一种单纯疱疹病毒共有型单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的：建立能稳定分泌单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）共有型单克隆抗体（Ｍａｂ）的细胞株并进行初步鉴定。方法：本研究利用杂交瘤技术建立了 １３株能稳定分泌抗 ＨＳＶ 特异性 Ｍａｂ的杂交瘤细胞株,其中 ５株能稳定分泌抗 ＨＳＶ型共有单克隆抗体（５Ｂ４－２、５Ｂ４－６、６Ｂ３－２－３、Ｄｂ４、Ｅｂ４）,并对５Ｂ４－６株进行了初步鉴定。结果：免疫双扩散法确定Ｍａｂ５Ｂ４－６的 Ｉｇ类型为 ＩｇＧ２ｂ。经微量免疫荧光法（Ｍｉｃｒｏ－ＩＦＡ）法测定杂交瘤培养上清及腹水中单抗效价,分别为 １∶１６及１∶２０４８０。杂交瘤细胞核型分析显示其染色体数目为９１．８±６．２。杂交瘤细胞经４次克隆,传代６个月仍能稳定地分泌抗体。用免疫印渍法进一步鉴定Ｍａｂ５Ｂ４－６所结合抗原的分子量约为７７ＫＤ。结论：细胞株５Ｂ４－６能稳定分泌一种新奇的针对具有ＨＳＶ型共有抗原表位的７７ＫＤ 蛋白的特异性单抗。     

单纯疱疹病毒单克隆抗体的研究及其应用

本文简要报道本室近年来在抗单纯疱疹病毒单克隆抗体研究方面的结果。①应用淋巴细胞杂交瘤技术,建立了18株稳定分泌抗单纯疱疹病毒单克降抗体的杂交瘤细胞系。②探讨了不同株单克隆抗体介导体外中和作用和动物体内保护作用的机制。③建立了应用单克隆抗体检测病毒抗原的方法。④应用型特异性和型共同性单克隆抗体对临床病毒分离株进行了病毒分型和抗原性分析。⑤应用单克隆抗体纯化了病毒的结构蛋白并对其特性做了鉴定。     

用单克隆抗体间接免疫荧光法进行子宫颈单纯疱疹病毒（HSV）感染普检的研究

用单克隆抗体间接免疫荧光法进行子宫颈单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）感染普检的研究刘江波１郑桂芝１王香兰２彭淑玲２周毅２人群中单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）感染极为普遍，直接接触和性接触为主要的传播途径，需要一种快速易行的方法进行检测，以便及时诊断及时治疗。本组采用单...     

单纯疱疹病毒荧光标记单克隆抗体的制备及临床应用

目的：为了了解所制备的单纯疱疹病毒荧光标记单克隆抗体的临床应用价值。方法：本研究利用杂交瘤技术制备了多株抗单纯疱疹病毒型共有及型特异性单克隆抗体（6B3－2－5、，Da5,5B4-6)，并通过BALB／C鼠体内诱生制备了较大量的单抗，经去脂澄清处理，利用辛酸－硫酸铵二步法纯化了单抗，经SDS－PAGE及薄层扫描分析显示其纯度，在pH9.0-9.5条件下，采用低温袋内透析法标记了单抗5H4－6及6B3－2－5，然后经透析及SephedexG-50柱去除游离荧光素，标记单抗采用直接免疫荧光法（DFA）检测各类临床标本110份及正常标本26份，并与间接免疫荧光法（IFA）及组织培养分离法作了初步比较，结果：1．纯化后的各单抗在解链状态下为二条链，一条为轻链，分子量各为20．6KD（5B4－6），24．6KD（6D3－2－5）及26．1KD（Da5)，一条为重链，分子量各为57．8KD（5B4－6），54．8KD（6B3－2－5）及52．7KD（Da5)，由此推算出其单抗分子量各为157KD，159KD，158KD，纯化回收率各为43．77％，47．21％及38．8％，2．标记单抗F／P值各为1．4及1．46，利用（DFA）法测定其效价各为1：32及1：16，。6．DFA与IFA的符合率达100％，而以组织培养法为“金标准”，其敏感性，特异性，阳性预测值及阴性预测值各为94％，95％，94％及95％，结论：这些单抗具有较好的应用价值。值得进一步研究及开发应用。     

