骨碎补提取液对兔骨髓基质细胞增殖的影响

为研究中药骨碎补提取液对骨髓基质细胞增殖作用的影响,探讨接骨续筋中药促进骨折愈合的机制,取新西兰大白兔骨髓液,经FICOIL淋巴细胞分离后行原代培养,以P1代细胞为研究对象,分为5组分别进行培养,MTT法测定其生长曲线,测量其分裂指数,行HE染色观察细胞形态,对测量的结果行统计学分析.结果显示条件培养组与完全培养其组无显著性差异,不同浓度骨碎补组均与完全培养基组有显著性差异.表明高浓度骨碎补提取液对于兔骨髓基质细胞的增殖有抑制作用,较低浓度的骨碎补提取液对兔骨髓基质细胞的增殖有促进作用,条件培养基对免骨髓基质细胞的增殖无明显作用.     

中药骨碎补提取液对兔骨髓基质细胞体外成骨分化的影响

为观察骨碎补提取液促进骨髓基质细胞体外向成骨细胞分化的作用,探讨该药促进骨折愈合、治疗预防骨质疏松的细胞学基础.采用不同浓度的骨碎补乙醇提取液对骨髓基质细胞培养,进行形态学和组织学鉴定.结果显示中、低浓度药物促进了骨髓基质细胞在体外向成骨细胞分化,说明该药含有诱导骨髓基质细胞向成骨细胞分化的成分.     

骨髓基质干细胞研究进展

骨髓基质干细胞(BMSCs)又称为骨髓间充质干细胞(MSCs),已广泛应用于脑和脊髓损伤、骨损伤、软骨缺损与损伤、心肌细胞损伤等的修复、基因治疗和临床治疗的研究。文中从BMSCs的发现及应用研究现状、BMSCs的制备、培养及生物学特征、BMSCs向神经细胞分化的研究进展等方面对BMSCs的国内外研究进展进行综述。     

右归饮诱导胎兔骨髓基质细胞向软骨细胞分化的实验研究

目的探讨中药复方右归饮体外诱导骨髓基质细胞分化为软骨细胞的可行性。方法采用机械分离法从胎兔的双侧股骨髓腔中分离出骨髓基质细胞,传代培养。取第3代细胞,培养24h,换含药培养液,继续培养72h。应用MTT法、HE染色及免疫组织化学染色方法观察右归饮含药血清对骨髓基质细胞体外培养的增殖及向软骨细胞诱导分化的影响。结果不同浓度右归饮含药血清对培养骨髓基质细胞均显示增殖刺激作用(P<0.05),其中10%含药血清组的增殖刺激作用较为显著;经右归饮含药血清诱导后,HE染色后见细胞形态由原先的长梭形,纺锤形逐渐变为圆形,椭圆形。Ⅱ型胶原免疫组化染色显示呈现阳性,可见棕黄色的颗粒分布于细胞胞浆内。结论右归饮可以有效地诱导骨髓基质细胞定向分化为软骨细胞。     

补肾填精法促进骨髓基质干细胞分化为神经元样细胞的实验研究

目的:探讨补肾填精方右归丸含药血清体外诱导大鼠骨髓基质干细胞分化为神经元样细胞的作用.方法:用DMEM/F-12培养液培养Wistar大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs).用右归丸含药血清诱导BMSCs分化后,倒置显微镜观察细胞形态变化;用尼氏染色法观察神经细胞特征性结构;用免疫细胞化学染色法鉴定神经胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及神经细胞特异性标志物神经元特异性烯醇化酶(NSE),微管相关蛋白-2(MAP-2)的表达.结果:诱导6h后,骨髓基质干细胞胞体收缩,有突起伸出;诱导24 h后突起增多形成网络结构;尼氏染色法显示诱导后的细胞胞体中有尼氏体.免疫细胞化学染色示NSE及MAP-2阳性表达,GFAP无表达.结论:右归丸含药血清可以体外诱导大鼠骨髓基质干细胞分化为神经元样细胞.     

