硫代乙酰胺诱导大鼠肝纤维化模型的制备

目的:建立稳定高效的硫代乙酰胺(thioacetamide,TAA)大鼠肝纤维化模型,分析大鼠肝脏病理纤维化分级与血清检测物指标,为临床提供适用的监测手段及理论依据。方法:选取SD雄性大鼠48只,随机分为4组,即对照组(12只)、模型-Ⅰ组(12只)、模型-Ⅱ组(12只)和模型-Ⅲ组(12只)。根据大鼠体重,采用腹腔注射TAA诱导肝纤维化。按实验给定时间给药,在不同时间段内测定谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)血清浓度,并进行肝脏病理组织学检查。结果:模型-Ⅰ组大鼠死亡率为25.00%(3/12)、肝纤维化形成率为75.00%(9/12);模型-Ⅱ组大鼠死亡率为8.33%(1/12)、肝纤维化形成率为91.67%(11/12);模型-Ⅲ组肝纤维化形成率为83.33%(10/12)。各组AST和ALT血清浓度均升高,肝脏病理组织学检查发现肝组织病变。结论:本法病理组织学检查结果可靠,操作简便,适用于实验肝纤维化模型制备。     

硫代乙酰胺诱导的小鼠肝内胆管癌模型特点研究

目的 建立硫代乙酰胺(thioacetamide, TAA)诱导的小鼠肝内胆管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma, ICC)模型并探讨该模型的特点及形成机制,为ICC的病理机制和治疗药物的研究提供实验基础。方法 C57BL/6J小鼠分为正常对照组和TAA组,正常对照组小鼠饮用灭菌水,模型组小鼠饮用600 mg·L^-1的TAA溶液,连续饮用32周。眼球取血,检测血清中ALT、AST、DBIL和TBIL的水平;观察两组小鼠肝脏形态;HE、天狼猩红、Masson和普鲁士蓝染色观察肝脏组织病理改变;免疫组化检测CK7、CK19、Ki67、CD68、TNF-α和α-SMA的表达水平;RT-qPCR和Western blot检测ICC相关标志物mRNA和蛋白的水平;免疫荧光双标记检测肝脏组织中HNF4α⁺CK19⁺双阳性细胞。结果 与正常对照组比较,TAA组小鼠肝脏表面呈细颗粒状、质硬,肝内呈肿块性病变;病理检查结果显示,肝组织有炎症细胞浸润,肿瘤细胞排列成管状,肝组织有明显的纤维化;血清中ALT、A...     

川芎嗪干预大鼠实验性肝纤维化的研究

目的研究川芎嗪对大鼠实验性肝纤维化的治疗作用,并探讨其剂量-效应关系。方法90只SD雄性大鼠随机取80只以40%四氯化碳皮下注射,其余10只予以相同容量生理盐水皮下注射作为正常对照组(N组)。8周后,造模组随机处死16只,经肝组织活检证实肝纤维化形成(模型对照组,M组)。剩余肝纤维化大鼠随机分成3组:分别为川芎嗪低剂量治疗组(T1组,川芎嗪一日1次20mg/kg腹腔内注射)、高剂量治疗组(T2组,川芎嗪一日1次80mg/kg腹腔内注射)、空白对照组(R组,生理盐水一日1次腹腔内注射),疗程8周。试验结束时,全部大鼠采血后处死,分别行HE染色评估肝纤维化程度、Masson染色评估肝组织中胶原纤维百分比、生化法检测血清谷丙转氨酶及谷草转氨酶水平。结果T1、T2组大鼠肝纤维化程度较R组明显减轻,胶原面积密度降低,血清转氨酶下降,且T2组改善优于T1组。结论川芎嗪具有逆转肝纤维化的作用,且高剂量疗效更显著。     

