肾细胞癌RASSF1A基因启动子区甲基化状况与表达水平研究

目的 检测19例肾细胞癌患者癌组织及癌旁组织Ras相关区域家族蛋白1A(RASSF1A)基因启动子区甲基化情况并检测其mRNA表达水平,探索两者之间的联系.方法 收集肾细胞癌患者癌组织及相应癌旁组织19份,分别提取其基因组DNA,以甲基化特异性PCR(Methylation special PCR, MSP)法检测RASSF1A基因启动子区甲基化情况,并以QPCR法检测了RASSF1A基因的mRNA表达水平.结果 19例中有10例肾细胞癌患者癌组织存在高甲基化, mRNA表达水平表达降低,二者之间存在显著负相关性(r=-0.8734, P<0.01).结论 肾细胞癌中RASSF1A基因启动子区存在高甲基化,并抑制该基因的表达.     

经典Wnt信号途径相关基因异常甲基化与肺癌发生的关系

目的检测肺癌中经典Wnt信号途径相关基因(WIF-1,sFRP-1,DKK-3)启动子的甲基化状态及β-连环蛋白(β-catenin)的表达情况,探讨其在肺癌发病中的作用。方法应用巢式甲基化特异性聚合酶链反应(nMSP),检测66例肺癌组织、25例相应的癌旁组织和10例正常肺组织以及肺腺癌A549细胞株中WIF-1,sFRP-1和DKK-3基因启动子区域的甲基化;免疫组化SP法检测β-catenin的表达情况。结果正常肺组织均未检测到所选基因的甲基化,肿瘤组织和癌旁组织中WIF-1,sFRP-1,DKK-3基因启动子甲基化的发生率分别为:50·0%vs24·0%(P<0·05),36·4%vs12·0%(P<0·05)和36·4%vs8·0%(P<0·01);重度吸烟患者肿瘤组织3个基因的甲基化发生率明显增高(P<0·05)。肺腺癌A549细胞株中WIF-1和DKK-3基因呈甲基化状态,而sFRP-1基因呈未甲基化状态。免疫组织化学显示肺癌组织中β-catenin的阳性表达率为81·2%,异常表达率为64·4%,且与组织学类型无关(P>0·05)。结论经典Wnt信号途径相关基因启动子甲基化可能与吸烟引起的肺癌有关,甲基化的WIF-1,sFRP-1和DKK-3基因可能成为肺癌表观遗传干预治疗的新靶点。     

MGMT基因启动子甲基化与非小细胞肺癌化疗敏感性及预后的关系

目的:检测非小细胞肺癌(NSCLC)组织中MGMT基因启动子甲基化状态,并分析MGMT基因启动子甲基化与NSCLC术后辅助化疗敏感性及预后的关系。方法:收集2012年1月～2015年6月在本院普胸外科进行手术并化疗辅助治疗的92例NSCLC患者的肿瘤组织和癌旁非肿瘤组织,采用甲基化特异性PCR(MSP)检测组织中MGMT基因启动子甲基化状态,分析MGMT基因启动子甲基化与患者化疗敏感性及无进展生存期(PFS)、3年总生存率的关系。结果:肿瘤组织中MGMT基因启动子甲基化率39.13%(36/92)高于癌旁非肿瘤组织中MGMT基因启动子甲基化率3.26%(3/92)(P<0.05);MGMT基因启动子甲基化与患者TNM分期、淋巴结转移、肿瘤分化程度有关(P<0.05);甲基化组复发、转移或死亡患者比例高于非甲基化组(P<0.05);甲基化组PFS和3年总生存率低于非甲基化组(P<0.05);多因素COX回归分析显示淋巴结转移和MGMT基因启动子甲基化是影响NSCLC患者预后的独立危险因素。结论:MGMT基因启动子甲基化与NSCLC术后铂类辅助化疗敏感性及预后密切相关,可能是逆转NSCLC铂类化疗敏感性,改善其预后的重要靶点。     

