血竭素高氯酸盐抑制高糖诱导的人肾小球系膜细胞结缔组织生长因子的表达

目的:研究血竭素高氯酸盐抑制高糖诱导的人肾小球系膜细胞(human mesangial cells,HMC)中结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的表达,探讨其防治糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)肾纤维化的机制.方法:将培养的HMC分为低糖组(LG组,5.5 mmol·L~(-1)D-葡萄糖)、高糖组(HG组,25 mmol·L~(-1) D-葡萄糖),每组均设血竭素高氯酸盐浓度7.5 μmol·L~(-1)对照,作用24,48 h后,采用RT-PCR方法和Western blot方法检测CTGF mRNA和蛋白水平的表达.结果:与高糖组比较,低糖组中CTGF mRNA和蛋白表达均显著性减少(P＜0.01),高糖组加血竭素高氯酸盐干预后,CTGF mRNA和蛋白表达显著性减少(P＜0.01).结论:血竭素高氯酸盐可以抑制CTGF的表达,这可能是其防治DN肾纤维化的部分机制.     

血竭素高氯酸盐通过线粒体途径诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡

目的:研究血竭素高氯酸盐(Dracorhodin Perchlorate,DP)抗乳腺癌作用及作用机制。方法:四甲基噻唑蓝法分析60μmol·L~(-1)DP作用不同时间后,其对肿瘤细胞的抑制率;细胞形态学分析、细胞核形态学分析和DNA片段化分析确定细胞凋亡的发生;Rhodamine123染色分析细胞线粒体膜电位;Western检测细胞凋亡相关特别是线粒体相关蛋白表达。结果:60μmol·L~(-1)DP时间依赖性地抑制人乳腺癌MCF-7细胞生长;DP抑制细胞生长通过诱导MCF-7细胞凋亡来实现;DP诱导细胞凋亡时,其活化了线粒体通路蛋白caspase-9,剪切了DNA损伤修复蛋白PARP;进一步研究发现DP诱导细胞凋亡的主要原因是其降低了细胞线粒体膜电位(正常膜电位细胞百分比93.11%;DP处理后正常膜电位细胞百分比37.45%);而线粒体上Bcl-2、Bcl-XL表达减少,Bax、Bak增多是DP改变线粒体膜电位的主要原因。结论:DP通过调节线粒体通路来促进细胞凋亡。     

肾康丸对高糖培养的火鼠系膜细胞TGF—β1及FN的影响

目的：观察肾康丸对高糖培养大鼠系膜细胞（MC）分泌转化生长因子（TGF-β1，及纤连蛋白（FN）分泌mRNA表达的影响，探讨其防治DN的分子机制。方法：体外培养大鼠MC，将细胞分为6组：低糖组、高糖组、正常血清组、开搏通组、肾康丸高、低剂量组。培养72h后，采用双抗夹心酶联免疫吸附（ELISA）法检测高糖对MC分泌TGF-β1，和FN的影响；采用逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR）法检测高糖对TGF-β1和FNmRNA的表达的影响；同时研究药物血清对上述指标的影响。结果：高糖可以促进MC分泌TGF-β1和FN，并提高MC中TGF-β1和FNmR—NA的表达，肾康丸可以明显抑制上述作用。结论：肾康丸可以通过TGF-β1途径抑制MC基质分泌。     

肾康丸对高糖培养的大鼠系膜细胞TGF-β1及FN的影响

目的:观察肾康丸对高糖培养大鼠系膜细胞(MC)分泌转化生长因子(TGF-β1,及纤连蛋白(FN)分泌mRNA表达的影响,探讨其防治DN的分子机制。方法:体外培养大鼠MC,将细胞分为6组:低糖组、高糖组、正常血清组、开搏通组、肾康丸高、低剂量组。培养72 h后,采用双抗夹心酶联免疫吸附(ELISA)法检测高糖对MC分泌TGF-β1和FN的影响;采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)法检测高糖对TGF-β1和FN mRNA的表达的影响;同时研究药物血清对上述指标的影响。结果:高糖可以促进MC分泌TGF-β1和FN,并提高MC中TGF-β1和FN mR-NA的表达,肾康丸可以明显抑制上述作用。结论:肾康丸可以通过TGF-β1途径抑制MC基质分泌。     

