毛茛总苷对人胃癌细胞和胰腺癌细胞增殖作用的初步研究

目的:研究毛茛总苷体外对人胃癌细胞MGC803和人胰腺癌PATU898细胞增殖、细胞周期的影响。方法:采用Alamar Blue和瑞-姬染色方法检测毛茛总苷对人胃癌细胞MGC803和人胰腺癌细胞PATU8988增殖的作用;PI染色法观察毛茛总苷对MGC803和PATU8988细胞周期的影响;Annexin V/PI双染实验法检测毛茛总苷对MGC803细胞凋亡的影响。结果:用Alamar Blue检测及瑞-姬染色法,其结果显示毛茛总苷对人胃癌细胞MGC803和人胰腺癌细胞PATU8988表现出具有较好地增殖和抑制作用,其48h的半数抑制浓度分别为222.05μg/mL,341.23μg/mL;用PI单染法,其结果显示毛茛总苷对2株肿瘤细胞的细胞周期无明显影响;用Annexin V/PI双染法,其实验结果显示毛茛总苷可诱导MGC803细胞凋亡。结论:毛茛总苷在体外可以明显抑制MGC803和PATU8988的增殖,其作用机制可能与诱导细胞凋亡有关,而与细胞周期阻滞无关。     

非诺贝特抑制人胃癌MGC 803细胞增殖及机制

目的: 探讨非诺贝特对胃癌MGC 803细胞生物活性的影响及作用机制。方法: 采用MTT法检测非诺贝特对胃癌MGC 803细胞的增殖抑制作用;采用流式细胞术观察非诺贝特对MGC 803细胞周期和凋亡的影响;免疫荧光染色检测非诺贝特对MGC 803细胞Bcl-2/Bax蛋白表达及细胞生长的抑制作用;蛋白免疫印迹法(Western Blotting)检测非诺贝特对MGC 803细胞p-ERK1/2、p-AKT、ERK1/2 和AKT蛋白表达的影响。结果: 非诺贝特对MGC 803细胞增殖抑制作用具有时间和剂量依赖性。非诺贝特使MGC 803细胞的周期阻滞于G2/M期,并诱导其凋亡,Bcl-2表达逐渐减少,Bax表达逐渐增加,且下调 ERK1/2和AKT蛋白的磷酸化水平,但对ERK1/2 和AKT蛋白表达水平没有影响。结论: 非诺贝特能够抑制胃癌MGC 803细胞增殖,并诱导其凋亡。其分子机制可能包括下调ERK1/2和AKT蛋白的磷酸化水平。     

蛇葡萄素对人宫颈癌SiHa细胞增殖、周期及凋亡的影响

目的探究蛇葡萄素(ampelopsin,AMP)对人宫颈癌SiHa细胞增殖、周期、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法MTT法检测不同浓度(10、20、40、80、160、320μmol·L^-1)和不同干预时间(24、48、72 h)的AMP对SiHa细胞增殖抑制作用;Hoechst 33258法、Annexin-FITC/PI法检测AMP对SiHa细胞凋亡的影响;流式细胞术检测细胞周期变化;Rh-123法检测线粒体膜电位的变化;Western blot检测AMP对SiHa细胞中Bcl-2、Bax、Cleaved-caspase-3蛋白表达的影响。结果AMP对SiHa细胞抑制率呈浓度和时间依赖性(P<0.05),最低IC 50值为40.33μmol·L^-1;随着AMP浓度的增加或作用时间的延长,细胞凋亡率逐渐增加(P<0.05);当AMP浓度为80μmol·L^-1时,细胞周期阻滞在G 2/M期,呈一定的时间依赖性;线粒体膜电位随AMP浓度上升而下降;Bax/Bcl-2和Cleaved-caspase-3表达水平均上调,呈浓度和时间依赖性(P<0.05)。结论AMP明显抑制SiHa细胞的增殖,阻滞细胞周期于G 2/M期,可能通过线粒体途径诱导SiHa细胞凋亡。     

奥曲肽联合顺铂对人胃癌细胞株MGC-803生长影响的研究

目的 研究奥曲肽联合顺铂对人胃癌细胞株MGC-803增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制.方法 利用不同浓度的奥曲肽、顺铂以及一定浓度的奥曲肽联合顺铂作用于体外培养的人胃癌细胞株MGC-803,应用MTT 法分析细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率.结果 奥曲肽及顺铂对MGC-803细胞的生长增殖产生抑制作用,并具有量效、时效及饱和性;大多数细胞被阻滞于G0/G1期,S期和G2/M期细胞数明显减少,细胞分裂受到抑制,凋亡率增加.结论 奥曲肽联合顺铂抑瘤率及细胞凋亡率显著高于单用奥曲肽或顺铂治疗组,表明奥曲肽和顺铂有协同作用,这为临床奥曲肽联合顺铂治疗胃癌提供了理论基础.     

