多重连接依赖的探针扩增(MLPA)技术在广州地区RhD阴性献血者基因分型研究中的应用

目的 采用新型Rh血型系统的MLPA检测试剂盒,对广州地区收集的200名RhD阴性献血者进行基因分型.方法 采用传统的血型血清学方法,对RhD阴性献血者进行RhD表型鉴定.提取基因组DNA,采用MLPA检测试剂盒对收集的200名RhD阴性献血者进行RHD基因分型.对于不能明确分型的标本,进行RHD基因直接测序分析.结果 在200名RhD阴性献血者中,采用MLPA方法对196名进行了明确的基因分型.其中,127名为RHD基因缺失(占63.5％);仅检测到包含RHD1227A突变的DEL等位基因有41例,其中38例包含杂合等位基因,其余3例包含纯合等位基因;仅检测到RHD (1-2)-CE (3-9)-D (10)等位基因的有23例,其中19例杂合,4例纯合;3例包含2种不同的RHD等位基因(1条为RHD (1-2)-CE (3-9)-D (10),另1条为RHD1227A);其余2例分别包含杂合的DFR-2(RHD-CE(4) -D)及弱D15型(RHD845A)等位基因.在其余4例直接测序分析的标本中,2例包含杂合的RHD711 delC突变;1例1条等位基因为MLPA检测到的包含RHD1227A突变的DEL等位基因,另1条为包含711delC突变的RHD等位基因;其余1例的1条等位基因为MLPA检测到的RHD (1-2)-CE (3-9)-D (10),另1条为包含新突变的RHD等位基因(1154G ＞T,385Gly＞ Val).结论 MLPA检测试剂盒是适用于中国人群的1种快速、有效的高通量基因分型方法,能够对中国人群常见的各种RHD基因型进行明确分型,适用于参比实验室相关疑难标本的基因分型检测.也可应用于中国人群常见的Del表型检测,使Del表型患者不必再输注RhD阴性血液,节约稀有的RhD阴性血液资源.     

菏泽市自愿无偿献血人群ABO、RhD(-)血型调查研究

目的 观察研究菏泽市ABO、RhD(-)血型分布特征。结果 24286例首次自愿无偿献血者ABO血型分布大致为A型占0.2659,B型占0.3235,O型占0.3271,AB型占0.0835;检出稀有B亚型3例,抗-M抗体两例;检出RhD(-)血型献血者102名,阴性率为0.42％,抗体筛选均阴性。结论 菏泽市ABO、RhD(-)血型人群分布与相关文献报道的比例有一定差异,RhD(-)血型自愿无偿献血者检测结果与相关文献基本一致。     

RhD阴性献血者RhD弱抗原变异体的发生频率

目的了解RhD阴性献血者RhD弱抗原变异体的发生频率,为提高输血安全性提供理论依据。方法首先采用盐水试管法对初筛为RhD阴性的血样进行RhD表型鉴定;然后采用间接抗球蛋白试验筛查Partial D和Weak D,最后用吸收放散试验从间接抗球蛋白试验确认阴性的血样中筛选并确认DEL型。结果 RhD阴性献血者中最多的Rh表型为dccee,其次为dCcee,分别为57.34%（207/361）和32.13%（116/361）。共筛查出Partial D和Weak D 19例,总检出率为5.26%（19/361）,其中dccEe 8例（2.22%）、dCcee 5例（1.39%）、dCCee 4例（1.11%）、dccee和dCcEe各1例（0.28%）。共确认DEL型87例,总检出率为24.10%（87/361）,其中dCcee 72例（19.94%）、dCCee 8例（2.22%）和dccEe 7例（1.94%）。结论 RhD阴性献血者RhD弱抗原变异体发生频率较高。常规血清学检测Rh阴性的供血者,应进一步排除RhD弱抗原变异体,以保障临床输血安全。     