糖肾安对高糖环境下人肾系膜细胞HO-1、VEGF表达的影响

目的观察糖肾安含药血清对高糖环境下培养的人肾系膜细胞血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1, HO-1)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)表达的影响。方法选用SPF级雄性Wistar大鼠制备不同质量浓度的糖肾安含药血清,并在高糖环境下培养人肾系膜细胞。实验随机分6组,正常组在正常糖浓度下培养,其余5组(模型组、糖肾安低、中、高剂量组、厄贝沙坦组)在高糖浓度下培养。培养结束后进行实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real time PCR, qRT-PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测高糖环境下人肾系膜细胞HO-1的m RNA及蛋白表达变化,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测高糖环境下肾系膜细胞上清液中VEGF的质量浓度。结果各给药组HO-1的m RNA及蛋白表达较模型组显著上调(P 0.01),VEGF的质量浓度显著下降(P 0.01)。结论糖肾安干预糖尿病肾病(diabetic kidney disease, DKD)的作用机制可能与上调HO-1的表达,降低VEGF质量浓度有关。     

糖肾汤对高糖下肾小球系膜细胞TGF-β1表达影响的实验研究

目的：观察高糖对肾小球系膜细胞TGF-β1蛋白及mRNA表达的影响，以及糖肾汤的干预作用。方法：分别用低糖、高糖以及高糖下糖肾汤不同剂量培养肾小球系膜细胞，采用ELISA法测定TGF-β1蛋白含量，逆转录-多聚合酶链反应(RT-PCR)法测定TGF-β1ImRNA表达，并以开博通作为阳性药对照。结果：高糖可刺激肾小球系膜细胞TGF-β1蛋白及mRNA的表达，糖肾汤具有对抗高糖刺激作用，且呈现一定的量效关系。结论：糖肾汤对高糖对肾小球系膜细胞的影响具有干预作用。     

芪药消渴胶囊对高糖诱导肾小球系膜细胞增殖的抑制作用

目的观察芪药消渴胶囊对高糖诱导肾小球系膜细胞(GMCs)增殖的抑制作用。方法通过GMCs体外培养技术,采用含药血清药理学的方法,制备不同浓度芪药消渴胶囊的含药血清,筛选最佳葡萄糖浓度,在葡萄糖的诱导下,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测并观察不同时间、不同浓度下GMCs增殖情况。结果在不同时间点,空白组细胞生长最为缓慢。与空白组比较,在相同培养条件下,0.4 g/L葡萄糖组及0.5 g/L葡萄糖组在48 h、72 h对GMCs增殖有刺激作用(P<0.05,P<0.01),0.6 g/L葡萄糖组0.7 g/L葡萄糖组、0.8 g/L葡萄糖组在24 h、48 h、72 h对GMCs增殖有明显刺激作用(P<0.05,P<0.01),其中0.6 g/L葡萄糖组在48 h、72 h对GMCs增殖刺激作用较强(P<0.01)。提示0.6 g/L葡萄糖为GMCs增殖的最佳刺激浓度。与空白对照组比较,高糖组细胞生长迅速(P<0.05,P<0.01);与高糖组比较,芪药消渴胶囊含药血清各组细胞在48 h、72 h生长缓慢(P<0.05),提示芪药消渴胶囊对高糖诱导的GMCs增殖的抑制作用。结论芪药消渴胶囊具有抑制GMCs增殖作用。     

