。     

甲醛对HepG2细胞胆汁酸代谢影响

目的 观察甲醛(FA)对人肝癌HepG2细胞内胆汁酸合成和外排影响,探讨甲醛引起肝细胞损伤机制.方法 以不同浓度甲醛对HepG2细胞染毒12、24和48 h,采用细胞毒性试验(MTT法)检测细胞活性;以不同浓度甲醛对HepG2细胞染毒24和48 h,采用化学-酶法测定HepG2细胞内总胆汁酸(TBA)含量;采用实时定量...     

COX-2抑制剂NS-398对肝癌HepG2细胞凋亡蛋白Bcl-2和Caspase 3表达的影响

目的探讨选择性环氧合酶2(COX-2)抑制在肝癌HepG2细胞凋亡中的作用。方法用选择性COX-2抑制剂NS-398处理HepG2细胞,流式细胞术测定细胞凋亡和半胱氨酸酶3(Caspase3)活性变化;Western blotting法检测不同浓度NS-398处理后凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase3表达变化。结果流式细胞术显示NS-398(0、100、200、300、400μmol/L)作用HepG2细胞24h后,对照组未见凋亡峰,各试验组(100、200、300、400μmol/L)出现明显的凋亡峰,其凋亡率分别为(10.51±1.04)%、(27.79±2.40)%、(45.72±3.32)%、(60.22±2.03)%,呈明显剂量依赖性(P<0.01),不同浓度NS-398处理后Bcl-2表达下降,Caspase3表达增加,随着NS-398处理浓度的增加,表达活性Caspase3的细胞百分率分别为(2.67±0.22)%、(9.53±0.15)%、(21.28±0.43)%、(39.63±0.8)%、(63.40±0.69)%,呈明显剂量依赖性(P<0.01)。结论选择性COX-2抑制剂NS-398可能通过下调Bcl-2蛋白表达活化Caspase3,从而诱导肝癌细胞HepG2凋亡,COX-2抑制也许可作为新的肝癌的治疗方法。     

EGCG对人肝癌HepG2细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对肝癌HepG2细胞增殖和侵袭的影响及可能的分子机制。方法不同浓度EGCG对HepG2细胞进行干预后,CCK-8法检测EGCG对肝癌HepG2细胞增殖的影响;荧光显微镜及流式细胞术(FCM)Annexin V-FITC/PI双染法检测EGCG对HepG2细胞的凋亡诱导作用;Transwell侵袭实验检测EGCG对HepG2细胞侵袭的影响;ELISA法检测HepG2细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达水平。结果EGCG各浓度组干预HepG2细胞24、48h后,细胞的生长增殖均明显受到抑制,其24h IC25值和IC50值分别为58.19和133.90mg/L。以60、135mg/L EGCG干预肝癌HepG2细胞24h后,FCM结果显示药物组细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05),荧光显微镜观察显示随着药物浓度的增加,细胞凋亡程度加重。Transwell侵袭实验显示,60、135mg/L EGCG对HepG2细胞侵袭力抑制率分别为69.47%和100%(P<0.05)。ELISA检测结果显示,EGCG干预后HepG2细胞上清液中MMP-2和VEGF表达水平下降(P<0.05)。结论 EGCG对人肝癌HepG2细胞具有抑制增殖和侵袭作用,其机制可能与EGCG诱导HepG2细胞凋亡和抑制肿瘤细胞中MMP-2及VEGF表达水平有关。     

