青蒿琥酯对T细胞淋巴瘤细胞株凋亡诱导作用的实验研究

目的：探讨青蒿琥酯对T细胞淋巴瘤细胞株Jurkat细胞的凋亡诱导作用及其可能的作用机制。方法：采用Mrrll比色法检测青蒿琥酯对Jurkat细胞体外生长的抑制作用;细胞形态学、DNA琼脂糖凝胶电泳、DNA的PI染色等观察和检测Jurkat细胞的凋亡;Western-blot法检测Jurkat细胞凋亡过程中Bcl-2、Bax、Caspase-8和ICAD蛋白表达水平的变化。结果：青蒿琥酯对Jurkat细胞的生长有明显的抑制作用,且生长抑制率与药物作用浓度呈正相关（P〈0．01）,呈浓度依赖性;其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关;随药物浓度的增高Bcl-2和ICAD蛋白表达量逐渐下降,而Bax蛋白表达上调,Caspase-8蛋白出现明显的剪切激活带。结论：青蒿琥酯具有诱导Jurkat细胞凋亡作用,既能通过线粒体途径又能通过外源性途径诱导Jurkat细胞凋亡。     

青蒿琥酯对体外培养角质形成细胞的影响

目的:了解青蒿琥酯(artesunate,ART)对角质形成细胞生长的抑制作用及机制。方法:用不同浓度ART处理人角质形成细胞株HaCat,MTT法检测ART对HaCat增殖情况的影响,流式细胞仪分析ART处理后的HaCat的趋化因子CXCR2表达的改变。对正常人表皮角质形成细胞进行原代培养,观察ART处理后,培养液中TGF-β1含量的变化。结果:0·01～0·5mg/mlART可抑制HaCat细胞的增殖,干预24小时后即可见到明显的抑制作用,但CXCR2的表达稍高于正常对照组。同时,正常原代的角质形成细胞的培养上清中TGF-β1分泌增加。结论:0·01～0·5mg/ml青蒿琥酯可促进角质形成细胞TGF-β1分泌,抑制角质形成细胞的增殖。     

青蒿琥酯对人结肠癌细胞HCT-8细胞凋亡和细胞周期的影响

目的:研究青蒿琥酯对人结肠癌HCT-8细胞凋亡和细胞周期的影响.方法:实验分为10,20,30 μmol·L-1青蒿琥酯处理组,阴性对照组和空白对照组.采用透射电镜和流式细胞仪检测青蒿琥酯对HCT-8细胞的凋亡诱导效果;采用流式细胞仪分析青蒿琥酯对HCT-8细胞周期的影响;采用Western blot印迹法检测青蒿琥酯对细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达的影响.结果:经青蒿琥酯处理后,电镜下可见HCT-8细胞膜皱缩、染色质凝聚、核碎裂、凋亡小体形成.10,20,30 μmol·L-1青蒿琥酯处理组凋亡率分别为17.1％±3.8％,29.5％±5.1％,41.4％±5.8％,显著高于空白对照组5.1％±1.4％.P＜0.05.在20 μmol· L-1青蒿琥酯处理组,HCT-8细胞G0/G1期所占比例随着药物作用时间延长而增加,S期与G2/M期细胞所占比例则下降.10,20,30 μmol·L -1青蒿琥酯处理组Bax蛋白表达水平分别为0.20±0.03,0.40±0.05和0.50±0.08显著高于空白对照组(0.06 ±0.02),P＜0.05;Bcl-2蛋白表达水平未见明显变化,Bcl-2/Bax呈下降趋势.结论:青蒿琥酯可以抑制人结肠癌细胞HCT-8增殖,诱导细胞凋亡,其诱导凋亡作用机制可能与其阻滞结肠癌细胞周期和上调促癌基因Bax表达有关.     

