RNA干扰沉默Twist基因对人胃癌细胞系SGC7901细胞增殖能力的影响

目的 探讨Twist基因沉默后对人胃癌SGC7901细胞增殖能力的影响.方法 利用脂质体转染法将携带有Twist干扰片段的pGenesil/Twist载体导入人胃癌SGC7901细胞,G418筛选阳性克隆,经RT-PCR,Western印迹法检测干扰效果.通过绘制生长曲线、流式细胞术检测细胞周期等反映Twist对SGC7901细胞增殖能力的影响.结果 生长曲线结果显示Twist基因沉默组细胞生长速度较两对照组缓慢.细胞周期结果显示Twist基因沉默组S期细胞数明显较对照组减少,增殖能力下降.结论 Twist基因沉默后可抑制SGC7901细胞的分裂增殖,可能成为临床胃癌基因治疗的新靶点.     

藤梨根提取物对人胃癌SGC7901细胞增殖抑制的影响

目的研究藤梨根提取物对胃癌细胞SGC7901的抑制作用及其机制。方法用MTT法检测不同剂量的藤梨根提取物对人胃癌细胞SGC7901的增殖抑制作用,并用流式细胞仪分别检测细胞周期以及凋亡程度。结果在浓度范围25~200μg/ml范围内,不同浓度的藤梨根提取物对胃癌细胞SGC7901均有抑制作用,且有一定的浓度依赖性。且在藤梨根提取物细胞浓度为53、86以及142μg/ml作用48 h后SGC7901在S期比例增多,凋亡率明显增加。结论藤梨根提取物可能通过干预细胞周期和凋亡对胃癌细胞SGC7901增殖起抑制作用,同时与药物浓度有一定的依赖性。     

ER-α36对胃癌SGC7901细胞在裸鼠体内生长的影响

目的:观察ER-α36分子对人胃癌细胞SGC7901在裸鼠体内生长的影响.方法:利用慢病毒转染技术构建稳定高表达和低表达ERα-36分子的重组人胃癌SGC7901细胞株.实验分为空白对照组(SGC7901-Control)、ER-α36低表达组(SGC7901-Low36)和ER-α36高表达组(SGC7901-High36),每组各3只雄性裸鼠.将上述细胞(5×106个/mL)接种裸鼠皮下,建立裸鼠荷瘤模型,连续观测30d.采用瘤结节体积测量和称质量、瘤组织HE染色及免疫组织化学法检测Ki67指数和E-cadherin蛋白表达等方法,鉴定各组细胞生长的情况.结果:全组实验动物均出现移植瘤.第16天开始,SGC7901-High36组裸鼠肿瘤的体积>SGC7901-Control组裸鼠肿瘤的体积>SGC7901-Low36组裸鼠肿瘤的体积,两两之间有显著性差异(P<0.05).第30天,SGC7901-High36组肿瘤的质量(2.58g±0.014g),明显大于SGC7901-Control组(1.32g±0.0245g)和SGC7901-Low36组(0.471g±0.021g),两两之间有显著性差异(P...     

菟丝子醇提物对胃癌SGC7901细胞凋亡的影响

目的 探讨菟丝子(CCL)醇提物诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡的作用.方法 以CCL(10、50、100 mg/L)作用于人胃癌SGC7901细胞,同时设DMSO和培养液作为对照组.采用HE染色法观察细胞形态变化,琼脂糖凝胶电泳法分析SGC7901细胞的DNA片段化.结果 HE染色镜下可见较为典型的凋亡形态学变化:细胞变小,核皱缩,荧光强度增强,核仁消失,新月体样改变,凋亡小体形成等;琼脂糖电泳出现明显的"梯状"条带,并存在剂量依赖性,而对照组未出现梯状条带.结论 CCL能够诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡.     

