ERK和Smad通路在TGF-β1抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的： 探讨ERK通路是否参与TGF-β/Smad 通路诱导的血管平滑肌细胞增殖及可能的分子机制。方法: 原代培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,细胞分4组：(1)对照组;(2)TGF-β1组;(3)ERK阻断剂(PD98059)组;(4)TGF-β1+ ERK阻断剂(PD98059)组。MTT法测细胞的增殖活性,Western blotting法检测VSMCs中细胞内核增殖抗原(PCNA)、Smad2/3、ERK1/2、Smad7蛋白表达及相关磷酸化蛋白含量,RT-PCR方法测VSMCs中Smad2、3、7mRNA的表达。结果: (1)各组PCNA蛋白表达和MTT法测得A值均低于对照组 (P＜0.05),TGF-β1+ ERK阻断剂组与TGF-β1组相比无显著差异。（2）与对照组相比,TGF-β1组p-Smad2/3、p-ERK1/2蛋白含量和Smad7蛋白表达增高 (P<0.05),ERK阻断剂组则明显降低(P<0.05);与TGF-β1组比,TGF-β1+ERK阻断剂组降低 (P<0.05)。各组间Smad2/3、ERK1/2蛋白表达无显著差异。(3)与对照组相比,TGF-β1组Smad7 mRNA表达增高 (P<0.05),ERK阻断剂组和TGF-β1+ERK阻断剂组降低(P<0.05);与TGF-β1组比,TGF-β1+ERK阻断剂组表达降低(P<0.05)。各组内VSMCs 的Smad2、Smad3 mRNA表达无显著差异。结论: (1)TGF-β1诱导的Smad2/3蛋白磷酸化依赖ERK通路激活,但对TGF-β1的抑制平滑肌细胞增殖的作用无影响,可能有其它信号通路参与此过程。(2)ERK通路可通过蛋白和mRNA水平促进Smad7表达,反过来其又可促进ERK通路激活。(3)ERK通路对Smad2/3蛋白和mRNA水平无影响。     

ERK1/2和TGF-β1在自发性高血压大鼠心脏中的表达上调

目的 探讨自发性高血压大鼠(SHR)心脏细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和转化生长因子β1(TGF-β1)表达的意义.方法 采用免疫组化和Western blot方法检测心脏ERK1/2和TGF-β1的表达.结果 在SHR8、SHR16、SHR20三个周龄组中,心肌间小动脉内皮细胞中的ERK1/2阳性率分别为15.38%、76.97%和72.72%,SHR16和SHR20组心肌间血管平滑肌细胞(VSMC)ERK1/2染色阳性率为5.49%和6.83%,均显著高于对照组(P＜0.05).在SHR16和SHR20组中ERK1/2蛋白含量明显高于对照组(P＜0.05);心脏中TGF-β1含量明显高于同周龄的SD大鼠(P＜0.05).心脏中ERK1/2和TGF-β1表达量与平均动脉血压正相关(P＜0.05).结论 在SHR心脏组织中TGF-β1表达增加并与ERK1/2相互作用,可能参与了心脏病变的形成.     

阿托伐他汀通过转录因子AP1抑制AS大鼠VSMC增殖及促凋亡

目的 探讨阿托伐他汀对动脉粥样硬化(AS)大鼠主动脉平滑肌细胞(VSMC)调节及转录因子AP1的作用.方法 80只大鼠随机分为:普通饲料组、AS组和阿托伐他汀高低剂量组(40和10 mg/kg·d).用原位TUNEL检测细胞凋亡;用免疫组化检测血管中AP1和α-SM-actin蛋白表达;用蛋白免疫印迹法检测血管相关蛋白AP1表达.结果 阿托伐他汀高和低剂量组TG、TC和LDL明显下降(P＜0.05).阿托伐他汀抑制AS大鼠VSMC增殖,促进其促凋亡(P＜0.05).阿托伐他汀干预后AS大鼠VSMC中AP1和α-SM-actin蛋白表达明显减少(P＜0.05).结论 阿托伐他汀通过下调AP1抑制AS大鼠VSMC增殖及促凋亡.     

