电针对大脑中动脉梗塞大鼠EphrinB2/EphB2信号通路上突触重塑相关因子的影响

目的:观察电针对大脑中动脉梗塞模型(MCAO)大鼠促红细胞生成素产生肝细胞配体-B2(erythropoietin-producing hepatocyte receptor interacting protein-B2,Ephrin B2)/受体-B2(erythropoietin-producing hepatocyte receptor-B2,Eph B2)信号通路上突触重塑相关因子表达的影响,以期揭示针刺治疗脑缺血的可能机制。方法:120只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、穴位组、非穴位组(n=30);各组再分为术后3d,14d及21d三个亚组(n=10)。除假手术组外,其余各组大鼠用Zea-longa线栓法制备MCAO模型;穴位组和非穴组电针治疗,其余两组只绑不针。对大鼠行神经功能评分,采用免疫组化、免疫荧光和蛋白质印迹法行相应指标检测。结果:模型组术后3d梗死灶周Ephrin B2/Eph B2表达明显减少,但随时间呈递增趋势,21d恢复到假手术水平。穴位组较模型组和非穴组增加更明显,术后21d表达高于假手术组(P0.05)。Ras相关的C3肉毒毒素底物1(ras-related C3 botulinum toxin substrate-1,Rac-1)和微管相关蛋白-2(microtubule-associated protein-2,MAP-2)的表达随时间逐渐递增,且均与神经功能改善相吻合;其中穴位组增加最明显,术后21d超假手术组水平(P0.05)。结论:Ephrin B2/Eph B2信号通路参与了MCAO大鼠突触重塑,电针肝俞、肾俞穴可能通过激活Ephrin B2/Eph B2信号通路,促进MCAO大鼠神经功能的康复。     

曲马多抑制大鼠神经病理性痛和脊髓背角NR2B表达

目的:研究曲马多对神经病理性痛(neuropathic pain,NP)大鼠的镇痛作用及对脊髓背角N-甲基-D-天门冬氨酸(N-Methyl-D-Aspartate,NMDA)受体NR2B亚基表达的影响.方法:雄性wistar大鼠,随机分为3组(每组10只):假手术组(Sham operation,SO组)、NP模型组(NP组)、曲马多处理组(Tramadol组,T组).NP模型采用慢性坐骨神经压迫损伤的方法制作.各组大鼠分别于术前和术后3、7、10、14d测术侧后爪机械缩足阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)和热缩足潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL).T组于术后3d开始腹腔注射曲马多注射液(20 mg/kg),术后14d取大鼠脊髓背角用免疫荧光法与RT-PCR方法检测NR2B蛋白和mRNA表达水平.结果:与SO组比较,NP组术后痛阈明显降低,NR2B表达水平明显升高(P＜ 0.05).与NP组比较,T组术后痛阈升高,NR2B表达水平明显降低(P＜0.05).T组和SO组比较,痛阈和NR2B表达水平差异无统计学意义.结论:曲马多可反转NP模型脊髓背角的NR2B表达上调并具有镇痛作用.     

电针对慢性压迫性损伤大鼠脊髓N-甲基-D-天门冬氨酸受体NR2B表达的影响

目的:观察电针对慢性压迫性损伤(CCI)大鼠脊髓N-甲基-D-天门冬氨酸受体NR2B表达的影响,分析电针(EA)累积性镇痛效应可能的作用机制。方法:将50只Wistar大鼠随机分为正常对照组、CCI模型组、EA3次组、EA5次组、EA10次组,每组10只。对照组大鼠行假手术,其余4组结扎坐骨神经造成CCI疼痛模型。手术后一周开始测定大鼠双侧缩腿的潜伏期(PWL)。EA3次组于CCI术后第14天电针双侧"足三里"-"阳陵泉"连续3d,EA5次组于CCI术后第12天电针双侧"足三里"-"阳陵泉"连续5d,EA10次组于CCI术后第7天电针双侧"足三里"-"阳陵泉"连续10d,每天1次。电针结束后用RT-PCR和Western blot法检测脊髓NMDA受体NR2B表达的情况。结果:与对照组比较,CCI后各组动物出现明显的痛觉过敏(P0.01)。EA5次后动物的痛觉过敏有明显减轻。EA10次后动物的痛觉过敏进一步减轻。CCI后第18天大鼠脊髓NMDA受体NR2B亚基mRNA和蛋白表达水平明显增加,与CCI组,EA5次组和EA10次组比较NMDA受体NR2B亚基mRNA和蛋白表达水平明显下降(P0.05)。结论:NR2B表达上调可能是神经损伤后出现慢性疼痛的发病机制之一,电针有可能通过抑制其表达从而发挥一定程度镇痛作用。     

