凝胶染色扫描法快速定量冬虫夏草中蛋白质方法的初步研究

目的：建立一种冬虫夏草蛋白质含量快速测定方法,弥补Bradford法不足,为研究过程中快速准确定量蛋白质奠定基础。方法本研究用牛血清蛋白（bovine serum albumin,BSA）作为已知浓度的定量标准,用它来计算其它带的量。根据Quantity One来降低图像噪音和背景强度,并确定泳道,定义带并建立光密度与已知浓度的定量标准蛋白线性关系,通过每个带的光密度定量计算凝胶上每个带的质量。结果本实验所建立的凝胶染色扫描法能够较为快速、简便、准确地测定冬虫夏草蛋白含量。结论凝胶染色扫描法用于蛋白质定量,准确度、精密度、重复性均符合要求,为测定方法的进一步完善奠定了基础。     

对影响聚丙烯酰胺凝胶电泳银染色因素的探讨

本文比较了考马斯亮蓝法和银染法对SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳染色灵敏度的影响;并对一些影响聚丙烯酰胺凝胶电泳银染因素作了探讨。     

缓冲液种类对毛细管区带电泳分离蛋白质的影响

目的 寻找可同时分离酸性和碱性蛋白的合适缓冲液。方法 以马心肌红蛋白、β—乳球蛋白A、碳酸酐酶Ⅱ和核糖核酸酶A为标准混合样品，详细研究了四种缓冲液，磷酸盐、硼酸盐、Tricine和Tris对毛细管区带电泳分离蛋白质的影响。结果 磷酸盐缓冲液与毛细管壁和蛋白均可发生作用，能改变碱性蛋白质的迁移规律；而硼砂缓冲液主要是通过与毛细管壁作用抑制蛋白的吸附，不改变蛋白质的迁移规律；Tris和Tricine不能有效地抑制蛋白质的吸附。结论 磷酸盐是同时分离酸性和碱性蛋白质的较好缓冲液。     

脲酶聚丙烯酰胺凝胶电泳活性区带染色方法的建立与应用

目的：建立聚丙烯酰胺凝胶电泳活性区带当色方法用于测定脲酶分子量和纯度鉴定。方法：建立十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS－PACE）梯度凝胶体系和电泳条件等,根据不同来源脲酶活性染色区带位置,鉴定出PAGE蛋白区带中脲酶区带位置,进一步测出脲酶的相对对分子量,结果：用新建立的SDS－PAGE脲酶活性区带染色方法,应用于不同来源的脲酶相对分子量测定和纯度鉴定,结果准确,重复性好,与凝胶过滤法测定分子量的结果相关性好,结论：我们建立的SDS－PACE脲酶活性区带染色方法,应用效果良好,有推广价值。     

三种染色方法用于检测聚丙酰胺凝胶中蛋白质的比较

用考马斯亮蓝染色、银染色、铜染色三种方法对同一种蛋白质的灵敏度、快速性进行比较,得出三种蛋白质染色方法的优缺点,为蛋白质电泳染色合理选用不同方法提供依据。     

三种蛋白染色方法在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中的应用

目的：比较ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）中蛋白染色的３种方法。方法：将ＳＤＳ－ＰＡＧＥ中的蛋白分别用银染、同染和考马斯亮蓝染色,并对铜染或考马斯亮蓝染色后的蛋白进行相应的复染。结果：快速银染法灵敏度最高,但操作步骤繁琐,染色时间约５０ｍｉｎ;考马斯亮蓝染色灵敏度最低,需染色和脱色,时间约为１ｈ;铜染灵敏度介于银染和考马斯亮蓝染色之间,但染色时间仅５ｍｉｎ,不需脱色,且可直接用考马斯亮蓝或快速银染法复染。结论：用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ进行蛋白检测时,铜染可作为蛋白快速分析的首选方法。     

检测聚丙烯酰胺凝胶中蛋白质的一种改进型银染法

介绍一种改进型银染色法。与传统银染色法用于检测同一种蛋白质的灵敏度、快速性进行比较。结果显示 ,在灵敏度无差异的情况下 ,改进型银染色法具有操作简便 ,省时的特点。     

一种脲梯度电泳的简便方法

目的与方法：介绍了了种应用国产ＤＹＹ－Ⅲ小型电泳槽进行脲梯度电泳的方法。结果与结论：该法操作简便,普适性好,能获得很好的样品迁移图谱。可用于蛋白质变性／复性的研究及原基因工程产品复性工艺的探索。     