秦皮甲素对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖及纤维连接蛋白表达的影响

目的探讨秦皮甲素对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)增殖及纤维连接蛋白(FN)表达的影响。方法采用CCK-8法检测不同浓度秦皮甲素(10、30、90μmol·L-1)对正常培养条件(含糖5.6 mmol·L-1)和高糖培养条件(含糖25 mmol·L-1)下的HBZY-1细胞增殖的影响;以PI3K抑制剂Wortmannin(1μmol·L-1)干预为对照,采用Western Blot法检测秦皮甲素对高糖培养条件下HBZY-1细胞FN蛋白表达及PI3K/Akt蛋白磷酸化水平变化的影响。结果在正常培养条件下,与正常组比较,秦皮甲素给药组(10、30、90μmol·L-1)的HBZY-1细胞增殖均无明显变化(P>0.05)。在高糖培养条件下,与正常组比较,高糖组的细胞活力明显增加(P<0.05),HBZY-1细胞FN蛋白表达和PI3K/Akt磷酸化水平明显升高(P<0.05);与高糖组比较,90μmol·L-1秦皮甲素给药组的HBZY-1细胞活力明显降低(P<0.05),FN蛋白表达和PI3K/Akt磷酸化水平亦显著下调(P<0.05)。结论秦皮甲素能够抑制高糖诱导的HBZY-1细胞增殖,下调FN蛋白表达,可能与其抑制PI3K/Akt信号通路激活密切相关。     

消渴平含药血清对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响

目的:观察消渴平(Xiaokeping,XKP)含药血清对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响,探讨其治疗DKD的作用机理.方法:使用不同浓度的消渴平含药血清及厄贝沙坦含药血清与高糖共同培养大鼠肾小球系膜细胞,应用TUNEL法检测细胞凋亡,荧光定量PCR检测大鼠肾小球系膜细胞中B淋巴细胞瘤基因相关X蛋白(Bax mR...     

保肾通络方抑制DN小鼠肾小球炎症和系膜基质增生减轻肾脏损伤机制研究

[目的]探讨保肾通络方对于糖尿病肾病（DN）小鼠肾小球炎症及系膜基质增生的影响。[方法] KK-Ay小鼠高脂喂养4周建立DN小鼠模型。造模成功的KK-Ay小鼠随机分为模型组、保肾通络方组及缬沙坦组,另外选取C57BL/6J小鼠作为正常对照组。保肾通络方组予保肾通络方灌胃,缬沙坦组予缬沙坦灌胃,模型组及正常对照组予等剂量的蒸馏水灌胃。连续灌胃12周。在灌胃0、4、8和12周收集24 h尿液检测尿蛋白水平。灌胃12周后心尖取血检测血肌酐及尿素氮水平。苏木精-伊红（HE）、糖原（PAS）、Masson染色观察肾脏病理改变,免疫组化检测各组小鼠肾小球Ⅳ型胶原蛋白（CollagenⅣ）及纤连蛋白（FN）表达,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测各组小鼠肾小球CollagenⅣ及FN的mRNA表达水平,酶联免疫法检测各组小鼠肾组织中白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。[结果]与正常对照组相比,模型组小鼠24 h尿蛋白、血肌酐、血尿素氮水平明显升高（P<0.05）;肾小球系膜细胞增多,细胞外基质增生;肾小球基质蛋白CollagenⅣ及FN蛋白和mRNA表达明显上...     

黄芪注射液对高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡的影响

[目的]研究黄芪注射液对高糖环境下肾小管上皮细胞(HK-2)凋亡的影响。[方法]传代培养人近曲肾小管上皮细胞,细胞用无血清培养基同步化24 h后,将细胞分为5组:低糖对照组、高糖组、高糖+不同浓度黄芪注射液组(2、20、200μg/m L),每组设3个复孔。将细胞置于37℃恒温培养箱中培养至24、48、72 h,收集细胞及细胞上清液。用流式细胞仪测定细胞凋亡率。[结果]24、48、72 h,低糖对照组细胞凋亡率明显低于高糖组(P0.05)。细胞培养24 h,黄芪干预组200和20μg/m L细胞凋亡率明显低于高糖组(P0.05)。细胞培养48和72 h,黄芪注射液干预组细胞凋亡率明显低于高糖组(P0.05)。黄芪注射液干预组各组之间凋亡率比较差异也都有显著性(P0.05),其干预作用呈剂量依赖性。[结论]黄芪注射液能抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞的凋亡,有助于糖尿病肾病的治疗。     