四川部分地区汉族献血者RhD阴性个体RHD基因多态性研究

目的了解四川部分地区汉族献血者中RhD阴性个体的基因多态性。方法用PCR-SSP及基因序列测定技术对经间接抗球蛋白试验(IAT)、吸收放散试验检测RhD均为阴性的标本分型。结果 69例RhD真正阴性的标本中,包括RHD基因完全缺失个体54例、13例携带RHD-CE(2-9)-D等位基因、1例携带RHD-CE(8-9)-D等位基因、1例携带RHD(711delC)等位基因。结论四川部分地区汉族献血者RhD阴性个体分子机制具有丰富的多态性和不同的遗传背景,主要为RHD全缺失为主,其次为RHD-CE(2-9)-D型,并存在其他稀有的基因型。     

RhD（-）非血缘献血者Del的检测分析及检测方法的探讨

本研究旨在分析RhD（-）非血缘献血者中Del的检测,采用血清学方法初筛RhD,用间接抗人球蛋白试验（IAT）确认RhD（-）,应用热-乙醚吸收放散法检测Del。结果表明：在38526名健康无偿献血者中,常规血清学方法初筛和IAT试验确认RhD（-）者为106人,热-乙醚吸收放散试验确认Del型者28例,在RhD（-）中的比例为26．41％,Del中各表型的频率分别是Ccee22例,占78．57％,CCee4例,占14．29％,CcEe2例,占7．14％。结论：用热一乙醚吸收放散实验检测Del对合理运用Rh阴性血源具有重要意义,本地区人群的Del表型频率与中国不同区域人群及日本人群Del表型频率有差异。     

33名RhD(-)无关献血者中Del的检测分析

Rh血型系统是较复杂的血型系统,最近,有研究表明黄种人与白种人RhD(-)个体不完全相同,一些RhD(-)个体用吸收放散的方法仍能检测到D抗原,称之为D洗脱阳性(Del)[1].笔者对本站10382名献血者进行了D抗原检测和Del筛查,并追踪供血史,调查RhD阴性患者输用Del血后的情况.     

河南省造血干细胞资料库汉族捐献者HLA基因多态性调查

目的了解河南造血干细胞资料库捐献者人类白胞抗原HLAA、B、DRB1等位基因多态性。方法按《中国造血干细胞捐献者资料库,组织配型实验室规程》(以下简称规程)的要求,采用国际通用的序列特异性引物聚合酶链反应(PCRSSP),检测1626名造血干细胞捐献者的部分等位基因,计算各等位基因的频率,分析并与国内外不同地区汉族人群的调查结果对比。结果检出HLAA等位基因17个,基因频率较高的有A2/0.2947、A11/0.1593、A24/0.1544、A33/0.1193;B位点共检出等位基因41个,高频基因为B13/0.1004、B51/0.0791、B46/0.0632、B40(60)/0.0741、B40(61)/0.0629、B35(0.0510)、B15/62(0.0694);DRB1高频基因为DR07/0.1377、DR04/0.1076、DR09/0.1270、DR12/0.1038、DR15/0.1715;未检出的等位基因有A36、A74、B4005、B15/70、B82。结论河南造血干细胞库汉族HLA基因多态性分布符合其种族、地区特点。     

山东汉族RhD阴性个体基因多态性研究

目的研究山东汉族人群RhD阴性个体RhD基因多态性。方法采用标准血清学方法和抗球蛋白实验筛选Rh阴性个体;对Rh阴性个体再用吸收放散实验确定DEL型。运用多重聚合酶链反应（PCR）方法分析RhD阴性个体基因存在情况。结果67例Rh阴性个体中DEL型16例,占Rh阴性个体的23．88％,其6个RhD基因特异性的第3、4、5、6、7、9外显子全部存在;剩下51例Rh阴性个体中1例缺失第5外显子,其余50例6个外显子全部缺失。结论山东汉族人群RhD阴性个体中存在一定比例的DEL型,且所有DEL样本均具有完整的RhD基因,在排除DEL型后的RhD阴性个体可能携带RhD基因,但其比例较低。     

