甲状腺乳头状癌组织中TSHR基因启动子甲基化及其临床意义

摘 要：［目的］ 探讨甲状腺乳头状癌（papillary thyroid cancer,PTC）组织中TSHR基因启动子区甲基化程度及其临床意义。［方法］采用甲基化特异性聚合酶链反应（Methylation-Specific Polymerase chain reaction,MSP）法检测100例PTC组织及其癌旁组织中TSHR基因启动子甲基化状态,并结合患者的临床病理特征和随访信息分析TSHR与PTC进展及预后的关系。［结果］ 100例PTC组织中TSHR基因启动子甲基化率为77%,明显高于癌旁组织的7%（P=0.002）。TSHR基因甲基化程度与患者初诊年龄、原发灶大小、数量、腺外侵犯、淋巴转移、TNM分期呈正相关（P<0.05）;而与患者性别、T分期无关（P>0.05）。单因素生存分析显示TSHR基因甲基化预示更短的无病生存时间,而多因素生存分析显示TSHR基因甲基化不是PTC患者无病生存的独立影响因素。［结论］ TSHR基因启动子区甲基化是PTC组织中频发的分子事件,与肿瘤的进展相关并提示PTC患者的不良预后。     

甲状腺肿瘤中p16基因甲基化及p16蛋白的表达

目的探讨甲状腺肿瘤细胞中p16基因异常甲基化及p16蛋白的表达。方法采用甲基化敏感的限制性内切酶SmaI消化DNA，PCR扩增p16基因外显子1，分析60例甲状腺肿瘤中p16基因外显子15′CpG岛异常甲基化，采用免疫组化Envision法检测60例甲状腺肿瘤标本细胞中p16蛋白的表达。结果60例甲状腺肿瘤中p16基因外显子。5′CpG岛异常甲基化率为15．0％（9／60）。30例甲状腺癌中为30．0％（9／30）；30例腺瘤中无异常甲基化，组间比较差异有显著性（P〈0．001）。60例甲状腺肿瘤中p16蛋白阳性表达率为46．7％／60）。30例腺瘤中p16蛋白阳性表达率为60．0％（18／30）；30例甲状腺癌中为33．3％（10／30），组间较差异有显著性（P〈0．05）。结论p16基因外显子t5′CpG岛异常甲基化与甲状腺癌的发生、发展有关，其主要机制可能与甲状腺恶性肿瘤中p16基因失活导致P16蛋白表达缺失有关。     

食管鳞状细胞癌及癌前病变组织中p16基因甲基化的研究

目的：探讨食管鳞状细胞癌及癌前病变纽织p16基因CpG岛的甲基化情况．及其在食管癌发生和早期诊断中的价值。方法：采用MSP方法，对食管癌前病变不同阶段、鳞状细胞原位癌和浸润癌的病变组织进行了甲基化检测．并与其相应的正常组织和慢性食菅炎组织的甲基化情况进行对比分析。结果：轻、中、重度不典型增生、鳞状细胞原位癌和浸润癌的甲基化频率分别为22．73％(5/27)、46．15％(6/13)、77．78％(7/9)、78．57％(11/14)和64．86％(24/37)。67例正常对照组织中3例(4．48％)p16基因甲基化，与病变组织相比，差异有统计学意义，P=0．000。10例慢性食管炎组织中1例(10％)p16基因甲基化。结论：p16基因甲基化可能是食管癌发生的最早期事件之一。     

食管鳞状细胞癌及癌前病变组织中p16基因甲基化的研究

目的探讨食管鳞状细胞癌及癌前病变组织p16基因CpG岛的甲基化情况,及其在食管癌发生和早期诊断中的价值。方法采用MSP方法,对食管癌前病变不同阶段、鳞状细胞原位癌和浸润癌的病变组织进行了甲基化检测,并与其相应的正常组织和慢性食管炎组织的甲基化情况进行对比分析。结果轻、中、重度不典型增生、鳞状细胞原位癌和浸润癌的甲基化频率分别为22.73%(5/22)、46.15%(6/13)、77.78%(7/9)、78.57%(11/14)和64.86%(24/37)。67例正常对照组织中3例(4.48%)p16基因甲基化,与病变组织相比,差异有统计学意义,P=0.000。10例慢性食管炎组织中1例(10%)p16基因甲基化。结论p16基因甲基化可能是食管癌发生的最早期事件之一。     