银杏酮酯对抑郁大鼠脑内ERK1 / 2 及其磷酸化水平的影响

目的:探讨银杏酮酯对抑郁大鼠前额叶与海马区细胞外信号调节激酶(ERK1/2)及其磷酸化水平的影响。方法:将50只成年SD大鼠随机分为对照组、模型组、银杏酮酯低、中、高剂量组。用慢性轻度不可预见性应激配合分养方法建立抑郁大鼠模型,采用荧光实时PCR检测大鼠前额叶、海马ERK1/2和磷酸化p-ERK1/2 mRNA表达水平,采用蛋白印迹法检测大鼠前额叶、海马ERK1/2蛋白和磷酸化p-ERK1/2蛋白的表达水平。结果:与给药前比较,银杏酮酯低、中、高剂量组旷场试验得分显著提高(P0.05),模型组旷场试验得分差异无统计学意义(P0.05)。模型组前额叶与海马p-ERK1/2 mRNA与蛋白质的表达水平显著低于对照组(P0.05),银杏酮酯低、中、高剂量组前额叶与海马p-ERK1/2 mRNA与蛋白表达水平较模型组显著升高(P0.05),各组ERK1/2 mRNA与蛋白的表达水平差异无显著统计学意义(P0.05)。结论:银杏酮酯可改善抑郁模型大鼠的抑郁样行为,其机制可能与上调前额叶与海马ERK1/2磷酸化水平有关。     

尾加压素Ⅱ通过ERK1/2途径诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和上调Egr-1表达

 目的:研究不同浓度尾加压素Ⅱ（UⅡ）及其受体拮抗剂urantide对培养大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMC）增殖的影响,探讨丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）途径及早期生长反应因子1（Egr-1）在UⅡ诱导大鼠PASMCs增殖中的作用。 方法: 以组织贴块法原代培养大鼠PASMCs：(1) 采用BrdU掺入实验测定不同浓度（1 μmol/L、0.1 μmol/L和0.01 μmol/L）UⅡ及其受体拮抗剂对大鼠PASMCs 增殖的影响;(2) 采用real-time PCR检测UⅡ及其受体拮抗剂对细胞外信号调节激酶1/2 (ERK1/2)、应激活化蛋白激酶（SAPK）、p38 MAPK及Egr-1 mRNA 表达的影响;(3) 采用Western blotting检测UⅡ、urantide及ERK1/2抑制剂PD98059对PASMCs磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）、p-SAPK、p-p38 MAPK和Egr-1蛋白表达的影响。 结果: （1）UⅡ在一定浓度范围（1 μmol/L、0.1 μmol/L和0.01　μmol /L）呈浓度依赖性地促进肺动脉平滑肌细胞增殖(P＜0.01或P＜0.05),这种增殖作用可被urantide拮抗(P＜0.05);（2）UⅡ上调ERK1/2、SAPK及Egr-1 mRNA表达(P＜0.01或 P＜0.05),PD98059和(或)urantide可拮抗UⅡ诱导的ERK1/2、SAPK和Egr-1 mRNA的表达(P＜0.01或 P＜0.05),但对p-p38 MAPK无影响;（3）UⅡ可增加PASMCs p-ERK1/2、p-SAPK及Egr-1蛋白表达(P＜0.01或 P＜0.05),urantide及PD98059可拮抗UⅡ诱导的p-ERK1/2、p-SAPK和Egr-1蛋白表达(P＜0.01, P＜0.05)。 结论: UⅡ可能通过ERK1/2途径诱导PASMCs增殖和上调Egr-1表达,Egr-1可能通过激活ERK1/2途径参与了PASMCs的增殖。     

