搜风祛痰法对血管紧张素Ⅱ诱导血管内皮细胞LOX-1mRNA及ET-1 mRNA表达的影响

目的观察搜风祛痰法对血管紧张素Ⅱ致体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）氧化低密度脂蛋白1（LOX－1）mRNA及内皮素－1 ET－1）mRNA表达的影响。方法制备兔活心汤舍药血清。采用酶消化法培养HUVECs2～3代用于实验,采用RT-PCR法测定内皮细胞LOX－1 mRNA及ET－1 mRNA。随机分为正常对照组、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）组、低浓度中药血清＋AngⅡ组、中浓度中药血清＋AngⅡ组、高浓度中药血清＋AngⅡCR。结果活心汤可抑制AngⅡ导致的内皮细胞损伤,减少LOX—1 mRNA及ET-1 mRNA的表达。结论活心汤可抑制AngⅡ所致的HUVECs损伤,保护血管内皮细胞功能。     

搜风祛痰法中药对AngⅡ诱导人脐静脉内皮细胞NF-κB mRNA及ET-1 mRNA表达的影响

目的观察搜风祛痰法对血管紧张素Ⅱ致体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）核转录因子（NF-κB）mRNA及内皮素-1（ET-1）mRNA表达的影响。方法制备兔活心汤含药血清。采用酶消化法培养HUVECs2-3代用于实验,采用RT-PCR法测定内皮细胞NF-κB mRNA及ET-1 mRNA,随机分为5组：正常对照组,血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）组,低浓度中药血清＋AngⅡ组,中浓度中药血清＋AngⅡ组,高浓度中药血清＋AngⅡ组。结果活心汤可抑制AngⅡ导致的内皮细胞损伤,减少NF-κB mRNA及ET-1 mRNA的表达。结论活心汤可抑制AngⅡ所致的HUVECs损伤,保护血管内皮细胞功能。     

搜风祛痰法对血管紧张素Ⅱ诱导血管内皮细胞LOX-1 mRNA表达的影响

目的:观察搜风祛痰中药对血管紧张素II致体外培养人脐静脉内皮细胞LOX-1 mRNA表达的影响。方法:制备兔活心汤含药血清。采用酶消化法培养HUVECs 2-3代用于实验,采用RT-PCR法测定内皮细胞LOX-1 mRNA,随机分成5组:正常对照组,AngⅡ组,低浓度药物血清+AngⅡ组中浓度药物血清+AngⅡ组高浓度药物血清+AngⅡ组。结果:活心汤可抑制AngⅡ所致的内皮细胞损伤,减少LOX-1 mRNA的表达。结论:活心汤可抑制AngⅡ所致的HUVECs损伤,可以保护血管内皮功能。     

搜风祛痰中药对AngⅡ诱导人脐静脉内皮细胞NF-KBmRNA及iNOSmRNA表达的影响

[目的]观察搜风祛痰法对血管紧张素Ⅱ致体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)NF-KB mRNA及iN-OSmRNA表达的影响,阐明搜风祛痰法的中药调控NF-KBmRNA与iNOSmRNA在AS过程中可能性的作用机理。[方法]制备兔活心汤含药血清。采用酶消化法培养HUVECs2-3代用于实验,采用RT-PCR法测定内皮细胞NF-KBmR-NA及iNOS mRNA。随机分为5组:正常对照组,AngⅡ组,低浓度中药血清+AngⅡ组中浓度中药血清+AngⅡ组高浓度中药血清+AngⅡ组。[结果]活心汤可抑制AngⅡ导致的内皮细胞损伤,减少NF-KBmRNA及iNOSmRNA的表达。[结论]活心汤可抑制AngⅡ所致的HUVECs损伤,保护血管内皮功能。     