叶酸诱导骨髓基质干细胞分化为神经细胞的浓度探索

目的探讨叶酸对骨髓基质干细胞诱导分化为神经细胞的最佳浓度。方法MSCs由正常成年人骨髓经密度梯度离心加贴壁离心获得．取第5代MSCs以1mmol／L二巯基乙醇（BME）预诱导24h后,用羟基茴香醚（BHA）、2％二甲基亚砜（DMSO）和3种不同浓度的叶酸诱导分化,采用免疫细胞化学法检测神经细胞特异性抗原标志神经元特异性烯醇化酶（NSE）、胶原纤维酸性蛋白GFAP的表达,MTT（四唑盐比色）法检测不同时间段对BMSCs增殖的影响。结果不同剂量叶酸组分化为NSE阳性神经元样细胞的百分率都较对照组高（P〈0．01）,但以40mg／L中等浓度的叶酸神经细胞最多,且神经元比例高于其他组。结论叶酸诱导BMSCs向神经元分化以40mg／L浓度为最佳。     

丹参诱导成年小鼠骨髓基质干细胞分化为神经细胞研究

应用复方丹参注射液诱导体外培养的成年小鼠骨髓基质干细胞,观察诱导过程中的形态学变化,并于诱导后5h、24h、72h分别应用抗Nestin、抗βⅢ-tubulin、抗MBP及抗GFAP抗体进行免疫细胞化学染色．RT-PCR检测mRNA表达,Western Blot检测蛋白表达,应用2-巯基乙醇作为诱导对照组。研究发现,复方丹参注射液和2－巯基乙醇均可诱导骨髓基质干细胞分化为神经样细胞,但复方丹参注射液诱导怍用更为缓和,细胞死亡率远低于2-巯基乙醇诱导组。免疫细胞化学示Nestin和βⅢ-tubulin阳性表达,MBP及GFAP为阴性表达。RT-PCR可见Nestin和βⅢ-tubulin mRNA阳性表达,Western Blot检测证实Nestin和βⅢ-tubulin蛋白呈阳性表达。提示,复方丹参注射液可在体外诱导成年小鼠骨髓基质干细胞向神经细胞发育,是较为理想的诱导剂。     

骨髓间充质干细胞与软骨修复研究进展

随着细胞学、分子生物学等基础医学的飞速发展和应用，近年来干细胞研究取得了重大进展，并于1999年及2000年连续两次被美国科学杂志评为世界十大科学成果之一，已经成为生命科学领域研究的热点。     

陶瓷化骨对成人骨髓基质干细胞分化的影响

目的:观察陶瓷化骨时成人骨髓基质干细胞生长和分化的影响.方法:体外分离培养成人骨髓基质干细胞,将第二代细胞以陶瓷化骨为载体进行培养,利用倒置显微镜、碱性磷酸酶细胞化学染色、碱性磷酸酶活性检测等条件,了解陶瓷化骨对成人骨髓基质干细胞生物学行为的影响.结果:体外连续培养6d,倒置显微镜下可见成人骨髓基质干细胞与陶瓷化骨相容性好,材料周边细胞生长密集,并有向陶瓷化骨趋化迁移现象,3周后形成矿化结节.碱性磷酸酶染色呈阳性、碱性磷酸酶活性检测有明显的细胞分泌量.结论:体外培养条件下,陶瓷化骨可诱导成人骨髓基质干细胞向成骨和骨质细胞分化.     

未分化骨髓基质干细胞体外抑制淋巴细胞增殖反应的初步研究

目的:研究犬未分化骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)体外抑制淋巴细胞增殖的作用。方法:从犬骨髓组织中分离获取骨髓基质干细胞,体外培养至第二代,1×105细胞/孔BMSCs刺激异体淋巴细胞,观察淋巴细胞增殖情况。以植物血凝素(PHA,2ug/mL)刺激淋巴细胞后,分别以1×102～5细胞/孔数量的异体BMSCs加入反应体系中,观察淋巴细胞增殖抑制情况。分别以1×102～5细胞/孔数量的"第三者"BMSCs加入双向混合淋巴细胞反应体系中,观察淋巴细胞增殖抑制情况。通透性隔离腔培养的BMSCs加入双向混合淋巴细胞反应体系中,观察淋巴细胞增殖抑制情况。结果:BMSCs刺激同种异体淋巴细胞体外增殖作用不明显;BM-SCs可明显抑制PHA刺激的淋巴细胞增殖(P<0.05);"第三者"BMSCs可明显抑制双向混合淋巴细胞反应(P<0.05),抑制作用呈BMSCs细胞数量依赖性;隔离腔培养的BMSCs也可明显抑制双向混合淋巴细胞反应(P<0.05)。结论:犬未分化BMSCs在体外具有抑制淋巴细胞增殖的作用,具有一定的调节淋巴细胞反应的能力。     