颈总动脉损伤大鼠成纤维细胞生长因子受体1、p21ras表达与辛伐他汀的抑制效应**

背景：辛伐他汀可通过抑制血管平滑肌细胞增殖发挥抗血管狭窄作用,但其作用机制尚不完全清楚。 目的：观察辛伐他汀对血管损伤后狭窄时成纤维细胞生长因子受体1、p21ras蛋白表达的影响。 方法：建立SD大鼠颈总动脉损伤模型,随机分为假手术组、模型组、低剂量和高剂量辛伐他汀组,后2组分别于术前3 d灌胃辛伐他汀5,10 mg/(kg•d)直至术后14 d。 结果与结论：大鼠颈总动脉损伤后：①苏木精-伊红染色显示,血管中膜血管平滑肌增殖显著,排列紊乱,管腔严重狭窄;应用辛伐他汀后血管内膜相对光滑,中膜血管平滑肌细胞排列趋于规整,管腔狭窄程度有不同程度减轻。②Western blot检测显示,颈总动脉成纤维细胞生长因子受体1、p21ras表达明显升高(P < 0.05),低剂量辛伐他汀干预后两种蛋白表达无明显变化,应用高剂量辛伐他汀干预后两种蛋白表达明显下降(P < 0.05)。表明辛伐他汀可能通过抑制成纤维细胞生长因子受体1、p21ras蛋白的表达抑制血管平滑肌细胞增殖,减轻血管损伤后狭窄。 关键词：辛伐他汀;颈总动脉损伤;狭窄;成纤维细胞生长因子受体1;p21rasS doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.07.031     

盐酸戊乙奎醚抑制脂多糖性肺损伤大鼠肺泡II型上皮细胞损伤和ERK活化

目的： 观察盐酸戊乙奎醚(PHC)对脂多糖(LPS)性肺损伤(ALI)大鼠肺泡II型上皮细胞(ATII)和肺组织细胞外信号调节激酶（ERK）活化的影响。 方法： SD大鼠随机分为对照组、LPS组（静脉注射5 mg/kg LPS）和LPS+PHC高、中、低(3.0、1.0和0.3 mg/kg)3个剂量组,每组8只,测定肺湿重/干重（W/D）比值,考马斯亮蓝法测BALF蛋白含量,双缩脲法测血浆蛋白含量,并计算肺通透指数（LPI=BALF蛋白/血浆蛋白）,透射电镜观察各组ATII超微结构,并进行PHC影响肺组织ERK表达的量效性分析;另取大鼠在注入生理盐水（NS）后即刻0 h（对照组）和注射LPS后2 h、4 h、6 h和12 h共5个时点,每时点6只,进行PHC影响肺组织ERK表达的时效性分析。蛋白免疫印迹法检测肺组织ERK的表达。 结果： LPS组大鼠电镜下可见ATII板层小体排空明显而致空泡化,微绒毛脱落,微丝模糊、断裂、缩短,线粒体空泡变性,基膜不完整,而PHC显著减少ATII板层小体空泡化,减轻ATII损伤。LPS模型组大鼠肺W/D比值、LPI及肺组织磷酸化ERK表达显著高于对照组（均P＜0.05),PHC高剂量组显著降低LPS诱导的大鼠肺W/D比值、LPI（均P＜0.05),显著抑制LPS诱导的大鼠肺组织磷酸化ERK表达（P＜0.05);PHC在LPS注射后6h时最能有效抑制ERK磷酸化。结论： PHC抑制LPS诱导的ALI大鼠肺组织通透性增加、ATII损伤和肺组织ERK活化,PHC对LPS诱导大鼠肺组织通透性增高和ATII损伤的拮抗作用可能与抑制ERK活化有关。     