呼和浩特地区 RhD 阴性献血者表型库的建立及应用

目的：了解该地区 RhD 阴性献血者表型分布,建立 RhD 阴性表型数据库。方法 RhD 初筛阴性的554份标本采用间接抗球蛋白试验确认。排除重复献血者后,剩余标本为366份,对其进行 Rh 血型表型分析。结果 RhD 阴性表型分布特征为ccdee（56．28％）＞ Ccdee （29．51％）＞ ccdEe （7．38％）＞ CcdEe （3．55％）＞ CCdee （3．01％）＞ ccdEE （0．27％）,未检出 CcdEE 、CCdEe 、CCdEE 型。结论建立 RhD 阴性表型数据库,有利于为 RhD 阴性及含有 Rh 同种抗体的患者提供相匹配血液,满足其急救用血,且对科学管理 RhD 阴性血源和合理运用 RhD 阴性血液有重要意义,为该地区尤其蒙古族 RhD 阴性血型积累了资料。     

山东汉族RhD阴性个体基因多态性研究

目的研究山东汉族人群RhD阴性个体RhD基因多态性。方法采用标准血清学方法和抗球蛋白实验筛选Rh阴性个体;对Rh阴性个体再用吸收放散实验确定DEL型。运用多重聚合酶链反应(PCR)方法分析RhD阴性个体基因存在情况。结果67例Rh阴性个体中DEL型16例,占Rh阴性个体的23.88%,其6个RhD基因特异性的第3、4、5、6、7、9外显子全部存在;剩下51例Rh阴性个体中1例缺失第5外显子,其余50例6个外显子全部缺失。结论山东汉族人群RhD阴性个体中存在一定比例的DEL型,且所有DEL样本均具有完整的RhD基因,在排除DEL型后的RhD阴性个体可能携带RhD基因,但其比例较低。     

临沂地区RhD初筛阴性献血人群分子遗传背景研究

目的通过对临沂地区RhD初筛阴性献血者的研究,了解其分子遗传背景。方法 2011年1月～10月采集无重复54 458人份全血,其中盐水法初筛RhD阴性标本241份。对初筛RhD阴性标本运用本室建立的SSP-PCR作基因检测分型,并对未确定型别携带RHD的标本进行基因测序。结果临沂地区献血人群中RhD阴性比例为0.44%,241例初筛RhD阴性标本检测到1～10外显子全缺失169例,2～9外显子缺失22例,1227GA突变38例,845GA突变5例,3～6外显子缺失5例,RHD(711DelC)1例,DVa(Hus)1例。分子生物学试验确定的Del型共38例,占初筛RhD阴性的15.77%(38/241)。结论临沂地区RhD初筛阴性献血人群中RHD基因存在多态性,其中RHD1227A等位基因为临沂地区Del型的遗传标志性基因。     

潍坊地区329例RhD(-)者Rh表现型、MN、P血型抗原分布

目的探讨潍坊地区RhD阴性献血者Rh表现型、MN及P血型分布特点。方法采用血清学凝集方法对329名RhD阴性献血者的Rh表现型、MN及P血型进行分型。结果Rh表现型:ccdee占58.06%,Ccdee占27.36%,ccdEe占7.6%,CcdEe占3.04%,CCdee占2.43%,ccdEE占0.91%,CCdEe占0.30%,CcdEE占0.30%;MN血:M占22.49%,N占26.45%MN占51.06%;P血型:P1占41.3%,P2占58.7%。结论摸清了潍坊地区RhD阴性献血者红细胞血型分布特点,建立了稀有血型管理档案,为Rh阴性患者储备了宝贵的血液。     