大肠癌组织白细胞介素-6表达与其甲基化之间的关系

目的:检测大肠癌中白细胞介素-6(IL-6)表达及启动子甲基化状态,进一步阐明大肠癌(CRC)的发病机制。方法:实时荧光定量PCR(QRT-PCR)检测20例CRC癌组织及癌旁组织IL-6mRNA水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测IL-6蛋白浓度,亚硫酸氢盐测序(BSP)检测IL-6启动子甲基化状态。结果:与癌旁组织相比,癌组织中IL-6mRNA及蛋白表达均显著增高(P<0.05),并且其蛋白表达随着Dukes分期逐渐升高,差异具有显著性(P<0.05);癌组织中,IL-6启动子-633、-611、-575、-575bp位点甲基化水平均低于相应癌旁组织(P<0.05),且非甲基化概率随着Dukes分期和分化程度增加而增高(P<0.05)。结论:IL-6在大肠癌中表达增加,并与Duke分期相关,其启动子区低甲基化或去甲基化可能是其表达增高的机制之一;初步筛选出IL-6基因启动子区低甲基化位点,为后续研究奠定基础。     

The significance of mRNA expression and methylation of SFRP1 promoter in invasive breast cancer

目的 探讨浸润性乳腺癌及相应癌旁乳腺组织中分泌型卷曲相关蛋白1(the secreted frizzled-related protein 1,SFRP1)基因的表达及其启动子CpG岛的异常甲基化状态,并分析其临床意义.方法 采用实时荧光定量PCR技术及甲基化聚合酶链反应(MSP)技术检测58例浸润性乳腺癌组织和相应癌旁乳腺组织中SFRP1基因的mRNA表达及其启动子CpG岛的异常甲基化情况,并分析其与临床病理参数之间的关系.结果 浸润性乳腺癌组SFRP1基因的甲基化显著高于癌旁乳腺组织组(P<0.05);腋窝淋巴结有转移的浸润性乳腺癌组SFRP1基因的甲基化显著高于腋窝淋巴结无转移组(P<0.05),而与其他临床病理参数无关.SFRP1在浸润性乳腺癌组的mRNA表达量与乳腺癌旁组比较,差异有统计学意义(P<0.05);在23例SFRP1基因启动子CpG岛发生异常甲基化的浸润性乳腺癌组,均未检测到SFRP1的mRNA表达.结论 SFRP1基因异常甲基化可能影响其 mRNA的转录水平;SFRP1基因启动子的甲基化与浸润性乳腺癌的发生发展有关,对其进行检测有可能为浸润性乳腺癌的早期诊断和判断预后提供帮助.     

胃癌中PTEN基因异常甲基化的检测

目的探讨抑癌基因第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白(PTEN)启动子区域甲基化状况与胃癌的关系。方法采用甲基化特异的PCR(MSP)法检测70例胃癌组织及相应癌旁组织中PTEN启动子区域甲基化状态。结果胃癌组织检测到程度不等的甲基化,其中低分化胃癌甲基化发生率为62.5%,与高中分化胃癌甲基化发生率(20.0%、22.2%)有显著性差异(P<0.05)。并且有淋巴结转移的19例胃癌组织中,有12例PTEN基因启动子甲基化,远高于无淋巴结转移组(P<0.05)。癌旁正常组织未检测到甲基化。结论PTEN基因启动子的甲基化与胃癌的发生、转移有关。PTEN甲基化是胃癌患者诊断及预后的候选标志物之一。     

经典Wnt信号途径相关基因异常甲基化与肺癌发生关系的探讨＊

[摘要] 目的 检测肺癌中经典Wnt信号途径相关基因(WIF-1,sFRP-1,DKK-3)启动子的甲基化状态及β-连环蛋白(β-catenin)的表达情况,探讨其在肺癌发病中的作用。方法 应用巢式甲基化特异性聚合酶链反应(nMSP),检测66例肺癌组织、25例相应的癌旁组织和10例正常肺组织以及肺腺癌A549细胞株中WIF-1,sFRP-1和DKK-3基因启动子区域的甲基化;免疫组化SP法检测β-catenin的表达情况。结果 正常肺组织均未检测到所选基因的甲基化,肿瘤组织和癌旁组织中WIF-1、sFRP-1、DKK-3基因启动子甲基化的发生率分别为：50.0% vs 24.0% (P＜0.05)、36.4% vs 12.0% (P＜0.05)和36.4% vs 8.0% (P＜0.01);重度吸烟患者肿瘤组织3个基因的甲基化发生率明显增高(P＜0.05)。肺腺癌A549细胞株中WIF-1和DKK-3基因呈甲基化状态,而sFRP-1基因呈未甲基化状态。免疫组织化学显示肺癌组织中β-catenin的阳性表达率为81.2%,异常表达率为64.4%,且与组织学类型无关(P＞0.05)。结论 经典Wnt信号途径相关基因启动子甲基化可能与吸烟引起的肺癌有关,甲基化的WIF-1、sFRP-1和DKK-3基因可能成为肺癌表观遗传干预治疗的新靶点。 [关键词] 肺肿瘤 经典Wnt信号途径相关基因 β-连环蛋白     