碱性成纤维细胞生长因子对AD细胞模型ERK1/2活性的影响

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对阿尔茨海默病(AD)细胞模型中磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK1/2)表达影响.方法 经体外培养的大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞(PC12细胞)分正常对照组(常规培养液)、Aβ损伤组(即AD细胞模型,加入Aβ25-35)、bFGF组(加入bFGF及Aβ25-35)和抑制剂组(加入MEK抑制剂PD98059、bFGF和老化Aβ25-35).MTT怯检测不同处理组PC12细胞存活率,Western Blot免疫印迹法分析P-ERK1/2蛋白表达变化.结果 Aβ损伤组PC12细胞存活率低于正常对照组(P＜0.05),bFGF组细胞存活率高于A β损伤组(P＜0.01).Western Blot结果显示,Aβ损伤组p-ERK1/2相对表达值较对照组显著下降,A β损伤组在加入不同浓度的bFGF后p-ERK1/2的相对表达值较A β损伤组显著增强,抑制剂组在加入不同浓度的PD98059后p-ERK1/2的相对表达值较bFGF组p-ERK1/2显著下降.结论 bFGF对Aβ诱导的PC12细胞损伤具有一定保护作用,可能与增强PC12细胞ERK1/2活性有关.     

辛伐他汀对大鼠脑出血后热休克蛋白70及细胞凋亡的影响

目的:观察辛伐他汀对大鼠脑出血模型血肿周围热休克蛋白70(HSP70)及细胞凋亡的影响。方法:应用Ⅶ型胶原酶诱导法建立脑出血大鼠模型,72只SD大鼠按随机数字表法分为假手术组(Sham组)、脑出血组(ICH组)、辛伐他汀组(SIM组)。分别于6、12、24、48 h对各组大鼠进行神经功能评分后处死留取脑组织,采用干/湿重法检测脑组织含水量;免疫组织化学法检测HSP70、Bax和Bcl-2阳性产物的分布情况;Western Blot检测HSP70、Bax和Bcl-2蛋白表达量,并计算Bcl-2/Bax的比值。结果:与假手术组相比,脑出血组大鼠脑组织含水量及神经功能评分增加(P0.05),血肿周围HSP70、Bax和Bcl-2表达明显上调(P0.05),且HSP70、Bax和Bcl-2三种蛋白的表达高峰分别出现在48 h、24 h及12 h,Bcl-2/Bax比值降低。与脑出血组相比,辛伐他汀治疗组脑组织含水量与神经功能评分显著降低(P0.05),血肿周围HSP70和Bcl-2表达进一步上调(P0.05),而Bax表达下调(P0.05),但三种蛋白的表达趋势未发生改变,Bcl-2/Bax比值增加。结论:辛伐他汀可以促进脑水肿及神经功能的恢复,其可能通过增加血肿周围HSP70表达,抑制脑组织细胞凋亡而发挥神经保护作用。     

山柰酚-3-O-芸香糖苷对血管平滑肌细胞增殖、迁移及TGFBR1信号通路活化的影响

目的:探索山柰酚-3-O-芸香糖苷(KR)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖、迁移及转化生长因子β受体1(TGFBR1)信号通路活化的影响。方法:将KR(10、20和40μmol/L)孵育大鼠VSMC细胞系A7R5 24 h,或将40μmol/L KR孵育A7 R5细胞24、48和72 h后,MTT法检测细胞活力,Ed U染色检测细胞增殖情况,Transwell小室实验检测细胞迁移能力的变化,Western blot检测细胞迁移相关蛋白基质金属蛋白酶2(MMP2)及基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达;分子对接技术探索KR与TGFBR1之间的相互关系,Western blot检测TGFBR1及其下游的Smad2和Smad3的激活情况。结果 :KR剂量和时间依赖性地降低细胞活力,剂量依赖性地减少Ed U染色阳性细胞数量,降低迁移细胞数量,减少迁移相关蛋白MMP2和MMP9的表达(P0.05)。KR与TGFBR1发生分子对接的结合力为-9.804 kcal/mol,与TGBFR1的SER-280、ARG-215、ASP-290和LYS-335氨基酸残基形成氢键连接。KR剂量依赖性地降低TGFBR1及其下游Smad2和Smad3的激活(P0.05)。结论:KR能抑制VSMC的增殖和迁移,其机制可能与抑制TGFBR1信号通路相关。     