绞股蓝皂苷对晚期糖基化终末产物诱导人肾小球系膜细胞晚期糖基化终末产物受体表达及氧化应激水平的影响

目的观察绞股蓝皂苷(GP)对晚期糖基化终末产物(AGEs)诱导下人肾小球系膜细胞(HMCs)中晚期糖基化终末产物受体(RAGE)表达及氧化应激水平的影响。方法用含13%FBS的DMEM低糖培养液体外培养HMCs细胞,将细胞分为6组:对照组(DMEM培养液),AGEs组(200 mg/L),GP低、中、高剂量(25、75、150 mg/L)组和阳性对照组(氨基胍0.1 mmol/L)。培养72 h后,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞中RAGE m RNA的表达水平,Western blotting法检测RAGE蛋白表达水平。应用试剂盒检测各组细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及细胞内微量还原型谷胱甘肽(GSH)活性。结果 AGEs显著促进HMCs中RAGE m RNA及蛋白表达(P0.01),增强细胞氧化应激水平。GP能有效抑制RAGE m RNA及蛋白表达,增加上清液中SOD和细胞内GSH水平,降低细胞上清液中MDA水平,且呈浓度依赖效应,与AGEs组比较差异显著(P0.01)。结论 GP下调AGEs刺激后HMCs细胞RAGE的异常高表达,同时改善细胞内氧化应激水平,其可能的机制是GP阻断了RAGE介导的AGEs-RAGE-氧化应激信号通路,表现为细胞上清液中MDA水平降低和SOD水平增加及细胞内GSH水平增加。     

丹参注射剂体内外对糖尿病状态下肾小管AT1表达的影响

目的探究丹参注射剂体内外对糖尿病状态下肾小管AT1表达的影响。方法采用高糖培养基培养NRK-52E,Western blot检测AT1蛋白表达。高糖高脂联合STZ建立糖尿病大鼠模型,大鼠随机分为正常组、模型组、氯沙坦组(20 mg/kg)、丹参注射液组(2 mL/kg),腹腔注射丹参注射剂,1次/d,给药6周。BCA法检测尿蛋白水平、自动生化仪分析检测血尿素氮(BUN)和血清肌酐(Scr)水平,HE染色观察肾脏结构,IHC和Western blot检测AT1蛋白表达。结果丹参注射液可以抑制高糖环境下NRK-52E和糖尿病大鼠肾小管AT1表达的上调(P<0.05,P<0.01),改善糖尿病大鼠24 h尿蛋白排泄(P<0.01),降低血尿素氮(BUN)和血清肌酐(Scr)水平(P<0.01),减轻糖尿病大鼠肾小管病变。结论丹参注射液对糖尿病肾病改善作用可能与抑制AT1表达及改善肾素-血管紧张素系统有关。     

Eriodictyol inhibits high glucose‐induced extracellular matrix accumulation,oxidative stress,and inflammation in human glomerular mesangial cells

Diabetic nephropathy (DN) is one of the major complications of diabetes mellitus. The progression of DN has been found to be associated with high glucose (HG)‐induced oxidative stress and inflammation in diabetes mellitus. Eriodictyol is a flavonoid that possesses antioxidant and anti‐inflammatory effects. However, the effect of eriodictyol on DN remains unknown. In the present study, we evaluated the role of eriodictyol in mesangial cells (MCs) in response to HG condition. The results showed that eriodictyol repressed cell proliferation of HG‐stimulated MCs. Treatment with eriodictyol attenuated oxidative stress, which was evidenced by increased superoxide dismutase activity as well as decreased production of reactive oxygen species (ROS) and malondialdehyde. Besides, eriodictyol suppressed the expressions of two NADPH oxidase (NOX) isoforms, NOX2 and NOX4, which are responsible for the generation of ROS. Eriodictyol suppressed the production of extracellular matrix proteins including fibronectin and Collagen IV, as well as the secretion of inflammatory cytokines including TNF‐α, IL‐1β, and IL‐6 in HG‐induced MCs. Moreover, the HG‐induced activation of Akt/NF‐κB pathway was mitigated by eriodictyol. In conclusion, eriodictyol protected MCs from HG stimulation though inhibition of Akt/NF‐κB pathway.     