喉鳞状细胞癌中RASSF1A基因启动子区甲基化及蛋白表达

目的：探讨RASSF1A基因启动子区甲基化与喉癌的关系。方法：运用甲基化特异性PCR,检测RASSF1A基因在48例喉癌组织、相对应癌旁组织及48例正常人外周血中的启动子区甲基化情况。用Western blotting方法检测喉癌组织、癌旁组织及正常人外周血中RASSF1A表达情况。结果：在48例喉癌组织、相对应的癌旁组织和48份正常人外周血中,RASSF1A基因启动子区分别有34例（70.83%）、11例（22.92%）和6例（12.50%）发生了甲基化, 喉癌组织甲基化程度明显高于癌旁组织和正常人外周血（P<0.05）。在48例喉癌组织中27例（56.25%）不能正常表达RASSF1A蛋白,而相对应癌旁组织中仅有8例（16.67%）,喉癌组织中RASSF1A蛋白的表达程度明显低于癌旁组织(P<0.01)。启动子区发生甲基化的34例喉癌组织中共有25例（73.53%）呈弱阳性,而7例未发生甲基化的喉癌组织中为1例（14.29%）,两组间比较差异具有显著性(P<0.05)。结论：RASSF1A基因启动子区甲基化与喉癌的发生有关,有望成为喉癌诊断的分子标志。     

人源幼虫巨大致死性基因在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的研究人源幼虫巨大致死性基因Hugl-1表达与人肺癌临床病理生理特征的关系,探讨Hugl-1基因表达与肺癌肿瘤细胞发生、侵袭的相关性。方法对50例NSCLC标本(含癌旁组织)和10例肺良性病变组织应用单克隆抗体、免疫组化SP法检测Hugl-1基因的蛋白表达情况。结果(1)肺癌肿瘤组织中Hugl-1基因表达水平显著低于癌旁组织和肺良性病变组织(P<0.05)。(2)肺癌组织中Hugl-1基因表达水平降低与肿瘤分期、淋巴结转移程度存在相关性(P<0.05),与肺癌组织学类型、细胞分化程度以及患者的性别、年龄无关。结论Hugl-1基因表达下降与肺癌的发生、发展过程有关。     

大肠癌组织Runx3基因启动子甲基化的研究

目的:检测大肠癌患者肿瘤组织及其相应的癌旁组织中Runx3基因表达和启动子区域甲基化状态,探讨甲基转移酶抑制剂5-aza-dc对结肠癌细胞系中Runx3表达的作用。方法:将手术切除的37例大肠癌组织和对应癌旁组织提取RNA和基因组DNA,采用RT-PCR检测Runx3基因的表达,甲基化特异PCR方法(MSP)检测Runx3基因启动子区域甲基化状态,用5-aza-dC处理结肠癌细胞系后,RT-PCR方法检测Runx3基因的表达。结果:37例大肠癌和对应癌旁组织中Runx3基因表达阳性率分别为100%(37/37),2.7%(1/37)。癌组织中Runx3基因表达明显降低(P<0.01)。MSP检测发现11例(30%)大肠癌标本及1例(3%)癌旁正常组织中Runx3基因呈甲基化状态。癌组织中Runx3基因甲基化明显高于癌旁组织(P<0.05)。结肠癌细胞系HT29 5-aza-dC处理后Runx3基因表达水平增加。结论:Runx3基因启动子甲基化和Runx3基因表达在大肠癌的癌旁组织和原发癌灶间存在显著性差异,可能与结肠癌的发生发展有关。     