龟鹿二仙胶抵抗化疗小鼠骨髓CD34^＋细胞凋亡的研究

目的：探讨滋阴益气补阳法（龟鹿二仙胶）对化疗小鼠骨髓CD34^＋造血干／祖细胞凋亡的影响。方法：小鼠采用腹腔注射环磷酰胺（CTX）造模，分组处理，9天后处死。流式细胞仪检测骨髓CD34^＋细胞凋亡；liT—PcR法检测其Cyt-C、bcl-2mRNA的表达。结果：CTX组FITC^＋／PI^-细胞比例较盐水组明显升高（P〈0．05）；而高、中、低3个剂量组及单纯中药组FITC^＋／PI^-细胞比例明显降低，与单纯CTX组比较，差异有显著性（P〈0．01）。单纯CTX组Cyt-CmlLNA表达较盐水组升高（P〈0．05），而中、低2个剂量组及单纯中药组表达较单纯CTX组降低（P〈0．05）；单纯CTX组bel-2mRNA表达较盐水组减少；而高、中、低3个剂量组及单纯中药组bel-2mRNA表达较单纯CTX组明显升高，差异有显著性（P〈0．01）。结论：滋阴益气补阳法组方的龟鹿二仙胶能有效抑制化疗小鼠骨髓CD34^＋造血干／祖细胞凋亡，上调bcl-2mRNA表达可能是其机理之一。     

佃氏舒筋精药酒抗炎、消肿作用的实验研究

通过测定小鼠不同炎症肿胀膜型的变化,探讨佃氏舒筋精的抗炎消肿作用。分别以二四苯诱发小鼠耳廓肿胀模型、甲醛致小鼠足肿模型、自由坠落物击打致肌肉组织损伤模型为观察对象,分别设立佃氏舒筋精高剂量组、低剂量组,相应的空白对照组、阳性药物对照组、模型对照组等不同组别进行对照观察。结果显示,佃氏舒筋精对二甲苯诱发的小鼠耳廓肿胀有明显的抑制作用(P<0.05),对甲醛所致的小鼠足肿有明显的抑制作用(P<0.05),对坠落物击打所致的肌肉组织的肿胀与炎症病理变化有明显的抗炎消肿效果,但对醋酸所致的小鼠腹腔毛细血管通透性增高无降低作用(P>0.05)。研究表明,佃氏舒筋精有良好的抗炎消肿作用,不同的剂量在病理表现中有一些差异。     

脱管散对兔肢体火器伤愈合的影响

目的:研究脱管散对火器伤愈合的影响.方法:健康新西兰大白兔20只,每只的双后肢配对分为用药组与对照组,95-式冲锋枪致伤造模,分别于致伤后第3、6、9、12天行弹道生物力学测试及羟脯氨酸含量测定,于各时间点处死5只,处死动物病理取材免疫组化染色测定TGF-β含量,对各时间点的弹道可扩张距离、羟脯氨酸含量、TGF-β含量进行配对t检验.结果:用药组弹道炎症反应轻于对照组,弹道收缩程度(等拉力条件下可扩张距离)、弹道周围软组织羟脯氨酸含量、TGF-β含量均较对照组有统计学差异.结论:中药组方脱管散对火器伤有一定的抗炎作用,能够促进弹道周围肉芽组织增生,提高弹道局部羟脯氨酸含量、TGF-β含量,加速愈合,是一种值得推广的弹道干预方法.     