丝氨酸对肝癌HepG2细胞增殖、迁移及粘附功能的影响

目的探讨丝氨酸对肝癌HepG2细胞增殖、迁移及粘附功能的影响及其调控机制。方法体外培养HepG2细胞,采用不同浓度(0.01~100μmol/L)丝氨酸处理,CCK8法、划痕实验和体外基质粘附实验检测HepG2细胞的增殖、迁移及粘附功能;采用1μmol/L丝氨酸处理,Western blot检测pERK和pAKT。结果与空白对照组细胞相比,1μmol/L丝氨酸处理组显著促进HepG2细胞的增殖,且在48 h和72 h差异具有统计学意义(P0.05)。1μmol/L丝氨酸处理组24 h的迁移促进率为6%(P0.05)。0.01和1μmol/L丝氨酸处理组对HepG2细胞粘附功能的促进率分别为15%(P0.05)和20%(P0.01)。1μmol/L丝氨酸处理组ERK和AKT活性(pERK和pAKT)明显升高。结论丝氨酸通过促进ERK和AKT磷酸化促进HepG2细胞的增殖、迁移和粘附。     

青石棉诱导A549细胞表达IL-8的研究

目的　研究青石棉纤维作用于A5 4 9细胞后IL 8蛋白和基因表达水平及酪氨酸激酶抑制剂PD980 5 9对IL 8表达的影响。方法　用定量RT PCR法测定青石棉诱导A5 4 9细胞后的IL 8mRNA水平 ;用免疫反应法测定A5 4 9细胞培养上清中IL 8蛋白水平。结果　不同浓度青石棉刺激A5 4 9细胞后 ,培养上清中IL- 8释放量明显增加 ,细胞中A5 4 9IL- 8mRNA表达显著上升 ,使用酪氨酸激酶抑制剂PD980 5 9可明显抑制IL- 8的蛋白及mRNA表达水平。结论　青石棉可诱导IL- 8的高表达 ,而这种表达可为PD980 5 9所抑制 ,提示IL -8的表达源于胞浆中MAPKs信号通路。     

瘦素对子宫内膜间质细胞分泌白细胞介素的影响

目的:观察瘦素对体外培养人子宫内膜间质细胞(ESC)分泌白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-8(IL-8)的影响,探讨瘦素对女性生殖生理的调节作用。方法:采用ELISA方法测定加入不同浓度瘦素时ESC分泌IL-6和IL-8的含量。结果:在ESC细胞上清液中瘦素能刺激IL-6、IL-8的产生,不同浓度瘦素刺激IL-6、IL-8分泌量不同,各组间比较有显著性差异(P<0·05,P<0·01)。结论:瘦素是细胞因子在子宫内膜产生的一种附加调节剂,通过调节局部细胞因子而调节生殖生理过程。     

HepG2细胞DNA损伤中8-OH-dG含量测定的高效液相色谱-电化学法

目的对利用高效液相色谱-电化学法(HPLC-ECD)测定HepG2细胞内8-羟基脱氧鸟苷(8-OH-dG)的方法进行研究。方法 HepG2细胞经前处理后,利用美国Varian Prostar高效液相色谱仪电化学检测器检测8-OH-dG水平。结果 8-OH-dG峰与杂质峰分离良好,8-OH-dG浓度在1～25 ng/ml之间呈良好线性,流动相最佳pH值为5.2,最佳工作电压为+0.60V,最低检测浓度为0.39 ng/ml,在线性范围内的3种质量浓度20、5、1 ng/ml下进行的测定,8-OH-dG回收率分别为(86.1+1.2)%、(85.3+2.3)%、(84.1+1.8)%。精密度试验的批内RSD在2.8%～6.7%,精密度试验的批间RSD在6.5%～8.4%。结论该法检测HepG2细胞内8-OH-dG灵敏、准确、重复性好,操作简便,值得推广。     