搜风祛痰中药对Ang II诱导人脐静脉内皮细胞LOX-1mRNA及NF-κB mRNA表达的影响

目的观察搜风祛痰中药对AngⅡ诱导体外培养人脐静脉内皮细胞凝素样氧化低密度脂蛋白受体1（LOX-1）与核因子-κB基因表达的影响。方法制备家兔中药复方活心汤含药血清。采用酶消化法体外培养HUVECs2-3代用于实验。采用RT-PCR法测定脐静脉血管内皮细胞LOX-1 mRNA水平。随机分为正常对照组、AngⅡ组、AngⅡ＋低剂量中药血清组、AngⅡ＋中剂量中药血清组、AngⅡ＋高剂量中药血清组。用中药先孵育2h后再加入0.5μmol／L AngⅡ刺激2h,取出细胞盖玻片固定。结果与对照组比较,活心汤含药血清可抑制AngⅡ导致的细胞损伤,减少LOX-1 mRNA及NF-κB mRNA的表达。结论活心汤可抑制AngⅡ所致的HUVECs损伤,保护血管内皮细胞功能。     

姜黄素对血管紧张素Ⅱ刺激下内皮细胞的保护作用与机制研究

目的研究姜黄素对血管紧张素Ⅱ刺激下人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)的保护性作用及其机制。方法采用MTT法检测HUVECs的细胞活力;生化比色法和ELISA法检测细胞培养上清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO)及内皮素-1(ET-1)的含量;实时RT-PCR检测HUVECs的Caspase 3、Caspase 9、Bcl-2、Bax基因的mRNA相对表达水平。结果 1×10~(-7)mol·L~(-1)AngⅡ刺激可以使HUVECs活力降低,使细胞培养上清中SOD、NO含量减少,使MDA、LDH及ET-1含量升高。AngⅡ刺激下HUVECs的Caspase 3、Caspase 9、Bax基因的mRNA相对表达水平均有所上调,Bcl-2基因的mRNA相对表达水平有所下调。不同剂量的姜黄素能够减少AngⅡ刺激下对HUVECs的损伤作用,能够上调SOD、NO的含量及Bcl-2基因的mRNA相对表达水平,同时下调MDA、ET-1及LDH含量及Caspase 3、Caspase 9、Bax基因的mRNA相对表达水平。结论姜黄素对于AngⅡ刺激下的HUVECs具有保护作用,其机制可能与减少细胞氧化应激损伤以及抑制细胞线粒体途径凋亡有关。     

血栓通对血管内皮功能的影响

目的:观察血栓通的成分三七总皂苷(PNS)中单体皂苷:人参皂苷Rg1、三七皂苷R1等对受损的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用。方法:将不同的三七总皂苷单体皂苷人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1分别与6～10 mmol/L的血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)共同作用于HUVECs24小时后,采用硝酸还原酶法和放射免疫法分析技术分别测定HUVECs上清液中一氧化氮(NO)和内皮素(ET-1)含量。结果:AngⅡ组孵育24小时后,内皮细胞与空白对照组比较(P=0.000),NO释放明显减少(P=0.000),ET-1明显增加(P=0.000)。三种单体可显著抑制AngⅡ促ET-1分泌(P<0.05),促进HUVECs释放NO(P<0.05)。但三种单体组间比较,对NO及ET-1释放作用无统计学意义(P<0.05)。结论:AngⅡ可直接引起HUVECs的损伤与功能失调,血栓通三七总皂苷能够抑制血管紧张素Ⅱ引起的体外培养内皮细胞损伤,可保护内皮细胞结构及功能的完整性。     