环孢素A对神经肽Y刺激的大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:观察环孢素A(CsA)对神经肽Y(NPY)诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响,以探讨钙调神经磷酸酶(CaN)信号通路在血管平滑肌细胞增殖中的作用。方法:体外培养的大鼠主动脉平滑肌细胞分为3组:(1)NPY组,(2)CsA+NPY组,(3)对照组。检测CaN活性(定磷法)、细胞增殖活度(MTT法)的变化,观察增殖细胞核抗原(PCNA)的表达水平(免疫组化定量技术)。结果:NPY组CaN活性、血管平滑肌细胞增殖活度(吸光度表示),PCNA表达水平(光密度值表示)明显高于对照组(P＜0.01或P＜0.05),CsA+NPY组各项指标明显低于NPY组(P＜0.01或P＜0.05)。结论:环孢素A可显著阻滞神经肽Y刺激的血管平滑肌细胞增殖,这种作用可能通过抑制CaN信号通路所致。     

仙茅苷对血管性痴呆模型大鼠海马区Caspase-3、PARP-1和雌激素受体表达的作用

目的:研究仙茅苷对血管性痴呆(VD)模型大鼠海马区Caspase-3、PARP-1和雌激素受体(ER)表达的作用.方法:确立SD大鼠对照组后,用构建的血管性痴呆模型大鼠随机分成模型组、药物仙茅苷低(24 mg/kg)和高剂量(72 mg/kg)组(予以仙茅苷灌胃4周),每组8只.用药结束后,按设计用Morris水迷宫测试大鼠空间学习记忆功能;流式细胞术分析海马区神经细胞元凋亡;Caspase-3、PARP-1和ER蛋白水平用Western Blot测定;Caspase-3、PARP-1和ER mRNA表达用Realtime PCR检测.结果:Morris水迷宫试验结果显示,药物组和模型组大鼠逃避潜伏期均明显延长(P ＜0.05～0.01),模型组大鼠更明显(P＜0.01);药物组和模型组大鼠空间探索距离百分比均降低(P ＜0.05 ～0.01),模型组大鼠降更明显(P＜0.01).与对照组比较,药物组和模型组大鼠海马神经细胞凋亡率显著提高(P＜0.01),模型组大鼠更明显(P＜0.01).与对照组比较,模型组的Caspase-3、PARP-1蛋白和mRNA表达均增加(P＜0.05);与模型组相比,仙茅苷各剂量组可见ER表达增加(P＜0.05),Caspase-3和PARP-1表达降低(P＜0.05).与对照组比较,模型组的Caspase-3和PARP-1表达增加(P＜0.01),而ER未见明显变化(P＞0.05);与模型组相比,仙茅苷各剂量组ER表达均增加(P＜0.01),Caspase-3和PARP-1表达不明显(P＞0.05),但不同剂量仙茅苷组间未见明显差异(P＞0.05).结论:结果表明仙茅苷具有改善血管性模型大鼠空认知功能的作用是通过抑制海马区神经细胞凋亡,下调Caspase-3和PARP-1表达,上调海马ER表达实现的.     

温阳益气平喘方对支气管哮喘大鼠嗜酸粒细胞凋亡和相关基因蛋白Bcl-2和Bax表达的影响

目的:研究温阳益气平喘方对支气管哮喘大鼠肺组织嗜酸粒细胞凋亡及相关基因蛋白Bcl-2和Bax表达的影响.方法:60只SD大鼠随机分为6组,即正常组、模型组、温阳益气平喘高剂量组、温阳益气平喘低剂量组、桂龙咳喘宁组,氨茶碱组,每组10只.除正常组外以卵蛋白致敏并吸入激发法制备大鼠支气管哮喘模型,各治疗组均从第1次哮喘激发开始(造模第3周)至处死前每天灌胃给药,激发并给药4周后处死大鼠.应用TUNEL法检测肺组织嗜酸粒细胞凋亡,免疫组织化学检测肺组织Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果:温阳益气平喘方高低剂量组大鼠肺组织嗜酸粒细胞凋亡指数显著高于哮喘模型组(P＜0.01和P＜0.05),高低剂量组优于桂龙咳喘宁组(P＜0.01),高剂昔组优于氨茶碱组(P＜0.01);肺组织及气道壁中Bcl-2蛋白阳性细胞的比例显著低于哮喘模型组(P＜0.01和P＜0.05),高剂量组优于桂龙咳喘宁和氨茶碱组(P＜0.01);Bax蛋白阳性细胞的比例显著高于哮喘模型组(P＜0.01),高低剂量组优于桂龙咳喘宁组(P＜0.01),高低剂量组优于氨茶碱组(P＜0.01和P＜0.05).结论:温阳益气平喘方可通过调节抑制凋亡基因bcl-2和促进凋亡基因bax蛋白的表达,促进肺内EOS凋亡,减少炎细胞浸润,减轻哮喘气道炎症.     

