体外构建组织工程化心肌片层的实验研究

探索以液态胶原作为支架材料,体外构建组织工程化心肌片层的可行性。用含0.04?TA的0.25%胰酶分离新生大鼠原代心肌细胞,然后与Ι型胶原M、atrigel和2×DMEM混合,注入方形模具内,制备心肌细胞-胶原复合体,体外培育1周后,施加外力,拉伸刺激条件下继续培养1周。通过光学显微镜下观察H、.E.染色、激光共聚焦和透射电镜观察等对构建的组织工程化心肌片层进行评价。结果表明:心肌片层在培养的第2天出现自发性的跳动,随时间的延长,跳动的区域逐渐增多,并于外力拉伸后的第4天形成一致跳动。激光共聚焦研究结果表明:在构建的工程化心肌组织中,肌原纤维显示排列有序,多数沿拉伸方向伸展,其形态类似于心肌组织。电镜观察显示:拉伸的心肌片层中的心肌细胞含有较多的肌原纤维,肌小节结构和Z带清晰可见。采用新生大鼠心肌细胞与液态Ι型胶原复合方式,可在体外再造出片层状心肌组织,构建的组织工程化心肌片层具有与心肌组织类似的结构和特性。     

丹那唑对体外培养的原位与异位子宫内膜细胞生长的影响

应用胶原凝胶细胞培养和传代培养的方法培养原位与异位子宫内膜细胞，并经丹那唑处理在无丹那唑对照培养中，细胞生长良好，形态呈星形，以胞浆突起相互连接。而经两种浓度丹那唑处理后，细胞生长受抑，传代后２４ｈ细胞贴壁力受损，部分细胞呈致死性病理改变，丹那唑作用的超微结构变化包括胞浆内大量空泡与脂滴，溶酶体增多，线粒体肿胀与细胞核不规则，核膜内陷，提示胶凝胶培养系统为较佳的培养子宫内膜细胞的方法，丹那唑可直接     

种植窗期子宫内膜细胞体外培养的形态学特点与妊娠结局的关系

目的对种植窗期人子宫内膜进行体外培养,探讨不同妊娠结局的子宫内膜细胞体外培养的细胞形态学特点。方法收集拟行IVF-ET助孕的患者种植窗口期（排卵后第5～7天）子宫内膜组织进行体外培养,于倒置显微镜下观察子宫内膜细胞形态学特性,并通过免疫荧光法进行鉴定,采用培养板单层贴壁细胞的原位计数方法,计算子宫内膜间质细胞和腺上皮细胞数量及比例。按助孕后妊娠结局,分为妊娠组和未妊娠组,比较两组患者子宫内膜细胞体外培养的细胞形态学特点。结果39例子宫内膜组织,培养成功36例。其中妊娠组19例,培养成功18例,培养成功率94.7％;未妊娠组20例,培养成功18例,培养成功率90.0％,两者的培养成功率差异无统计学意义（P〉0.05）。子宫内膜间质细胞接种后即开始贴壁,细胞呈扁平状,胞浆透明,核圆居中,波形蛋白表达阳性。子宫内膜腺细胞于接种2h后开始贴壁,细胞呈多角形或蝌蚪形,旋涡状排列,核圆而大,角蛋白表达阳性。妊娠组腺细胞贴壁率为64.8％±4.7,贴壁培养后腺上皮细胞的比例为17.3％±9.5,间质细胞比例为82.7％±9.5;未妊娠组子宫内膜组织腺细胞贴壁率为57.6％±3.4,贴壁培养后腺上皮细胞的比例为14.7％±4.8,间质细胞比例为85.3％±4.8。妊娠组比未妊娠组腺上皮细胞贴壁率及贴壁后腺细胞比例高,但差异无统计学意义（P〉0.05）。结论种植窗期人子宫内膜细胞进行体外培养后,妊娠组与未妊娠组细胞的外观特征相似,虽妊娠组腺上皮细胞贴壁率及贴壁后腺细胞比例较高,但两组差异无统计学意义。单以种植窗期子宫内膜体外培养的细胞形态特点,无法判断内膜的容受性,也无法预测妊娠结局。     

