平阳霉素诱导人脐静脉血管内皮细胞HUVEC凋亡的作用机制

目的 检测不同浓度平阳霉素(pingyangmycin,PYM)作用24h对人脐静脉血管内皮细胞HUVEC细胞的生长抑制及凋亡的影响,探讨平阳霉素诱导HUVEC细胞凋亡最佳浓度及有关作用机制。方法 用不同浓度的平阳霉素作用HUVEC细胞24h,以细胞增殖-毒性8检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测比较0.1、10、100、1000μg/ml平阳霉素作用24h后对HUVEC细胞的抑制作用,用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶细胞凋亡检测试剂盒(Annexin-VFITC/PIapoptosis kit)检测不同浓度PYM对HUVEC细胞凋亡作用的影响,蛋白印迹法(Western blot)检测不同浓度平阳霉素作用HUVEC细胞后内质网应激蛋白GRP78和CHOP的表达。结果 CCK-8结果显示随平阳霉素浓度的升高,对HUVEC细胞的抑制作用越明显(P<0.05);然平阳霉素药物浓度100μg/ml和1000μg/ml组相比,差异无显著性统计学意义(P>0.05)。流式细胞检测显示0.1、1、10、100μg/ml平阳霉素作用24h后细胞凋亡率分别为5.37%±1.63%、12.70%±1.57%、24.70%±6.99%、23.60%±0.80%,坏死率分别为4.87%±2.09%、7.32%±3.88%、39.10%±6.18%、66.30%±0.40%,随药物浓度增加而增高,过高浓度细胞坏死占主导,和对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);Western blot法结果显示,平阳霉素各浓度作用24h后促进内质网应激蛋白GRP78和CHOP的表达。结论 平阳霉素在体外能明显抑制HUVEC细胞生长并促进其凋亡,当平阳霉素浓度达到100μg/ml时,细胞以坏死为主;平阳霉素可能通过内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)途径诱导HUVEC细胞凋亡。     

平阳霉素磁性微球的制备及特性检测

目的 :制备平阳霉素磁性微球 ,对其特性进行检测并评价其靶向性。方法 :采用冷冻凝聚法制备包裹超微Fe3O4 和平阳霉素的明胶微球 ,测定微球的直径 ;应用液相高效色谱仪、原子吸收分光光度仪、药物溶出仪等测定微球各成分含量、释放率及在外加磁场作用下微球在大鼠体内的分布情况。结果 :微球呈球形 ,平均直径 32 .2 3μm各成分含量为 (W/W ) :Fe3O4 11.7%,PYM3 .8%,明胶 84.5 %。 3h内平阳霉素释放率 6 3 .1%。Fe3O4 在大鼠靶向部位分布明显高于非靶向部位。结论 :平阳霉素磁性微球具有较好的靶向性和缓释性 ,是治疗海绵状血管瘤较为理想的剂型。     

平阳霉素对大鼠脾脏组织的作用及其机制

目的:以大鼠脾脏为模型,探讨平阳霉素治疗海绵状血管瘤的机制.方法:观察平阳霉素注射于大鼠脾脏后不同时段的病理变化,采用末端转移酶介导的缺口末端标记法结合透射电镜检测凋亡,图像分析技术选择性地比较不同作用时段的凋亡率,免疫组化结合图像分析仪定量分析凋亡相关蛋白Caspase-3的变化.结果:注射生理盐水不引起大鼠脾脏结构破坏.注射平阳霉素后第2天、第5天脾脏仅有轻微肿胀;第8天、第14天呈萎缩改变,脾窦内皮细胞受损伤;注射平阳霉素后不同时间电镜检查均可见到凋亡细胞;TUNEL标记结果显示凋亡广泛发生于脾窦内皮细胞及其他脾细胞;注射后一定时间内,凋亡率随作用时间延长而增加;Caspase-3蛋白表达逐渐增强,与细胞凋亡的增加一致.结论:平阳霉素主要通过诱导脾窦内皮细胞凋亡为主,并导致一定程度的坏死,少量的成纤维细胞增生等.其发生机制是通过Caspase-3活化途径来诱导细胞凋亡.     

