干细胞凝胶复合体加右归饮修复家兔软骨缺损的实验研究

为探讨右归饮对骨髓基质干细胞凝胶复合体修复兔关节软骨缺损的影响.取兔骨髓基质干细胞进行体外增殖后,复合于纤维蛋白凝胶,并加入细胞因子TGF-β与IGF-Ⅰ,植入到兔膝关节实验性关节软骨缺损,并以中药右归饮灌胃.4、8、12周后对修复组织进行形态学观察及组织学检查.结果术后12周,右归饮实验组的缺损由透明软骨样组织充填,软骨及软骨下骨组织基本修复,修复的软骨组织在组织形态学上优于对照组.表明骨髓基质干细胞 纤维蛋白凝胶 TGF-β、IGF-Ⅰ能修复家兔膝关节软骨缺损,中药右归饮能促进软骨的修复,且提高修复质量.     

补气活血方对多因素损伤老年痴呆大鼠血清β淀粉样蛋白及生长因子水平的影响

目的建立多因素损伤老年性痴呆（AD）大鼠模型，探讨补气活血方对AD大鼠血清β淀粉样蛋白（β-AP）、转化生长因子（TGF-α）及类胰岛素样生长因子Ⅱ（IGF-Ⅱ）水平的影响及其作用机理。方法采用腹腔注射D-半乳糖、氢溴酸东莨菪碱注射液（SCOP），喂饲A1C1，，喹啉酸（QA）海马区注射相结合的方法建立多因素损伤AD大鼠模型，随机分为正常组（A组）、假损伤组（B组）、模型组（C组）、补气活血方组（D组）、喜得镇组（E组）。D、E组分别灌胃给予补气活血方和喜得镇，A、B、C组给予等容积的生理盐水。治疗3周后，放免法观测大鼠血清β-AP、TGF-α及IGF-α水平变化。结果模型组大鼠血清β-AP、TGF-α及IGF-Ⅱ水平明显升高，经补气活血方和喜得镇治疗后，血清β-AP、TGF-α及IGF-Ⅱ水平明显降低。结论补气活血方可能通过调节TGF-α、IGF-Ⅱ的水平，影响β-AP生成，从而达到治疗AD作用。     

右归饮联合干细胞介入法对冷冻坏死股骨头血管修复的实验研究

目的：观察右归饮联合干细胞介入法对冷冻坏死股骨头的血管修复及疗效,探讨该方法在治疗冷冻坏死股骨头的作用机理。方法：毕格犬24只,随机分为4组：A组（模型组）、B组（右归饮组）、C组（干细胞介入组）、D组（干细胞介入加右归饮组）。液氮冷冻法造模;分离、培养、增殖骨髓基质干细胞（MSCs）;造模完成,C、D组行动脉灌注MSCs 1mL（细胞密度：5×10^6-1×10^7/mL）;术后,B、D组每天予以右归饮100mL;治疗4周及8周后分批处死。采用DSA、病理学,免疫组织化学和RT-PCR观察股骨头坏死修复、血管修复及VEGF、TGF-β表达情况。结果：DSA观察：D组的血管数量及直径较C组明显改善（P〈0.01）;组织病理学及免疫组织化学：各治疗组较A组的结构有明显改善,D组较其他各组的VEGF、TGF-β阳性表达率都明显增高（P〈0.01）;RT-PCR：D组VEGF、TGF-β较其他各组表达量增多（P〈0.01,P〈0.05）,各治疗组的表达都高于A组（P〈0.01）。讨论：右归饮联合干细胞介入法能够促进VEGF、TGF-β的表达增强,能够有效地改善坏死股骨头的血供,促进坏死修复。     

中药活脑康对脑缺血大鼠脑组织TGF-β1蛋白表达影响的实验研究

目的：探讨脑缺血大鼠脑组织TGF-β1的变化及中药活脑康的保护作用。方法：应用免疫组化方法，测定正常对照组（A）、假手术组（B）、模型组（C）、活脑康治疗组（D）、步长脑心通组（E）对TGF-β1表达的影响。结果：与A、B组比较，C、D、E组TGF-β1表达增多（P〈0．001）。结论：活脑康能提高TGF-β1蛋白表达，减少脑缺血区细胞凋亡的发生。     