Twist基因沉默促进人胃癌SGC7901细胞凋亡的机制

目的探讨Twist基因沉默促进人胃癌SGC7901细胞凋亡的机制。方法以稳定转染pGenesil-Twist质粒的人胃癌SGC7901细胞作为研究对象,实验分为对照组、空载体组、Twist基因沉默组。采用AnnexinV-FITC/PI染色观察细胞凋亡情况;通过检测细胞Caspase3、9活性、p53、Bcl-2、Bax蛋白表达情况和Ca2+含量探讨细胞的凋亡机制。结果激光共聚焦显微镜检测结果显示Twist基因沉默组中有较多的细胞呈现绿色荧光,未见明显的呈现红色荧光的细胞。流式细胞仪检测显示,Twist基因沉默组AnnexinV-FITC阳性细胞的比例明显高于SGC7901组和空载体组(P<0.01);Twist基因沉默组细胞中p53蛋白表达量显著高于对照组和空载体组(P<0.01),Bcl-2蛋白表达量显著低于对照组和空载体组(P<0.01),而Twist基因沉默组中Bax蛋白表达比例显著高于对照组和空载体组(P<0.01);Twist基因沉默组Caspase3、9酶活性明显高于对照组和空载体组(P<0.01,P<0.05);Twist基因沉默组SGC7901细胞中Ca2+含量显著高于对照组和空载体组(P<0.05)。结论 Twsit基因通过线粒体介导的细胞凋亡途径调节细胞凋亡,Twist基因有望作为靶基因发挥抗肿瘤作用。     

Adv-shRNA抑制NRP2表达对胃癌SGC7901细胞增殖的影响

目的通过特异性抑制胃癌细胞株SGC7901中神经纤毛蛋白2(NRP2)基因的表达,检测RNA干扰片段对SGC7901细胞增殖能力的影响。方法将NRP2的特异性RNA干扰腺病毒载体转染至胃癌细胞SCG7901 72 h后荧光显微镜观察转染情况;采用RT-PCR法检测转染后NRP2基因mRNA表达情况;MTT法检测胃癌细胞增殖情况;Western印迹检测转染后NRP2蛋白表达情况。结果成功将NRP2-shRNA重组腺病毒载体转染至胃癌细胞SGC7901。各重组腺病毒转染组NRP2 mRNA水平均低于阴性对照组和空白组,其中以NRP2-shRNA-3抑制效应最强。阴性对照组与空白组细胞增殖迅速,两组间无显著差异(P>0.05),实验组经腺病毒载体转染后细胞增殖程度显著减少,与前两组相比有显著差异(P<0.05)。阴性对照组与空白组NRP2蛋白表达量明显高于实验组(P<0.01),而阴性对照组与空白组之间无显著差异(P>0.05)。结论重组腺病毒载体NRP2-shRNA可有效抑制胃癌细胞SCG7901中NRP2基因的mRNA和蛋白的表达,并在一定程度上抑制癌细胞增殖,可作为动物实验的理论基础和前期条件。     

钒化钠抑制人胃癌SGC7901细胞增殖的作用机理

目的通过观察钒化钠对人胃癌SGC7901细胞周期蛋白cyclinD1表达的影响,探讨其对人胃癌SGC7901细胞增殖抑制的作用机理。方法应用MTT法测定钒化钠对人胃癌SGC7901细胞的生长抑制作用;用Western-blot法检测钒化钠对人胃癌SGC7901细胞周期蛋白cyclinD1表达水平的变化。结果一定浓度的钒化钠使人胃癌SGC7901细胞增殖周期密切相关的cyclinD1蛋白表达降低。结论一定浓度的钒化钠能明显抑制人胃癌SGC7901细胞的生长,钒化钠的抗肿瘤机制可能与cyclinD1蛋白表达降低有关。     

胰岛素样生长因子Ⅱ与胃癌细胞SGC7901 c-fos和c-jun表达的关系

目的:探讨胰岛素样生长因子Ⅱ(insulin-like growth factor-Ⅱ,IGF-Ⅱ)与胃癌细胞SGC7901 c-fos和c-jun表达的关系.方法:体外细胞培养,分别用MTT法和免疫组织化学以及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测不同浓度IGF-Ⅱ(0,10,50,100 mg/L)作用胃癌细胞后细胞的增殖率和c-fos和c-jun蛋白及mRNA的表达情况.结果:IGF-Ⅱ作用于细胞SGC7901的增殖效应呈浓度和时间依赖性:随着药物浓度的升高,c-fos和c-jun蛋白,mRNA表达均增加.在IGF-Ⅱ10,50,100 mg/L时,c-fos和c-jun蛋白分别为41.32±1.28 mg/L,50.43±0.57 mg/L,64.22±1.76 mg/L;52.00±0.67 mg/L,63.20±0.95 mg/L,76.31±1.16 mg/L;c-fos,c-jun mRNA与GAPDH mRNA比值分别为0.316±0.021,0.392±0.0357,0.478±0.028;0.379±0.006,0.412±0.022.0.494±0.048,均与相应对照组(30.00±1.01 mg/L,41.14±2.02 mg/L,0.220±0.037,0.290±0.064)相比有统计学意义(P<0.05,P<0.01).结论:胰岛素样生长因子Ⅱ可能通过旁分泌上调c-fos和c-jun的表达而诱导胃癌细胞增殖.     