MiR-126 通过MAPK 信号通路抑制oxLDL 处理的血管平滑肌细胞增殖和迁移

目的:探索miR-126 对oxLDL 处理的血管平滑肌细胞(VSMC)生物学功能的影响及其分子机制。方法:采用oxLDL 处理人主动脉血管平滑肌细胞建立模型。实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-126 表达。CCK-8 实验检测细胞增殖。Transwell 实验分析细胞迁移。免疫印迹分析增殖标记蛋白细胞增殖核抗原-67(Ki-67)、增殖细胞核抗原(PCNA)、迁移标记蛋白基质金属蛋白酶9(MMP-9)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白ERK1/2、p-ERK1/2、p38、p-p38、JNK 和p-JNK 的表达。结果:模型组的miR-126 表达显著低于对照组(P<0.01)。与模型组相比,miR-126 mimic 组miR-126 表达极显著升高(P<0.001)。模型组和mimic control 组细胞增殖倍数明显高于对照组(P<0.05)。与模型组相比,miR-126 mimic 组细胞增殖倍数明显降低(P<0.05)。与对照组相比,模型组和mimic control 组细胞迁移能力大大提高(P<0.001)。miR-126 mimic 组细胞迁移显著低于模型组(P<0.01)。模型组和mimic control 组细胞增殖标记蛋白Ki-67和PCNA,迁移标记蛋白MMP-9 和VEFG 表达显著高于对照组(P<0.01)。与模型组相比,miR-126 mimic 组增殖标记蛋白Ki-67 和PCNA 及迁移标记蛋白MMP-9 和VEFG 表达明显减弱(P<0.05)。而且,与对照组相比,模型组和mimic control 组中p-ERK1/2/ ERK1/2、p-p38/ p38、p-JNK/ JNK 的相对蛋白表达量的比值显著升高(P<0.01)。miR-126 mimic 组p-ERK1/2/ ERK1/2、p-p38/ p38、p-JNK/ JNK 的相对蛋白表达量的比值则明显低于模型组(P<0.05)。与对照组相比,模型组Ki-67、PCNA、MMP-9、VEGF 表达明显升高(P <0.05)。与模型组相比,miR-126 mimic 组Ki-67、PCNA、MMP-9、VEGF 表达明显降低(P <0.05);Anisomycin 组Ki-67、PCNA、MMP-9、VEGF 表达明显升高(P<0.05)。miR-mimic+ Anisomycin 组Ki-67、PCNA、MMP-9 和VEGF表达与模型组无明显差异。结论:MiR-126 通过MAPK 信号通路抑制oxLDL 处理的血管平滑肌细胞增殖和迁移。     

