黄曲霉毒素B1人工抗原及抗体的制备研究

Carboxymethyloxime of aflatoxin B1 (AFB1) was synthesized by refluxing AF B1 with carboxymethoxylamine hemihydrochloride for 4 hours in the presence of pyridine. AF B1-BSA (antigen) was made successfully by coupling AF B1-oxime with bovine serum albumin (BSA) in the presence of a water soluble carbodiimide. The rabbits were immunized with the artificial immunogen which had been purified by dialysis. The titers of antisera were determined by indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) which was developed by ourselves. The highest titer was 1:100,000.     

放射免疫法测定黄曲霉毒素B_1

合成黄曲霉毒素B_1-肟-牛血清白蛋白(AFB-1-肟-BSA)复合物,并制备了兔抗黄曲霉毒素B1(AFB_1)抗血清,后者与AFB_1的特异性结合为70～80％。由该血清制成的AFB_1剂量反应曲线在0.46～2.30ng之间,由曲线斜度可知敏感检测范围较大。血清样本与大米样本添加AFB_1的回收率分别为80％与74％左右。本方法适用于血清和大米中AFB_1含量检测。     

高效液相色谱检测黄曲霉毒素B_1及其代谢物

用高效液相色谱法(HPLC)检测黄曲霉毒素B_1(AFB_1)及其代谢物(AFM_1)的最低水平分别为500Pg和50Pg。尿液外加AFB_1和AFM_1后的回收率均为80～85％。同时检测了玉米中AFB_1含量及肝癌高发区人群进食污染玉米后24h内尿液中AFM_1排出量。     

黄曲霉毒素B_1诱发鲫鱼肝细胞癌的实验研究

本文报道用含５－３０ｐｐｂ黄曲霉毒素Ｂ１（ＡＦＢ１）饲料连续喂养鲫鱼（ＣａｒａｓｓｉｕｓａｕｒａｔｕｓＬ）诱发鱼肝癌，２４周后处死，实验组１６尾鲫鱼中有５尾出现原发性肝细胞癌，肝癌诱发率为３１．２％。对照组鲫鱼均未见肝脏组织癌变。ＡＦＢ１诱发的鱼肝癌为灰白色肿块，癌细胞异型性明显，围绕血管排列成巢状或实质团块状。     

黄曲霉毒素B_1与超氧化物歧化酶的关系

用羟胺法测定 AFB_1染毒后小鼠体内红细胞及肝组织中 SOD 活力的变化,探讨AFB_1致癌的可能机制。结果表明,AFB_1对 SOD 活力的抑制有一时间峰值,染毒6h 后对SOD 活力影响最大,SOD 活力下降比对照组有明显的差异(P<0. 05) 。提示 AFB_1毒性可能与自由基有关。     

黄曲霉毒素B_1诱发大鼠肝癌的实验病理研究

本实验以黄曲霉毒素B_1(AFB_1)诱癌,苯巴比妥钠(PB)和四氯化碳(CCl_4)促癌,建立了一种新的诱发大鼠肝癌的实验模型,并用病理组织学、形态定量测算及电子显微镜等方法,研究了癌变过程中变异肝细胞灶/给节的发生和发展及其与肝癌的关系。结果表明,PB和CCl_4能使变异细胞灶的数目和体积增加,而且可促进肝癌的发生。作者还发现,嗜酸细胞结节与高分化型肝细胞癌密切相关。     

黄曲霉毒素B_1与扶绥肝癌关系的流行病学研究

本文报道近20年来黄曲霉毒素B_1(AFB_1)与扶绥肝癌关系的流行病学研究结果:(1)扶绥县的气候特点适宜黄曲霉菌的生长和产毒,(2)8697份粮油食品的检测结果表明,该地区是AFB_1的重污染区;(3)AFB_1的污染水平及居民的AFB_1摄入量与肝癌死亡率有高度相关;(4)AFB_1摄入量与肝癌死亡率有剂量—反应关系;(5)10年前瞻性研究结果,高摄毒组居民患肝癌的危险性是低摄毒组居民的4.3倍。作者认为,AFB_1是扶绥肝癌高发的一个主要危险因素,采取措施减少和消除这一因素的影响,对控制和降低当地居民肝癌的发病率有积极意义。     