层粘连蛋白在早孕小鼠子宫内膜中的表达

层粘连蛋白 (ＬａｍｉｎｉｎＬＮ)是细胞外基质中重要的大分子非胶原糖蛋白 ,由座落于基膜上的上皮细胞、内皮细胞及被基膜包绕的肌细胞、垂体细胞合成并分泌贮存于基质中。研究表明 ,ＬＮ与细胞膜表面受体结合后可产生多种生物学作用 ,如介导上皮细胞生长、增殖、分化 ,促进细胞粘附、辅展、移动 ,并在肿瘤细胞转移过程中起重要作用。有人曾用间接免疫荧光方法对小鼠早期胚胎进行研究 ,发现ＬＮ在桑椹胚和内细胞团及其滋养层均有较强的阳性反应 ,在外胚层与内胚层之间的细胞外基质中可见ＬＮ呈条带状荧光。但有关胚泡植入前后子宫内膜中Ｌ…     

酶消化结合差时贴壁的方法体外分离培养人子宫内膜细胞

目的探讨酶消化结合差时贴壁培养的方法对人子宫内膜细胞进行体外培养的培养效果,以寻找一种简单高效的人子宫内膜细胞体外分离培养的方法。方法采用胶原酶消化结合差时贴壁的方法,对人正常子宫内膜细胞进行体外分离培养,并传代、冻存及复苏。光镜下观察其培养效果,通过免疫荧光法对腺上皮细胞及间质细胞进行鉴定,并分析其纯度。结果共培养人子宫内膜38份,成功培养35份,培养成功率92％,冻存后成功复苏率达97％;子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞分别经角蛋白单抗和波形蛋白单抗免疫荧光显色为阳性,腺上皮细胞和间质细胞原代纯度均达90％以上。结论酶消化结合差时贴壁的培养方法,操作简单、培养成功率高、污染机会少、省时、维持细胞活性好,是子宫内膜细胞体外分离培养的简单高效方法。     

兔眼前方子宫内膜自体移植模型的研究

将兔的子宫内膜植入到自体的眼前房中，移植块在虹膜表面生长良好。经显微镜活体录像、光镜和电镜检查，证明子宫上皮细胞分化良好，并有分泌功能。子宫内膜自体移植块对雌二醇和孕酮的刺激，在５ｍｉｎ内可发生充血、肿胀反应，２０ｍｉｎ后达高峰，１ｈ后逐渐消退。抗孕酮药物ＲＵ－４８６和ＺＫ－９８２９９可以阻断移植块对雌二醇和孕酮的反应。兔眼前房子宫内膜自体移植模型可用于抗孕激素药物及其他影响子宫功能药物的快速筛选     

子宫内膜异位症对子宫内膜容受性的影响

子宫内膜异位症（Endometriosis,EMs）是妇科常见病,也是女性不孕的常见原因之一,它通过影响生殖过程的各个环节而导致不孕.其中对胚胎植入的影响包括子宫内膜超微结构的改变、细胞因子及黏附分子的表达紊乱、同源盒基因HOXA10的下调等所致的子宫内膜容受性的下降.     

应用胶原海绵构建组织工程皮肤的实验研究

目的探讨以胶原海绵为支架材料构建组织工程皮肤的方法。方法体外分离、培养、鉴定角朊细胞和成纤维细胞,制备胶原海绵作为组织工程支架材料;在成功构建人工真皮的基础上,种植表皮细胞,构建人工复合皮肤,通过大体观察、HE染色与免疫组织化学进行组织学检测。结果制备的胶原海绵孔径平均100~150μm,孔隙率89%,组织相容性良好;以胶原海绵构建的皮肤替代物免疫组织化学染色显示Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白和层粘连蛋白阳性,HE染色可见均具有表皮和真皮双层结构,在形态结构上与正常皮肤相似。结论培养的人角朊细胞和成纤维细胞种植于胶原海绵支架上培养可构建出具有类似天然皮肤结构的组织工程皮肤。     