甘肃黄芪毛蕊异黄酮对血管内皮细胞ACE,ACE2表达的影响

 目的观察甘肃黄芪毛蕊异黄酮对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中血管紧张素转换酶(ACE)和血管紧张素转换酶2(ACE2)蛋白及其mRNA表达的影响。方法体外培养HUVECs,建立内皮细胞损伤模型,分为对照组,血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)组(1×10^-6mol·L^-1),AngⅡ+毛蕊异黄酮不同剂量组(10,1,0.1mg·L^-1),采用HE染色观察内皮细胞的形态,免疫组化(SP法)检测ACE,ACE2蛋白的表达,RT-PCR检测ACE,ACE2mRNA的表达。结果①与正常对照组比较,AngⅡ可促进ACE蛋白,mRNA的表达,减弱ACE2表达(P<0.05);②与AngⅡ组相比,毛蕊异黄酮可增强ACE2表达,抑制ACE分泌,并呈剂量依赖性(P<0.05)。结论甘肃黄芪毛蕊异黄酮通过增强内皮细胞ACE2表达,抑制ACE的分泌,减轻AngⅡ所致的体外培养HUVECs的损伤,具有保护内皮细胞的作用。     

天麻钩藤饮含药血清对人脐静脉内皮细胞保护作用的研究

目的：观察天麻钩藤饮对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）致人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的保护作用。方法：制备大鼠天麻钩藤饮含药血清。采用酶消化法体外培养HUVECs，利用Human von Willebrand factor免疫细胞化学法鉴定，随机分为3组：对照组，AngⅡ组，AngⅡ＋天麻钩藤饮组。倒置显微镜下观察细胞形态、密度，酶联免疫法测定细胞上清TNF-d含量，RT-PCR法测定细胞PPAR-γmRNA的表达。结果：与对照组比较，AngⅡ（10^-6mol／L）可引起内皮细胞密度降低，细胞分泌TNF-α增加，PPAR-γmRNA表达水平降低。天麻钩藤饮含药血清可抑制AngⅡ导致的细胞损伤，减少TNF-α的分泌，升高PPAR-γmRNA的表达。结论：天麻钩藤饮可对抗AngⅡ所致的HUVECs损伤，保护血管内皮细胞功能。     

搜风祛痰中药对AngⅡ诱导人脐静脉内皮细胞Lox-1mRNA及iNOSmRNA表达的影响

目的:探讨AngII对人脐静脉内皮细胞Lox-1mRNA及iNOSmRNA表达的影响,阐明搜风祛痰法的中药调控Lox-1与iNOS在AS过程中可能性的作用机理。方法:家兔中药血清的制备,采用酶消化法培养HUVECs2-3代用于实验,采用RT-PCR法测定脐内皮细胞LOX-1mRNA及iNOSmRNA,随机分为5组:正常对照组,AngII组,低浓度中药血清+AngII组,中浓度中药血清+AngII组,高浓度中药血清+AngII组。结果:AngII使血管内皮Lox-1mRNA及iNOSmRNA的表达明显上调。中药血清使Lox-1mRNA及iNOSmRNA的表达下降,其中低中剂量组之间有统计学意义,中高剂量组之间没有统计学差异。结论:AngII使血管内皮Lox-1mRNA及iNOSmRNA的表达上调;搜风祛痰中药使血管内皮Lox-1mRNA及iNOSmRNA的表达下降,中剂量的中药在表达上效果显著,起到良好的抗AS作用。     

丹桔胶囊对血管紧张素Ⅱ损伤血管内皮功能的保护作用

目的 :观察丹桔胶囊对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)损伤血管内皮功能的保护作用。 方法 :制备大鼠胸主动脉环,观察丹桔胶囊提取剂对抗AngⅡ引起的胸主动脉环收缩反应;AngⅡ刺激人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)以反转录—聚合酶链反应( RT-PCR) 方法检测HUVEC的内皮素(ET-1)mRNA 表达水平;蛋白质印迹(Western blot)方法检测HUVEC中细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)和核转录因子κB (nuclear factor κB,NF-κB)的活化情况。 结果 :AngⅡ引起胸主动脉收缩,丹桔胶囊制剂能显著对抗血管收缩作用,下调AngⅡ刺激所致的HUVEC细胞ET-1 mRNA 过度表达,抑制ERK1/2磷酸化,同时对NF-的活化表现出显著的抑制作用。p65位移、IκB-α磷酸化降解,丹桔胶囊上述抑制作用均呈现浓度依赖性。 结论 :丹桔胶囊抑制AngⅡ对血管内皮功能的损伤,其机制与降低ET-1表达,抑制ERK/NF-κB途径活化有关。     