黄曲霉毒素B_1单克隆抗体的制备和鉴定

以自己合成的黄曲霉毒素Ｂ＿１一人血清白蛋白（ＡＦＴＢ＿１－ＨＳＡ）偶联物免疫ＢＡＬＢ／ｃ鼠，应用杂交瘤技术，建立了两株能持续分泌抗ＡＦＴＢ＿１单克隆抗体（ＡＦＴＢ＿１ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞株，命名为ＩＢ５和２Ｆ１，接种ＢＡＬＢ／ｃ鼠腹腔均能诱发产生含特异性抗体的腹水。用间接竞争抑制ＥＬＩＳＡ鉴定ＭｃＡｂ的反应特异性，使ＭｃＡｂ与固相黄曲霉毒素Ｂ＿１一牛血清白蛋白（ＡＦＴＢ＿１－ＢＳＡ）结合产生５０％抑制所需的ＡＦＴＢ＿１、Ｂ＿２、Ｇ＿１、Ｇ＿２浓度依次为：１Ｂ５４．０、３６．９、２３．３、４０３．３ｎｇ／ｍｌ，２Ｆ１２．４、２．６、２．８、４。７ｎｇ／ｍｌ。     

高效液相色谱法测定黄曲霉毒素B_1在水中的溶解度

本文介绍用非极性的化学键合固定相柱Zorbax-ODS-C_(18),在带荧光检测器的HPLC较精确的测定AFB_1在水中的溶解度.测得结果:AFB_1随温度升高其溶解度增大.     

黄曲霉毒素B_1对大鼠肝脏毒性作用的病理学研究

用雄性Wistar大鼠,体重130～150 g,实验组31只,对照组10只,连续喂黄曲霉毒素B_1结晶品45周,每只大鼠受毒总剂量3.88 mg,分别在第8、9、11、12、13、14、15、16个月处死,每次处死给药组3只,对照组1只,第17个月后自然死亡7只。肝组织切片用HE染色;对28只大鼠肝组织进行了AFP免疫酶染色的形态学观察,15只鼠作了电镜观察,其结果:(1)光镜观察的主要表现为肝细胞的水样变性、嗜酸性变、嗜碱性改变、脂肪变性以及肝细胞的灶性坏死。其应答反应显示卵圆细胞和小胆管增殖、肝细胞的再生及炎细胞浸润。上述改变为慢性非特异性中毒性肝炎;(2)电镜观察主要改变有肝细胞核仁均质化,核样体形成,线粒体肿胀和基质均质化,继而形成空泡和灶性坏死;(3)85.71％(24/28)宿主肝细胞AFP免疫酶染阳性,多呈全胞浆型分布,阳性程度多为弱至中等度。AFP阳性肝细胞呈散在或灶性分布。这一改变表明,是由于AFB_1对肝细胞毒性损害所产生的返祖现象。     

上海地区大米样品黄曲霉素B_1含量检测

目的对上海市区内出售的大米样本进行黄曲霉素B1含量的测定和分析。方法以在上海市区内的散装粮食店、中型超市、大型超市和淘宝网店采购的苏北产大米和东北产大米作为受试样本,采用酶联免疫吸附法测定样本大米中黄曲霉素B1的含量。采用独立样本T检验分析不同产地样本大米中黄曲霉素B1含量的差异;单因素方差分析比较不同购物来源样本大米中黄曲霉素B1的含量差异。结果 60个受试样本中黄曲霉素B1含量的总体均值为1.926 ppb,其中超过国家标准样本数为2个,分别为购自散装店和中型超市的东北产大米;苏北和东北样本大米中黄曲霉素B1的含量分别为(1.221±1.055)ppb和(2.631±2.903)ppb,两者差异具有统计学意义(P<0.05)。散装店、网店、中型超市和大型超市样本大米中黄曲霉素B1的含量分别为(2.900±2.457)ppb、(1.570±1.416)ppb、(1.743±2.683)ppb和(0.569±0.608)ppb,四者比较差异有统计学意义(P<0.05),进一步的多重检验表明散装店与大型超市来源样本大米中黄曲霉素B1的含量存在统计学差异(P<0.05)。结论上海市区出售的大米样本中黄曲霉素B1含...     