Ampelopsin inhibits high glucose‐induced extracellular matrix accumulation and oxidative stress in mesangial cells through activating the Nrf2/HO‐1 pathway

Oxidative stress plays an important role in diabetic nephropathy (DN), which is a diabetic complication. Ampelopsin (AMP) is a natural flavonoid that has been found to possess antidiabetic and antioxidative activities. However, the effect of AMP on DN remains unclear. In this study, we aimed to evaluate the protective effect of AMP on glomerular mesangial cells (MCs) exposed to high glucose (HG). We found that AMP improved HG‐caused cell viability reduction in MCs. AMP significantly suppressed the intracellular ROS production and expression levels of ROS producing enzymes NADPH oxidase 2 (NOX2) and NOX4. Increased of NOX activity in HG‐stimulated MCs was suppressed by AMP. Pretreatment with AMP inhibited extracellular matrix (ECM) accumulation in HG‐stimulated MCs with decreased expression levels of fibronectin (FN) and collagen type IV (Col IV). Furthermore, AMP elevated the expression levels of nuclear Nrf2 and heme oxygenase‐1 (HO‐1), as well as increased the mRNA levels of Nrf2‐driven genes NAD(P)H dehydrogenase quinone‐1 (NQO‐1) and HO‐1 in HG‐treated MCs. Knockdown of Nrf2 reversed the protective effects of AMP against HG‐induced oxidative stress and EMC accumulation in MCs. In conclusion, these findings indicated that AMP protected MCs from HG‐induced oxidative damage and ECM accumulation, which might be mediated by Nrf2/HO‐1 pathway.     

肾络通调控NR3C2/SGK-1/Smad通路抑制肾间质纤维化的机制研究

目的探讨中药复方肾络通调控NR3C2/SGK-1/Smad通路抑制肾间质纤维化的作用机制。方法 Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、依普利酮组、肾络通组,每组各12只。模型组、依普利酮组和肾络通组均采用单侧输尿管结扎的方法建立肾间质纤维化大鼠模型。术后即开始给药,依普利酮组给予依普利酮混匀于饲料中按100 mg/(kg·d)剂量食入;肾络通组给予肾络通煎剂按照26 g/(kg·d)剂量入水瓶饮用,模型组和假手术组给予等比例生理盐水,每天1次,连续干预10 d。采用激光共聚焦显微镜检测盐皮质激素受体NR3C2表达,采用免疫组化、Westernblotting、q RT-PCR等方法检测大鼠肾组织SGK-1、TGF-β1、Smad4、Smad7表达情况。结果假手术组NR3C2表达于细胞胞质,核内未见表达;模型组小管表达明显增强,核内可见阳性表达;依普利酮组和肾络通组细胞核内可以见到NR3C2表达,但较模型组显著减少。与假手术组比较,其他各组SGK-1、TGF-β1、Smad4表达显著上调,而Smad7表达则显著降低(P0.05、0.01)。与模型组比较,依普利酮组及肾络通组SGK-1、TGF-β1、Smad4表达范围及强度均显著减弱(P0.05、0.01),Smad7表达范围及强度均显著增强(P0.01)。结论肾络通可通过抑制盐皮质激素受体活化,下调SGK-1表达,并通过调控Smads信号蛋白水平,抑制了TGF-β1促纤维化作用,从而阻止了肾间质纤维化的发生发展。     