大蒜素对人喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡的影响

目的 研究大蒜素(Allitridi)对人喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法 分别以不同浓度大蒜素(25、50、100 mg·L-1)和顺铂(1.8 mg·L-1)干预对数生长期人喉癌Hep-2细胞,药物干预24 h后经Hoechst染色后利用倒置显微镜观察细胞的形态,采用MTT比色法测定大蒜素对Hep-2细胞的增殖抑制作用,采用FCM测定细胞周期分布、检测细胞凋亡率;采用RT-PCR检测Bax、Bcl-2 mRNA表达水平,Western-blot检测caspase-3蛋白表达.结果 大蒜素各组和顺铂1.8 mg·L-1组人喉癌Hep-2细胞较空白对照组出现不同程度损伤,以大蒜素100 mg·L-1组损伤最为严重;大蒜素(50、100 mg·L-1)组和顺铂1.8 mg·L-1组人喉癌Hep-2细胞增殖抑制率显著升高,细胞周期G0/G1期显著增长、G2/M期显著缩短,细胞凋亡数量明显增多、凋亡率显著升高,凋亡相关基因bcl-2 mRNA表达显著下调而Bax mRNA显著上调、Bax/bcl-2表达比值显著升高,促凋亡蛋白caspase-3表达显著上调,上述均差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01).结论 大蒜素对人喉癌Hep-2细胞生长具有抑制作用,其机制可能与大蒜素能够阻滞人喉癌Hep-2细胞周期进程、抑制细胞增殖并促进其凋亡有关.     

苯丙素苷类抗氧化剂异毛蕊花苷对人胃癌细胞生长和分化的影响

目的：探讨苯丙素苷类抗氧化剂异毛蕊花苷对人胃癌MGC 803细胞生长和分化的影响。方法：以1．5％二甲基亚砜为阳性对照,采用细胞计数、肿瘤形成率实验、酶活性测试、流式细胞仪分析和Western blot等方法分别评价异毛蕊花苷对MGC 803细胞生长、致瘤性、碱性磷酸酶（ALP）及乳酸脱氢酶（LDH）活性、细胞周期和周期相关基因表达的影响。结果：MC 803细胞经异毛蕊花苷处理后,细胞生长和增殖呈浓度和时间依赖性抑制;异毛蕊花苷20μmol/L可使细胞致瘤性明显受抑,胃癌细胞分化标志酶ALP和LDH活性均呈时间依赖性下降,细胞周期表现为G0／G1期阻滞,G1→S期调控点相关蛋白p53、p21/WAF1和p16/INK4表达上调,C－myc蛋白表达受抑。结论：异毛蕊花苷可明显抑制MGC 803细胞生长及逆转胃癌细胞恶性表型进而诱导分化,这可能与细胞周期G0／G1期阻滞及其对周期相关基因表达的调控作用有关。     

丝石竹皂甙对人胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的影响

目的 探讨丝石竹提取物丝石竹皂甙在体外对人胃腺癌细胞株SGC-7901增殖、凋亡的影响及其机制.方法 取对数生长期的SGC-7901细胞,加入含不同浓度(20、40、80μ上g/mL)的丝石竹皂甙分别培养处理24、48、72 h,以不含丝石竹皂甙细胞作为对照组.MTT比色法检测细胞增殖活性;流式细胞仪Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;流式细胞仪分析细胞周期;实时荧光定量PCR检测Wnt5a、Wnt8b基因的表达情况.结果 MTT表明,丝石竹皂甙对胃癌细胞株SGC-7901增殖的抑制随处理时间的延长和浓度的增加而增强,其24h的IC50值为40μg/mL;细胞凋亡分析显示,丝石竹皂甙作用24h,细胞凋亡率呈浓度依赖性增加,细胞G0/G1期阻滞,S期细胞数量显著减少;定量PCR结果表明,丝石竹皂甙能下调Wnt5a、Wnt8b mRNA的表达,且呈浓度依赖性.结论 丝石竹皂甙通过下调Wnt通路关键基因的表达,抑制胃癌细胞的增殖、促进其凋亡.     