单克隆抗体分析单纯疱疹病毒的抗原性

用15种抗HSV型共同性McAb相2种分别抗HSV-1和HSV-2的型特异性McAb,分析了43株HSV临床株的抗原性。间接免疫荧光试验和改良ELISA的分机结果表明,从宫颈炎患者分离出的15株HSV中,1株为HSV-1,14株为HSV-2;从口唇和眼部感染病变中分离出的28株HSV均为HSV-1.用15种型共同性McAb对HSV的抗原性分析表明43株HSV分离株中,22株(51.2％)可与所有型共同性McAb反应,21株(48.8％)仅与部分McAb反应。结果表明,HSV临床分离株间及不同的HSV参考株间在抗原性上有明显差异,其原因有待进一步研究。     

喷昔洛韦体内抗单纯疱疹病毒的作用

目的 :研究喷昔洛韦 (PCV)对单纯疱疹病毒 (HSV)感染小鼠的疗效。方法 :每只分别用病毒滴度为 10 0LD50 ·(0 .1ml) - 1 HSV 1、HSV 2腹腔注射 0 .0 3ml,2 4h后皮下注射给药 ,PCV剂量分别为 2 0 ,5 0 ,10 0 ,2 5 0mg·kg- 1 ·d- 1 ,疗程 5d。观察动物的反应 ,出现死亡时间和死亡数 ,所有动物用药后观察 15d。同时收集各组动物治疗后的标本 ,进行病毒分离 ,按常规测定病毒滴度。另设病毒对照组、0 .9%NaCI对照组、阳性药阿昔洛韦对照组 (ACV)。结果 :PCV对HSV感染鼠有保护作用 ,5 0mg·kg- 1 ·d- 1 时 ,HSV 1和HSV 2感染鼠的存活率分别为 6 0 %和 75 % ,平均存活时间 (d)分别为 11.3± 3.6和 12 .9± 2 .8,随着药物剂量增加 ,疗效增强 ,该药还能降低组织内病毒滴度 ,阻止体内病毒复制 ,抗HSV作用类似于相同剂量的ACV。结论 :PCV有抗HSV作用。     

免疫印迹技术在单纯疱疹病毒型鉴定的应用

本实验对免疫印迹(Western Blot,WB)技术在单纯疱疹病毒(HSV)型鉴定上的应用做了探讨性研究,以ELISA方法做对照,对临床分离的HSV进行型别鉴定,比较了两种方法对HSV型别鉴定的价值,发现23-28、41、42kd多肽可能为HSV-1型特异性抗原。     

单纯疱疹病毒Ⅱ型三万道尔顿糖蛋白的纯化及其特性研究

用抗HSV—Ⅱ型特异性单克隆抗体CH—A9与Sepharose 4B偶联制备免疫吸附柱作亲和层析,纯化出HSV—Ⅱ30,000道尔顿糖蛋白。结果表明,该糖蛋白特性与文献报道的各种HSV糖蛋白均不相同:首先,其分子量明显较小,其次,具有HSV—Ⅱ型特异性。     

单纯疱疹病毒Ⅱ型与肿瘤

近年来对单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)引起肿瘤的研究越来越深入,许多临床调查,动物实验和体外细胞培养等均证明了HSV-2确实能引起肿瘤。 1 HSV-2的结构特点 HSV-2呈球状,病毒的囊膜为脂蛋白,衣壳是对称二十面立方体,由162个子粒所组成。HSV属双股DNA病毒,DNA呈线状,二端可以连接成环状结构,后者与病毒的致癌作用及潜伏感染有关。在病毒增殖过程中产生的胸苷激酶(TK)也与潜伏感染有关。HSV-2DNA的分子量为10~8dalton,G+C含量约69％,碱基分布不均一,它是以编码     