大鼠蛛网膜下腔出血后NR2B在脑组织中的表达

目的观察大鼠蛛网膜下腔出血（subarachnoidhemorrhage,SAH）后N-甲基-D-天门冬氨酸受体亚单位NR2B在脑组织中的表达变化。方法42只成年健康雄性SD大鼠,随机分为正常组、对照组及SAH后1d（D1）、3d（D3）、5d（D5）、7d（D7）、14d（D14）共7组,各6只。SAH模型制作：经大鼠自体尾动脉（股动脉）非肝素化动脉血注入视交叉池,分别在蛛网膜下腔出血后1、3、5、7、14d处死,取大脑皮层、海马、小脑做标本,Western blot及免疫组化测定NR2B。结果对照组与正常组相比差异无统计学意义;SAH后1d组NR2B蛋白水平明显降低（P〈0．01）,SAH后3、5、7d组NR2B蛋白水平降低（P〈0．05）,SAH后14d组NR2B蛋白水平与正常组相比差异无统计学意义。结论NR2B在SAH后24h明显下降,之后逐渐上升,至14d时基本恢复正常。     

行为训练对大鼠海马梗死灶周围及颞叶皮层NR2B表达的影响

目的研究行为训练对双侧海马梗死大鼠梗死灶周围及颞叶皮层N-甲基-D天门冬氨酸（NMDA）受体2B亚单位（NR2B）表达的影响。方法将54只大鼠随机分为行为训练前、训练7d、14d、21d组；制动前、制动7d、14d、21d组及正常对照组。于造模3d后开始分别给予行为训练或制动，观察不同时间点各组大鼠海马梗死灶周围及颞叶皮层NR2B的表达。结果正常大鼠海马及颞叶皮层内均有NR2B的丰富表达，造模后明显下降，给予行为训练后逐渐增高，较制动组有非常显著性差异（P〈0．01）。结论行为训练能促进海马梗死大鼠梗死灶周围及颞叶皮层内NR2B的表达。     

海洛因成瘾对大鼠海马CA3区NR1、NR2A亚基表达的影响

目的 观察海洛因依赖大鼠海马CA3区NMDA受体NR1、NR2A亚基的表达。方法 将40只SD大鼠随机分成海洛因依赖组、海洛因+MK801组、海洛因戒断组及对照组,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术半定量检测海马NMDA受体NR1、NR2A亚基mRNA的表达。结果 与对照组比较,海洛因依赖组、海洛因戒断组和海洛因+MK801组的NR1表达明显升高(P<0.05),且海洛因依赖组NR1的表达明显高于海洛因戒断组和海洛因+MK801组,海洛因戒断组与海洛因+MK801组的NR1表达差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,海洛因+MK801组NR2A的表达降低(P<0.05),海洛因戒断组NR2A表达升高(P<0.05),依赖组NR2A的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 海洛因依赖可使大鼠海马CA3区NR1的表达明显上调。海洛因戒断的大鼠海马CA3区NR2A表达上调,使用MK801干预的大鼠海马CA3区NR2A表达下调。     

孤儿核受体NR4A1通过NF-κB/COX-2对氧化应激诱导的血栓形成的保护作用及机制研究

目的 分析孤儿核受体NR4A1对氧化应激诱导的血栓形成的保护作用及机制。方法 选取健康SD大鼠30只,随机分为对照组、模型组和NR4A1组,每组10只。用FeCl₃构建颈动脉血栓大鼠模型,用NR4A1激动剂促进大鼠NR4A1的表达。称取3组小鼠的血栓重量;采用苏木精-伊红染色观察颈动脉组织切片的血栓形成情况;采用蛋白质印迹法检测核转录因子-κB(NF-κB)/环氧合酶-2(COX-2)信号轴相关蛋白表达水平;采用硝酸还原酶法检测NO水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测内皮素-1(ET-1)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)水平;采用放射免疫分析法测定血栓素(TX)B2、6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)水平。结果 对照组未形成血栓,NR4A1组大鼠血栓重量明显低于模型组,3组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组与NR4A1组大鼠颈动脉组织NR4A1蛋白表达水平均低于对照组,且模型组低于NR4A1组,差异均有统计学意义(P<0.05);模型组与NR4A1组大鼠颈动脉组织p-NF-...     