阿司匹林对体外培养人宫颈癌细胞凋亡作用的研究

目的 探讨阿司匹林诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及对凋亡相关基因Bcl-2和bax的作用.方法 培养人宫颈癌Hela细胞,加入不同浓度阿司匹林(1.0、5.0、10.0 mmol/L)干预培养.应用流式细胞技术检测Hela细胞凋亡和细胞周期的变化;用RT-PCR 检测细胞凋亡相关基因bcl-2及bax转录水平的改变;免疫组化法检测bcl-2及bax蛋白表达的变化.结果 与对照组相比,阿司匹林干预组Hela细胞凋亡率明显增高(P<0.05); 随着阿司匹林浓度增加,G0/G1期细胞比例下降,G2/M期细胞比例升高(P<0.05);阿司匹林干预培养后Hela细胞中bcl-2基因mRNA表达明显降低,而bax基因mRNA表达升高明显,较对照组均有统计学意义(P<0.05);阿司匹林作用48 h后,免疫组化法检测bcl-2蛋白表达下调及bax蛋白表达上调(P<0.05).结论 阿司匹林能诱导宫颈癌Hela细胞凋亡,其机制与抑制bcl-2表达,上调bax表达有关.     

曲古抑菌素诱导HepG2细胞凋亡中Wnt/β-catenin信号转导通路的作用

目的研究Wnt/β-catenin信号通路在曲古抑菌素(TSA)诱导Hep G2细胞凋亡中的作用。方法取对数生长期Hep G2细胞,设不同质量浓度药物诱导组,同时设空白对照组,用CCK-8法检测其对细胞增殖的影响;用流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡;Western Bolt法检测Hep G2细胞β-catenin的表达。结果 CCK-8法检测结果显示,曲古抑菌素对肝癌Hep G2有明显的增殖抑制作用并呈浓度和剂量依耐性;流式细胞术细胞周期检测结果显示,药物组G0/G1期细胞数量明显增多(P<0.05),(G2+M)和S期细胞数量明显减少(P<0.05),提示曲古抑菌素可将Hep G2细胞周期阻滞在G0/G1期;细胞凋亡检测结果显示,空白对照组凋亡率为(3.82±0.23)%,250 nmol/L曲古抑菌素组凋亡率为(23.00±0.65)%,500 nmol/L曲古抑菌素组凋亡率为(37.85±0.87)%,提示TSA具有促进Hep G2细胞凋亡的作用,且呈浓度依赖性;Western Bolt检测结果显示β-catenin表达水平均明显升高。结论曲古抑菌素有诱导Hep G2细胞凋亡的作用,Wnt/β-catenin信号通路在此过程中起重要作用。     

生存素反义寡核苷酸诱导HL-60细胞凋亡的实验研究

目的 :探讨特异性靶向生存素的反义寡核苷酸 (ASODN)对急性早幼粒细胞系HL 6 0细胞凋亡的影响。方法 :应用四唑盐 (MTT)比色法分析细胞增殖 ;倒置显微镜观察细胞形态学变化 ;原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡指数 (AI) ;流式细胞术(FCM)定量检测细胞凋亡 ;RT PCR半定量检测生存素mRNA的表达。结果 :5～ 2 0 μmol·L-1生存素ASODN对HL 6 0细胞增殖均有抑制作用 ,且呈时间和剂量依赖性。ASODN组凋亡率和生存素基因表达抑制率明显高于对照组。结论 :生存素ASODN能有效抑制HL 6 0细胞生存素mRNA的表达并诱导细胞凋亡 ,表明生存素对维持肿瘤细胞的增殖具有非常重要的作用。     

二烯丙基二硫对人胃癌MGC803细胞G_2/M期检查点Chk1与Chk2的影响

目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对人胃癌MGC803细胞G2/M期检查点Chk1与Chk2的影响。方法流式细胞术检测细胞周期改变;Northern blot、Westernblot与免疫细胞化学检测DADS处理MGC803细胞的Chk1与Chk2表达。结果流式细胞术分析显示,30 mg.L-1DADS呈时间依赖性阻滞MGC803细胞在G2/M期(P<0.05);Northern blot检测表明,DADS不同时间作用MGC803细胞后,Chk1与Chk2 mRNA表达与未处理组差异无显著性(P>0.05);免疫细胞化学发现Chk1与Chk2表达与未处理组无明显改变(P>0.05);Western blot DADS在不同时间对MGC803细胞Chk1与Chk2总蛋白表达无改变(P>0.05),而磷酸化的Chk1表达呈时间依赖性增加(P<0.05),但磷酸化的Chk2无明显改变(P>0.05)。结论 DADS阻滞MGC803细胞G2/M期与磷酸化Chk1有关。     