上皮细胞及间质细胞表面分子在兔子宫内膜中的表达

目的探讨兔子宫内膜中上皮细胞及间质细胞表面分子的表达。方法应用流式细胞术检测上皮细胞表面标记分子EpCAM、EMA,及间质细胞表面标记分子CD90（Thy-1）和Collagen type I,lit—PCR分析上述表面分子的mRNA表达,同时对Sox2及Oct4的mRNA进行检测。结果在兔子宫内膜中,可以检测到EpCAM、EMA、CD90及CollagentypeI的mRNA及蛋白表达,同时可检测到Oct4及Sox2在兔子宫内膜中的表达。结论兔子宫内膜可能存在上皮细胞及间质细胞两种细胞成分,同时可能存在兔子宫内膜干细胞。     

纤维蛋白胶与兔角膜3种细胞构建组织工程细胞片研究

目的： 观察兔角膜3种细胞能否在体外构建的纤维蛋白胶体上良好生长，探讨纤维蛋白胶作为组织工程细胞片支架材料的可行性。方法: 将培养扩增的兔角膜3种细胞分别接种于纤维蛋白胶表面,采用倒置显微镜,HE染色和扫描电子显微镜,观察兔角膜3种细胞在纤维蛋白胶表面生长情况。结果: 制备的薄层纤维蛋白胶支架光滑、透明，随培养细胞的生长部分降解，可获得仅带少量纤维蛋白胶的细胞片。角膜3种细胞在纤维蛋白胶表面生长良好，可保持生理状态的细胞形态。角膜上皮细胞可形成单层和复层，细胞间连接紧密。角膜内皮细胞呈圆形或多角形，细胞大小一致，排列紧密。角膜基质细胞拉长生长，呈三角形或树枝状，细胞间连接明显，可形成网状连接。结论: 体外构建的纤维蛋白胶与角膜3种细胞有组织相容性,纤维蛋白胶有望作为角膜3种细胞的生长载体构建可供移植的组织工程细胞片。     

构建具有神经支配的工程化心肌组织的初步研究

探索神经生长因子诱导的交感神经元样PC12细胞作为组织工程化心肌组织神经支配研究模型的可行性。用含0.04?TA的0.25%胰酶分离新生大鼠原代心肌细胞,然后与NGF诱导的交感神经元样PC12细胞在液态的Ι型胶原中共培养,通过光学显微镜观察、常规H.E.染色、免疫组织化学染色和透射电镜观察等对其进行评价。在三维共培养模型中,NGF诱导的交感神经元样PC12细胞长出神经突起,突起及其上的膨体能够到达跳动的心肌细胞表面,神经突起随心肌细胞一起跳动。说明采用神经元样PC12细胞作为组织工程化心肌神经支配的模型是可行的,神经细胞与心肌细胞可能有支配关系。     

Tissue-engineered platforms of axon guidance

Tissue engineering provides a valuable tool for in vitro investigation of complex in vivo environments. A particular application of tissue-engineered in vitro platforms in neuroscience and regenerative medicine is the fabrication of controlled microenvironments for the study of axon guidance, with the goal of informing strategies to overcome nerve injury. The innovative design of tissue-engineered scaffolds that incorporate multiple guidance cues and cell types into various environments is advancing the understanding of how neurons integrate guidance information to make growth decisions. This review focuses on recent strategies that present neurons with multiple cues with micro- and nanoscale resolution in order to study the interactions between neurons and their local environment during axon guidance.     