青蒿琥酯诱导人胃癌细胞凋亡的分子机制研究

目的探讨青蒿琥酯对人胃癌HGC27细胞凋亡的影响及可能的分子机制。方法将HGC27细胞分为正常对照组、20 mg·L-1青蒿琥酯组、80 mg·L-1青蒿琥酯组、160 mg·L-1青蒿琥酯组,采用CCK8分别检测青蒿琥酯作用24、48和72 h后对HGC27细胞增殖的影响,流式细胞术检测青蒿琥酯对HGC27细胞凋亡的影响,Western blot检测青蒿琥酯对HGC27细胞中β-catenin、GSK-3β、c-Myc以及Caspase-3表达的影响。结果青蒿琥酯能抑制HGC27细胞增殖,与对照组相比,青蒿琥酯各浓度组的增殖抑制率显著升高(P0.05),且具有浓度-时间依赖性。青蒿琥酯能诱导HGC27细胞凋亡,与对照组相比,青蒿琥酯各浓度组的细胞凋亡率显著升高(P0.05),且具有浓度依赖性。Western blot检测发现青蒿琥酯能显著上调GSK-3β和Caspase-3的蛋白表达(P0.05),抑制β-catenin和c-Myc的蛋白表达(P0.05)。结论青蒿琥酯能明显抑制HGC27细胞的增殖,诱导细胞凋亡,这可能与其抑制Wnt/β-catenin信号通路活化有关。     

青蒿琥酯对肝癌HEPG-2细胞Caspase-3和P53蛋白的影响实验研究

目的 研究青蒿琥酯(artesunate,Art)对肿瘤细胞增殖的影响和机制.方法 MTT法测定青蒿琥酯对HEPG-2细胞增殖的影响, ELISA方法研究Caspase-3的活性,DNA电泳观察细胞DNA的变化,免疫组化研究凋亡相关蛋白p53,bcl-2,bax的表达.结果 青蒿琥酯作用细胞48 h后可明显诱导HEPG-2细胞凋亡,并影响Caspase-3,p53,bcl-2蛋白的表达.结论 青蒿琥酯可明显抑制HEPG-2细胞的增殖,促进HEPG-2细胞的凋亡,其机制可能是通过激活Caspase-3的活性,以及调节p53,bcl-2蛋白的表达而实现的.     

青蒿琥酯对SP2/0骨髓瘤细胞的强效增殖抑制及促凋亡作用

青蒿素是从传统中草药黄花蒿中分离得到的高效、低毒的抗疟药物，为一种含过氧化基团的倍半萜内酯化合物，其衍生物包括蒿甲醚、蒿乙醚、青蒿琥酯、双氢青蒿素等。邓安定等首次报道了青篙素衍生物对白血病P388细胞有选择性杀伤活性。此后的研究发现，青蒿素衍生物对肝癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、结肠癌、宫颈癌等多种肿瘤均具有抗癌活性，且作用广泛。本研究就青蒿琥酯（Artesunate，ART）对于SP2／0骨髓瘤细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用进行了观察。     

青蒿琥酯对骨髓瘤RPMI 8226细胞增殖、凋亡及对Survivin、Caspase-3、Caspase-7的影响

目的探讨青蒿琥酯对体外培养的人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226的增殖、凋亡及对凋亡相关基因survivin及caspase-3、caspase-7表达的影响。方法采用MTT法检测青蒿琥酯对RPMI8226细胞增殖的抑制作用,光镜下观察细胞形态学变化,流式细胞仪分析细胞凋亡率,荧光定量PCR(FQ-PCR)检测survivin和caspase-3、caspase-7mRNA表达水平变化,Western blotting检验Survivin蛋白表达变化,应用Caspase-3/7试剂盒检测Caspase-3、Caspase-7蛋白活性。结果青蒿琥酯质量浓度从2.5μg/mL增加至50μg/mL时,青蒿琥酯体外对RPMI8226细胞的抑制率由33.55%增加到74.71%。细胞凋亡率呈剂量依赖性增加,50μg/mL青蒿琥酯诱导RPMI8226细胞最大凋亡率达(68.1±5.9)%。不同质量浓度青蒿琥酯干预48h后Survivin mRNA及蛋白表达水平明显降低,Caspase-3、Caspase-7mRNA及蛋白活性明显升高(P0.01)。结论青蒿琥酯对RPMI8226细胞有生长抑制和诱导凋亡作用,其机制可能与增强Caspase-3、Caspase-7活性,抑制抗凋亡分子survivin表达有关。     