异博定与平阳霉素合用对人喉癌细胞的毒性

利用国产抗癌药物平阳霉素与钙拮抗剂异博定单独或同时处理体外培养人喉癌细胞（HEP-2），测定细胞的生长速度和集落形成率。发现无毒剂量的异博定与平阳霉素合用后，细胞生长速度和集落形成率显著下降。表明异博定能增强平阳霉素的细胞毒性。     

肺纤维化形成过程中大鼠成纤维细胞对肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响

目的:研究在平阳霉素诱导的大鼠肺纤维化形成过程中肺成纤维细胞对肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响。方法:先将大鼠分成平阳霉素组和生理盐水组,平阳霉素组气管内给药复制大鼠肺纤维化动物模型(平阳霉素3mg/kg),生理盐水组气管内注射等量生理盐水,分别于7,28 d处死平阳霉素组大鼠10只,生理盐水组大鼠4只,其中平阳霉素组及生理盐水组各取3只提取肺成纤维细胞,平阳霉素组6只提取大鼠原代Ⅱ型肺泡上皮细胞,分别进行培养。待两种细胞均已贴壁后,再进行如下分组即:①实验组:用平阳霉素组肺成纤维细胞上清液加入平阳霉素组肺泡Ⅱ型上皮细胞并培养48 h;②对照组:用生理盐水组肺成纤维细胞上清液加入平阳霉素组肺泡Ⅱ型上皮细胞并培养48 h。用半定量RT-PCR法检测实验组和对照组中肺泡Ⅱ型上皮细胞SP-A、TGF-β及HGF mRNA表达的变化。结果:①SP-A mRNA和HGF mRNA的表达实验组低于对照组(P相似文献   

平阳霉素抑制人脐静脉内皮细胞系ECV304的实验研究

目的 探讨平阳霉素抑制人脐静脉内皮细胞系ECV304的量效和时效关系及其相关机制.方法 用不同浓度的平阳霉素作用于ECV304细胞24、48、72 h,MTT法观察细胞增殖抑制情况,电镜及DNA电泳实验分析细胞凋亡情况,流式细胞术分析细胞凋亡率、细胞周期及Fas、Bcl-2蛋白的表达.结果 MTT法显示不同浓度平阳霉素组间细胞生长抑制率有显著差异,浓度越高、作用时间越长,抗增殖效应越明显;流式细胞术显示细胞凋亡率随药物浓度和作用时间增加而升高,平阳霉素各浓度作用24 h后,G2-M期百分率增高,S期百分率降低,G0-G1期百分率无明显变化;Fas表达随药物浓度增加而递增,Bcl-2表达随药物浓度增加而递减.结论 平阳霉素能明显抑制ECV304细胞生长,并具有浓度和时间依赖性;平阳霉素可能是通过上调Fas蛋白并下调Bcl-2蛋白的表达,从而诱导细胞在G2-M期发生凋亡.     

平阳霉素和鱼肝油酸钠联合注射治疗颌面部海绵状血管瘤疗效分析

目的 :探讨平阳霉素和鱼肝油酸钠联合注射治疗颌面部海绵状血管瘤的疗效。方法 :对 78例颌面部海绵状血管瘤采用平阳霉素和鱼肝油酸钠联合瘤腔内注射治疗。 7～ 10天注射 1次 ,2～ 4次为 1个疗程 ,同时设立 78例单用鱼肝油酸钠和 73例单用平阳霉素腔内注射作为对照。结果 :平阳霉素和鱼肝油酸钠联合瘤腔内注射治疗 1～ 2年内随访 74例 ,总愈显率 97.30 % ;单用鱼肝油酸钠组总愈显率 78.2 1% ,两组差异有极显著性意义 (P <0 .0 0 5 ) ;单用平阳霉素组总愈显率 87.67% ,与联合用药组间差异也有显著性意义 (P <0 .0 5 )。结论 :平阳霉素和鱼肝油酸钠联合注射治疗颌面部海绵状血管瘤有显著疗效 ,值得临床推广     