成都地区献血人群RhD阴性个体遗传学背景研究

目的 RhD阴性存在多种变异体,通过研究成都地区RhD阴性献血者,了解其遗传背景。方法 2009年6—11月采集的74947人份全血中获得盐水法初筛阴性标本318例,采用间接抗球蛋白试验(IAT)筛选部分D和弱D,对IAT阴性的标本采用吸收放散试验,筛查Del型,采用序列特异性引物PCR(PCR-SSP)检测各种变异D基因型。检测的Del等位基因包括RHD(M285)、RHD(IVS3+1)、RHD(IVS1+1)、RHD(1227A)、RHD(DelEX9)、RHD(M1I)、RHD(R10W)、RHD(L84P)。吸收放散试验阳性标本使用DelDNA分型试剂盒筛查,未分出型别的标本检测RHD基因1—7和9—10外显子,并对检测到的各种变异D以及疑难标本进行测序分析。结果 318份盐水法初筛阴性标本中检出IAT阳性标本3例,弱D152例,部分D(RhDⅥⅢ)1例。成都地区献血人群中RhD阴性比例为0.42%,表型dccee(56.19%)和dCcee(32.06%)比例高。对可获得的303例IAT阴性标本进行微量吸收放散试验,发现阳性71例。通过DelDNA分型试剂盒检测,RHD(1227A)型57例、RHD(M1I)型1例、无法确定为已知的Del型13例。无法确定的13例标本通过检测RHD基因1—7和9—10外显子,发现11例部分或全部缺失上述外显子,2例含有完整的RHD基因。34例吸收放散阴性含有C或E抗原标本,经检测RHD基因1—7和9—10外显子及1227A,发现RHD(1227A)型9例、部分或全部缺失型25例。血清学试验和分子生物学试验确定的Del型共69例,占IAT筛查RhD阴性的22.77%(69/303)。结论成都地区常规血清学筛查RhD阴性献血人群中RHD基因存在多态性,RHD1227A等位基因是Del型的主要基因类型。吸收放散试验检测Del准确率偏低。     

Detection of RhD(el) in RhD-negative persons in clinical laboratory

The Rhesus (Rh) blood group is the most polymorphic human blood group system, and it is clinically significant in transfusion medicine. About 15% of Caucasoid people are RhD-negative, whereas in the Asian population, the RhD-negative blood type only occurs in 0.1% to 0.5%. However, approximately 30% of apparently RhD-negative Taiwanese people actually were RhD(el). Traditionally, we verify RhD(el) by a serologically adsorption-elution procedure with polyclonal anti-D. In our recent report, RhC phenotype is highly associated with RhD(el), and RHD1227A is a useful genetic marker for RhD(el). For setting up a rapid protocol to detect RhD(el) in clinical laboratory, a total number of 395 Taiwanese serological RhD-negative blood samples, those with RhC (+) phenotypes as selected by serological tests, were further screened by adsorption/elution tests and RHD1227A allele by specific sequence primer-polymerase chain reaction (SSP-PCR) for RhD(el). Among 395 blood samples collected from RhD-negative subjects, the incidence of RhC (+) was 43% (171/395). One hundred and twenty six of the 171 RhC (+) samples were positive for both adsorption/elution for RhD detection and SSP-PCR assay for RHD1227A. The sensitivity and specificity were 96.9% and 97.5%, respectively, for RHD1227A detection as compared with the traditional adsorption/elution test. Our results also indicated that RHD1227A was highly linked to Ce haplotypes (95.2%). In conclusion, combined RhC (+) phenotyping and RHD1227A analysis can be a simple and accurate laboratory screening protocol for RhD(el) detection in RhD-negative population.     