青蒿琥酯对佐剂性关节炎滑膜组织中凋亡因子Fas／FasL及Bcl-2／Bax表达影响的实验观察

目的观察青蒿琥酯对佐剂性关节炎滑膜组织中凋亡因子Fas/FasL及Bc l-2/Bax表达的影响。方法雄性W istar大鼠60只随机分为6组,空白组、模型组(对照组)、青蒿琥酯I组(高剂量组)、青蒿琥酯Ⅱ组(低剂量组)、青蒿琥酯加甲氨喋呤组及甲氨喋呤组。除空白组外,各实验组用完全弗氏佐剂制备成佐剂性关节炎模型。记录用药干预后各组关节肿胀指数,免疫组化法检测滑膜组织中凋亡相关因子Fas/FasL,Bc l-2及Bax的表达情况。结果各实验组关节肿胀指数明显降低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。滑膜组织中Fas/FasL及Bax被上调,Bc l-2被下调,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论实验证实了青蒿琥酯有诱导佐剂性关节炎病情缓解的作用,上调滑膜组织中Fas/FasL及Bax,下调Bc l-2的表达而诱导滑膜细胞凋亡可能是其机制之一。     

青蒿琥酯对人慢性粒细胞白血病K562细胞凋亡及Fas/FasL蛋白表达的影响

目的研究中药青蒿琥酯体外诱导K562细胞凋亡的作用及其Fas/FasL蛋白的表达。方法采用MTT法、光学显微镜、透射电镜技术、流式细胞术对青蒿琥酯诱导K562细胞凋亡进行了系统观察,并应用流式细胞术检测了Fas/FasL蛋白表达水平的改变。结果青蒿琥酯抑制K562细胞的增殖,IC50值为12.41μg/ml,其有时间、剂量-效应关系;50μg/ml的青蒿琥酯可诱导K562细胞凋亡,且具有时间-效应关系,同时上调K562细胞Fas蛋白的表达,下调FasL的表达。结论青蒿琥酯可诱导K562细胞凋亡,Fas/FasL表达的改变可能是青蒿琥酯诱导K562细胞凋亡的机制之一。     

青蒿琥酯对肝纤维化小鼠肝脏星状细胞凋亡和增生的影响

目的：探讨青蒿琥酯抗肝纤维化的可能机制。方法：采用四氯化碳致小鼠肝纤维化模型,利用免疫组化和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法对肝星状细胞的增生和凋亡基因进行检测。结果：青蒿琥酯高剂量组能明显降低PCNA的表达（P〈0.01）,确能促进凋亡基因的表达（P〈0.01）。结论：青蒿琥酯对实验性肝纤维化具有明显的抑制作用,其机制可能是一方面通过抑制活化的肝星状细胞的增殖,另一方面通过调节凋亡基因的表达,进而减轻活化的肝星状细胞的增殖,恢复了凋亡和增殖的平衡态,从而起到抗肝纤维化的作用。     

高良姜素诱导肝癌BEL-7402细胞凋亡的研究

目的:研究高良姜素诱导肝癌细胞系BEL-7402细胞凋亡.方法:MTT法测定BEL-7402细胞毒性及细胞生长,荧光显微镜观察细胞形态学的变化,流式细胞仪分析细胞周期和线粒体膜电位的变化.发色底物法检测Caspase-3、Caspase-6和Caspase-9活性变化.结果:高良姜素对BEL-7402细胞IC50为30.15 mg/L,BEL-7402细胞生长曲线表明,高良姜素浓度增高,生长率明显下降.细胞凋亡可在20～80 mg/L高良姜素处理后24 h出现.凋亡细胞主要表现为核染色质固缩,荧光染色增强.高良姜素阻断细胞于G.期,线粒体膜电位降低.Caspase-3、Caspase-6和Caspase-9被激活,呈时间依赖性改变.高良姜素处理BEL-7402细胞6 h时Caspase-9活性最高,而Caspase-6活性在12 h达峰值,Caspase-3活性峰值时间在18 h.结论:高良姜素可以诱导BEL-7402细胞发生凋亡,其途径可能是通过线粒体旁路.     