阿斯匹林对平阳霉素诱导培养兔晶体白内障形成抑制作用的实验研究

目的 :观察阿斯匹林对平阳霉素诱导培养兔晶体白内障形成的抑制作用 ,研究阿斯匹林对晶体上皮细胞凋亡的抑制作用。方法 :采用兔晶体体外培养方法 ,观察阿斯匹林对不同培养时间 (2 4h ,4 8h ,72h ,96h)平阳霉素诱导兔晶体混浊形成的影响。在透射电镜下观察晶体上皮细胞超微结构的改变。通过免疫组织化学S P染色检测不同培养时间 (12h ,2 4h ,36h)晶体上皮细胞Bcl 2表达的情况。结果 :阿斯匹林可延缓和减轻平阳霉素诱导的兔晶体混浊的形成。培养 2 4h透射电镜下平阳霉素组和平阳霉素 +阿斯匹林组均检测到凋亡细胞。阿斯匹林 +平阳霉素组和平阳霉素组Bcl- 2染色的积分光密度在 12h分别为 2 5 1.0 1± 75 .2 7和 12 2 .2 3± 4 0 .74 (P <0 .0 5 ) ,在 2 4h分别为 178.6 3± 16 .84和 96 .15± 15 .76 (P <0 .0 5 ) ,在 36h分别为 114 .14± 2 9.86和 6 4 .71± 15 .5 3(P <0 .0 5 )。结论 :阿斯匹林可抑制平阳霉素诱发的兔晶体上皮细胞凋亡 ,延缓和减轻平阳霉素诱导的兔白内障的发生和发展。体外晶体培养诱导兔白内障模型是一种可行的实验方法     

平阳霉素联合尿素瘤内注射治疗海绵状血管瘤40例

目的:探讨平阳霉素联合尿素瘤内注射治疗海绵状血管瘤的临床疗效。方法:120例海绵状血管瘤患者随机分为A、B、C组3组,每组40例,A组采用平阳霉素联合尿素瘤内注射;B组采用单纯平阳霉素瘤内注射;C组采用单纯尿素瘤内注射,所有病例随访1年以上,对其疗效进行评估。结果:平阳霉素联合尿素治疗组治愈率明显高于单用平阳霉素组或单用尿素组,治愈疗程也较单用平阳霉素组或单用尿素组明显缩短,而且并发症发生率显著低于单用平阳霉素组或单用尿素组。结论:平阳霉素联合尿素瘤内注射治疗海绵状血管瘤治愈率高、疗程短,并发症少。     

