人鼻咽癌细胞株中C－Ha－ras基因DNase－I超敏区的序列分析

Ｃ一Ｈａ一ｒａｓ基因的活化与鼻咽癌的发生有关。为了进一步了解ｃ一Ｈａ一ｒａｓ基因在鼻咽癌中的调控模式和活化机制，本文用ＤＮａｓｅ一Ｉ超敏区分析方法对人鼻咽癌细胞株ＨＮＥ２和ＨＯＮＥ１的Ｃ一Ｈｅ一ｒａｓ基因进行研究，发现Ｃ一Ｈａ一ｒａｓ基因启动子部位存在一个重要的ＤＮａｓｅ一Ⅰ超敏区，测序结果表明其ＤＮＡ序列与正常Ｃ一Ｈａ一ｒａｓ基因的相应序列完全等同。提示鼻咽癌细胞中Ｃ一Ｈａ一ｒａｓ基因的调控模式在序列水平与正常细胞中的并无差异。     

c—Ha—ras基因3‘端—VNTR位点与卵巢癌的相关性研究

应用ＡＦＬＰ－ＡＧＥ技术分析３１例卵巢癌病人ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因３’端ＶＮＴＲ位点的基因频率。共检测到２５个等位基因，与正常人群的基因频率分布比较，差异有显著性意义（Ｐ〈０．０５）。某些等位基因只见于卵巢癌病人。在２１例血液检测为杂合子的卵巢癌病人的肿瘤组织（包括瘤性腹水）中共发现９例有一个等位基因的丢失。提示ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因３端－ＶＮＴＲ位点某些特定的闰基因及某些一基因的丢失与卵巢癌的发生发     

实验性大鼠肝癌形成过程中c—myc,Ha—ras,Ki—ras的表达特点及其生物意义

目的：通过动态观察ｃ－ｍｙｃ、Ｈａ－ｒａｓ和Ｋｉ－ｒａｓ在实验性大鼠肝癌形成过程中的表达变化，探讨上述原癌基因与肝癌发生的关系及其生物学意义。方法：用３＇－Ｍｅ－ＤＡＢ饲喂ＳＤ大鼠，分别于第４，６，８，１４和１７周处死大鼠，取其肝脏，石蜡包埋，并进行核酸原位杂交。结果：在诱癌全过程中，ｃ－ｍｙｃ和Ｈａ－ｒａｓ均为同步表达；在诱癌的早期即可检测到较多ｃ－ｍｙｃ和Ｈａ－ｒａｓ的阳性表达细胞，而Ｋｉ－ｒａｓ的细胞数则很少，且反应强度弱；而诱癌后期，各癌基因ｍＲＮＡ阳性表达细胞均减少；至第１７周，所有癌组织内均显示三种癌基因表达阴性，或仅见个别小癌巢内少数癌细胞呈弱阳性。而癌旁肝组织内却可见三种癌基因的大量表达。结论：ｃ－ｍｙｃ和Ｈａ－ｒａｓ被激活是肝癌发生过程中的早期事件，且二者之间具有协同作用，这种协同作用在肝癌的启动上可能具有重要意义；Ｋｉ－ｒａｓ的激活则发生较晚，可能与促进细胞恶性转化有关。     

Ha—ras基因产物P^21在人鼻咽癌组织中的表达

本文从P~(21)高表达质粒PJCL.E_(30),分离出P~(21)蛋白,免疫后,取睥细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP 2/O融合,制备了高效价P~(21)单克隆抗体。以此单抗为探针,应用免疫组化技术,对50例鼻咽部组织ras—P~(21)的表达进行了探测。结果表明,在鼻咽癌组织中具有明显阳性表达(阳性率为85％),而鼻咽部炎症仅1例有表达,正常胎儿鼻咽组织未观察到阳性表达。说明在鼻咽癌变中,当ras基因被激活,其表达增强,P~(21)蛋白量增加。本文首次报道了P~(21)在鼻咽癌中具有阳性表达,这不仅对研究ras基因在鼻咽癌变中的作用,并对临床应用,均具有重要的理论意义及实用价值。     

c—Ha—ras癌基因高表达与胃癌临床行为的关系

应用ＲＮＡ斑点杂交、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ和免疫组织化学技术检测了２０例胃癌病员癌组织中ｃ－Ｈａ－ｒａｓ ｍＲＮＡ和Ｐ＾２１蛋白的表达。统计学结果表明，胃癌组织中ｃ－Ｈａ－ｒａｓ ｍＲＮＡ过度表达和肿瘤淋巴结转移状态密切相关（Ｐ＝０．０３３），随着胃癌临床病程进展，肿瘤细胞中ｃ－Ｈａ－ｒａｓ Ｐ＾２１表达水平逐渐升高（Ｐ＝０．１１２）。提示ｃ－Ｈａ－ｒａｓ癌基因高表达可能是胃癌形成过程中的关键     