去氢骆驼蓬碱诱导白血病细胞凋亡的实验研究

目的：研究去氢骆驼蓬碱对白血病细胞的作用及其机制。方法：采用MTT法测定去氢骆驼蓬碱对各白血病细胞的生长抑制作用;以U937、HL-60为作用细胞,用琼脂糖凝胶电泳检测去氢骆驼蓬碱诱导白血病细胞凋亡的作用;应用蛋白印迹法检测去氢骆驼蓬碱诱导白血病细胞凋亡过程中Bcl-2表达的变化情况。结果：去氢骆驼蓬碱对白血病细胞有明显的生长抑制作用,其对各白血病细胞抑制率无明显差异,其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关;Bcl-2在白血病细胞中有表达,并随药物浓度的增高表达量逐渐降低。结论：去氢骆驼蓬碱可诱导白血病细胞凋亡,其作用与降低Bcl-2表达有关。     

氧化苦参碱诱导骨肉瘤细胞凋亡的实验研究

目的探讨不同浓度的氧化苦参碱对人骨肉瘤细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。方法将不同浓度的氧化苦参碱作用于培养的OS732骨肉瘤细胞,通过MTT比色法、流式细胞仪和DNA凝胶电泳、光学显微镜技术观察检测细胞凋亡,研究分析其对骨肉瘤细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。结果浓度为1.77,3.55,5.32mmoL/L的氧化苦参碱对OS732骨肉瘤细胞相对抑制率分别为16.4%,29.0%,47.0%;流式细胞技术显示骨肉瘤细胞的凋亡率分别为11.8%,18.6%,27.7%;DNA电泳见DNA"梯形"图谱;显微镜显示细胞的凋亡形态。结论氧化苦参碱能显著抑制OS732细胞增殖、促进其凋亡。     

蟾蜍灵诱导人白血病HL60细胞凋亡的初步研究

目的 :探讨中药蟾蜍灵诱导白血病HL60细胞凋亡作用。方法 :应用台盼蓝染色法测定HL6 0细胞的生长曲线 ,应用相差显微镜、电子显微镜和DNA琼脂糖凝胶电泳等技术分析细胞凋亡。结果 :蟾蜍灵与HL60细胞共育时 ,能明显抑制细胞生长 ,细胞呈典型的凋亡形态学改变 :细胞皱缩 ,染色质凝集 ,沿核膜内侧分布 ,呈新月形 ,可见由膜包被细胞内容物的凋亡小体的产生 ;细胞DNA裂解成 180～200bp及其倍数的片段 ,电泳得到特有的梯形条带。结论 :蟾蜍灵诱导细胞凋亡是其抗肿瘤的作用机制之一。     

榄香烯诱导小鼠黑色素瘤B16细胞凋亡的实验研究

目的:观察榄香烯对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖和凋亡的影响。方法:不同浓度榄香烯体外处理小鼠黑色素瘤B16细胞,采用MTT比色法、流式细胞仪分析技术及荧光染色等方法,检测榄香烯对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖和凋亡的影响。结果:榄香烯能抑制B16细胞增殖,使细胞停滞于G0/G1期,S期细胞明显减少,其作用呈明显浓度依赖性。形态学及流式细胞术分析结果均提示:在本实验条件下,榄香烯可诱导B16细胞凋亡,其诱导作用亦显示明显的浓度依赖关系。在此基础上,进一步分析发现:榄香烯可诱导B16细胞原癌基因bcl-2表达降低,抑癌基因p53表达增强。结论:榄香烯在体外通过干扰细胞周期、诱导细胞凋亡明显抑制B16细胞增殖,其作用机制可能与其诱导癌基因bcl-2表达减少、p53表达增加有关。     

扶正消癥方药液诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

目的:研究扶正消方药液对人胃癌细胞SGC-7901细胞凋亡的诱导作用,探讨扶正消方药液治疗胃癌的可能作用机理。方法:MTT法检测扶正消方药液对SGC-7091细胞增殖的影响;应用电镜和流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:扶正消方药液能抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖。在实验浓度范围内,随着剂量的增加,抑制作用更加明显;同一剂量下,72小时内药物作用时间越长,抑制作用越明显。流式细胞仪检测在细胞周期G1期前出现低于2倍体的凋亡峰,电镜检测到胃癌细胞SGC-7901发生典型的凋亡形态学改变。结论:扶正消方药液能够抑制人胃癌细胞SGC-7901的体外生长,其作用机制可能与抑制人胃癌细胞SGC-7901的增殖和诱导细胞凋亡有关。     

扶正消癥瘤方药液诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

目的：研究扶正消瘟方药液对人胃癌细胞SGC-7901细胞凋亡的诱导作用，探讨扶正消瘟方药液治疗胃癌的可能作用机理。方法：MTF法检测扶正消瘟方药液对SGC-7091细胞增殖的影响；应用电镜和流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果：扶正消瘟方药液能抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖。在实验浓度范围内，随着剂量的增加，抑制作用更加明显；同一剂量下，72小时内药物作用时间越长，抑制作用越明显。流式细胞仪检测在细胞周期G1期前出现低于2倍体的凋亡峰，电镜检测到胃癌细胞SGC-7901发生典型的凋亡形态学改变。结论：扶正消瘟方药液能够抑制人胃癌细胞SGC-7901的体外生长。其作用机制可能与抑制人胃癌细胞SGC-7901的增殖和诱导细胞凋亡有关。     