肺纤维化形成过程中肺泡Ⅱ型上皮细胞对肺成纤维细胞的影响及相关机制的探讨

目的:探讨肺间质纤维化形成过程中肺泡Ⅱ型上皮细胞对肺成纤维细胞FSP1,TGF-β,HGFmRNA表达的影响和调控作用机制.方法:28只SD大鼠随机分为平阳霉素组和生理盐水组,平阳霉素组气管内给药复制大鼠肺纤维化动物模型,生理盐水组气管内注射等量生理盐水.分别于7,28天各处死平阳霉素组大鼠10只,生理盐水组大鼠4只,其中平阳霉素组3只及生理盐水组3只提取肺泡Ⅱ型上皮细胞,平阳霉素组6只提取肺成纤维细胞,分别进行培养.至2种细胞到亚汇合状态时,实验组即:用平阳霉素组肺泡Ⅱ型上皮细胞上清液培养平阳霉素组肺成纤维细胞48h;对照组即:用生理盐水组肺泡Ⅱ型上皮细胞上清液培养平阳霉素组肺成纤维细胞48h,然后用半定量RT-PCR法检测肺成纤维细胞FSP1,TGF-β,HGFmRNA表达量的变化.平阳霉素组及生理盐水组各余1只用作HE染色.结果:(1)实验组7天,28天FSP1mRNA,TGF-βmRNA,HGFmRNA表达均高于对照组(P＜0.01),(2)第7,28天实验组FSP1mRNA,TGF-βmRNA表达无明显差别(P＞0.05),实验组28天HGFmRNA表达高于第7天(P＜0.01).结论:平阳霉素诱导的肺纤维化大鼠的肺泡Ⅱ型上皮细胞能够促进肺成纤维细胞FSP1mRNA、TGF-βmRNA的表达,能够促进纤维化的进展.     

应用平阳霉素与单克隆抗体Fab片段偶联物抑制肿癌生长与肿瘤肝转移

目的 研制一种具有抑制肝癌生长和瘤肝转移作用的单克隆抗体Fab 片段与平阳霉素（PYM）偶联物。方法 以胃蛋白酶酶解结合二巯基苏糖醇（DTT）还原法制备单抗Fab片段。以葡聚糖T－40（ 拒T－40)为中介体制备Fab片段和PYM偶联物Fab-PYM;用间接ELISA法,2,3,5－氯化三苯基四氮唑（TTC）抑菌效价检测法,克隆形成法及动物移植性肿瘤模型测定F -PYM偶联物在体外的生物学活性与在小鼠体内的抗肿瘤作用。结果： Fab-PYM与BEL－7402,肝癌22（H22）及HP－29细胞呈免疫学阳性反应,但与KB细胞无反应;偶联物中PYM的抑菌活性为游离PYM的15％,Fab-PYM对体外培养的BEL－7402细胞,HT－29细胞和KB细胞的50％抑制浓度（IC50）分别为0．02,0．08及0．50umol/L;静脉注射10mg/kg Fab-PYM偶联物和PYM皮下接种对小鼠肝癌22的抑瘤率分别为86％和62％,腹腔注射,10mg/kg Fab-PYM偶联物和PYM对小鼠脾内接种的结肠癌26肝转移的抑制率分别为91％和62％,结论 Fab-PYM偶联物具有比游离平阳霉素更强的抑制肝癌生长与肿瘤肝转移作用。     

前列腺癌单克隆抗体与平阳霉素偶联物导向化疗的体外作用

目的 探讨导向化疗对前列腺癌细胞系LNCaP的体外作用.方法 以葡聚糖为中介体制备抗前列腺癌单克隆抗体7E11C5.3与平阳霉素(PYM)的偶联物,用间接ELISA法测定其免疫活性,2,3,5-氯化三苯基四氮唑法测定其抑菌活性.四唑盐法测定其体外细胞毒作用.结果 偶联物中7E11C5.3和PYM的摩尔比为1:54,偶联后单抗的免疫活性降低了10%～20%,偶联物中PYM的抑菌活性为游离PYM的25%,偶联物和游离PYM对体外培养的LNCaP细胞50%抑制浓度分别为(9.41±1.98)μg/ml和(29.92μ7.88)μg/ml.结论 7E11C5.3-PYM偶联物的体外抗前列腺癌作用强于游离PYM.     