糖肾一号胶囊对糖尿病肾病大鼠的作用及其机制研究

目的观察糖肾一号胶囊对糖尿病肾病(DN)大鼠的作用及可能机制。方法 SD大鼠采用ip链脲佐菌素(STZ)方法制备DN模型,造模成功大鼠随机分为模型组,贝那普利组(1.04 g/kg),糖肾一号胶囊高、中、低剂量(9、6、3 g/kg)组,每组15只,另设对照组15只,各组连续ig给药8周,测定各组大鼠血糖、血脂、血胱抑素C、血清固醇元件结合蛋白1c(SREBP-1c)、SREBP-2c水平,进行尿微量白蛋白定量,检测各组大鼠肾组织IRS-1、PI3K、podocin蛋白表达水平。结果与模型组比较,糖肾一号胶囊高、中剂量组大鼠血糖、血脂、血胱抑素C、尿微量白蛋白明显降低(P0.05、0.01),血清SREBP-1c和SREBP-2c水平显著降低(P0.05),肾脏组织IRS-1、PI3K及podocin蛋白表达水平明显升高(P0.05),而糖肾一号胶囊低剂量组升高不明显(P0.05),高剂量组与中剂量组比较差异显著(P0.05)。结论糖肾一号胶囊对DN大鼠具有一定保护作用,其能够降低DN大鼠血糖、血脂、血胱抑素C、尿微量白蛋白水平,作用机制可能与提高肾组织podocin蛋白表达、改善肾足细胞损伤、延缓肾脏纤维化有关。     

KIOM-79 inhibits high glucose or AGEs-induced VEGF expression in human retinal pigment epithelial cells

We evaluated whether KIOM-79, a mixture of extracts obtained from Puerariae lobata, Magnolia officinalis, Glycyrrhiza uralensis and Euphorbia pekinensis, could inhibit vascular endothelial growth factor (VEGF) expression in human retinal pigment epithelial (RPE) cells cultured under high glucose (HG, 25mM) or S100b (a specific ligand of the receptor for advance glycation end products (RAGE), 5microg/ml). In this study, the effect of KIOM-79 on HG or S100b-induced VEGF expression was investigated using 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT) assay, RT-PCR, ELISA, and Western blot on human RPE cells. The MTT assay (p<0.01) revealed that KIOM-79 (up to 1mg/ml) had no effect on cell growth. HG or S100b induced an increase in expression of VEGF at both mRNA and protein levels (p<0.05; p<0.01 versus control). The increase in VEGF expression by HG or S100b was dose- and time-dependently prevented by KIOM-79 (p<0.05 versus 25mM glucose; p<0.01 versus S100b). Also, KIOM-79 inhibited protein kinase C (PKC)-alpha/beta(alpha) and p38 mitogen-activated protein kinase (MAPK) activation. Our results demonstrate that KIOM-79 can inhibit VEGF expression via inhibition of the MAPK and PKC pathway.     

熟地黄水提物含药血清对HUVECs-1细胞增殖及EPO表达的影响

目的：探讨熟地黄水提物含药血清对人脐静脉内皮细胞-1(HUVECs-1)增殖的影响及其机制。方法：熟地黄水提物3，6，10 g·kg^-1分别给SD大鼠灌胃1周，取血制备含药血清，加入血管内皮细胞培养液。采用MTT法观察血清对HUVECs-1增殖的影响，免疫细胞化学染色和Western blot检测血清对HUVECs-1表达红细胞生成素(EPO)的影响。结果：与相同浓度的NS血清组比较，3，6 g·kg^-1地黄水提液含药血清组HUVEC-1吸光度显著升高(P＜0.05)。免疫组化结果显示，3，6 g·kg^-1熟地黄水提物5%含药血清组与相同浓度NS血清组比较，3，6，10 g·kg^-1熟地黄水提物10%，20%含药血清组与相同浓度NS血清组比较，EPO免疫反应阳性细胞平均吸光度均显著增加(P＜0.05)。Western blot分析显示：与NS血清组比较，6 g·kg^-1熟地黄水提物相同浓度含药血清各组EPO相对条带吸光度值(IOD)均显著增高(P＜0.05)。结论：中药熟地黄水提物含药血清可上调血管内皮细胞EPO表达，对血管内皮细胞有显著的促增殖作用。