寒痹康汤对实验性关节炎大鼠血清TNF—α的影响

目的：观察寒痹康汤对实验性关节炎大鼠的血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响，探讨其作用机理。方法：采用牛Ⅱ型胶原蛋白诱导实验性关节炎模型，以甲氨喋呤作对照，观察大鼠的关节肿胀指数的变化，采用放射免疫法检测各组大鼠血清TNF-α水平。结果：寒痹康汤能显著减轻大鼠关节肿胀指数、显著降低大鼠血清TNF-α水平（P〈0．05或P〈0．01），其作用优于甲氨喋呤（P〈0．05或P〈0．01）。结论：寒痹康汤能下调实验性关节炎大鼠血清TNF-α的水平，是其治疗类风湿关节炎的作用机理之一。     

复骨健步片对兔膝骨性关节炎软骨细胞凋亡的影响

目的：观察复骨健步片对兔膝骨性关节炎软骨细胞凋亡的影响，探讨其治疗膝骨性关节炎的机制。方法：将48只家兔随机分为4组，A为正常对照组，B为模型组，C为壮骨关节丸组，D为复骨健步片组，每组12只，B、C、D组造模成功后。A、B组予生理盐水，C组予壮骨关节丸，D组予复骨健步片。第2、4、6周每组各处死4只兔，取关节软骨观察细胞凋亡及计数。结果：第2周，C、D两组凋亡显著低于B组（P〈0．01），且两组间差异无统计学意义；第4、6周，B、C、D三组凋亡显著高于A组（P〈0．01），D组显著低于B、C组（P〈0．01）。结论：复骨健步片可以明显降低骨关节炎中软骨细胞的凋亡率，从而达到保护软骨细胞，延缓发病的目的。     

头部电针透穴疗法对帕金森病模型大鼠黑质神经干细胞增殖的影响

目的：探讨头部电针透穴疗法治疗帕金森病的作用机制。方法：以6-羟基多巴胺左侧纹状体微量注射法制备偏侧帕金森病大鼠旋转模型,采用头部电针透穴疗法进行治疗,设立正常组、假手术组、模型组和透针组：①以免疫组织化学方法检测酪氨酸羟化酶阳性细胞的形态、数量;②以RT-PCR技术检测神经干细胞巢蛋白mRNA的表达。结果：①透针组与模型组比较络氨酸羟化酶免疫反应阳性神经元在面密度、数密度及积分光密度方面表达增加（P〈0．05）;②透针组与模型组比较巢蛋白121RNA表达增加（P〈O．05）。结论：头部电针透穴疗法能促进帕金森病模型大鼠黑质内源性神经干细胞的增殖。     

《伤寒论》"心下"病证辨治探析

本文根据(《伤寒论》“心下”病证的有关条文内容，从痛、满、痞、硬、结、悸等6个方面予以详尽辨析，以示明“心下”病证轻重变化及遣方用药的特点，为“心下”病证辨治提供了可靠的依据，同时也丰富了中医腹诊的内容。     

骨刺痹痛丸对体外培养软骨细胞增殖的影响

为探讨骨刺痹痛丸含药血清对体外软骨细胞增殖的影响,取4周龄兔膝关节软骨分离、培养出软骨细胞后,接种于6孔和96孔板中,以A组空白兔血清培养,B组骨刺痹痛丸含药血清培养。分别进行细胞形态学、免疫组织化学的观察及以MTT法检测软骨细胞的活性和增殖能力。结果显示骨刺痹痛丸含药血清在第4~10天软骨细胞增殖加速,与同期对照组比较,具有显著统计学意义(P<0.05)。表明骨刺痹痛丸可促进软骨细胞增殖。     

补肾中药改善骨质疏松大鼠骨骼强度的作用机制

目的：评价补肾中药改善去卵巢大鼠骨强度的作用效果和机理。方法：将48只6月龄健康雌性sD大鼠随机分为假切除组、模型组、补肾方组和雷罗昔芬组。大鼠灌胃给药3个月后处死，观察股骨骨矿密度、生物力学指标、骨组织形态计量学指标和骨超微结构指标等的变化情况。结果：①模型组骨密度为（0．250±0．04）g·am_。，显著低于假切除组（0．302±0．03）g·cm^-2，补肾方组为（0．268±8．34）g·cm^-2。②模型组最大载荷（108．85±9．63）N，显著低于假切除组（121．07±8．34）N，补肾方组最大载荷为（122．91±8．72）N，与模型组比较有明显统计学差异。③补肾方能明显改善骨小梁面积、骨小梁厚度、骨小梁数目、骨小梁分离度和游离末端等形态计量学参数。④补肾方在一定程度上能保护骨结构。结论：补肾方能延缓骨结构的退变，有效改善去卵巢骨质疏松大鼠骨强度。