Effect of pingyangmycin on the growth and cell cycle of human vascular endothelial cells]

OBJECTIVE: To study the effect of pingyangmycin (PYM, bleomycin A5) on the proliferation and cell cycle of the cultured ECV304 cells, a human umbilical vein endothelial cell (HUVEC) line. METHODS: The growth inhibition of PYM on ECV304 cells was measured by MTT assay and the changes in the cell cycle by flow cytometry. RESULTS: After 10 microg/ml PYM treatment of the cells for 24, 48, and 72 h, the inhibition rates were 44.7%, 59.7%, and 74.4% respectively, showing a dose- and time-dependent inhibitory effect, with the 50% inhibitory concentration (IC50) of PYM corresponding to treatment durations of 24, 48 and 72 h being 32.94, 2.56 and 0.75 microg/ml respectively. Flow cytometry showed that ECV304 cell cycle was arrested at G2-M phase after 24-hour treatment with 1 microg/ml PYM, with significant reduction in the cell ratio of S phase and increase of G2-M phase (P<0.01) CONCLUSION: PYM can effectively inhibit the proliferation of ECV304 cells, the mechanism of which might involve the blocking of cell cycle.     

应用平阳霉素与单克隆抗体Fab′片段偶联物抑制肝癌生长与肿瘤肝转移

目的　研制一种具有抑制肝癌生长和肿瘤肝转移作用的单克隆抗体Fab′片段与平阳霉素（PYM）偶联物。方法　以胃蛋白酶酶解结合二巯基苏糖醇（DTT）还原法制备单抗Fab′片段;以葡聚糖T-40（dextran T-40）为中介体制备Fab′片段和PYM偶联物Fab′-PYM;用间接ELISA法、2,3,5-氯化三苯基四氮唑 （TTC）抑菌效价检测法,克隆形成法及动物移植性肿瘤模型测定Fab′-PYM偶联物在体外的生物学活性与在小鼠体内的抗肿瘤作用。结果　Fab′-PYM与BEL-7402、肝癌22（H22）及HT-29细胞呈免疫学阳性反应, 但与KB细胞无反应;偶联物中PYM的抑菌活性为游离PYM的15%;Fab′-PYM对体外培养的BEL-7402细胞、HT-29细胞和KB细胞的50%抑制浓度（IC50）分别为0.02、0.08及0.50 μmol/L;静脉注射10 mg/kg Fab′-PYM偶联物和PYM皮下接种对小鼠肝癌22的抑瘤率分别为86%和62%;腹腔注射,10 mg/kg Fab′-PYM偶联物和PYM对小鼠脾内接种的结肠癌26肝转移的抑制率分别为91%和62%。结论　Fab′-PYM偶联物具有比游离平阳霉素更强的抑制肝癌生长与肿瘤肝转移作用。     

胃癌及乳癌对化疗药物敏感性的测定

目的探讨胃癌、乳癌对常用化疗药物的反应性,筛选针对个体的化疗药物,为临床用药提供依据。②方法采用噻唑蓝（ＭＴＴ）法,对肿瘤组织进行５－氟尿嘧啶（５－ＦＵ）、顺铂（ＤＤＰ）、氨甲喋呤（ＭＴＸ）、丝裂霉素（ＭＭＣ）、长春新碱（ＶＣＲ）、平阳霉素（ＰＹＭ）、足叶乙甙（ＶＰ－１６）敏感性测定。③结果７种化疗药物对胃癌、乳癌抑制率不同,其中ＤＤＰ,５－ＦＵ,ＰＹＭ,ＶＣＲ,ＭＭＣ对胃癌抑制率较高;５－ＦＵ,ＰＹＭ,ＤＤＰ对乳癌抑制率较高。不同个体对化疗药物敏感性差异较大,胃癌病人对ＤＤＰ,５－ＦＵ,ＰＹＭ敏感者居多;乳癌病人对５－ＦＵ,ＰＹＭ敏感者居多。④结论不同肿瘤及同一肿瘤不同个体对化疗药物敏感性有显著差异。     

BEP方案治疗中晚期鳞癌30例临床观察

本文报道应用ＢＥＰ方案治疗中晚期鳞癌３０例，其中完全缓解４例，部分缓解１４例，总有效率为６０％。我们认为该方案毒副作用轻微，经解率较高，故可作为中晚期鳞癌化疗的优先方案。     