p16基因甲基化及蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达

目的 探讨p16基因甲基化及蛋白在人非小细胞肺癌组织中的表达情况.方法 应用甲基化特异性PCR法(MS-PCR)及免疫组化SP法检测45例非小细胞肺癌组织、21例肺良性疾病组织中p16基因甲基化及蛋白的表达情况.结果 肺良性疾病中p16基因甲基化阳性率低于癌组织,差异有显著性(P=0.001),p16基因甲基化与非小细胞肺癌细胞分化程度及淋巴结转移情况有明显的相关性(P<0.05);肺良性疾病中p16蛋白阳性率高于癌组织,差异有显著性(P=0.007);p16蛋白表达与非小细胞肺癌临床分期、细胞分化程度及淋巴结转移情况有明显的相关性(P<0.05).p16甲基化和p16蛋白表达缺失存在相关性(P=0.004).结论 p16基因甲基化及蛋白的表达情况与非小细胞肺癌的发生、发展有关.     

p16基因甲基化及蛋白表达在非小细胞肺癌发病中的研究

目的 探讨p16基因甲基化及蛋白在人非小细胞肺癌组织中的表达情况。方法 应用甲基化特异性PCR法(MS-PCR)及免疫组化SP法检测45例非小细胞肺癌组织, 21例肺良性疾病组织中p16基因甲基化及蛋白的表达情况。结果 肺良性疾病中p16基因甲基化阳性率低于癌组织,差异有显著性(P＝0.001),p16基因甲基化与非小细胞肺癌细胞分化程度及淋巴结转移情况有明显的相关性(P<0. 05);肺良性疾病中p16蛋白阳性率高于癌组织,差异有显著性(P＝0.007); p16蛋白表达与非小细胞肺癌临床分期、细胞分化程度及淋巴结转移情况有明显的相关性(P<0. 05)。p16甲基化和p16蛋白表达缺失存在相关性(P＝0.004)。结论 p16基因甲基化及蛋白的表达情况与非小细胞肺癌的发生、发展有关。     

非小细胞肺癌组织中RASSF_(1A)和p16基因启动子甲基化研究

目的:研究肺癌新型侯选抑癌基因Ras相关结构域家族基因1A(RASSF1A)和p16基因在非小细胞肺癌(NSCLC)中的甲基化情况,揭示两基因表达失活的机制,为NSCLC的基因诊断和治疗寻找新途径。方法:用甲基化特异性PCR(MSP)方法对96例NSCLC患者癌组织及相应的远癌正常肺组织中RASSF1A和p16基因启动子甲基化状态进行检测。结果:(1)96例NSCLC组织RASSF1A甲基化率48.96%,p16基因34.38%,96例远癌正常肺组织均未发现此两基因甲基化。(2)RASSF1A甲基化率鳞癌组(64.29%)高于腺癌组(37.04%,P<0.05);p16基因甲基化率50岁以上组(44.93%)高于50岁以下组(7.41%,P<0.05),鳞癌(61.90%)高于腺癌(12.96%,P<0.05),有淋巴结转移组(46.67%)高于无淋巴结转移组(13.89%,P<0.05)。(3)RASSF1A与p16基因启动子CPG岛甲基化呈正相关(r=0.256,P<0.05)。结论:RASSF1A和p16在NSCLC尤其是鳞癌中频繁甲基化,可能是两基因表达失活的主要原因。     

CBP基因在非小细胞肺癌中的表达及其生物学意义

目的:研究CBP(CSK-binding protein)基因表达下降与人肺癌临床病理生理特征的关系,探讨CBP基因表达与肺癌肿瘤细胞发生、侵袭的相关性.方法:对50例非小细胞肺癌(NSCLC)标本(含癌旁组织)和10例肺良性病变组织应用单克隆抗体、免疫组化SP法检测CBP基因的蛋白表达情况.应用RT-PCR方法检测NSCLC中CBP的mRNA表达水平.结果:肺癌肿瘤组织中CBP基因表达水平显著低于癌旁组织和肺良性病变组织(P＜0.05).肺癌组织中CBP基因表达水平降低与肿瘤分期、淋巴结转移程度存在相关性(P＜0.05),与肺癌组织学类型、细胞分化程度以及患者的性别、年龄无关.结论:CBP基因可能参与了对肺癌肿瘤细胞Src家族成员激酶活性的负反馈调节,其表达下降可能与肺癌的发生、发展过程有关.     