生存素蛋白在胃癌中的表达及意义

目的 观察生存素（survivin）蛋白在不同胃组织中的表达与肿瘤细胞凋亡及增殖的关系。方法 采用免疫组织化学SP法检测生存素蛋白,DNA末端标记法TUNEL技术检测细胞凋亡。结果 150例胃癌标本中有73例生存素蛋白阳性表达,其阳性率48．67％;生存素蛋白阳性表达组中的凋亡指数（0．60％）与其阴性组（0．94％）之间有统计学差异（P〈0．05）;增殖指数也明显高于阴性组（P〈0．05）;生存素蛋白在正常胃黏膜中没有表达,在上皮内瘤变中生存素蛋白有不同程度的表达,与正常胃黏膜之间有统计学意义（P〈0．05）,低级别与高级别上皮内瘤变之间有统计学意义（P〈0．05）,高级别上皮内瘤变与胃癌之间无统计学意义（P〉0．05）。从低级别上皮内瘤变、高级别上皮内瘤变到胃癌的过程中,凋亡指数逐渐减少,增殖指数逐渐增加。结论 生存素蛋白抑制胃癌细胞凋亡,促进胃癌细胞增殖,与肿瘤的发生有关。     

环胞菌素A对皮肤角朊细胞株增殖抑制及凋亡的试验研究

通过研究环胞菌素A(CSA)在体外对角朊细胞株的增殖抑制及对凋亡影响,初步探讨其外用治疗皮肤病的机制.用MTT法检测增殖抑制;二苯胺法及流式细胞仪检测细胞凋亡;RT-PCR测bcl-2 mRNA表达.结果表明CSA10-4g·L -1作用72h开始抑制角朊细胞株增殖,随药物浓度增加,抑制增殖能力增加;CSA10-3 g·L -1作用72h二苯胺法测片段化DNA含量增加,并随药物浓度增加而增加;CSA10-2g·L -1作用72h流式细胞仪检测亚二倍细胞明显增加;此浓度作用24h明显上调bcl-2 mRNA表达,随作用时间延长,上调的bcl-2 mRNA水平下降.结论:CSA可抑制角朊细胞株增殖并具诱导其凋亡能力,此诱导凋亡机制可能与bcl-2有关.     

大黄素对人胃癌MNK-45和MGC8-03细胞增殖的影响

目的观察大黄素对人胃癌MNK-45和MGC8-03细胞增殖的影响。方法采用MTT法测定MNK-45细胞和MGC8-03细胞增殖抑制率;采用AO/EB双染观察细胞形态学变化;采用流式细胞仪测定细胞周期。结果大黄素（5～80μg/mL）对MNK-45和MGC8-03细胞增殖均具有显著抑制作用（P〈0.01或0.05）,且药物剂量越大,作用时间越长,其抑制作用越强（P〈0.01）;大黄素作用于两种细胞后荧光显微镜下观察均显示细胞凋亡特征;大黄素使MNK-45和MGC8-03细胞增殖被阻滞于G0/G1期。结论大黄素能抑制人胃癌MNK-45和MGC8-03细胞增殖,诱导其凋亡,影响其细胞周期时相的分布。     

三氧化二砷对人胃癌细胞凋亡的作用及对肺耐药蛋白表达的影响

目的 研究亚砷酸(As2O3)对人胃癌细胞株MGC803的凋亡诱导作用及对肺耐药蛋白基因(LRP)表达的影响.方法 选用人胃癌MGC803细胞系,运用体外细胞培养法,流式细胞术检测As2O3对人胃癌细胞的诱导凋亡作用;用逆转录-聚合酶链反应方法检测LRP的表达情况.结果 不同浓度的As2O3均可诱导凋亡.1.0、2.0 μmol·L-1的As2O3,可下调LRP的表达.结论 As2O3具有诱导胃癌细胞凋亡的作用,适当的浓度可下调LRP的表达.     