茵陈蒿对黄曲霉毒素B_1诱变效应的抑制

本文报道茵陈蒿水煎剂对致癌剂 AFB_1诱导 TA_(98)移码型、TA_(100)碱基置换型突变株回复突变抑制实验,结果表明茵陈蒿对 AFB_1的致突变作用有显著抑制效果,并呈剂量效应关系。本结果提示中药茵陈蒿可能对预防肝癌有意义.     

高温作业工人VB1,VB2,Vc丢失量的研究

本文对高温作业工人几种水溶性维生素的代谢情况进行研究。VB_1、VB_2、VC由汗、尿中丢失量分别占摄入量的22.11%,26.77%和6.21%。由汗丢失的VB_1、VB_2分别是尿的1.4倍和1.8倍,是高温作业工人的主要丢失途径。汗中VB_1、VB_2、VC的浓度分别为0.059±0.037μg/ml,0.049±0.023μg/ml,0.390±0.211μg/ml。汗中水溶性维生素的浓度可能受机体营养水平的影响。本文结果可为高温作业工人维生素的补充提供理论依据。     

河南主要食物中维生素B_1、B_2、C及胡萝卜素含量测定

为了解河南产食物中各种维生素的含量，采用荧光分析及纸层析等方法，对河南产１２０余种常用食物的的ＶｔｉＢ１、Ｂ２、Ｃ和胡萝卜素的含量进行了测定。河南常见食物中：小麦、玉米、黄豆等粮谷类和豆类制品中ＶｉｔＢ１含量最丰富。ＶｉｔＢ２主要存在于肉、鱼、蛋、奶等动物性食品中。白菜、萝卜、西红柿等新鲜蔬菜中ＶｉＣ的含量较高。胡萝卜素则主要存在于韭菜、青菜、菠菜、胡萝卜等有色蔬菜中。而为制订河南食物成份表，指导河南人民合理膳食及一些疾病的防治提供科学依据。     

广西肝癌高发区婴儿尿中黄曲霉毒素M_1排出水平的探讨

黄曲霉毒素 B_1(AFB_1) 与原发性肝癌的关系十分密切,黄曲霉毒素 M_1(AFM_1) 是机体摄入 AFB_1后产生的主要代谢产物之一。我们对广西肝癌高发区30名1～12个月龄的婴儿进行尿中 AFM_1的检测,以了解肝癌高发区婴儿尿中 AFM_1的含量及排出水平。结果:肝癌高发区婴儿尿中 AFM_1的检出率为73. 33%;肝癌高发区婴儿从尿中排出的AFM_1是相对低发区婴儿的4. 65倍(P<0. 005) ;女性婴儿从尿中排出的 AFM_1是男性婴儿的4. 72倍(P<0. 005) 。     

黄曲霉毒素B_1加合物检测方法研究进展

黄曲霉毒素B1污染是我国肝癌发生的主要危险因素之一,检测黄曲霉毒素B1暴露的生物标志物来研究黄曲霉毒素B1和肝癌之间的关系已成为趋势。随着多学科的交叉发展,现在已经具备多种试验方法检测黄曲霉毒素B1生物标志物,其中的一些检测方法具有高敏感度和精确度,对研究黄曲霉毒素B1早期低暴露具有重要价值。     

BLCAP蛋白多克隆抗体制备及其免疫学特性鉴定

目的:利用大肠杆菌BL21(DE3)表达BLCAP融合蛋白并制备和鉴定其多克隆抗体。方法:构建原核表达重组质粒pET32a(+)-BLCAP并转化到宿主菌BL21中,诱导表达带有His标签的目的融合蛋白,经Ni2+亲和层析纯化回收后免疫日本大耳白兔制备多克隆抗体,用ELISA测定抗体的效价,Western blot检测抗体的特异性和亲和性。结果:成功获得分子质量约为28 kU纯化的融合蛋白,免疫日本大耳白兔后得到抗BLCAP的多克隆抗体。ELISA测定显示抗体效价可达到1∶10 000。通过Western blot检测证明该抗体有较好的针对BLCAP蛋白的专一性。结论:重组质粒表达的BLCAP融合蛋白具有良好的抗原性。制备的特异性和效价良好的抗BLCAP的多克隆抗体,能够满足针对BLCAP免疫印迹和细胞免疫组化检测等实验要求,为今后深入研究BLCAP蛋白性质与功能提供了有用的实验工具。