胃癌组织中p16基因甲基化状态及临床意义

[目的]探讨胃癌患者癌组织、癌旁组织以及对照正常胃黏膜组织中p16基因的甲基化状态,及其与临床病理参数及预后的关系。[方法]应用甲基化特异性实时荧光聚合酶链反应技术检测92例胃癌患者癌组织及配对癌旁组织中p16基因启动子区5′-CpG岛甲基化状态,分析p16基因异常甲基化与患者临床病理特征以及预后之间的关系。[结果]胃腺癌患者癌组织中检测到p16基因甲基化79例(85.9%),癌旁组织11例(12.0%),胃炎患者组织10例(20.8%),健康人未检测到甲基化。p16基因甲基化与肿瘤大小、分化程度、是否淋巴管侵犯、T分期、有无淋巴结转移、有无远处转移、临床分期有关(P<0.05)。p16基因甲基化影响患者预后,但不是胃癌患者无病生存的独立预后因子。[结论]胃腺癌患者p16基因甲基化与肿瘤的生物学行为有关,提示肿瘤进展,恶性程度高,预后欠佳。     

子宫内膜癌组织p16基因甲基化检测及其临床意义的研究

目的:研究子宫内膜癌(endometrial carcinoma, EC)组织中p16基因CpG岛甲基化情况及其临床意义.方法:采用甲基化特异性PCR法(methylation specific PCR, MSP)检测38例EC组织、20例相应癌旁正常内膜组织(adjacent normal endometrium,ANE)和22例正常子宫内膜对照组织(normal controls, NC)中p16基因甲基化状态.结果:ANE和NC组织中不存在p16基因全部甲基化, EC及ANE组织p16基因部分甲基化率分别为26.3%(10/38)及30.0%(6/20),EC组织全部甲基化率为31.6%(12/38).EC、ANE和NC组织p16基因甲基化率(全部甲基化与部分甲基化)分别为57.9%(22/38)、30.0%(6/20)和0,差异有统计学意义,χ2=20.821,P＜0.01.p16基因甲基化率与EC临床分期(χ2=4.716,P＜0.05)及病理分化(χ2=5.739,P＜0.05)密切相关.结论:p16基因甲基化在EC发生和发展过程中可能是一个早期的、逐渐发展的事件,可为EC的早期诊断提供一定的理论基础.     

肝细胞癌p16基因甲基化及其对mRNA表达的影响

目的:探讨肝细胞癌p16基因甲基化状态和对mRNA表达的影响。方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)法和逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)分别检测了25例肝细胞癌及其相应的癌旁组织p16基因甲基化和mRNA表达状况。结果:25例肝细胞癌组织中检出13例甲基化,甲基化率为52.0%,相应的癌旁组织有6例甲基化,甲基化率为24.0%;25例肝细胞癌组织中,mRNA表达10例(表达率40.0%),相应的癌旁组织其mRNA表达19例(表达率76.0%),肝细胞癌组织和癌旁组织的甲基化率及mRNA表达,两者之间差异有显著性。结论:p16基因甲基化是肝细胞癌频发事件,p16基因甲基化导致mRNA表达缺失,p16基因甲基化检测可作为肝细胞癌分子诊断标志。     

食管癌前病变组织p16及FHIT基因甲基化探讨

目的:探讨食管癌前病变组织p16及FHIT基因启动子区CpG岛的甲基化状况.方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)方法,对食管癌前病变不同阶段及鳞状细胞原位癌的病变组织进行了甲基化检测,并与同一个体相应的病变旁组织及慢性食管炎和浸润性鳞癌组织的甲基化情况进行了时比分析研究.结果:轻度、中重度不典型增生、鳞状细胞原位癌和浸润癌共95例病变组织中p16基因的甲基化频率分别为22.73%、59.09%、78.57%、64.86%:FHIT基因的甲基化频率分别为22.73%、45.45%、64.29%、67.57%.同一个体相应的95例病变旁对照组织中16例未检测成功,余79例中5例(6.33%)p16基因甲基化,3例(3.80%)FHIT基因甲基化,与病变组织相比,均有统计学差异.10例慢性食管炎组织中1例p16基因甲基化,未发现FHIT基因甲基化.结论:p16及FHIT基因甲基化在癌前病变阶段就已经存在,可能是食管癌发生的早期事件之一.     

胃癌p16基因外显子1甲基化状态的研究

目的 研究抑癌基因p165‘CpG岛甲基化状态及其与胃癌发生、发展及浸润转移的关系。方法 对46例胃癌组织和30例良性病变胃粘膜（对照组）分别采用甲基化敏感性限制性内切酶（Hpa Ⅱ,MspⅠ,SacⅡ)酶切后PCR扩增进行p16基因甲基化多位点检测。结果 46例胃癌组织,p16基因甲基化13例（28．3％）,30例对照组无p16基因甲基化,两者比较有显著性差异（P＜0．05）。23例胃癌浸润未达肌层患者p16基因甲基2例（8．7％）,23例达肌层或浆膜层患者p16基因甲基化11例（47．8％）,两者比较有显著性差异（P＜0．05）。20例高中分化胃癌患者无p16基因甲基化,17例低分化胃癌p16基因甲基化13(76．5％）,两者比较差异有显著性（P＜0．05）。18例呈结节生长型胃癌p16基因甲基化6例（33．3％）,28例局限溃疡或溃疡浸润26例胃角、胃窦癌p16基因甲基化8例（30．8％）,两者比较无显著性差异（P＞0．05）。9例伴肝或淋巴结转移者胃癌p16基因甲基4例（44．4％）,37例无转移者p16基因甲基化9例（24．3％）,两者比较无显著性差异（P＞0．05）。结论 抑癌基因p16 5‘CoG岛甲基化在胃癌发生中起重要作用,并与胃癌浸润深度、分化程度有关,但与肿瘤的生长方式、部位及转移无关。     