C—Ha—ras—1癌基因在人宫颈癌发生中的作用

Ha-ras癌基因首先在膀胱瘤细胞系中发现,以后相继在许多肿瘤中被鉴定出来。为了探讨C-Ha-ras-1癌基因在宫颈疾患中的激活状况,我们对宫颈疾患病人宫颈活检组织DNA中C-Ha-ras-1癌基因进行了检测,现将结果报告如下。     

妊娠滋养细胞疾病c—Ha—ras基因突变及ras p21蛋白表达的研究

目的：探讨ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因突变及ｐ２１蛋白表达与妊娠滋养细胞疾病（ＧＴＤ）发生发展的关系。寻找具有特异性的可预测ＰＴＤ的诊断标记。方法：采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法及ＳＰ免疫组化法,对９０例ＧＴＤ组织中ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因第１外显子点突变及其产物ｐ２１表达进行检测,以正常足月新鲜胎盘３０例为对照。结果：所有正常胎盘组织ｒａｓ突变及ｐ２１表达均为阴性。     

人肺癌组织中C—Ha—ras,C—myc和C—sis基因的扩增

用同位素α－＾３２ＰｄＣＴＰ标记癌基因Ｃ－Ｈａ－ｒａｓ，Ｃ－ｍｙｃ和Ｖ－ｓｉｓ基因片段，通过点杂交和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交法检测１７例鳞癌，９例腺癌６例其它类肺癌组织和６例非肺癌组织中Ｃ－Ｈａ－ｒａｓ，Ｃ－ｍｙｃ和Ｃ－ｓｉｓ基因扩增的情况，结果发现：４６．８％（１５／３２）的肺癌组织有Ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因扩增，其中１０例（５８．８％）鳞癌，３例腺癌（３３．３％）出现Ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因扩增，２５％（     

NB901对胃癌细胞DNA的拓扑酶II的活力及其对c—Ha—ras基因表达的影响

本文从胃癌ＢＧＣ８２３细胞中分离出ＤＮＡ扑酶ＩＩ，应用ｐＢＲ３２２质粒ＤＮＡ作为底物测定酶的活力，发现５＇脱氧－５＇醛基腺嘌呤核－ＮＢ９０１可以诱导拓扑酶ＩＩ对超螺旋ｐＢＲ３２２质粒ＤＮＡ的松散和裂解，并且可以抑制胃癌ＢＧＣ８２３细胞中ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因的表达。结果提示抗癌化合物ＮＢ９０１是以癌细胞中ＤＮＡ拓扑酶ＩＩ为作用靶点，癌细胞中拓扑酶ＩＩ可能参与细胞增殖相关基因的转录调控，ＮＢ９０１能够     

膀胱癌中Ha—ras癌基因点突变和rasP21表达的研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术和寡聚核甘酸探针杂交法检测膀胱癌中Ｈａ－ｒａｓ癌基因第１２位密码于Ｇ→Ｔ突变，同时应用免疫组织化学方法检测了ｒａｓＰ２１在膀胱癌中的表达，在２９例膀胱癌中有１０例存Ｈａ－ｒａｓ癌基因第１２位密码子点突变，突变率为３４．５％，有１８例ｒａｓＰ２１表达为阳性，阳性率为６２．１％，结果提示Ｈａ－ｒａｓ癌基因第１２位密码子点突变和ｒａｓＰ２１的表达与膀胱癌病理分级，临床分期和     

胃癌c－Ha－ras基因突变分析方法的建立及临床应用研究

本文应用多聚酶ＤＮＡ链延伸反应产物限制性酶切片段多态性分析（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）和单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）两种方法同时检测了２０例胃癌中ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因突变．本文显示ＰＣＲ－ＲＦＬＰ和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ均是检ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因突变的简便、快速和敏感的方法，适用于临床大批量肿瘤标本的检测。     