温肾阳方及其拆方通过TGF-β信号通路促进小鼠肢芽干细胞增殖与分化

目的?探讨温肾阳方及方中单味中药骨碎补、淫羊藿是否通过TGF-β信号通路促进小鼠肢芽干细胞增殖与分化。方法?分别采用温肾阳方（0.42 g生药/mL）、骨碎补（0.09 g生药/mL）及淫羊藿（0.09 g生药/mL）煎剂和等体积生理盐水给大鼠灌胃，制备含药血清，分离孕12.5天小鼠肢芽干细胞进行微团培养，含药血清干预后，CCK-8法检测肢芽干细胞增殖能力，阿尔新蓝染色检测软骨分化能力，IPP软件统计软骨球个数及面积，Real-time PCR法检测Col2a1及Aggrecan表达水平。采用293T细胞，脂质体转染TGF-β信号通路报告基因4×SBE，荧光素酶实验分析各组对TGF-β信号通路的调节作用。采用TGF-β信号通路抑制剂SB431542抑制肢芽干细胞中TGF-β信号通路，进行阿尔新蓝染色及软骨细胞外基质检测。结果?与空白组比较，温肾阳方、淫羊藿、骨碎补组干预48 h和72 h后小鼠肢芽干细胞增殖均增强（P<0.01，P<0.05）。阿尔新蓝染色显示，温肾阳方、淫羊藿、骨碎补组软骨球个数及面积增加（P<0.05），软骨细胞基质Col2a1及Aggrecan的表达增强（P<0.01）。荧光素酶实验发现，与空白组比较，各中药组TGF-β信号通路活性上调（P<0.01，P<0.05）。加入TGF-β信号通路抑制剂SB431542后，与空白组比较，抑制剂组软骨球个数及面积均明显减少（P<0.01）；而温肾阳方、淫羊藿、骨碎补组软骨生成抑制显著缓解（P<0.05），但与空白组比较，软骨球个数及面积仍明显减少（P<0.01，P<0.05），Col2a1及Aggrecan水平也有相似的变化趋势（P<0.01）。结论?温肾阳方及温肾阳药骨碎补、淫羊藿可以部分通过TGF-β信号通路促进小鼠肢芽干细胞增殖与分化。     

温针灸对膝骨关节炎兔膝关节软骨转化生长因子β1和胰岛素生长因子Ⅰ水平的影响

目的:观察温针灸对膝骨关节炎(KOA)家兔膝关节软骨转化生长因子β1(TGF-β1)和胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)的影响,探讨温针灸治疗KOA的作用机制。方法:30只日本大耳白兔随机分为正常组、模型组、温针灸组,采用膝关节机械制动法制备KOA模型。温针灸组取患侧内外"膝眼""阳陵泉""血海",温针灸刺激干预4周,每天1次,每次30min。4周后,采用放射免疫分析法测定各组家兔膝关节软骨TGF-β1和IGF-Ⅰ水平,HE染色后光镜下观察膝关节软骨病理形态学变化。结果:模型组兔膝关节软骨细胞TGF-β1、IGF-Ⅰ明显高于正常组(均P0.05);温针灸组膝关节软骨TGF-β1、IGF-Ⅰ表达水平较模型组显著降低(均P0.05)。HE染色结果显示,温针灸组关节软骨中软骨细胞表面较模型组光整,无簇集。结论:温针灸能通过调节KOA膝关节软骨TGF-β1和IGF-Ⅰ的水平,促进关节软骨的修复,缓解并改善膝关节局部炎性症状,起到治疗KOA的作用。     

基于ERK/TGF-β1/Smad4信号通路探讨章氏接骨丹含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化调控的影响

目的 基于ERK/TGF-β1/Smad4信号通路探讨章氏接骨丹含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化调控的影响。方法 取3月龄SPF级雌雄各半SD大鼠40只，随机分为药物组与蒸馏水组各20只，药物组按2.7 mL/（kg·d）灌服生药量浓度为1.554 g/mL接骨丹药液，蒸馏水组以等剂量蒸馏水灌胃，2组每日早晚各灌胃1次，灌胃7 d后取大鼠腹主动脉血制备接骨丹含药血清和空白血清。取2月龄SD大鼠双侧股骨和胫骨的骨髓液培养传代至第4代制备骨髓间充质干细胞模型，随机分为空白组、模型组、接骨丹组、抑制剂组，选用细胞外调节蛋白激酶（ERK）抑制剂对ERK通路进行抑制。空白组采用10%空白血清+α-MEM培养液进行培养；模型组采用10%空白血清+α-MEM培养液+ERK抑制剂进行培养；接骨丹组采用10%接骨丹含药血清+α-MEM培养液进行培养；抑制剂组采用10%接骨丹含药血清+α-MEM培养液+ERK抑制剂进行培养。4组均培养9 d后分别检测4组碱性磷酸酶（ALP）浓度，采用免疫荧光法测定Ⅰ型胶原（COLI）表达水平，采用qPCR法检测COLI、转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad4...     