莪术对SGC7901胃癌细胞COX-1,COX-2,VEGF和PGE2表达的影响

目的:观察莪术对人胃癌SGC7901细胞 COX-1,COX-2,VEGF和PGE2的影响．方法:MTT法观察莪术对胃癌细胞的抑制作用,绘制其抑制率曲线,选取抑制率为25％时的药物浓度作为加药浓度,用RT-PCR以及Western blot方法检测加药后人胃癌细胞 COX-1,COX-2基因及其蛋白表达的变化．用ELISA方法检测加药后培养基中VEGF和 PGE2的表达情况．结果:莪术对胃癌细胞有一定的抑制作用,且随着浓度的增加,其抑制作用加强;将RT-PCR 产物经电泳分析,证实胃癌细胞中有COX-1、 COX-2基因的表达,对各条带进行灰度分析发现:中西药对COX-1和COX-2均有抑制作用,莪术对COX-2的抑制作用大于塞来昔布;Western blot曝光结果可见,COX-1各组在 70 kDa处可见特异性的蛋白条带,COX-2各组在80 kDa处可见特异性的蛋白条带．对各条带进行灰度分析发现:各组中西药对COX-2 均有明显的抑制作用,而对COX-1则无抑制作用,其中,莪术对COX-2的抑制作用要强于celecoxib;西药celecoxib及莪术组可明显降低人胃癌细胞VEGF的表达,与细胞组相比,其差别有统计学意义(91．0±18．2,127．8 ±12．1 ng／L vs162．0±15．1 ng／L,P<0．01);西药celecoxib组PGE2表达低于细胞组,但其差别无统计学意义,莪术可明显降低人胃癌细胞PGE2的表达,与细胞组相比,其差别有统计学意义(67．5±6．9 ng／L vs 78．7±5．6 ng／L, P<0．01)．结论:莪术可能是通过抑制COX-2及其下游 PGE2表达,使VEGF表达下调而抑制肿瘤．     

洛贝林逆转胃癌细胞SGC7901/VCR多药耐药的作用

目的:探讨哌啶类生物碱洛贝林(Lobeline)能否逆转人胃癌多药耐药细胞株SGC7901/VCR的多药耐药,并进一步探讨洛贝林逆转其多药耐药的机制,评估其有效性.方法:以人胃癌多药耐药细胞株SGC7901/VCR为研究对象,用四氮唑蓝(MTT)法分别测定在无和有洛贝林(细胞无毒浓度10 mol/L)作用下多药耐药细胞株SGC7901/VCR对VCR及5-Fu的半数生长抑制率,并由此求其耐药逆转的倍数;RT-PCR分别检测在无和不同终浓度洛贝林(5、10、20、50、100 mol/L)作用下多药耐药细胞株SGC7901/VCR的多药耐药基因MDR1 mRNA表达情况;Western blot分别检测在无和不同终浓度洛贝林(5、10、20、50、100 mol/L)作用下多药耐药细胞株SGC7901/VCR的P-gp蛋白表达.结果:在洛贝林无毒作用浓度(10 mol/L)作用下,多药耐药细胞株SGC7901/VCR对化疗药的敏感性增加,VCR对耐药细胞株的IC50由原来的16.55 g/L±0.13 g/L变成7.27g/L±0.65 g/L,逆转指数约为2.28;5-Fu对耐药细胞株的IC50由原来的11.01 g/L±0.43 g/L变成9.53 g/L±0.79 g/L,逆转指数约为1.16;RT-PCR检测示多药耐药细胞株SGC7901/VCR呈现MDR1 mRNA高度表达,随洛贝林终作用浓度的增大,MDR1 mRNA表达逐渐下降,各组间差距有统计学意义(P<0.05);Western blot检测表明多药耐药细胞株SGC7901/VCR高度表达P-gp蛋白,随洛贝林作用终浓度依次增加P-gp蛋白表达依次减弱,组间呈浓度依赖性,差别有统计学意义(P<0.05).结论:无细胞毒作用浓度的洛贝林可以逆转胃癌多药耐药细胞株SGC7901/VCR的多药耐药,增强VCR和5-Fu的化疗敏感性.洛贝林对SGC7901/VCR细胞多药耐药的逆转可能机制为抑制P-gp蛋白的表达.     