膜蛋白质组分析技术的研究进展

膜蛋白在细胞中执行着一些非常重要的功能。膜蛋白的溶解性是膜蛋白质组分析面临的主要挑战。膜蛋白溶解性的提高，使得经典的基于凝胶的蛋白质组策略和新兴的鸟枪蛋白质组策略在膜蛋白质组分析中逐渐被广泛应用，进而可以揭示膜蛋白的拓扑学特征和鉴定其翻译后修饰，为深入研究其重要的生物学功能积累数据。     

双向电泳法比较两种蛋白质组样品制备方法

目的：比较两种破碎方法提取的蛋白质样品在双向电泳（2-DE）中的分离效果。方法用超声破碎和玻璃珠振荡破碎方法分别制备革兰阴性菌、革兰阳性菌、动物组织的蛋白抽提样品,通过2-DE比较两种制样方法的实际效果。结果获得了革兰阴性菌、革兰阳性菌、动物组织在两种制样条件下的2-DE图。结论通过对比不同样品的电泳结果发现,玻璃珠振荡破碎法制样背景更低,更有利于后续的图像分析。     

小鼠肝细胞线粒体磷酸化蛋白质组的初步研究

目的 提取小鼠肝细胞线粒体磷酸化蛋白并利用双向凝胶电泳技术对其进行分离. 方法 提取小鼠肝细胞线粒体蛋白并利用金属磷酸盐亲和层析树脂富集磷酸化蛋白后,进行一维等电聚焦分离和二维聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,质谱鉴定感兴趣的蛋白点. 结果 成功提取了小鼠肝细胞线粒体磷酸化蛋白,并通过双向凝胶电泳分离技术成功建立了小鼠肝细胞线粒体磷酸化蛋白质组图谱. 结论 磷酸化蛋白纯化技术与二维凝胶电泳分离技术的结合是研究亚细胞器磷酸化蛋白质组的有效方法,为进一步全面鉴定和研究线粒体磷酸化蛋白的功能打下了基础.     

胃粘膜组织蛋白质组双向凝胶电泳技术的初步建立与优化

为建立并优化人类胃粘膜组织蛋白质组分析所需的双向凝胶电泳技术 ,提高其分辨率及重复性。采用刮取手术胃粘膜组织 ,对以固相pH梯度为第一向的双向凝胶电泳的关键因素与环节 ,如样品处理、上样量、电泳参数、凝胶浓度和SDS凝胶电泳染色方法等进行一系列的优化。结果以固相pH梯度———IPG胶条 (pH =3～10 )进行第一向等电聚焦 ,以SDS均一胶 (13% )的垂直电泳为第二向 ,成功地得到了胃粘膜组织的双向凝胶电泳图谱     

毛细管区带电泳法测定甘草浸膏粉中甘草酸和甘草次酸的含量

目的　建立测定甘草浸膏粉中甘草酸和甘草次酸含量的方法。方法　用毛细管区带电泳法 ,紫外检测波长 2 2 8nm ,电压 14kV ,以 5 0mmol·L-1硼砂溶液为背景电解质 ,氢氯噻嗪为内标 ,对甘草浸膏粉中的甘草酸和甘草次酸进行定量分析。结果　甘草酸和甘草次酸的相对峰面积 (氢氯噻嗪为内标 )与各自的质量浓度呈良好的线性关系 ,甘草酸和甘草次酸的平均回收率分别为 98.2 %、96 .8% .结论　该法操作简便、准确、快速     

腹泻型肠易激综合征患者结肠黏膜组织异常表达蛋白质的筛选与鉴定

目的 筛选及鉴定腹泻型肠易激综合征(D-IBS)患者与正常人结肠黏膜组织中的差异表达蛋白.方法 D-IBS患者及健康志愿者各4例,分别为D-IBS组和正常对照组.通过结肠镜取回盲部及乙状结肠黏膜进行活检,用含0.1% PMSF的冰盐水将标本洗净后立即置于液氮中保存.提取蛋白质,采用双向凝胶电泳法筛选差异表达蛋白,并采用质谱法对变化最明显的蛋白点进行鉴定.结果 利用双向凝胶电泳技术成功得到人结肠黏膜组织的蛋白质组图谱.正常对照组图谱平均得到蛋白点336个,组内图像平均匹配率92%,D-IBS组图谱平均得到蛋白点426个,组内图像平均匹配率95%.D-IBS组与正常对照组之间进行平均胶图谱的比较,两组间匹配率为74%.Volume值变化大于2倍以上的点共24个,其中21个点表达上调,3个点表达下调.表达上调最明显的2个蛋白点经鉴定分别为免疫球蛋白J链(Ig-j)和热休克蛋白27(HSP27),表达下调最明显的2个蛋白点则分别为血红蛋白β亚基和果糖二磷酸醛缩酶A.结论 采用双向凝胶电泳法可以成功得到人结肠黏膜组织蛋白质组表达图谱,D-IBS患者与正常人结肠黏膜组织蛋白质表达存在差异,已经鉴定出来的4个蛋白可能在D-IBS的发病机制中起一定作用.     