益气化瘀补肾方联合TGF-β1诱导大鼠BMSCs向类髓核细胞分化的研究

目的:观察中药益气化瘀补肾方含药血清联合转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)向类髓核细胞分化的效果,探讨益气化瘀补肾方在协同诱导、调节分化方面的作用。方法:取成年大鼠股骨骨髓,贴壁培养法获得原代BMSCs,体外培养、分离及纯化。取第3代大鼠BMSCs,分为空白对照组(A组)、单纯中药含药血清诱导组(B组)、单纯TGF-β1诱导组(C组)以及中药含药血清联合TGF-β1诱导组(D组)。A组加入含10%胎牛血清(FBS)的L-DMEM培养基继续培养,B组为含10%益气化瘀补肾方含药血清的L-DMEM培养基,C组为含10μg/L TGF-β1的LDMEM培养基,D组为含10%益气化瘀补肾方含药血清及10μg/L TGF-β1的L-DMEM培养基。连续培养3、7、14、21 d,采用倒置相差显微镜进行细胞形态学观察,使用Alcian Blue染色检测蛋白多糖表达情况,免疫组化法检测Ⅱ型胶原表达情况,使用RT-PCR方法检测蛋白多糖及Ⅱ型胶原m RNA表达情况。结果:培养3 d时,仅有D组可检出蛋白多糖和Ⅱ型胶原表达。培养至第14天时,D组蛋白多糖、Ⅱ型胶原及其m RNA水平明显高于其它实验组(P0.05)。结论:TGF-β1可以诱导大鼠BMSCs向类髓核细胞分化,联合中药益气化瘀补肾方含药血清能进一步提高诱导分化的效率,揭示了中药在干细胞组织工程领域的潜在作用。     

右归饮联合经tgf-β1转染骨髓间充质干细胞用于修复大鼠软骨组织的机制研究

目的:探究右归饮联合经转化生长因子-β (TGF-β1)转染骨髓间充质干细胞用于修复大鼠软骨组织的效果.方法:选取40只SD大鼠,采用手术钻孔的方法将大鼠制成软骨组织损伤模型;采用随机数字表法分为4组,每组10只,其中A组为空白组,仅仅制成软骨组织损伤模型不作任何处理;B组为单纯右归饮组采用右归饮灌胃;C组为单纯复合体...     

抗纤灵药物血清对骨髓来源的成纤维细胞转化生长因子-β和Ⅰ型胶原的抑制作用

目的观察抗纤灵药物血清对骨髓来源的成纤维细胞转化生长因子-β（TGF-β）和Ⅰ型胶原（collagenⅠ）的抑制作用。方法将抗纤灵方煎至含原药材3.2 g/mL,福辛普利配成含药0.33 mg/mL,给大鼠灌胃（正常组给予蒸馏水灌胃）,制备抗纤灵血清、福辛普利血清和正常血清。用DMEM培养基稀释血清,将其分为正常血清组、福辛普利组、抗纤灵组、TGF-β1组、TGF-β1＋福辛普利组和TGF-β1＋抗纤灵组。以大鼠肾组织体外培养骨髓来源的成纤维细胞为材料,采用酶联免疫吸附法和实时荧光定量PCR法检测骨髓来源的成纤维细胞collagenⅠ和TGF-β的表达。结果加入TGF-β1刺激因子的细胞表达TGF-β和CollagenⅠ较正常大鼠血清组明显增强,抗纤灵及福辛普利药物血清可明显抑制其表达。结论抗纤灵药物血清可以通过抑制骨髓来源的成纤维细胞TGF-β的表达,减少细胞外基质collagenⅠ的沉积,从而延缓肾纤维化的进程。