低频电针对海洛因依赖小鼠海马N-甲基-D-天冬氨酸受体NR1、NR2A、NR2B亚型蛋白表达的影响

摘要 目的：通过观察低频电针对海洛因心理依赖小鼠海马N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)的亚型NMDAR1(NR1)、NMDAR-2A(NR2A)、NMDAR-2B(NR2B)表达的影响,探讨低频电针对海洛因成瘾记忆干预作用的可能中枢机制。 方法：筛选无天然位置偏爱的雄性小鼠45只,随机分为对照组、海洛因心理依赖模型组（模型组）、模型电针组（模针组）,每组15只。海洛因剂量递增注射结合条件性位置偏爱（conditioned place preference, CPP）训练制作海洛因心理依赖模型,2Hz低频电针“内关”、“三阴交”,点刺“四神聪”穴。采用白箱CPP值变化评价低频电针治疗效应,免疫组化方法检测海马NMDA受体亚型（NR1、NR2A、NR2B）的表达。 结果：①模针组白箱CPP值较模型组明显降低(P＜0.05)。②模针组小鼠NR1、NR2B阳性表达较模型组增强(P＜0.05)。③模针组小鼠NR2A阳性表达较模型组降低(P＜0.05)。 结论：低频电针疗法能增强海洛因心理依赖小鼠海马NR1、NR2B,降低NR2A的阳性表达。这种改变可能与低频电针调节海洛因依赖的机制有关。     

NR2B mRNA在骨癌痛小鼠的前扣带回和脊髓中表达含量变化

目的:观察骨癌痛小鼠前扣带回(anterior cingulate cortex,ACC)和脊髓中的N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartic acid receptor,NMDA)受体2B亚基(NR2B mRNA)表达含量的变化。方法:选用C57BL/6小鼠75只,随机分为癌痛组、假手术组、正常对照组。骨癌痛组接种肺癌细胞约2×106个;假手术组接种等容积的d-hanks液;正常对照组不予任何处理。分别于术后第6 d、10 d、14 d、18 d和22 d测定机械性触诱发痛,取前扣带回和L4~6段脊髓用于做实时定量PCR检测NR2B mRNA的表达。结果:①骨癌痛组于术后第10 d~22 d出现触诱发痛,机械缩足阈值低于对照组和假手术组(p<0.05)。②实时定量PCR显示:术后第14 d、18 d,骨癌痛组前扣带回NR2BmRNA的表达明显高于对照组和假手术组(p<0.05);术后第10 d、14 d、18 d,22 d,骨癌痛组于脊髓NR2B mRNA的表达明显高于对照组和假手术组(p<0.05);而术后第10 d、14 d、18 d,22 d,假手术组与正常组脊髓和前扣带回NR2B的差异无统计学意义(p>0.05)。结论:骨癌痛组脊髓和前扣带回中的NR2B mRNA含量表达上调,提示在骨癌痛的产生和维持中不仅激活脊髓低位中枢,而且有脑部中枢的参与。     

电针结合经颅磁刺激对局灶性脑缺血大鼠pCREB表达的影响

目的：探讨电针结合经颅磁刺激（rTMS）对局灶性脑缺血大鼠磷酸化环腺苷酸反应元件结合蛋白（pCREB）表达的影响及其治疗缺血性脑损伤的机制。方法：Wistar大鼠75只,随机分为A、B、C、D及E组各15只,A组为正常对照,B、C、D及E组大鼠采用线栓法制备局灶性脑缺血模型,术后A、B组不实施处理,C组进行电针治疗,D组给予rTMS治疗,E组给予电针及rTMS联合治疗。通过Western blot检测脑缺血后第7、14及28d3个不同时相大鼠海马胞核内pCREB的表达,并观测神经功能缺损程度评分的变化。结果：脑缺血后不同时相点缺血侧海马pCREB阳性表达和灰度值,B组在7d时高于A组,28d时低于A组（P〈0．05）,14d时与A组比较差异无显著性意义;C、D组和E组各时相点均高于B组,7及14d时高于A组（均P〈0．05）,28d时与A组比较无差异;E组7及14d时相点均高于C及D组（P〈0．05）;C与D组各时相点均无差异。各时相点神经功能缺损评分C、D组和E组均较B组下降（P〈0．01）,尤以E组为明显。结论：电针结合rTMS对脑卒中后神经功能的恢复有显著的促进作用,pCREB的表达增强可能是其治疗缺血性脑卒中的机制之一。     

NMDA NR2A and NR2B receptors in the rostral anterior cingulate cortex contribute to pain-related aversion in male rats