两步法分析RhD阴性及D变异体分子机制(附1例新等位基因的发现)

目的建立用于RhD阴性及RhD变异体大标本量的快速准确的筛查方法。方法采用血清学常规试管法初筛后,对初筛阴性标本以序列特异性引物多聚酶链反应(SSP-PCR)作两步法(第一步检测出阴性,Del1227突变,以及其他变异体;第二步检定出其他变异体的具体类型)基因检测分型,并用INNO-TRAIN试剂盒作检测结果的比较,对有突变位点的变异体进行基因测序。结果在235例初筛RhD阴性标本中,检测到1~10外显子全缺失137例,2~9外显子缺失20例,1 227G>A突变63例,845G>A突变4例,3~6外显子缺失2例,3G>A突变1例,8~9外显子缺失1例,首次发现1例3~10外显子缺失;INNO-TRAIN试剂检测及基因测序结果与之完全符合。结论所建立的两步法基因检测分型,方法经济实用、简洁可靠,适用于大标本量筛查RhD阴性及D变异体。     

RhD初筛阴性孕产妇RHD基因表型相关研究

目的研究不同RhD基因型与抗-D产生的相关性,以发现与产生抗-D及能引起Rh血型新生儿溶血病(HDN)相关的D基因表型。方法应用血清学方法结合分子生物学(PCR-SSP)技术。结果 RhD初筛阴性样本128例,再行RhD阴性确认试验,有3例样本阳性,为D变异型。根据分子生物学结果表明缺失RHD基因104例;DEL型21例;弱D15型2例;DⅥ型Ⅲ型1例。结论应对RhD抗原初筛试验阴性的个体进一步鉴定RHD基因型,以预测与评估产生抗-D的可能性,从而对孕产妇进行孕期指导、监测及产后干预。     

长春地区RhD（-）基因型分析

目的研究长春地区献血者RhD（-）基因型。方法 60名经间接抗人球方法确认的RhD阴性血样用序列特异性引物PCR（PCR-SSP）检测弱D15、DVI Ⅲ型、RHD-CE（2-9）-D和1227DEL的等位基因。结果经间接抗人球蛋白试验检出RhD（-）血液样本60例,通过PCR-SSP对这60例RhD（-）血液标本进行基因分型,检出DVIⅢ型1例、弱D15型5例1、227DEL 7例、RHD-CE（2-9）-D 9例和RHD基因缺失38例。其中1227DEL约占11.67%,长春与上海、新疆、日本等地区的1227DEL血液所占阴性血液的比率没有显著差异（P〉0.05）;RHD-CE（2-9）-D约占15%,与国内RHD-CE（2-9）-D所占阴性血液的比率没有显著差异（P〉0.05）;RHD基因完全缺失约占63.33%与云南等地区其所占阴性血液比率亦没有显著差异（P〉0.05）。结论 PCR-SSP方法是一种检测弱D、部分D和DEL表型的有效方法。间接抗人球蛋白实验和PCR-SSP方法结合检测弱D15、DVIⅢ型、RHD-CE（2-9）-D和1227DEL血型,有助于避免RhD血型的假阴性。     

中国汉族Rh(-)个体D基因完整者与C基因的关联调查

目的观察中国汉族非血缘关系随机个体和家系的Rh阴性D基因完整者与C基因间的关系。方法用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)扩增技术,扩增Rh血型C/E基因,D基因的外显子,检测192例RhD阳性个体,166例RhD阴性个体的血样品。结果192例RhD阳性个体,均有D基因8个外显子。在166例RhD阴性个体中,100例有ce/ce或ce/cE基因型的个体RHD外显子阴性;66例有Ce/Ce或Ce/ce基因型的个体中,34例RHD外显子完整,19例RHD外显子部分完整,13例RHD外显子阴性。结论中国人RhD阴性个体D基因完整者与C基因间可能存在联系,其在中国各民族、各地区Rh阴性个体中的发生频率和机制有待于进一步调查。     

辽南地区39名RhD(-)汉族无关供血者中RH基因检测

笔者采用PCR-SSP和血清学方法,对比分析辽南地区汉族人中Rh血型的基因构成. 1 材料与方法 1.1 血标本来源随机选取39名本血液中心注册且祖居辽南地区的RhD(-)汉族献血者血样.