HepG2细胞培养方法与条件的探讨

目的 探讨HepG2细胞最优培养方法与培养条件。方法 对比40℃先溶解后37℃水浴恒温与传统37℃复苏方法效果以选择最佳的复苏方法；观察不同比例胎牛血清培养基下细胞生长情况以确定最佳的血清含量；观察不同汇合度下细胞生长趋势及死活细胞比例以选择恰当的传代时机；观察不同消化方法的消化效果以选择合适的消化方法。结果 40℃先溶解后37℃水浴恒温的复苏存活率(85．7％)明显高于传统37℃复苏方法(68．4％)；在含12％以上胎牛血清的I)MEM中细胞生长良好；汇合度达95％～100％．时细胞生长趋势达到平台期，100％以后活细胞逐渐减少而死细胞逐渐增加；应用先P'BS洗涤后0．25％胰酶消化的传代方法易于控制，消化效果好。结论 HcpG2细胞采取40℃先溶解后37℃水浴恒温的复苏方法，含12％胎牛血清DMEM培养基培养，采用先PBS洗涤后胰酶消化的方法于汇合度95％～100％时传代的方法进行培养，能获得最佳培养效果。     

基于微孔板的人HepG2细胞体外彗星试验方法的研究

目的运用微孔板体外培养技术,建立人HepG2细胞的体外彗星试验方法,为进一步建立体外高通量筛选方法提供依据。方法选用人HepG2细胞,运用96孔板体外细胞培养技术,建立微孔板的彗星试验方法,结合中性红检测细胞毒性的方法,选择20种化合物对所建方法进行验证。结果阳性和阴性对照物用所建方法与体内试验所获结果一致,验证结果显示,8种遗传毒物在体外彗星试验中均获得阳性结果,灵敏度为100%,且当细胞的相对活力>50%时,拖尾率及尾长均与剂量呈正相关。12种非遗传毒物中,11种物质呈阴性反应,1种物质呈阳性反应,特异性为91%。结论运用微孔板体外细胞培养技术,可在1块96孔板上同时检测4~5种受试物,并在无S9的情况下能检测出直接与间接诱变剂,并可界定出引起遗传毒性的作用剂量,提高了筛选的速度,减少了受试物等的用量,具有发展成为体外高通量筛选方法的良好条件。     

二氯乙腈诱导HepG2细胞凋亡及机制研究

目的 研究二氯乙腈(DCAN)对人肝肿瘤HepG2细胞凋亡的作用及其机制。 方法 用二甲基亚砜(DMSO)溶解DCAN,以DMSO处理的HepG2细胞作为对照组, 50和800 μmol/L 的DCAN处理的HepG2细胞作为处理组,采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂盒检测细胞活力,流式细胞术(FCM)检测细胞周期分布情况,Annexin V-FITC/PI双标记法测定细胞凋亡率;荧光测定法检测HepG2细胞内天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性。 结果 DCAN处理浓度和处理时间存在交互效应(P<0.001),与对照组比较,DCAN可明显抑制HepG2增殖,呈现时间和剂量效应(P<0.05);与对照组比较,800 μmol/L DCAN处理组G₀/G₁期比例明显减少,G₂/M期细胞比例明显增加;DCAN诱导的HepG2细胞凋亡随着浓度的增加而增加,呈剂量-效应关系,回归方程为=0.031x+5[决定系数(R²)=0.915,F=64.782,P<0.001];DCAN诱导的HepG2细胞内caspase-3酶活性随着处理浓度的增加而增加,呈剂量-效应关系,回归方程为=0.001 6x+1(R²=1.000,F=21 266.064,P<0.001)。 结论 DCAN可抑制HepG2细胞增殖并诱导细胞凋亡,其机制可能与G₂/M期细胞阻滞、抑制RNA和蛋白质的合成并激活细胞内caspase-3凋亡途径有关。     