姜黄素对血管紧张素II刺激下内皮细胞的保护作用机制研究

研究姜黄素对血管紧张素II刺激下人脐静脉血管内皮细胞的保护性作用及其机制。方法 采用MTT法检测HUVECs的细胞活力;生化比色法和ELISA法检测细胞培养上清中SOD、MDA、LDH、NO及ET-1的含量;实时RT-PCR检测HUVECs的Caspase 3、Caspase 9、Bcl-2、Bax基因的mRNA相对表达水平。结果 1×10-7 M AngII刺激可以使HUVECs活力降低,使细胞培养上清中SOD、NO含量减少,使MDA、LDH及ET-1含量升高。AngII刺激下HUVECs的Caspase 3、Caspase 9、Bax基因的mRNA相对表达水平均有所上调,Bcl-2基因的mRNA相对表达水平均有所下调。不同剂量的姜黄素能够减少AngII刺激下对HUVECs的损伤作用,能够不同程度地上调SOD、NO的含量及Bcl-2基因的mRNA相对表达水平,同时不同程度地下调MDA、ET-1及LDH含量及Caspase 3、Caspase 9、Bax基因的mRNA相对表达水平。结论 姜黄素对于AngII刺激下的HUVECs具有保护作用,其机制可能与减少细胞氧化应激损伤以及抑制细胞线粒体途径凋亡有关。     

灵芝多糖对血管紧张素Ⅱ诱导的血管内皮细胞衰老的干预研究

目的探讨灵芝多糖保护血管内皮细胞、抑制血管内皮细胞衰老的作用。方法采用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)建立衰老模型,分为对照组、AngⅡ诱导组和灵芝多糖组(给予AngⅡ刺激前1 h先给予100 mg/L灵芝多糖)。采用CCK-8法检测细胞存活率,采用免疫化学染色方法检测衰老相关β-半乳糖苷酶活性,流式细胞术检测细胞周期来反映细胞的增殖能力。结果与对照组比较,AngⅡ诱导组细胞存活率明显下降,β-半乳糖苷酶阳性染色率明显增多,细胞周期多停滞于G0/G1期,S期细胞逐渐减少,表明AngⅡ成功诱导了HUVECs衰老,而给予灵芝多糖干预后上述变化改善。结论灵芝多糖具有抑制内皮细胞衰老、保护血管内皮功能的作用。     

调脾护心方对急性心肌缺血模型大鼠心肌AngⅡ、ACE、AGTR1蛋白及AGT、AGTR1、ET-1 mRNA表达的影响

目的观察调脾护心方对急性心肌缺血模型大鼠心肌血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血管紧张素转化酶(ACE)、血管紧张素Ⅱ受体1(AGTR1)蛋白和血管紧张素原(AGT)、AGTR1、内皮缩血管肽1(ET-1)mRNA表达的影响。方法采用腹腔注射异丙肾上腺素[5 mg/(kg·d)]连续5天,制备大鼠急性心肌缺血模型。将64只急性心肌缺血模型大鼠随机分为调脾护心方低剂量组[低剂量组,生药5.85 mg/(kg·d)]、调脾护心方高剂量组[高剂量组,生药23.40 mg/(kg·d)]、曲美他嗪组[10 mg/(kg·d)]、模型组,每组16只,并设正常大鼠16只作为对照组。各用药组灌胃相应药物,对照组与模型组灌胃等体积生理盐水。连续灌胃28天后,分别采用HE染色法观察心肌组织病理变化;Western Blot检测各组大鼠心肌组织中AngⅡ、ACE、AGTR1蛋白表达;RT-PCR检测各组大鼠心肌组织中AGT、AGTR1、ET-1 mRNA表达。结果病理结果显示,调脾护心方和曲美他嗪可改善心肌缺血后细胞损伤。与对照组比较,模型组AngⅡ、ACE、AGTR1蛋白和AGT、AGTR1、 ET-1 mRNA表达增高(P0.05,P0.01)。与模型组比较,各用药组AngⅡ、ACE、AGTR1蛋白和AGT、AGTR1、 ET-1 mRNA表达均降低(P0.05,P0.01)。与曲美他嗪组比较,低剂量组AngⅡ、ACE、AGTR1蛋白和AGT、AGTR1 mRNA表达增高,高剂量组ACE蛋白和AGT mRNA表达增高(P0.05,P0.01)。与低剂量组比较,高剂量组AngⅡ、ACE、AGTR1蛋白和AGT mRNA表达降低(P0.01),ET-1 mRNA表达增高(P0.01)。结论调脾护心方可通过抑制肾素—血管紧张素系统(RAS)的过度激活发挥心肌保护作用。     