Urantide对动脉粥样硬化大鼠肝细胞外调节蛋白激酶1/2的作用及机制*

目的:观察Urantide对动脉粥样硬化(AS)大鼠肝中细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)表达的影响,探讨AS大鼠脂肪肝中调控ERK1/2的分子机制。方法:维生素D3(VD3)腹腔注射及特制高脂饲料饮食建立大鼠AS模型,随机分为正常组、AS组、辛伐他汀组、Urantide组。H-E染色观察大鼠胸主动脉、肝的形态学改变;生化检测大鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)的含量;免疫印迹法检测各组大鼠肝组织中尾加压素Ⅱ(UⅡ)、G蛋白偶联受体14(GPR14)、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)、ERK1/2蛋白质表达水平;免疫荧光法检测各组大鼠肝细胞中p-ERK1/2的表达水平。结果:与正常组相比,AS组大鼠胸主动脉出现典型的AS病理学改变,肝出现典型的脂肪变性;AS组大鼠血清中TC、TG、LDL含量显著升高,HDL含量显著降低;大鼠肝中UⅡ、GPR14、p-ERK1/2、ERK1/2的蛋白表达水平显著升高。与AS组相比,辛伐他汀组及Urantide组大鼠肝的脂肪变性明显减轻;肝中UⅡ、GPR14、p-ERK1/2蛋白表达显著降低,ERK1/2蛋白表达水平无显著变化。结论:Urantide可通过抑制UⅡ/GPR14的生物学效应抑制ERK1/2的活化进而达到治疗脂肪肝的作用。     

叶酸通过下调ERK1/2信号通路抑制血管平滑肌细胞增殖和迁移

目的:探讨叶酸(folic acid,FA)对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和迁移的影响及其机制。方法:取SD大鼠的主动脉,采用组织贴块法培养VSMCs,随机分组进行实验。采用CCK-8和Ed U法检测叶酸对VSMCs活力和增殖能力的影响。采用划痕实验和Transwell法检测叶酸对VSMCs迁移和侵袭的影响。采用Western blot法检测细胞增殖核抗原(PCNA)蛋白表达以及血小板源性生长因子受体(PDGFR)和细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)蛋白的磷酸化水平。结果:叶酸抑制血小板源性生长因子(PDGF)诱导的VSMCs的活力,并呈浓度依赖性(P0.05)。叶酸抑制PDGF诱导的VSMCs的迁移,并呈浓度依赖性(P0.05)。叶酸降低PCNA表达和PDGFR磷酸化水平,并抑制PDGF激活的ERK1/2信号通路。结论:叶酸降低PDGF诱导的VSMCs PCNA和p-PDGFR蛋白水平,下调ERK1/2信号通路,从而抑制VSMCs的增殖和迁移。     

Probucol抑制氧化低密度脂蛋白诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖

目的:研究Probucol抑制ox-LDL诱导RASMCs增殖与信号蛋白分子ERK1/2、MKP-1、HO-1和Trx-1表达之间的关系。方法:采用MTT、流式细胞术和Western blotting观察ox-LDL刺激条件下probucol对细胞周期、细胞增殖和凋亡、ERK1/2、MKP-1、HO-1和Trx-1表达的影响。结果:(1)Probucol抑制ox-LDL刺激RASMCs增殖:100μmol/Lprobucol+35mg/Lox-LDL组与35mg/Lox-LDL组比较,A值下降了34.9%(P0.01);(2)Probucol通过使RASMCs停滞在G0/G1期和诱导细胞凋亡2种方式抑制ox-LDL刺激细胞增殖。(3)ox-LDL显著抑制MKP-1的蛋白表达,与对照组比较下降了60.0%(P0.01),同时使p-ERK1/2表达增加了34.7%;Probucol使MKP-1蛋白表达显著增加2倍,p-ERK1/2表达降低了15.7%(P0.01);(4)35mg/Lox-LDL使细胞内Trx-1蛋白表达下降28.9%(P0.05),HO-1蛋白表达轻度增加(P0.05)。与ox-LDL组比较,probucol使Trx-1蛋白表达增加了91.6%(P0.01),HO-1表达增加31.9%(P0.01)。结论:Probucol通过增强MKP-1和HO-1蛋白表达、抑制细胞周期运转和诱导细胞凋亡的机制抑制RASMCs增殖。     