大蒜素诱导LM-8细胞凋亡及相关基因表达的实验研究

目的:探讨大蒜素对C3H小鼠骨肉瘤细胞株LM-8细胞增殖的影响及与bcl-2、bax凋亡基因表达的关系,以初步探索其诱导凋亡的机制。方法:用水溶性四唑盐WST-8比色法检测大蒜素对LM-8细胞株生长的影响;倒置显微镜观察细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞调亡率的变化;免疫细胞组化技术检测bcl-2和bax基因表达。结果:大蒜素能明显抑制LM-8细胞的生长,与大蒜素的浓度和时间有关,在72h其药物半数抑制率浓度是11.09μg/ml;5μg/ml、10μg/ml和15μg/ml浓度的大蒜素作用72h后可诱导LM-8细胞凋亡(P<0.05);大蒜素可以降低bcl-2表达,增强bax表达,经15μg/ml大蒜素作用72h,bcl-2和bax基因表达阳性率及bcl-2/bax分别为(7.24±1.18)%(、47.56±7.43)%和0.15±0.02,对照组分别为(24.40±9.96)%、(11.28±1.31)%和2.18±0.93,与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:大蒜素可以诱导LM-8细胞凋亡,其机制涉及到bcl-2表达上调及bax表达下调。     

青蒿琥酯对脂多糖致血管内皮细胞活化及损伤的保护作用

目的观察中药青蒿提取物青蒿琥酯(artesunate,AR)对脂多糖(lipololysaccharide ,LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)活化及损伤状态下的保护作用及相关机制．方法建立人脐静脉内皮细胞培养,细胞生长至融合状态后分别加入LPS及不同浓度的AR(0．04mg／L、0．2mg／L、1mg／L、5mg／L及20mg／L)共同孵育24h,ELISA方法检测培养上清中血管假性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)含量,Western blot法检测细胞间黏附分子(ICAM—1)蛋白表达,原位杂交方法检测肿瘤坏死因子(TNFα)mRNA表达结果暴露于1ug／ml LPS后,HUVECs的vWF及ICAM1表达较对照组明显增加,加入AR后,随AR浓度增加明显下调LPS升高的vWF及ICAM—1表达,至AR为1mg／L时,其vWF与ICAM—1表达与LPS组比较差异均有显著性(P＜0．05)。AR抑制LPS升高的vWF及ICAM-1表达呈一定的浓度依赖方式．原位杂交显示在AR0．2mg／L及1mg／L时明显下调TNFα mR—NA表达,与LPS组比较差异有显著性(P＜0．05,P＜0．01)、结论青蒿琥酯对脂多糖诱导的HUVECs的活化及损伤有保护作用,可能与AR抑制TNFα mRNA表达有关。     

六神丸诱导HL-60细胞凋亡的实验研究

目的:从细胞凋亡角度探讨六神丸治疗白血病的机理,为临床应用提供依据。方法:分别制备六神丸乙醇提取剂和六神丸含药血清,用MTT法检测六神丸对HL-60细胞增殖的抑制作用,吉姆萨染色观察细胞凋亡的形态学变化,原位末端标记(POD)法检测细胞凋亡现象。结果:六神丸乙醇提取剂对HL-60细胞的增殖有明显的抑制作用,且呈现浓度依赖关系;中剂量组所得六神丸含药血清对HL-60细胞增殖的抑制作用优于低剂量组和高剂量组。吉姆萨染色显示六神丸乙醇提取剂和六神丸含药血清处理过的HL-60细胞均出现典型的凋亡形态。原位末端标记表明,六神丸乙醇提取剂诱导HL-60细胞凋亡在一定范围内呈现时间-浓度依赖关系;六神丸含药血清诱导HL-60细胞凋亡作用优于As_2O_3血清组和空白血清组(P<0.01)。结论:六神丸体外诱导HL-60细胞凋亡可能是六神丸治疗白血病的作用机制之一。