心肌尔康对血管紧张素Ⅱ诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的作用

目的:研究心肌尔康(XJEK)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的作用,并探讨相关的作用机制。方法:体外培养HUVECs细胞,随机分为7组,分别为空白组,AngⅡ(1×10~(-5)mol·L~(-1))组,AngⅡ(1×10~(-5)mol·L~(-1))+心肌尔康不同质量浓度组(0.1,0.2,0.4,0.8,1.6 g·L~(-1)),噻唑蓝(MTT)比色法检测HUVECs的活性;Griess法测定一氧化氮(NO)含量;流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)的水平;钙成像仪测定细胞胞浆内游离钙离子(Ca~(2+))浓度;比色法及TBA法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测内皮型一氧化氮合酶(e NOS)蛋白表达水平。结果:与空白组比较,AngⅡ组内皮细胞活力,NO释放,e NOS蛋白表达及SOD活力明显降低,MDA,ROS含量和内皮细胞胞浆内Ca~(2+)浓度明显升高(P0.05,P0.01);与AngⅡ组比较,心肌尔康可剂量依赖性提高内皮细胞活力,促进NO释放、增加e NOS蛋白的表达;升高SOD活力,抑制MDA,ROS含量和内皮细胞胞浆内Ca~(2+)浓度的升高,各指标差异均具有显著性(P0.05,P0.01)。结论:心肌尔康对AngⅡ诱导的内皮损伤具有明显的保护作用,其可能机制为抑制细胞内Ca~(2+)超载和降低氧化应激水平。     

尼古丁对血管内皮细胞PAI-1表达水平的影响

目的研究尼古丁对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）表达纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）的影响。方法 HUVECs培养后接种于25 cm2培养瓶,随机分为对照组（培养液中不加任何干预）和尼古丁组（培养液中加入尼古丁,使其终浓度100μmol/L）,分别孵育12 h后收集各组细胞及细胞上清液,采用酶联免疫吸附双抗体夹心分析法（ELISA）测定各组细胞上清液中PAI-1的抗原浓度;采用逆转录-聚合酶链反应法（RT-PCR）检测各组细胞PAI-1mRNA的表达水平。结果尼古丁组PAI-1含量在12h显著升高,与对照组比较有统计学意义（P〈0.01）,且PAI-1 mRNA的表达显著升高,与对照组比较有统计学意义（P〈0.01）。结论尼古丁损伤血管内皮细胞,显著上调HUVECs PAI-1 mRNA的转录和PAI-1蛋白的分泌,抑制内皮细胞的纤溶活性。     