芥子酸对高糖诱导下大鼠血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨芥子酸对高糖诱导下大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖和凋亡的影响及机制。方法:将培养的A7r5细胞随机分组处理,MTT法检测细胞活力,Brd U法检测细胞DNA合成,流式细胞术检测细胞周期进程和细胞凋亡,ELISA检测细胞活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)生成,Western blot检测cyclin D1、P21和P27等蛋白的表达,以及蛋白激酶C(PKC)和P38的磷酸化水平。结果:与正常组比较,高糖组细胞活力显著升高,DNA合成加快,细胞周期加快,P21和P27表达降低,cyclin D1表达增加,ROS水平增加,细胞凋亡率降低,p-PKC和p-P38蛋白水平增加(P0.05)。而芥子酸(0.1、1和10μmol/L)处理引起细胞增殖活性降低,DNA合成减弱,细胞周期受阻,P21和P27表达增加,cyclin D1表达降低,ROS水平降低,细胞凋亡率升高,p-PKC和p-P38蛋白水平降低,且呈一定浓度依赖性(P0.05)。P38抑制剂SB203580和PKC抑制剂chelerythrine均显著抑制高糖诱导的PKC/P38活化和细胞活力(P0.05)。结论:芥子酸可通过抑制PKC/P38激活降低高糖诱导的VSMCs增殖,并促进细胞凋亡。     

胆固醇诱导人血管平滑肌细胞表型转化

目的观察胆固醇对人血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化的影响。方法体外培养人血管平滑肌细胞株,分别用(12.5、25.0、50.0)mg/L浓度的胆固醇作用细胞48 h;50.0 mg/L的胆固醇分别作用细胞24、48、72 h。采用实时定量PCR检测VSMC中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及平滑肌22α(SM22α)mRNA的表达;采用Western blot法检测胆固醇对VSMC中α-SMA、SM22α及单核细胞趋化蛋白-1诱导蛋白(MCPIP)表达的影响;CCK-8法检测VSMC增殖。结果 (12.5、25.0、50.0)mg/L胆固醇作用VSMC 48 h较对照组相比,α-SMA及SM22αmRNA水平及蛋白水平表达均降低(P0.05),50.0 mg/L胆固醇作用后表达水平最低,存在剂量依赖效应;用50.0 mg/L胆固醇分别作用VSMC 48、72 h后,α-SMA及SM22αmRNA及蛋白表达与对照组相比均降低(P0.05)。与对照组相比,胆固醇作用均明显促进VSMC增殖(P0.05)。50.0 mg/L胆固醇作用VSMC48 h可诱导MCPIP蛋白表达增加。结论胆固醇作用VSMC后可降低收缩型标志蛋白α-SMA及SM22α的表达、促进VSMC增殖,提示胆固醇可诱导VSMC表型转化。     

罗布麻叶提取物预处理对缺血再灌注大鼠心肌损伤的作用

目的:观察罗布麻叶提取物(AVLE)预处理对心肌缺血再灌注(MI/R)大鼠心肌细胞凋亡和细胞信号转导系统中丝(苏)氨酸激酶(Akt)和细胞外信号调节激酶(ERK1/2)的影响。方法:采用SD大鼠MI/R模型(结扎冠脉左前降支起始部30min后再灌注4h),随机分为Sham组(假手术)、MI/R组、AVLE预处理组[AVLE(500mg/kg)灌胃,每日一次,连续灌胃7天后再行MI/R]。用TUNEL法检测各组心肌细胞凋亡,计算凋亡指数(AI);荧光免疫分析法检测各组心肌组织凋亡蛋白Caspase-3活性;Western Blotting测定心肌组织Akt和ERK1/2的表达水平和磷酸化水平。结果:与Sham组比较,MI/R组心肌细胞AI显著升高(P0.05),心肌组织Caspase-3活性明显升高(P0.05),心肌Akt和ERK1/2的磷酸化水平显著降低(P0.05);与MI/R组比较,AVLE预处理组AI明显下降(P0.05),心肌组织Caspase-3活性显著降低(P0.05),Akt和ERK1/2磷酸化水平显著升高(P0.05)。结论:AVLE能够抑制缺血再灌注所致心肌细胞损伤,其作用与生存信号通路蛋白PI3K/Akt和ERK1/2的活化水平有关。