乳腺肿瘤组织中Ha—ras基因蛋白表达与血清CA15—3水平的相关性及…

用免疫组化ＡＢＣ法和ＩＲＭＡ法分别检测了４２例乳腺癌和３０例良好性乳腺病患者组织中Ｈａ－ｒａｓ基因蛋白（ｒａｓｐ２１）的表达状况及血清ＣＡ１５－３，结果恶性病变组织中ｒａｓＰ２１呈过度表达，ｒａｓＰ２１的表达与细胞分化状态密切相关，不同淋巴吉转移状况的乳腺癌患者，其血清ＣＡ１５－３差异呈显著性，ＣＡ１５－３水平的变化与ｒａｓＰ２１表达状况显著相关，提示血清ＣＡ１５－３水平为监测乳腺癌病情变化的良性     

胃癌及癌前病变中c—Ha—ras癌基因点突变的研究

采用高敏感和特异的ＰＣＲ技术及寡核苷酸探针检测，ｃ－Ｈａ－ｒａｓ癌基因第１２位密码子的Ｇ→Ｔ突变。６６例胃粘膜组织中（包括胃癌、不典型增生、肠化生、浅表性胃炎及胃粘膜０，点突变７例，胃癌占６例，达２８．５７％（６／２１），不典型增生１例，占５．５６％（１／１８）初步提示ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因突变有可能发生于胃癌变的早期，应用ＰＣＲ结合斑点杂技术检测ｃ－Ｈａ－ｒａｓ癌基因有可能与胃癌病理和临床研究相结     

对92例胃癌c—K—ras癌基因表达的观察

对９２例胃癌ｃ－Ｋ－ｒａｓ癌基因表达的观察么景满张振忠薄爱华①夏苓①张林西①张家口医学院第一附属医院外科（河北省张家口市０７５０００）有学者报告［１，２］ｃ－Ｋ－ｒａｓ基因突变在胰腺癌中占９０％，日本胰腺癌患者ｃ－Ｋ－ｒａｓ基因突变者达１００％，说...     

c—Ha—ras^V12G基因转染细胞系促癌剂检测模型的建立

目的：建立促癌剂检测模型。方法：采用电穿孔的方法，将突变的c-Ha-rasV12G基因转入人胚肺成纤维细胞WI-38及人支气管上皮细胞BEAS-2B中，将获得的G418抗性(G418r)单克隆细胞株进行DNA-DOT-Bloting及RT-PCR分析后，进一步用促癌剂佛波醇酯(PMA)处理，并选用克隆形成率(CFE)、锚着独立性生长(AIG)、血清抗性及裸鼠成瘤性等表型改变对受试细胞进行了恶性程度检测。结果：c-Ha-rasV12G基因使细胞对促癌剂的促癌敏感性增强，其中，对于WI38 G418r细胞，当PMA剂量分别为0、3.125×10-5、 6.25×10-5、1.25×10-4、2.5×10-4及0.5×10-3 (mol*L-1)时，其在含体积分数为1%FBS的1640培养基中的克隆形成率分别7、8、11、12、15及14 (/200cells)，在含体积分数为10% FBS的培养基中分别为76、92、106、109、127及173 (/200cells)，在质量浓度为0.33%的琼脂中为47、61、70、69、80及97(/1 000cells)。选取0.5×10-5mol*L-1剂量组处理的G418r细胞进行裸鼠成瘤性实验，结果阳性。对照非基因转染细胞，用0.5×10-5mol*L-1 PMA处理后，在3种培养基中相应的克隆形成情况为3、33/200cells, 0/1 000cells，裸鼠皮下注射部位无肿瘤生长。PMA以0、2.0×10-5、1.0×10-4、5.0×10-4、1.0×10-3及1.6×10-3(mol*L-1)分别作用24 h，结果1.0×10-4mol*L-1剂量作用使BEAS-2B G418r细胞获得了最高的血清抗性及CFE，表现为在含体积分数为0.8%、0%FBS的LHC-8培养基及软琼脂中的CFE分别为190%、150%及75%(对照非基因转染细胞在不含PMA及FBS的LHC-8中CFE计为100%)，对照细胞在含体积分数为0.8%FBS的培养基及软琼脂中不能生长，随着PMA处理剂量的增加，其CFE逐渐降低。结论：c-Ha-rasV12G基因可使上皮细胞BEAS-2B获得对PMA的促癌作用敏感性，其中当PMA剂量1.0×10-4mol*L-1时，可发挥促癌作用，大于该剂量则有促分化作用；上皮细胞发生恶性转化的标志之一是细胞对FBS、PMA等促分化剂的促细胞分化抗性增强。     