二烯丙基三硫诱导人胃癌细胞凋亡相关基因的差异表达

目的探讨二烯丙基三硫(diallyl trisulfide,DATS)诱导人胃癌MGC803细胞凋亡的分子机制。方法MTT法检测DATS对MGC803细胞的生长抑制作用,荧光显微镜和流式细胞仪观察DATS作用后的细胞凋亡。人细胞凋亡基因芯片检测DATS作用MGC803细胞的凋亡相关基因表达谱,RT-PCR验证凋亡相关基因。结果MTT结果显示,4、8、12、16、24mg.L-1DATS对MGC803细胞生长的抑制率从11%增至78%,呈明显量效关系(P<0.05)。荧光显微镜下,DATS处理后的MGC803细胞核染色质着橘红色并呈固缩状或片段状。流式细胞仪检测显示,8、12、16、24mg.L-1DATS作用24h后,出现典型亚二倍体峰,平均凋亡率分别为11.4%、23.7%、27.4%、31.1%(P<0.05)。人细胞凋亡基因芯片检测结果表明,16mg.L-1的DATS作用4h后出现16个凋亡相关基因表达差异,RT-PCR证实,SODD基因mRNA表达上调、Apaf-1基因mRNA表达下调(P<0.05)。结论DATS诱导人胃癌MGC803细胞凋亡可能与多个基因和信号转导通路作用有关。     

二烯丙基二硫诱导人胃癌MGC803细胞凋亡及细胞周期阻滞的研究

目的　研究二烯丙基二硫 (diallyldisulfide ,DADS)诱导人胃癌MGC80 3细胞凋亡和对细胞周期的影响。方法　采用MTT法、丫啶橙染色、流式细胞仪等方法检测DADS对MGC80 3的增殖抑制 ,诱导凋亡以及细胞周期分布的影响。结果　MTT法显示 ,DADS对MGC80 3细胞有明显的抑制增殖作用 ,2 0、3 0、40mg·L- 1DADS作用MGC80 3细胞72h后 ,生长抑制率分别达 2 5 7%、58 6%、69% ;经 3 0mg·L- 1DADS作用MGC80 3细胞 48h后 ,用丫啶橙染色法观察到不同阶段的凋亡细胞形态学改变 ;流式细胞仪分析结果显示 ,DADS对MGC80 3细胞有明显的G2 /M期阻滞作用 ,3 0mg·L- 1DADS作用MGC80 3细胞 2 4h ,与对照组相比 ,可使G2 /M期细胞增加到 4倍多 ,且DADS呈时间依赖性诱导MGC80 3细胞凋亡 ,3 0mg·L- 1DADS作用MGC80 3细胞48h ,凋亡率从对照组的 3 5%升高到 3 9 5%。结论　DADS引起MGC80 3细胞G2 /M期阻滞并诱导凋亡可能是其抗肿瘤的机制之一     

尼美舒利对人食管癌细胞Eca-109 COX-2表达及生长的抑制作用

目的研究环氧化酶-2(COX-2)选择性抑制剂尼美舒利对人食管癌Eca-109细胞株COX-2表达和细胞增殖及凋亡的影响。方法MTT法测定尼美舒利对人食管癌Eca-109细胞增殖的抑制率;RT-PCR法检测Eca-109细胞COX-2mRNA表达变化;流式细胞仪检测COX-2蛋白表达、细胞周期时相分布及凋亡率的变化;光镜和琼脂糖电泳法进一步观察细胞凋亡。结果尼美舒利对人食管癌Eca-109细胞有较强的抑制作用,有明显的时间和浓度依赖性;呈浓度依赖性下调Eca-109细胞COX-2 mRNA及蛋白表达;可使Eca-109细胞G0/G1期比例增高,S期细胞减少,增殖指数降低,凋亡细胞增多。结论尼美舒利可能通过对COX-2表达的下调而诱导凋亡和细胞周期阻滞,从而抑制人食管癌Eca-109细胞生长。     

生存素在VP16诱导HL-60白血病细胞凋亡中的作用

目的探讨生存素在化疗药物足叶乙甙（VP16）诱导白血病细胞凋亡中的作用。方法用HL-60白血病细胞株进行传代培养,MTT试验检测VP16不同药物浓度对白血病细胞增殖的影响。通过光镜下观察细胞形态学变化和DNA凝胶电泳定性检测细胞凋亡,用流式细胞术（FCM）定量检测细胞凋亡及周期变化,用RT-PCR检测生存素基因表达,免疫组化检测其蛋白表达。结果各种浓度的VP16均可诱导HL-60细胞凋亡,下调生存素表达,阻滞细胞周期,具有明显时间和浓度依赖性。结论VP16诱导白血病细胞凋亡可能与其抑制生存素表达有关。