蛋白质组研究中肽质量指纹图制备与鉴定方法初探

蛋白质组（ｐｒｏｔｅｏｍｅ）是指一个基因组、一种细胞或组织所表达的所有蛋白质成分。蛋白质组的研究是为了识别及鉴定一种细胞或组织所表达的全部蛋白质及它们的表达模式〔１，２〕。蛋白质组研究技术包括对细胞内所有蛋白质的分离以及对分离得到的蛋白质的鉴别和认定...     

大鼠烫伤后肠黏膜上调蛋白质组的分离鉴定及其功能分析

目的　观察严重烧伤后早期肠黏膜上调蛋白的整体变化特性 ,并对明确的蛋白质进行功能分析 ,为探讨严重烧伤后肠黏膜损害的发病机制提供理论依据。　方法　采用大鼠Ⅲ度烫伤模型 ,利用高分辨双向电泳 ( 2 -DE)对肠黏膜组织进行蛋白质分离 ,ImageMaster 2DElite图像分析软件进行分析 ,应用生物质谱、蛋白质库及文献分析等技术对差异蛋白质中的上调蛋白质组进行鉴定、功能和临床意义分析。　结果　 ( 1)烧伤后 6和 12h两组明确下调的蛋白质点数为34,进行检测及功能分析的蛋白质 2 2个 ;( 2 )糖调控蛋白前体 78、蛋白质二硫化物异构酶A3(PDIA3)前体、基质金属蛋白酶 11、α -烯醇酶和鸟氨酸转化酶等参与了对应激反应的调控。有其他蛋白质 ,如白蛋白、乳酸脱氢酶A、T细胞活化连接蛋白、辅酶Q和eps8捆绑蛋白呈现上调表达。　结论　这些上调的蛋白质的表达改变主要参与了肠黏膜的应激反应及其他病理反应的调控。     

按功能区结构检索蛋白质数据库中蛋白质序列的方法

按蛋白质功能区的一级结构特点检索蛋白质家族成员的方法,是根据蛋白质功能区中氨基酸序列分布的统计特点,建立氨基酸在功能区保守性片段分布的频数矩阵,用模式匹配方法,编写检索程序对蛋白质数据库检索。本文以免疫球蛋白功能区的检索为实例,说明方法和程序的可靠性。     

X线及MRI对聚丙烯酰胺凝胶隆胸后乳腺病变诊断价值的评价与比较

目的对聚丙烯酰胺凝胶(PAG)注射式隆胸术后,出现并发症或合并乳腺其他病变的X线与MRI的诊断价值进行评估。方法回顾性分析26例PAG隆胸术后钼靶X线与MRI的影像表现。结果钼靶X线及MRI能显示充填物位置、形态,合并乳腺病变4例,X线全部漏诊,MRI能检出病灶。结论钼靶X线是PAG隆胸术后普查、随访的首选方法,但出现并发症或者合并乳腺病变时,MRI具有无法比拟的优越性,在临床诊断与治疗中发挥了重要作用。     

姜黄素对人结肠癌耐药细胞HCT-8/VCR蛋白质双向电泳图谱的影响

目的 探讨姜黄素处理对人结肠癌耐药细胞HCT-8/VCR蛋白质表达谱的影响.方法 实验分两组,姜黄素处理组用25-μmol/L的姜黄素作用于人结肠癌耐药细胞HCT-8/VCR 24h,对照组加入相应体积的生理盐水.应用同相pH梯度双向凝胶电泳技术分离姜黄素处理组与对照组人结肠癌耐药细胞HCT-8/VCR的总蛋白,凝胶银...     

皮肤和肉芽组织石蜡与冰冻制片免疫组化染色效果的比较

比较石蜡制片与冰冻制片对免疫组化染色效果的差异.对切割伤后的皮肤和肉芽组织采用不同固定方法和制片方法进行免疫组织化学染色.冰冻制片的免疫组化染色效果明显优于石蜡制片.不同制片方法、固定液的种类、固定温度、固定时间的长短,脱水液的种类、温度、时间和pH值可显著影响免疫组化染色效果.