NMDA receptors, which are implicated in pain processing, are highly expressed in forebrain areas including the anterior cingulate cortex (ACC). The ACC has been implicated in the affective response to noxious stimuli. Using a combination of immunohistochemical staining, Western blot, electrophysiological recording and formalin-induced conditioned place avoidance (F-CPA) rat behavioral model that directly reflects the affective component of pain, the present study examined formalin nociceptive conditioning-induced changes in the expressions of NMDA receptor subunits NR1, NR2A, and NR2B in the rostral ACC (rACC) and its possible functional significance. We found that unilateral intraplantar (i.pl.) injection of dilute formalin with or without contextual conditioning exposure markedly increased the expressions of NMDA receptor subunits NR2A and NR2B but not of NR1 in the bilateral rACC. NMDA-evoked currents in rACC neurons were significantly greater in formalin-injected rats than in naïve or normal saline-injected rats. Selectively blocking either NR2A or NR2B subunit in the rACC abolished the acquisition of F-CPA and formalin nociceptive conditioning-induced Fos expression, but it did not affect formalin acute nociceptive behaviors and non-nociceptive fear stimulus-induced CPA. These results suggest that both NMDA receptor subunits NR2A and NR2B in the rACC are critically involved in pain-related aversion. Thus, a new strategy targeted at NMDA NR2A or NR2B subunit might be raised for the prevention of pain-related emotional disturbance.     

Effect of NMDA NR2B antagonist on neuropathic pain in two spinal cord injury models

N-Methyl-d-aspartate (NMDA) receptors are thought to play an important role in the processes of central sensitization and pathogenesis of neuropathic pain, particularly after spinal cord injury (SCI). NMDA antagonists effectively reduce neuropathic pain, but serious side effects prevent their use as therapeutic drugs. NMDA NR2B antagonists have been reported to effectively reduce inflammatory and neuropathic pain. In this study, we investigated the effects of NR2B antagonists on neuropathic pain and the expression of NR2B in the spinal cord in 2 SCI models. SCI was induced at T12 by a New York University impactor (contusion) or by sectioning of the lateral half of the spinal cord (hemisection). Ifenprodil (100, 200, 500, 1000nmol) and Ro25-6981 (20, 50, 100, 200nmol) were intrathecally injected and behavioral tests were conducted. Ifenprodil increased the paw withdrawal threshold in both models but also produced mild motor depression at higher doses. Ro25-6981 increased the mechanical nociceptive threshold in a dose-dependent manner without motor depression. NR2B expression was significantly increased on both sides at the spinal segments of L1-2 and L4-5 in the hemisection model but did not change in the contusion model. Increased expression of NR2B in the hemisection model was reduced by intrathecal ifenprodil. These results suggest that intrathecal NMDA NR2B antagonist increased the mechanical nociceptive threshold after SCI without motor depression. A selective subtype of NMDA receptor, such as NR2B, may be a more selective target for pain control because NMDA receptors play a crucial role in the development and maintenance of chronic pain.     

督脉电针对脊髓损伤大鼠生长相关蛋白43 表达的影响

目的研究督脉电针对大鼠脊髓损伤后生长相关蛋白43(GAP-43)基因及蛋白表达的影响。方法利用多中心急性脊髓损伤打击器建立Sprague-Dawley 大鼠T11脊髓损伤模型,造模成功后分为对照组(A 组,n=18)和督脉电针组(B 组,n=18)。造模后1 周,B 组接受督脉电针治疗每天1 次。两组大鼠于造模后1、2、4、8 周行BBB 后肢运动功能评分;造模后2、4、8 周,采用RT-PCR检测GAP-43 mRNA表达,采用免疫组化染色检测GAP-43 蛋白表达。结果造模后,与A组比较,B组BBB评分明显升高(P<0.01),GAP-43 mRNA相对表达量明显升高(P<0.01),GAP-43 蛋白阳性表达明显增强(P<0.01)。结论督脉电针可促进脊髓损伤大鼠GAP-43 表达。     

电针结合重复经颅磁刺激对脑缺血大鼠海马突触素的影响

目的：研究电针结合重复经颅磁刺激对脑缺血大鼠海马突触素的影响。方法：120只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、电针组、重复经颅磁刺激组和电针结合重复经颅磁刺激组, 根据不同时间点每个组又细分为7d、14d和28d组3个亚组。复制大脑中动脉栓塞模型,分别给予电针、磁刺激和电针结合磁刺激干预。免疫荧光标记方法观察缺血侧海马CA3区突触素的表达,蛋白印迹技术定量分析不同时间点、不同组别之间缺血侧海马突触素表达的差异。结果：电针、磁刺激和电针结合磁刺激都能显著上调3个时间点海马突触素的表达。从时间上看,随着治疗时间的增加,突触素的表达逐步上调;不同组间比较,第28天时电针结合磁刺激海马突触素的表达最显著。结论：三种干预方法都能促进脑缺血大鼠海马突触素的表达,其中第28天时电针结合磁刺激效果最显著。     