软肝宁对大鼠肝纤维化的保护作用研究

目的探讨软肝宁对肝纤维化大鼠的影响,为临床适应证提供实验依据。方法将60只大鼠随机分为6组。正常对照组给予生理盐水;模型组给予20%四氯化碳花生油溶液按10 mL/kg皮下注射,首剂加倍,每5 d注射1次,首次注射后,用生理盐水按10 mL/kg灌胃,1次/天,连续6周;秋水仙碱组配成0.01 g/L;软肝宁高、中、低剂量组（0.12,0.06,0.03 g/kg）按损伤模型组同法给予CCl4造模,然后给予软肝宁给药,1次/天。给药6周后检测大鼠血清中的丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬酸氨基转移酶（AST）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、血清透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）和羟辅氨酸（HYP）,并观察大鼠肝组织常规病理改变。结果软肝宁能改善肝纤维化大鼠的肝功能,高、中剂量可显著降低CCl4致大鼠肝损伤血清ALT,AST,MDA,HA,LN,PCⅢ水平和肝组织中过高的HYP（P〈0.05或P〈0.01）,并能升高血清中SOD含量。常规病理显示,中、高剂量软肝宁可明显减轻CCl4所致的大鼠肝细胞变性、坏死及肝组织损害程度。结论软肝宁具有延缓CCl4所致肝纤维化进程的作用。     

鬼针草总黄酮抗大鼠肝纤维化的实验研究

目的:观察鬼针草总黄酮(totalflavonesofBi-denspilosaL,TFB)的抗肝纤维化作用。方法:将大鼠随机分为六组:正常对照组,模型组,TFB160、80、40mg.kg-1组和秋水仙碱0.1mg.kg-1阳性药对照组。除正常对照组外,其余各组采用皮下注射四氯化碳(CCl4)诱导肝纤维化模型。于造模第9周起,给药组分别灌胃相应的受试药物,正常对照组和模型组灌胃等容量的生理盐水,疗程10周。实验结束后,取大鼠血清测ALT、AST、透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原肽(PCⅢ)、Ⅳ型前胶原酶(CⅣ);取大鼠肝、脾称重,计算肝、脾指数;同时取固定部位肝组织,测定组织中MDA、Hyp含量和GSH-Px活性;另取部分肝组织做病理组织学和电镜学检查。结果:TFB160、80mg.kg-1能显著降低肝纤维化大鼠肝、脾指数,并降低血清中ALT、AST活性及HA、PCⅢ、CⅣ和肝组织中MDA、Hyp含量,且升高肝组织中GSH-Px活性(P<0.05)。病理组织学和电镜检查结果显示TFB160、80mg.kg-1组肝脏组织结构明显改善,肝纤维化增生程度减轻。结论:TFB对CCl4所致大鼠肝纤维化有明显治疗作用,其机制可能与抑制氧自由基的生成有关。     

姜黄素对大鼠肝纤维化防治作用

目的:探讨姜黄素对大鼠肝纤维化的治疗作用,为临床治疗提供参考。方法:通过不同剂量姜黄素灌胃并测定血清ROS和内毒素水平、肝组织MDA含量、肝组织NF-k B活性和表达、TGF-b1、PDGF-BB、CTGF水平及TIMP-1的m RNA水平研究姜黄素对四氯化碳致大鼠实验性肝纤维化模型的作用。结果:ROS、内毒素、MDA、NF-k B、TGF-b1、PDGF-BB、CTGF、TIMP-1m RNA水平在模型组大鼠中均明显升高,与正常组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);给予姜黄素干预后,它们均有不同程度下降,并与剂量有一定的关系,与模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);高剂量姜黄素组各因子水平与低剂量姜黄素组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:姜黄素对上述诸因子均有不同程度的抑制作用,具有保护肝功能、改善肝脏病理学变化等功效。     

大鼠肝纤维化精密切片技术的建立

目的：建立肝纤维化精密切片技术，摸索最佳体外培养条件，用于体外肝脏异物代谢和药物相互作用研究。方法：建立大鼠复合因素(高脂、酒精和CCl4)肝纤维化模型，制备肝纤维化状态下的肝切片，建立培养系统，以培养基中乳酸脱氢酶(LDH)漏出量、肝组织中谷胱甘肽S-转移酶(GST)活性、肝细胞噻唑蓝(MTT)还原能力为指标，观察切片厚度、培养液pH值和培养时间对肝切片活力的影响。结果：大鼠经复合因素处理后，3周即可造成肝纤维化早期病理改变。在切片厚度300μm、培养液pH7．0的条件下，肝切片在6h内能够维持最低的LDH漏出量和最高的GST活性、MTT还原量。结论：肝纤维化状态下的精密肝切片技术，其切片厚度300μm、培养液pH7．0、培养时间6h时为最佳培养条件。     