p16基因在乳腺浸润性导管癌中甲基化的研究

目的探讨p16基因启动子的甲基化与乳腺浸润性导管癌发生的关系。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应法（MSP）,对42份乳腺浸润性导管癌组织和24份乳腺非癌组织进行p16基因甲基化检测。结果 42例乳腺癌中,18例检测到p16基因甲基化,甲基化率为42.9%;24例乳腺非癌组织中检测到2例（均为乳腺纤维腺瘤）甲基化,甲基化率为8.3%。p16基因启动子的甲基化率乳腺癌组与非癌组比较有显著性差异（χ2=8.619,P〈0.05）。结论 p16基因甲基化对乳腺浸润性导管癌的临床诊断具有一定指导意义。     

宫颈癌中p16基因启动子异常甲基化的检测

目的:探讨宫颈癌组织及外周血浆中p16基因启动子异常甲基化的状况及其在宫颈癌诊断中的价值.方法:用甲基化特异性PCR技术对宫颈癌组织,正常宫颈组织及相对应血浆中p16基因进行甲基化的检测.结果:45例宫颈癌组织中p16基因异常甲基化率为33.3％(15/45),相对应血浆中p16基因甲基化的检出率为20％(9/45),而正常对照组织未检出甲基化.血浆中甲基化的改变与宫颈癌组织甲基化状态显著相关(P＜0.05).p16基因甲基化发生率与年龄、病理分级、临床分期之间无统计学相关性(P＞0.05).结论:p16基因CpG岛甲基化是宫颈癌发生的高频事件,其甲基化检测在宫颈癌早期诊断中有一定的应用价值.     

p53和Rb与甲状腺乳头状癌分化程度关系的研究

目的:通过检测p53和Rb蛋白在不同分化程度甲状腺乳头状癌中的表达,探讨其在不同分化程度甲状腺乳头状癌发生、发展中的意义。方法:采用免疫组化LSAB法,对62例甲状腺乳头状癌术后原发灶标本中p53及Rb蛋白表达情况进行检测,按显微镜下甲状腺乳头状癌细胞的组织学特点,分为Ⅰ型(分化较好型)、Ⅱ型(中间型)、Ⅲ型(分化较差型)三型。结果:1)三型不同分化程度甲状腺乳头状癌中,癌细胞分化程度越好,p53的阳性表达率越低,而Rb的阳性表达率越高,p53阳性表达率差异有统计学意义,P=0.005,Rb阳性表达率差异也有统计学意义,P=0.001。2)在甲状腺乳头状癌中p53和Rb的蛋白表达无相关性,P=1。结论:p53蛋白的高表达与Rb蛋白的低表达在甲状腺乳头状癌向不同分化方向发展方面可能起重要作用,甲状腺乳头状癌细胞分化程度越差,p53的阳性表达率越高,而Rb的阳性表达率越低,但两者并无关联性。     

亚砷酸诱导人鼻咽癌细胞中p16基因表达的研究

目的 研究亚砷酸( As2O3)诱导鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)CNE- 2Z细胞株中抑癌基因p16的表达.方法 体外培养的CNE-2Z细胞分别加入不同浓度的亚砷酸,并作用于不同时间.用终浓度为2μmol/L、1 μmol/L、0.5μmol/L的As2O3加入鼻咽癌CNE-2...     

前列腺癌的p16基因甲基化程度定量分析

目的 建立和评价基因组DNA甲基化的定量分析方法,并比较正常前列腺组织和前列腺癌组织中的p16抑癌基因的DNA甲基化差异.方法 提取正常前列腺组织和前列腺癌组织中的基因组DNA,用亚硫酸氢钠将未甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶,经过PCR扩增后,用BstUⅠ和HpaⅡ限制性内切酶消化,通过电泳分离消化的片段,定量分析基因组中...     