头穴丛刺法对急性脑梗死大鼠行为学及凋亡相关基因bcl-2 的影响

目的探讨头穴丛刺对急性脑梗死大鼠神经行为学及凋亡相关基因bcl-2 的影响。方法将72 只雄性Wistar 大鼠随机分为3 组：假手术组(A)、造模组(B)和头穴丛刺组(C),每组各24 只。各组再根据脑梗死后不同时间分为6 h、24 h 和3 d 三个亚组,每个时间点各8 只。采用线栓法制备急性脑梗死动物模型,观察不同时间点头穴丛刺法对急性脑梗死大鼠行为学及脑组织凋亡相关基因bcl-2 表达的影响。结果脑梗死第3 天,C组大鼠神经功能评分明显低于B组(P<0.01);C组大鼠术后不同时间点缺血半暗区bcl-2 的表达增多,24 h 时达到高峰,与B组比较差异均具有高度显著性差异(P<0.01)。结论头穴丛刺能明显降低急性脑梗死大鼠神经功能评分,促进运动功能恢复;并可促进大鼠缺血半暗区bcl-2 的表达,抑制细胞凋亡。     

The role of N‐methyl‐d‐aspartate receptor subunit NR2B in spinal cord in cancer pain

Cancer pain is one kind of the most common and severe kinds of chronic pain. No breakthrough regarding the mechanisms and therapeutics of cancer pains has yet been achieved. Based on the well established involvement of the NMDA (N‐methyl‐d ‐aspartate) receptor containing NR2B in inflammatory pain and neuropathic pain and the effective pain relief obtained with ketamine in cancer patients with intractable pain, we supposed that NR2B in the spinal cord was an important factor for cancer pain. In this study, we investigated the possible role of NR2B in the spinal cord using a murine model of bone cancer pain. C3H/HeJ mice were inoculated into the intramedullary space of the right femur with Osteosarcoma NCTC 2472 cells to induce ongoing bone cancer‐related pain behaviors. At day 14 after operation, the expression of NR2B mRNA and NR2B protein in the spinal cord were higher in tumor‐bearing mice compared to the sham mice. Intrathecal administration of 5 and 10 μg of NR2B subunit‐specific NMDA receptor antagonist ifenprodil attenuated cancer‐evoked spontaneous pain, thermal hyperalgesia and mechanical allodynia. These results suggest that NR2B in the spinal cord may participate in bone cancer pain in mice, and ifenprodil may be a useful alternative or adjunct therapy for bone cancer pain. The findings may lead to novel strategies for the treatment of bone cancer pain.     

不同时间点电针治疗对脑梗死大鼠Bcl-2 mRNA转录及caspase-3蛋白表达的影响

目的:观察大鼠脑缺血再灌注损伤后不同时间点电针治疗对其Bcl-2 mRNA转录水平及caspase-3蛋白表达的影响。方法:SD大鼠100只,随机分为正常组、假手术组、模型组及电针组,每组根据术后干预时间点再分为术后6 h、12 h、24 h、48 h及72 h共5个亚组。线栓法制作大鼠左侧大脑中动脉栓塞/再灌注模型。电针组各亚组分别于脑缺血再灌注后不同时间点进行电针治疗,其它3组各亚组均于相同时间点进行捆扎,不给予电针治疗。各组大鼠均于治疗14 d后取脑,采用实时荧光定量PCR技术检测脑梗死侧Bcl-2 mRNA的转录水平,免疫组织化学染色检测脑梗死侧caspase-3蛋白的表达。结果:电针组各亚组Bcl-2 mRNA转录水平及caspase-3蛋白表达水平与其它3组相同时间点各亚组比较,差异有统计学意义(P0.05);电针组各亚组间Bcl-2 mRNA转录水平及caspase-3蛋白表达水平比较,差异有统计学意义(P0.05),电针组12 h亚组Bcl-2 mRNA转录水平较高,24 h亚组caspase-3表达水平较低。结论:脑缺血再灌注12 h～24 h内给予电针治疗,能促进脑梗死大鼠Bcl-2 mRNA转录并抑制caspase-3蛋白的表达。