黄芍颗粒抗大鼠肝纤维化作用研究

目的:研究黄芍颗粒对CCl4致大鼠肝纤维化的作用及其机制。方法:将60只大鼠随机分为6组,分别为空白组、模型组、大黄蟅虫丸组和黄芍颗粒高、中、低剂量组,除空白组外,其余各组采用CCl4复制大鼠肝纤维化模型,造模、给药结束后观察各组动物的肝组织病理学变化;并检测丙胺酸氨基转移酶(ALT)、天冬胺酸氨基转移酶(AST)的活性及白蛋白含量,检测血清玻璃酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(ⅣC)及层粘连蛋白(LN)的含量。结果:与模型组比较,黄芍颗粒中、高剂量组以及大黄蟅虫丸组肝细胞结构显著改善,并可使大鼠血清ALT、AST的活性降低,白蛋白的含量升高,同时也可降低血清中HA、PCⅢ、ⅣC、LN的含量。结论:黄芍颗粒具有较好的抗模型大鼠肝纤维化的作用,值得进一步研究和开发。     

"抗纤汤"治疗四氯化碳致肝纤维化大鼠模型的实验研究

目的观察"抗纤汤"对四氯化碳致肝损伤的肝纤维化大鼠模型的治疗效果.方法 60只大鼠被随机分为3组,每组20只,在治疗组用"抗纤汤"治疗3个月后分别比较正常对照组、模型组和治疗组大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、透明质酸(HA)的含量,并观察其组织学改变的差异.结果治疗组血清ALT、AST、PCⅢ、HA均显著低于模型组(P＜0.05).病理学提示,治疗组肝细胞损伤、肝脏脂肪变性与纤维组织形成较少.结论 "抗纤汤"在抗纤维化治疗中有确切疗效.     

Preventive effects of Ophiocordyceps sinensis mycelium on the liver fibrosis induced by thioacetamide

Thioacetamide (TAA), usually used as a fungicide to control the decay of citrus products, itself is not toxic to the liver, but its intermediates are able to increase oxidative stress in livers and further cause fibrosis. Ophiocordyceps sinensis mycelium (OSM) which contains 10% polysaccharides and 0.25% adenosine decreased (P < 0.05) the lipid accumulation and increased (P < 0.05) antioxidative capacity in livers of thioacetamide (TAA) injected rats. Meanwhile, the increased (P < 0.05) liver sizes, serum alanine transaminase (AST) and aspartate transaminase (ALT) values in thioacetamide (TAA)‐injected rats were ameliorated (P < 0.05) by OSM supplementation. Moreover, the levels of proinflammatory cytokines, such as the tumor necrosis factor‐α (TNF‐α) and interleukin‐1β (IL‐1β), were also reduced (P < 0.05). The fibrosis phenomena in pathological (Masson's trichrome and H&E stainings) and immunohistochemical [α‐smooth actin (αSMA) and CD86/ED1] observations in TAA‐treated rats were reduced (P < 0.05) by OSM cotreatment. The protective effect of OSM against TAA‐induced liver inflammation/fibrosis may be via downregulations (P < 0.05) of TGF‐β pathways and NFκB which further influenced (P < 0.05) the expressions of fibrotic and inflammatory genes (i. e., αSMA, Col1α, COX2). Therefore, OSM shows preventive effects on the development of TAA‐induced hepatic fibrosis.     