组织工程化心脏瓣膜的研究进展

心脏瓣膜置换术是外科治疗瓣膜性心脏病的主要方法，但目前临床应用的人工瓣膜的远期效果尚不满意。近年来，随着组织工程学技术的进展，利用培养的自身组织细胞种植于支架材料表面，体外重新构建理想的心脏瓣膜植物日益成为研究热点。本文简述了心脏瓣膜工程的定义，细胞支架材料的选择，种子细胞的培养、种植方法以及组织工程化心脏瓣膜的评估，并指出下一步研究中尚需解决的问题。     

组织工程化肌腱植入体内的研究进展

组织工程化肌健修复肌腱韧带缺损及功能重建是目前的研究热点。所选用的支架材料不仅要对人体无毒副作用，还要求其易于细胞黏附，能诱导胶原沉积，新腱形成，并具有接近正常肌腱的力学性能，近年的研究发现。随着支架材料在体内的降解及其腱化，植入的组织工程经肌腱的力学性能也有所改变，胶原生成，支架材料降解和新腱的力学性能三者的匹配关系还有待进一步的研究。     

组织工程复合物进行兔尿流改道

背景：根治性膀胱切除是目前对于肌层浸润性膀胱癌最有效的治疗手段,膀胱切除后尿流改道需利用肠道,并发症较多。 目的：试用膀胱脱细胞基质和尿路上皮细胞构建组织工程化卷管进行尿流改道。 方法：制作兔脱细胞基质,体外培养扩增兔膀胱上皮细胞,将上皮细胞种植到兔脱细胞基质上,培养7 d后制作成4 cm长的卷管;新西兰兔28只,其中实验组24只,分6组每组4只,分别行保留膀胱三角区的膀胱大部分切除,再将膀胱三角区与组织工程化卷管吻合,网膜包裹卷管;对照组4只,利用未种植细胞的脱细胞基质制作成流出道并与膀胱三角区吻合。分别于手术后1,2,4,8周取标本做苏木精-伊红染色,8周后对复合物进行免疫组织化学检测。 结果与结论：实验组所有的动物均存活,苏木精-伊红染色显示流出道覆盖上皮,随着时间的推移,种植的上皮细胞与脱细胞基质逐渐融合,8周后免疫组织化学可见抗细胞角蛋白单克隆抗体 AE1/AE3阳性,抗ZO-1抗体阳性,证实流出道组织内有成熟上皮细胞覆盖,尿路上皮细胞之间有连接功能;对照组4只兔术后2周内均死亡,尸体解剖见流出道瘢痕形成,闭锁,双肾重度积水。结果表明,利用种植有尿路上皮细胞的脱细胞基质制作成组织工程化卷管在动物体内进行尿流改道是可行的,流出道内腔有成熟上皮覆盖,具有防止尿外渗的功能。     

半月板运动损伤的组织工程修复

背景：半月板损伤后较难自我恢复,组织工程学手段为其功能恢复提供了可能。 目的：全面综述半月板损伤的治疗方法,着重阐述了半月板的组织工程修复情况。 方法：应用计算机检索PubMed和万方数据库中1980-01/2011-03关于半损伤及医用材料的文章,在标题和摘要中以“半月板、治疗、措施、材料”或“meniscus, treatment, the measure, materials”为检索词进行检索。选择研究内容与半月板治疗措施及材料学选择相关的文章,同一领域文献则选择近期发表或发表在权威杂志上的文章。 结果与结论：初检得到174篇文献,根据纳入标准选择35篇文章进行综述。研究发现软骨组织周边区域具有一定的自我修复功能,对于规则性裂伤应进行保留组织进行传统疗法治疗,后期效果较好,对于较严重的损伤传统疗法却无能为力,运用组织工程学手段对其进行治疗的材料学条件日趋多元与成熟,理想材料的研制与选择是制约其康复效果的重要因素。     

气管组织工程的研究策略及其展望

气管组织工程是近10年来国内外研究的热点和难点问题,取得了一些进展.但如何更好地遴选基质材料、实现种子细胞共培养、上皮化以及再血管化来构建组织工程化气管仍需要不断寻求新的研究思路和策略.本文从气管重建和理想化气管替代物的角度,回顾了近年来在组织工程气管方面的研究进展,并对未来的研究作出展望.