异搏定联合抗肿瘤药物对人涎腺粘液表皮样癌高转移细胞生长抑制的增效效应

目的 :分析钙拮抗剂异搏定 (verapamil,Ver)联合应用阿霉素 (adriamycin ,ADM)柔红霉素 (daunorubicin ,DNR)、足叶乙甙 (etoposide,VP1 6 )、高三尖杉酯碱 (homoharringtonine,HHT)和长春花碱 (vinblastineVBL)等抗肿瘤药物对人涎腺粘液表皮样癌高转移细胞 (Mc3)的增效效应 .方法 :采用细胞培养、细胞计数及MTT等方法观察各化疗药物对Mc3细胞的杀伤作用 ,根据药物剂量 -效应曲线、半抑制浓度 (IC50 )、抗肿瘤活性 (RAA)比较各化疗药物单独用药及分别联合非细胞毒性的Ver的抗肿瘤作用及联合用药合并指数 (CI50 ) .结果 :Ver剂量超过 32 0 0 0时 ,对Mc3细胞有生长抑制作用 ,其IC50为 3981 0 .72 ;DNR ,VBL ,VP1 6 ,ADM和HHT等药物单独用药对Mc3细胞均呈现具有一定量效关系的生长抑制作用 .低浓度的DNR ,VBL ,VP1 6 ,ADM和HHT与非细胞毒性剂量的Ver联合应用 ,各用药组均呈现极强的细胞毒性作用 ,CI50 分别 <0 .95 ,其所合用的剂量水平均有显著的协同作用 .结论 :非细胞毒性剂量的Ver明显增强了化疗药物的抗肿瘤活性 ,对人涎腺粘液表皮样癌高转移肿瘤细胞生长抑制有明显的增效效应 .     

平阳霉素的体外抗癌谱

采用集落形成试验法,对平阳霉素(pingyangmycin,PYM)的体外抗癌谱进行研究,结果10种人癌细胞系对PYM的敏感性存在差异,ID_(50)为0.03～0.82μg/ml。食管癌Eca109和CaEs17细胞、鼻咽癌CNE细胞及肝癌BEL-7402细胞对PYM敏感,ID_(50)<0.2μg/ml,与PYM的临床疗效一致;2种起源于宫颈癌的细胞系对PYM明显抗拒,ID_(50)>0.7μg/ml,与临床疗效不一致;2种胃腺癌细胞系(MGc80-3和BGC-823)对PYM的敏感性较低,ID_(50)为0.21和0.47μg/ml;肺鳞癌LTEP-78为PYM敏感细胞,ID_(50)仅为肺腺癌SPC-A-1细胞的1/7,但其临床意义尚不清楚。     

平阳霉素对人脐静脉内皮细胞株EA.hy926的作用及其机制

目的:观察平阳霉素(PYM)对人脐静脉内皮细胞株EA.hy926的作用及可能机制。方法:采用甲基三氯硅烷(MTS)比色法检测PYM对EA.hy926细胞体外生长的作用;流式细胞术测定PYM作用细胞24h后细胞凋亡、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3表达、线粒体膜电位的变化;免疫印迹(Western-blot)法检测PYM对EA.hy926细胞中Caspase-8、Caspase-9蛋白表达水平的影响。结果:PYM可明显抑制EA.hy926细胞的增殖,且生长抑制率具有浓度时间依赖性;流式细胞术检测结果显示PYM各浓度作用24h后,细胞凋亡百分率随药物浓度增加而增高,活化Caspase-3表达在PYM各浓度组均增强,线粒体膜电位在各浓度组均下降;Western-blot法检测结果显示PYM作用EA.hy926细胞后,Caspase-8、Caspase-9蛋白均可出现明显的剪切带。结论:PYM能抑制EA.hy926细胞的增殖,这种抑制作用是可通过诱导细胞凋亡实现的,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9参与了PYM诱导EA.hy926细胞凋亡的过程。