胃癌组织中RASGRF1基因甲基化及蛋白表达与其临床意义

目的探讨胃癌组织中Ras蛋白特异性鸟苷酸释放因子1（RASGRF1）基因甲基化及蛋白表达以及临床意义。方法收集80例胃癌病人病历资料,采用免疫组织化学法检测80例胃癌组织和相应癌旁组织中RASGRF1蛋白表达情况,采用甲基化特异性PCR检测RASGRF1基因甲基化状态,分析胃癌组织中RASGRF1基因甲基化及蛋白表达的相关性,并观察胃癌组织中RASGRF1基因甲基化状态及蛋白表达情况与病人临床病理参数的关系。结果胃癌组织和相应癌旁组织中RASGRF1蛋白表达与基因甲基化表达情况差异均有统计学意义（P < 0.05）;Spearman相关分析结果显示,胃癌组织中RASGRF1蛋白表达与基因甲基化呈负相关关系（P < 0.01）;胃癌组织中RASGRF1蛋白表达与性别、年龄、肿瘤直径、组织学分化程度、发生远处转移无关（P>0.05）,与肿瘤分期有关（P < 0.05）;胃癌组织中RASGRF1基因甲基化与性别、年龄、肿瘤直径、组织学分化程度无关（P>0.05）,与肿瘤分期、发生远处转移有关（P < 0.05和P < 0.01）。结论胃癌组织中RASGRF1基因甲基化和蛋白表达二者呈负相关关系,RASGRF1基因甲基化及蛋白表达与肿瘤分期、发生远处转移有一定关系。     

非小细胞肺癌患者肿瘤和癌旁组织p14ARF的甲基化状态检测及临床意义

目的：探讨非小细胞肺癌中的 p14ARF基因启动子甲基化状态及其在非小细胞肺癌癌变中的作用。方法收集非小细胞肺癌及配对的癌旁组织各107例,采用改良巢式 MSP（methylation specific PCR, MSP）检测肺癌患者肿瘤标本以及配对的癌旁组织中 p14ARF基因外显子 CpG岛的启动子甲基化情况。结果p14ARF甲基化在107例肺癌中肿瘤组织中表达率为33.6%;而在配对的癌旁组织中表达率为12.1%;两组之间差异具有统计学意义（P＆lt;0.05）,并且两者相关性极差。结论肺癌的癌组织及配对的癌旁组织中p14ARF启动子甲基化存在明显差异,结合其他辅助检查可提高肺癌诊断的阳性预测值。     

非小细胞肺癌中基质金属蛋白酶-10的表达

目的:探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)中基质金属蛋白酶-10(matrix metalloproteinase-10,MMP-10)的表达及其与临床参数间的关系.方法:使用RT-PCR法及免疫组化法,检测32对NSCLC癌组织及癌旁正常组织中MMP-10的表达水平,并分析其与性别、年龄、分期、分级、肿瘤大小、淋巴结转移及病理类型之间的相关性.结果:MMP-10 的表达在mRNA水平与蛋白质水平表达有差异:MMP-10 mRNA在NSCLC癌组织中的表达要显著低于癌旁正常肺组织(P＜0.05),MMP-10蛋白在肺癌癌组织中的表达要显著高于癌旁正常肺组织(P＜0.01);在NSCLC癌组织中MMP-10 mRNA 的表达与MMP-10蛋白的表达呈正相关(r=0.4672, P＜0.05),而在癌旁正常肺组织中,两者表达相关性无显著统计学差异(r=-0.003022,P＞0.05).结论:MMP-10 mRNA在肺癌癌组织中表达要低于正常组织,MMP-10蛋白在肺癌癌组织中表达要高于正常组织.     

p16基因甲基化在非小细胞肺癌的表达研究

目的：探讨p16基因甲基化在人非小细胞肺癌组织中的表达情况。方法：应用甲基化特异性PCR法（MS-PCR）检测45例非小细胞肺癌组织,21例肺良性疾病组织中p16基因甲基化的表达情况。结果：肺良性疾病中p16基因甲基化阳性率为14．3％,低于癌组织中的57．8％,差异有统计学意义（P=0．001）;p16基因甲基化与非小细胞肺癌细胞分化程度及淋巴结转移情况有明显的相关性（P〈0．05）。结论：p16基因甲基化的表达情况与非小细胞肺癌的发生、发展有关。