镉暴露对HepG2细胞NRF2信号通路影响

目的 探讨镉暴露对HepG2细胞转录因子NF-E2相关因子2（NRF2）信号通路的影响。方法 采用甲臢比色法测定CdCl₂（0、1、2.5、5、10、25、50、100、200 μmol/L）处理24 h后,HepG2细胞活力变化;应用蛋白免疫印迹法检测CdCl₂（1、2、5、10、20 μmol/L）处理细胞6 h后,NRF2蛋白水平;采用RT-qPCR方法检测10 μmol/L CdCl₂处理细胞2、4、6、12、24 h后,GCLC、GCLM、HO1 和 AKR1C1 mRNA水平变化,检测CdCl₂（1、2、5、10、20 μmol/L）处理细胞6 h后,GCLC、GCLM、HO1和AKR1C1 mRNA水平变化。结果 HepG2细胞活力随镉处理剂量升高而降低（P<0.05）;与对照组（0.60±0.01）比较, 1、2、5、10、20 μmol/L镉处理组HepG2细胞NRF2蛋白表达水平[分别为（0.65±0.01）、（1.37±0.04）、（1.94±0.05）、（2.24±0.07）、（2.22±0.05）]均明显升高（P<0.05）;与对照组比较,镉处理6 h时,HepG2细胞内GCLC、GCLM、HO1和AKR1C1 mRNA水平[分别为（45.76±7.04）、（114.21±5.23）、（59.52±1.50）、（674.13±27.12）]明显升高（P<0.05）;与对照组比较,5 μmol/L镉处理组HepG2细胞内GCLC和GCLM mRNA水平[分别为（24.77±2.16）、（29.93±0.67）]升高,2 μmol/L镉处理组HepG2细胞内HO1和AKR1C1 mRNA水平[分别（28.55±2.02）、（186.32±12.63）]升高（P<0.05）。结论 镉暴露能激活HepG2细胞系中NRF2信号通路。     

不同温度热疗对肝癌HepG2细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨不同温度热疗对体外培养肝癌HepG2细胞增殖与凋亡的影响. 方法 采用水浴对肝癌HepG2细胞行43℃、46℃、48℃、50℃实验组和37℃对照组热疗,用倒置显微镜观察热疗后24 h的细胞形态变化,四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞增殖水平,流式细胞仪测定细胞凋亡和坏死率. 结果 46℃、48℃、50℃与43℃、37℃比较,细胞增殖明显受抑制,24、48、72、96 h分别为54.9%、78.0%、82.0%、65.2%、80.3%、87.7%、72.3%、87.5%、91.0%、82.7%、91.3%、92.8%(P<0.05).而43℃细胞增殖抑制不明显(P>0.05).46℃组的细胞凋亡率最高为34.17%±1.75%,与其它各组之间差异有统计学意义(P<0.01),50℃组的细胞坏死率最高为57.36%±4.07%,各组之间差异均有统计学意义(P<0.05). 结论 46℃及以上的热疗能够明显抑制HepG2细胞的增殖,引起明显的细胞凋亡与坏死.     

Inactivation of hepatitis B virus in plasma by hospital in-use chemical disinfectants assessed by a modified HepG2 cell culture

Because of the difficulties of the chimpanzee model and the genetic differences using the duck model, we developed a cell culture method to measure human hepatitis B virus (HBV) inactivation in vitro. Pooled HBV-infected human plasma that had been exposed to a disinfectant was left in contact for three days with a cell culture of the human hepatoma cell line, HepG2, with 4% polyethyleneglycol and 3 mM sodium butyrate. The mean log10 of the viral titre of unexposed plasma was 4.87 infectious units per mL. Our results showed that 1% glutaraldehyde, sodium hypochlorite at 4700 ppm free chlorine and an iodophor-detergent disinfectant containing 3.6% povidone-iodine reduced viral titres by factors exceeding 10(3)-10(4). However, sodium hypochlorite at 1000 ppm free chlorine had minimal activity and povidone-iodine at 9, 5 and 3.6% had no measurable activity (less than 10-fold reduction). This is the first study using a cell culture model to assess disinfectant activity against HBV. It demonstrates more rapidly than the chimpanzee model that glutaraldehyde and sodium hypochlorite, using standard concentrations and exposure times compatible with clinical practice, were highly active against HBV. However, unexpectedly for an enveloped virus, we found no antiviral activity for iodine in the absence of detergent.