乙酰肝素酶反义寡核苷酸对人胃癌细胞株SGC7901表达bFGF的抑制作用

目的 探讨乙酰肝素酶反义寡核苷酸(AS-ODN)对人胃癌细胞株SGC7901表达碱性成纤维细胞生长因子(basic fibrob-last growth factot，bFGF)的影响。方法 AS-ODN和乙酰肝素酶mRNA起始密码子区互补，无义寡核苷酸(NS-ODN)为对照组，用阳离子脂质体包裹ODNs并转入SGC7901细胞；转染后48小时提取细胞总RNA，半定量RT-PCR法检测乙酰肝素酶基因的含量，免疫细胞化学法检测bFGF的表达。结果 AS-ODN处理后SGC7901表达乙酰肝素酶mRNA下降；处理前bFGF、的表达率为72．23％，不同浓度(0．1、0．2、0．4、0．8μmoL／L）AS-ODN处理后bFGF的表达率下降程度不同(分别为57．15％、51．11％、42．36％和40．25％)。结论 和乙酰肝素酶mRNA起始密码子区互补的AS-ODN对SGC7901表达bFGF有明显影响，且呈剂量相关性。     

苦参碱对胃癌SGC7901/DDP细胞耐药相关miRNA表达的影响和靶点分析

目的探讨苦参碱对化疗药物的增敏作用和机制。方法以非毒性剂量的苦参碱联合长春新碱、阿霉素、5-氟尿嘧啶干预胃癌SGC7901/DDP细胞,观察苦参碱对胃癌SGC7901/DDP细胞耐药性的增敏作用;采用实时荧光定量PCR观察苦参碱干预后耐药相关miRNA的表达,并应用生物信息学方法预测和分析相关miRNA的靶基因和信号通路,应用GO分析方法进行了靶基因的功能注释。结果苦参碱可以增强胃癌SGC-7901/DDP细胞对化疗药物的敏感性,逆转耐药;苦参碱可以剂量依赖性上调耐药相关mir-7、mir-125b、mir-200a、mir-200b、mir-200c、mir-146a的表达,生物信息学方法预测和分析了其靶基因和相关信号通路,并筛选出耐药相关miRNA靶向调控的耐药基因和DNA修复基因,为苦参碱克服胃癌化疗多药耐药提供了靶点。结论苦参碱可以增强胃癌SGC-7901/DDP细胞对化疗药物的敏感性;其作用可能与苦参碱可以上调耐药相关mir-7、mir-125b、mir-200a、mir-200b、mir-200c、mir-146a的表达,并通过miRNA靶向调控的耐药基因和DNA修复基因有关。     

RNA干扰沉默CXCR4基因对胃癌细胞SGC7901增殖和侵袭力的影响

目的探讨特异性抑制胃癌细胞SGC7901中趋化因子受体4(CXCR4)的表达及RNA干扰对胃癌细胞SGC7901细胞增殖及侵袭力的影响。方法将腺病毒载体CXCR4-shRNA转染至胃癌细胞SGC7901,RT-PCR检测转染后CXCR4 mRNA的表达量;MTT法检测癌细胞增殖情况;Transwell小室侵袭实验对胃癌细胞侵袭力进行检测。结果 (1)成功将CXCR4-shRNA重组腺病毒载体转染至胃癌细胞SGC7901;(2)空白组与对照组细胞增殖迅速,两组之间无显著性差异(P>0.05),实验组经腺病毒载体转染后细胞增殖程度显著减少,与前两组相比有显著性差异(P<0.05);(3)shRNA-CXCR4腺病毒载体和空白组及对照组相比能显著抑制SGC7901细胞的侵袭力(P<0.05),抑制率为57.01%。空白组与对照组相比无显著性差异(P>0.05)。结论重组腺病毒载体CXCR4-shRNA能有效抑制胃癌细胞SGC7901的侵袭,并在一定程度上抑制癌细胞增殖。     