PCR检测生殖器疱疹患者HSV-2

目的：用聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍ ｅｒａｓｅｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ, Ｐ Ｃ Ｒ）检测生殖器疱疹患者单纯疱疹病毒（ｈｅｒｐｅｓｓｉｍ ｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ ２, Ｈ Ｓ Ｖ２）。方法：对１０１ 例生殖器疱疹和糜烂患者及２０ 例对照组用 Ｐ Ｃ Ｒ法检测 Ｈ Ｓ Ｖ１、 Ｈ Ｓ Ｖ２。结果： Ｈ Ｓ Ｖ２ 检出阳性率占 ６０４％ （６１／１０１）, Ｈ Ｓ Ｖ２ 和 Ｈ Ｓ Ｖ１ 双重感染占４％ （４／１０１）。对照组均为阴性,并且年龄轻者感染阳性率高于年龄长者。结论： Ｐ Ｃ Ｒ 具有操作较易、快速、敏感的特点,为临床对生殖疱疹的诊断和鉴别诊断提供了理想的新方法。     

单纯疱疹病毒性角膜炎泪液中EGF检测分析

为了解单纯疱疹病毒性角膜炎(Herpes Simplex Virus Keratitis,HSVK)病程中泪液表皮生长因子(Epidermic Growth Factor,EGF)的分泌状况,应用放射免疫沉淀法定量测定对照组40例(A组),HSVK发作期组49例(B组)及HSVK恢复期组31例(C组)共120例人反射性泪液中的EGF值.结果发现B组泪液中EGF含量增高,与A、C组的比较有非常显著差异性(P<0.001);C组泪液中EGF含量较高,与A组的比较亦有显著性差异(P<0.05).提示HSVK病程中反射性泪液EGF含量较正常人高.     

实验性单纯疱疹性角膜炎中基质金属蛋白酶-2的表达研究

目的:探讨I型单纯疱疹病毒（HSV-1）感染对角膜基质金属蛋白酶-2（MMP-2）分布表达的影响。方法:分别收集正常眼球及HSV-1（KOS株）感染后第2,7,14,28d的感染眼球行石蜡包埋,并应用抗MMP-2的多克隆抗体免疫染色角膜切片。结果:感染后第2d,MMP-2的表达比未感染眼增加且表达主要位于浅表基质层及上皮下的炎性细胞中。感染后第7d,MMP-2的表达较第2d减弱。而感染后第14及28d可见角膜基质中及浸润的炎性细胞中尤其是溃疡处可见MMP-2的表达再次显著增加。结论:由角膜细胞及浸润的炎性细胞分泌产生的MMP-2对HSV-1感染所致上皮性角膜炎及角膜溃疡形成可能起重要作用。     

实验性单纯疱疹性角膜炎中基质金属蛋白酶mRNA的表达

目的 :探讨Ⅰ型单纯疱疹病毒 (HSV 1)所致的角膜炎中基质金属蛋白酶 (MMPs)mRNA的表达。方法 :雌性BalB/c小鼠眼角膜接种HSV 1(KOS株 )以诱发单纯疱疹性角膜炎 (HSK)。收集正常角膜及感染后第 2 ,7,14d的感染角膜 ,应用RT PCR技术检测基质金属蛋白酶 2 ,基质金属蛋白酶 9(MMP 2 ,MMP 9)的mRNA表达。结果 :除正常角膜MMP 9mRNA为阴性表达其他各组均获得阳性目的片断。感染后第 2dMMP 2mRNA表达较正常组差异没有显著性 (P >0 .0 5 ) ,感染后第 7dMMP 9mRNA表达与第 2d的表达差异没有显著性 (P >0 .0 5 ) ,其他各组差异均有显著性意义 (P <0 .0 1)且大体上呈随感染天数增加表达增高的趋势。结论 :在实验性HSK中存在基质金属蛋白酶mRNA的表达且MMP 2 ,MMP \|9的mRNA高表达参与了角膜溃疡、角膜新生血管的形成等病变的发生。     

郎格罕细胞抗单纯疱疹病毒感染作用的实验研究

本实验用接种单纯疱疹病毒方法,诱发豚鼠皮肤及唇粘膜疱疹,动态观察接种区疱疹发生及郎格罕细胞 (LC) 的变化。结果表明接种病毒后2～3天,皮肤或唇粘膜即发生疱疹,前音散在出现,持续3～5天;后者成群发生,持续5一8天。皮肤病灶内 LC 数目明显减少,而唇粘膜接种部位内树枝状、ATPase(+)LC 完全消失。病灶周围皮肤或粘膜 LC 随之向病灶迁移,聚集在形成疱疹的部位。至疱疹消失,LC 数目复原。由此提示,在病毒感染早期,LC 可能具有类似巨噬细胞的功能。