Toxicokinetics and toxicity of thioacetamide sulfoxide: a metabolite of thioacetamide

Thioacetamide (TA) is bioactivated by CYP2E1 to TA sulfoxide (TASO), and to the highly reactive sulfdioxide (TASO₂), which initiates hepatic necrosis by covalent binding. Previously, we have established that TA exhibits saturation toxicokinetics over a 12-fold dose range, which explains the lack of dose–response for bioactivation-based liver injury. In vivo and in vitro studies indicated that the second step (TASO → TASO₂) of TA bioactivation is less efficient than the first one (TA → TASO). The objective of the present study was to specifically test the saturation of the second step of TA bioactivation by directly administering TASO, which obviates the contribution from first step, i.e. TA → TASO. Male SD rats were injected with low (50 mg/kg, ip), medium (100 mg/kg) and high (LD₇₀, 200 mg/kg) doses of TASO. Bioactivation-mediated liver injury that occurs in the initial time points (6 and 12 h), estimated by plasma ALT, AST and liver histopathology over a time course, was not dose-proportional. Escalation of liver injury thereafter was dose dependent: low dose injury subsided; medium dose injury escalated upto 36 h before declining; high dose injury escalated from 24 h leading to 70% mortality. TASO was quantified in plasma by HPLC at various time points after administration of the three doses. With increasing dose (i.e., from 50 to 200 mg/kg), area under the curve (AUC) and C_max increased more than dose proportionately, indicating that TASO bioactivation exhibits saturable kinetics. Toxicokinetics and initiation of liver injury of TASO are similar to that of TA, although TASO-initiated injury occurs at lower doses. These findings indicate that bioactivation of TASO to its reactive metabolite is saturable in the rat as suggested by previous studies with TA.     

Application of metabonomics on an experimental model of fibrosis and cirrhosis induced by thioacetamide in rats

Metabonomics has already been used to discriminate different pathological states in biological fields. The metabolic profiles of chronic experimental fibrosis and cirrhosis induction in rats were investigated using (1)H NMR spectroscopy of liver extracts and serum combined with pattern recognition techniques. Rats were continuously administered with thioacetamide (TAA) in the drinking water (300 mg TAA/L), and sacrificed on 1st, 2nd, and 3rd month of treatment. (1)H NMR spectra of aqueous and lipid liver extracts, together with serum were subjected to Principal Component Analysis (PCA). Liver portions were also subjected to histopathological examination and biochemical determination of malondialdehyde (MDA). Liver fibrosis and cirrhosis were progressively induced in TAA-treated rats, verified by the histopathological examination and the alterations of MDA levels. TAA administration revealed a number of changes in the (1)H NMR spectra compared to control samples. The performance of PCA in liver extracts and serum, discriminated the control samples from the fibrotic and cirrhotic ones. Metabolic alterations revealed in NMR spectra during experimental liver fibrosis and cirrhosis induction, characterize the stage of fibrosis and could be illustrated by subsequent PCA of the spectra. Additionally, the PCA plots of the serum samples presented marked clustering during fibrosis progression and could be extended in clinical diagnosis for the management of cirrhotic patients.     

血小板反应蛋白-1在大鼠肝纤维化中表达的意义

目的研究血小板反应蛋白-1(TSP-1)在肝纤维化模型大鼠肝组织中的表达,探讨TSP-1在肝纤维化发病机制中的作用。方法选择健康雄性大鼠30只,随机分为正常组10只,模型组20只,选用四氯化碳(CCL4)、饮酒、高脂低蛋白饮食等复合因素诱导肝纤维化模型,造模8周,取两组大鼠肝组织HE染色病理观察、纤维化分级,测定肝脏指数、血清透明质酸(HA)、肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量及免疫组化法测定肝组织中TSP-1的表达量。结果复合因素大鼠肝纤维化模型造模成功,肝组织病理显示炎症明显、纤维化形成,模型组大鼠肝脏指数、血清HA肝组织Hyp及TSP-1较正常组显著升高,TSP-1在肝组织的表达量与肝纤维化程度成正比。结论TSP-1在肝纤维化发生发展过程中可能发挥了病理作用。     

维生素E对猪血清诱导大鼠肝纤维化预防作用的研究

目的 为探讨维生素E对免疫损伤性大鼠肝纤维化的预防作用。方法 用猪血清腹腔内注射诱导免疫性肝纤维化模型。以维生素E为预防组,秋水仙碱为对照给药组,通过灌胃给药,每日一次。第12周处死动物作肝组织病理分析,行血清Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)、透明质酸(HA)及肝组织脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量测定,并行肝组织超氧化物歧化酶(SOD)活性测定。结果 各药物预防组肝纤维程度较模型组轻,维生素E能显著地降低血清PC-Ⅲ、HA含量及肝组织MDA,提高肝组织SOD活性,呈剂量反应关系。结论 维生素E对免疫损伤性肝纤维化有较好的预防作用。     