人鼻咽癌细胞株（SUNE—1）抗肿瘤药物敏感实验

人鼻咽癌细胞株（ＳＵＮＥ－１）抗肿瘤药物敏感实验杨小平李满枝潘启超关键词鼻咽肿瘤细胞株抗肿瘤药敏感实验中图号Ｒ９７９．１９９２年我们将一个５４岁诊断为鼻咽低分化鳞状上皮癌的女性患者的鼻咽癌活检组织成功地接种于裸鼠腋窝皮下，持续稳定地在裸鼠中传至３０代...     

人胃癌总基因DNA与c—myc,c—Ha—ras基因甲基化的改变

DNA甲基化（DNAmethylation）在调节基因表达及维持细胞正常分化中起重要作用[1]。各种恶性肿瘤的形成过程中或多或少地有DNA甲基化的改变，包括总基因组DNA甲基化水平降低和各种癌基因特定位点的DNA甲基化模式的改变[2，3]。国外有较多的动物实验和细胞培养的报道，国内有过胃癌c－Ha－ras基因甲基化变化的分析[4]．但都未有较系统的人胃癌细胞总基因组DNA与特定位点DNA甲基化改变的对比研究．我们将胃癌（Gastriccancer，C）区、癌旁（Paracancer，P）区、外周正常（Normal，N）区粘膜组织细胞DNA标本分为两份，同时作甲基化…     

EB病毒诱发人胚鼻咽上皮细胞c—myc活化和p53的改变

ＥＢ病毒诱发人胚鼻咽上皮细胞ｃ－ｍｙｃ活化和ｐ５３的改变孙宁陈小毅吴枫郭忠民沈淑静关键词ＥＢ病毒鼻咽上皮细胞基因，ｃ－ｍｙｃ基因，ｐ５３中图号Ｒ７３９．６３已证明鼻咽癌发生与ＥＢ病毒（ＥＢＶ）关系密切〔１〕，而某些癌基因如ｃ－ｍｙｃ、ｃ－ｅｒｂＢ－２...     

人鼻咽癌细胞裸鼠体内演进中bcl—2、p53及c—erbB—2表达与EB病毒LMP1的关系

目的研究EB病毒LMP1在人高分化鼻咽癌细胞裸鼠体内演进中的作用及与bcl-2、p53及c-erbB-2蛋白表达的关系.方法将表达EB病毒LMP1的人高分化鼻咽癌细胞及对照阴性细胞移植于裸鼠体内,然后将移植瘤细胞再移入裸鼠建立第二代移植瘤,如此传至第三代,分别观察移植瘤的成瘤和生长的变化,以免疫组化和图像分析技术检测移植瘤细胞bcl-2、p53及c-erbB-2蛋白表达.结果表达LMP1的鼻咽癌细胞原代移植成瘤率达75.0%,比对照组显著增高(P＜0.01).平均潜伏期及体内倍增时间分别为29.6±7.7天和2.81±0.13天,比对照组明显缩短(P＜0.01).表达LMP1的鼻咽癌细胞(C1L)各代移植瘤的bcl-2蛋白表达阳性率显著低于对照组对应的各代细胞的表达(P＜0.01);bcl-2蛋白表达阳性率有显著下降趋势,对照组细胞bcl-2蛋白表达则呈峰值变化;各细胞系体内移植瘤细胞的p53及c-erbB-2蛋白表达的变化趋势较为相似,即各细胞系不同代间p53表达的阳性率有显著下降趋势,c-erbB-2蛋白表达阳性率有显著上升趋势.表达LMP1的鼻咽癌各代移植瘤细胞的p53及c-erbB-2蛋白表达阳性率显著高于对照组对应的各代(P＜0.01).结论LMP1使鼻咽癌细胞的生长能力增强,在癌细胞的演进中使其向去分化方向发展,这种作用可能通过bcl-2表达的替代通路,并使p53的积聚、活性受抑制和c-erbB-2蛋白表达增高来实现促进细胞增殖,在鼻咽癌细胞演进过程中可能起重要协同作用.