鼠源性血管抑素基因转染对人肝癌细胞体内致瘤力的影响及新血管抑制作用

目的 研究血管抑素血管他丁（angiostatin）基因转染人肝癌细胞系HCC7721,对肿瘤细胞体外生长、周期分布、形态以及体内致瘤力的影响。探讨血管抑素的作用机制。方法 应用定向克隆技术构建鼠源性血管抑素血cDNA基因真核表达载体pcDNA3.1( )-angio,酶切鉴定和测序。采用脂质体基因转染技术将真核表达载体导入人肝癌细胞系HCC7721,新霉素G418筛选抗性克隆,设置转染空载体细胞为阴性对照和未转染细胞为空白对照。通过RNA点杂交和流式细胞荧光免疫检测血管抑素的表达,测定细胞生长曲线,计算细胞倍增时间,流式细胞仪检测细胞周期分布。建立动物模型,观察转染前后肿瘤细胞致瘤力的改变。免疫组化检测肿瘤组织微血管密度（MVD）和血管抑素体内表达。结果 成功构建带有碱基序列正确的血管抑素基因片段的重组真核表达载体pcDNA3.1（ ）-angio。分别转染脂质体/pcDNA3.1( ）-angio和脂质体/pcDNA3.1( ）的实验组,HCC7721肝癌细胞作阴性对照组经G418筛选,30d后均得到稳定的抗性细胞克隆,空白对照组在筛选1周后全部死亡。实验组HCC7721细胞在体内和体外均表达目的蛋白,而对照组细胞中无表达。与对照组相比,虽然实验细胞在体外的生长速度和细胞周期分布未发生明显改变。但在体内的致瘤力显著降低,瘤体增长缓慢,平均抑瘤率达47%。肿瘤MVD计数显示,实验组肝癌细胞形成的瘤体组织中MVD明显低于阴性对照组。结论 血管抑素不直接影响肝癌细胞HCC7721在体外的生物学特笥,但可强烈抑制体内肿瘤的形成,其机制可能是通过抑制肿瘤的新血管生成,间接发挥抑制肿瘤作用。     

磷脂酰肌醇3''-激酶通路活化对化疗药物诱导的胃癌细胞凋亡的影响

磷脂酰肌醇3＇-激酶（P13＇K）信息传导通路的激活已被认为是肿瘤细胞抗凋亡的主要机制之一，我们前阶段对胃癌化疗药物对蛋白激酶B（PKB）及其下游分子的影响进行了研究，但是P13＇K作为其上游信号分子在其中所起的作用尚不得而知。我们通过观察阿霉素、足叶乙甙对人胃癌细胞系SGC7901的作用，探讨P13＇K信号通路活化对体外胃癌细胞化疗效果的影响并探讨其可能的机制。     

木黄酮对人胃癌细胞SGC-7901作用的研究

目的探讨木黄酮对体外培养的人胃癌细胞SGC-7901生长的抑制和诱导细胞凋亡的作用。方法用MTT法检测药物效应，透射电镜及流式细胞仪观察木黄酮处理SGC-7901细胞后细胞周期和细胞凋亡。细胞免疫化学观察木黄酮处理SGC-7901细胞后，SGC-7901细胞PCNA，FAS，C-mvc的变化。结果①MTT法证实木黄酮对SGC-7901细胞生长有抑制作用，并呈剂量-效应关系。②流式细胞仪分析木黄酮处理SGC-7901细胞后细胞滞留于G2／M期，并可见凋亡峰。③透射电镜可见SGC-7901细胞出现典型的细胞凋亡及坏死形态学改变。④木黄酮下调PCNA及C—myc表达，上调FAS表达。结论木黄酮对人胃癌细胞SGC-7901有抑制作用，其抑制作用可能通过下调C-mvc基因表达，上调Fas蛋白表达，下调PCNA表达，从而多途径诱导胃癌细胞凋亡和坏死、阻抑细胞周期进程，抑制SGC-7901细胞增殖。     

Twist基因沉默对人胃癌SGC7901细胞凋亡的影响

目的探讨Twist基因沉默对人胃癌SGC7901细胞凋亡的影响。方法以本课题组稳定转染pGenesil-Twist质粒的人胃癌SGC7901细胞作为研究对象,实验分为三组:对照组、空载体组、Twist基因沉默组。通过倒置显微镜和透射电镜观察Twist基因沉默对SGC7901细胞形态的影响;通过Rhodamine123染色后流式细胞仪检测各组细胞线粒体跨膜电位的变化;采用DAPI染色和TUNEL法观察Twist基因沉默对SGC7901细胞凋亡情况的影响。结果与对照和空载体组相比,倒置显微镜下观察显示基因沉默组细胞生长缓慢,细胞形态发生明显改变,有较多细胞呈圆形,细胞异型性小;透射电镜观察显示Twist基因沉默组细胞体积变小,微绒毛减少,细胞突触变短且增多,空泡增多,核质比例降低,异染色质团块状分布,核周间隙更大;Rhodamine123染色后流式细胞仪检测结果显示Twist基因沉默组阴性细胞数增高;DAPI染色结果显示细胞核边缘不规则,染色质凝集,着色较重,核固缩,核小体碎片增加;TUNEL法检测显示Twist基因沉默组可见明显细胞核棕黄色染色的阳性细胞。结论 Twist基因沉默促进SGC7901细胞凋亡,提示Twist在胃癌恶性进展中起重要作用,Twist可能成为肿瘤基因治疗的靶点。