牡荆素鼠李糖苷对内皮细胞血管舒缩因子表达影响的实验研究

目的:观察牡荆素鼠李糖苷对缺氧-再给氧损伤内皮细胞产生血管舒缩因子表达的影响。方法:采用脐静脉内皮细胞培养的方法,以缺氧再给氧造成内皮细胞损伤,分别以放射免疫、Griess法、免疫组化法测定细胞培养上清中内皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)、细胞内一氧化氮合酶(NOS)活性;RT-PCR方法测定细胞内ET-1,NOS mR-NA的转录。结果:不同浓度的牡荆素鼠李糖苷均可明显提高内皮细胞NOS mRNA的表达和NOS的活性;使内皮细胞血管舒张因子NO产量明显增加;缩血管因子ET-1 mRNA表达及ET-1明显减少。结论:牡荆素鼠李糖苷能通过蛋白及基因水平有效地调节缺氧再给氧损伤血管内皮细胞产生的血管活性物质的表达。     

调脂颗粒干预血管紧张素Ⅱ诱导内皮细胞自噬水平的实验研究

目的研究调脂颗粒对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)自噬水平的影响及其机制。方法采用中药血清药理学方法,以调脂颗粒含药血清和AngⅡ处理HUVECs,用MTT比色法检测血管内皮细胞生长的影响,Western blot检测各组自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、beclin-1、SQSTM1/p62的相对表达量变化,免疫荧光法检测自噬小体的数量变化,用NO试剂盒检测各组NO含量的变化。结果 AngⅡ处理HUVECs对细胞活力无改变,调脂颗粒含药血清联合AngⅡ对细胞活力也无明显影响。AngⅡ刺激内皮细胞后LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、beclin-1表达量增加,SQSTM1/p62表达量降低,自噬小体数量显著增加,NO含量下降。调脂颗粒含药血清预处理后逆转了AngⅡ诱导的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、beclin-1表达量的增多、SQSTM1/p62表达量的下降、自噬小体数量的减少及NO含量的降低(P0.05)。结论调脂颗粒对AngⅡ诱导的细胞自噬具有抑制作用,其机制可能与调节细胞内NO生成量有关。     

隐丹参酮调控PKM2抑制内皮细胞血管新生的研究

目的:研究隐丹参酮是否通过调控PKM2表达而抑制内皮细胞血管新生。方法:培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),采用紫草素抑制PKM2的表达,DASA-58激活PKM2,并用隐丹参酮进行干预,MTT法检测不同浓度隐丹参酮对HUVECs增殖的影响;细胞划痕实验及管腔形成实验观测HUVECs迁移及管腔形成能力,qPCR和Western blot分别检测HIF-1α、VEGF、PKM2 mRNA和蛋白表达,并用免疫荧光观察PKM在细胞内分布。结果:隐丹参酮对HUVECs具有呈浓度依赖性的抑制作用,DASA-58激活PKM2后,VEGF、HIF-1α mRNA和蛋白质表达上调,细胞迁移能力与成血管能力增加经隐丹参酮干预后,VEGF、HIF-1α、PKM2 mRNA和蛋白表达显著降低,细胞迁移能力与成血管能力降低。结论:PKM2高表达能促进新血管生成,隐丹参酮可能通过调控PKM2发挥抗血管新生的作用。     

WH505对实验性血栓形成的影响及其作用机制

目的：探讨WH505（丹参和山楂提取物）对实验性血栓形成的影响及其作用机制。方法：用电刺激大鼠颈总动脉和结扎大鼠下腔静脉造成血栓形成模型;用放免法和聚合酶链反应方法检测体外培养血管内皮细胞缺氧后ET-1的表达。结果：WH505剂量依赖性地延长电刺激大鼠颈总动脉后血栓形成时间,与对照组比较有显著差异。WH505明显抑制静脉血栓的形成,抑制率分别为12.64%、19.30%和57.32%。体外培养人血管内皮细胞经缺氧后,细胞内ET-1mRNA表达增加,培养液中ET-1浓度升高。在缺氧前,用不同浓度WH505与血管内皮细胞共孵育,则可明显抑制细胞内ET-1mRNA表达,减少内皮细胞分泌ET-1。结论：WH505具有抗大鼠体内血栓形成的作用,其作用机制可能与保护血管内皮细胞损伤有关。