Plk1和p27在甲状腺乳头状癌中的表达及预后意义

目的:探讨Plk1和p27在甲状腺乳头状癌中的表达及与甲状腺乳头状癌预后的关系。方法:采用免疫组织化学技术检测Plk1和p27在甲状腺乳头状癌中的表达情况。结果:甲状腺乳头状癌中Plk1的阳性表达率明显高于正常甲状腺组织（P<0.05）。Plk1在微灶癌（直径≤1cm）中的阳性表达率明显高于在癌灶直径>1cm的甲状腺乳头状癌(P<0.05)。甲状腺乳头状癌中p27阳性表达率（44.12%）明显低于正常甲状腺组织（80.00%,P<0.05）。Plk1和 p27表达与包膜浸润、淋巴结转移情况相关。结论:Plk1在早期甲状腺乳头状癌的发生、发展中起重要作用,联合检测Plk1和p27 有助于甲状腺乳头状癌的诊断及预后评估。     

Frequent inactivation of the p16 gene in human pituitary tumors by gene methylation

Rodent models of pituitary tumorigenesis have implicated the retinoblastoma (Rb) pathway in the development of pituitary tumors. Previously, we reported that loss of p16 expression rather than loss of Rb occurs in most human pituitary adenomas. This alteration in these tumors is not associated with p16 mutation or frequent homozygous p16 gene loss. Our laboratory has now demonstrated that in most human pituitary tumors, the 5′ CpG island of the p16 gene is extensively methylated. The high frequency of p16 gene methylation in human pituitary tumors suggests that this alteration is an early and perhaps required event in pituitary cell transformation. Mol. Carcinog. 19:221–224, 1997. © 1997 Wiley-Liss, Inc.     

高发区食管癌患者p16基因甲基化及其表达的比较研究

目的:比较p16基因甲基化在食管癌高发区河南林州(北方组)和广东揭阳(南方组)之间的异同,探讨p16基因甲基化在不同气候环境条件下的两地食管鳞癌(ESCC)发生中的作用。方法:采用甲基化特异性PCR方法(MSP)分别检测两地食管癌组织、癌旁组织和切缘组织p16基因启动子区域CpG岛甲基化状态。采用EnVision免疫组化法检测两地食管癌组织及癌旁组织的p16蛋白的表达。结果:南方组75例标本中,食管癌组织、癌旁组织和切缘组织p16基因甲基化率分别为41.3%(31/75)、13.3%(10/75)和6.67%(5/75);癌组织和癌旁组织p16蛋白的阳性表达率分别为29.3%(22/75)和56.7%(17/30);31例p16基因甲基化阳性标本中有2例(6.4%)检测到p16蛋白的表达,而44例p16基因甲基化阴性标本中有20例(45.5%)检测到p16蛋白的表达。北方组65例标本中,食管癌组织、癌旁组织、切缘组织p16基因甲基化率分别为52.3%(34/65)、16.9%(11/65)和7.69%(5/65);食管癌组织和癌旁组织p16蛋白的阳性表达率分别为32.3%(21/65)和66.7%(20/30);34例p16基因甲基化阳性标本中有4例(11.8%)检测到p16蛋白的表达,而31例p16基因甲基化阴性标本中有17例(54.8%)检测到p16基因的表达。两地组内癌组织p16甲基化率均显著高于癌旁组织和切缘组织,p16蛋白表达与p16基因甲基化呈负相关(P<0.01)。两地同类组织比较p16甲基化率和p16蛋白表达率均无显著性差异(P>0.05)。结论:p16基因异常甲基化后功能失活可能是南、北两地食管癌癌变过程的重要事件,在我国南北环境气候条件不同的两地高发区食管癌的发生中均起着重要的作用。本研究为环境因素和p16基因功能之间的生物学关联在食管癌的发生中提供了一定的证据。     

恶性淋巴瘤中p16基因的缺失及甲基化

目的：研究恶性淋巴瘤中ｐ１６基因缺失、甲基化发生的频率及其在淋巴瘤发生、发展中的作用,并研究其与淋巴瘤恶性度的关系。方法：收集７８例新鲜淋巴瘤标本及９例反应性增生的标本,用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增ｐ１６基因第１、第２外显子,检测等位基因纯合性缺失,用限制性内切酶－ＰＣＲ方法检测ｐ１６基因甲基化。结果：ｐ１６基因在恶性淋巴瘤中的缺失率为１１．５％,甲基化率为２６．９％;９例反应性增生未见ｐ１６基因     

子宫内膜癌中p16基因缺失及CpG岛甲基化的研究

目的　研究子宫内膜癌中 p16基因缺失及CpG岛甲基化情况。 方法　用PCR技术检测 p16基因在子宫内膜癌中的纯合性缺失及第一外显子异常甲基化。结果　 36例癌组织中 9例发生基因缺失 ,12例发生甲基化 ,未发现基因缺失与甲基化同时存在的病例。结论　 1.p16基因缺失与子宫内膜癌组织学分级严重程度和临床分期呈正相关 ;2 .5’CpG甲基化可能是 p16基因失活的重要机理 ,参与子宫内膜癌发生、发展。