低聚原花青素对大鼠肝纤维化氧化损伤的影响

目的 研究低聚原花青素抗肝纤维化的作用及机制.方法 SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、扶正化瘀胶囊组、低聚原花青素低、中、高剂量组(60、120、240 mg·kg-1).采用腹腔注射四氯化碳(CCl4)构建肝纤维化模型,采用苏木精-伊红(HE)染色法进行肝脏病理学观察.生化检测血清丙氨酸转移酶(ALT)和天冬氨酸转移酶(AST),酶联免疫吸附(ELISA)法测定肝组织的超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量.蛋白质免疫印迹法检测沉默信息调节因子1(SIRT1)和Nrf2蛋白表达.结果 低聚原花青素(60、120、240 mg·kg-1)组显著抑制四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化程度,血清丙氨酸转移酶、天冬氨酸转移酶水平及肝脏组织中丙二醛水平明显降低,超氧化物歧化酶显著提高,并上调沉默信息调节因子1和Nrf2蛋白表达.结论 低聚原花青素具有抗纤维化的作用,其作用机制可能与其抗氧化作用并上调沉默信息调节因子1和Nrf2蛋白表达有关.     

牛磺酸联合维生素E对慢性乙型肝炎肝纤维化的影响

目的 探讨牛磺联合维生素E对慢型乙型肝炎肝纤维化的影响.方法 将本院2003年5月至2006年5月慢型乙型肝炎患者66例,随机分为对照组和治疗组各33例,对照组给予保肝治疗;治疗组在保肝治疗的基础上,加用牛磺酸及维生素E,疗程6个月.比较两组治疗前后血清学及肝脏病理炎症积分,分析疗程结束时两组肝纤维化变化情况.结果 治疗组血清学指标、炎症、纤维化积分较治疗前有明显下降（P＜0.05）,而对照组无显著性改变.结论 牛磺酸联合维生素E对肝纤维化的发展具有一定的阻断作用,且具有价格便宜、疗效较好、无明显副作用的特点,值得临床推广应用.     

垂体后叶素致肝纤维化作用研究

目的在肝硬化及肝癌患者中应用垂体后叶素,了解其致肝细胞凋亡,肝纤维化情况。方法垂体后叶素12U治疗21例肝硬化及肝癌患者,监测治疗前,用药30min时及用药结束时的谷丙转氨酶。以高于谷丙转氨酶正常值上限2倍以上为较严重肝损害。结果21例患者用药30min时及用药结束时,谷丙转氨酶升高均无超过未用药前的两倍以上者。结论垂体后叶素用药近期无较严重致肝细胞凋亡、肝纤维化的作用。垂体后叶素致肝细胞凋亡及肝纤维化的作用,仍待深入研究。     

肝纤维化形成过程中大鼠肝组织Bcl-2、Bax表达的动态研究

目的研究CCl4肝纤维化模型形成过程中Bcl-2、Bax蛋白在大鼠肝组织中的动态表达。方法雄性wistar大鼠制备CCl4肝纤维化动物模型,设正常对照组、4周模型组、8周模型组。实验结束后用v-G法染色观察肝纤维化程度并分级,同时用免疫组织化学法(SABC法)检测各组大鼠肝组织Bcl-2、Bax的表达情况。结果模型组大鼠肝纤维化程度均达肝纤维化的Ⅲ-V期以上。BcI-2在正常组、4周及8周模型组表达量分别为(3.19±0.79)％、(12.36±4.71)％及(17.39±5.98)％(P<0.01或P<0.05)。Bax在正常组、4周及8周模型组表达量分别为(2.04±0.58)％、(18.05±5.64)％及(13.56±4.77)％(P<0.01或P<0.05)。凋亡指数、Bax/Bcl-2比值在CCl4肝纤维化模型组中明显增加,尤以4周模型组增加最明显,且凋亡指数与Bax/Bcl-2比值呈正相关(r=0.347,P<0.05)。 结论肝纤维化时Bcl-2、Bax的表达加强,且在肝纤维化发生过程中存在动态变化。