HLA-DRB1基因多态性与慢性肾小球肾炎相关性

目的〓〖HTK〗探讨慢性肾小球肾炎（CGN）与人类白细胞抗原（HLA）DRB1等位基因的相关性。〖HTW〗方法〓〖HTK〗以山东省3大省级医院近十年汉族CGN尿毒症患者1?073例为病例组，选择中国造血干细胞捐献者资料库山东分库汉族人7418名汉族健康志愿捐献者为对照组，对两组的HLA-Ⅱ类DRB1基因多态性进行分析比较，探讨HLA-DRB1基因多态性与CGN的关系；并随访了部分携有易感基因的患者，评价其预后。〖HTW〗结果〓〖HTK〗病例组中HLA-DRB1*18基因频率高于对照组(P＜0.001)，可能是CGN尿毒症的易感基因，且随访发现携有该类基因的患者预后较差。病例组中HLA-DRB1*16基因频率低于对照组(P＜0.001)，可能是CGN尿毒症的保护基因。〖HTW〗结论〓〖HTK〗山东汉族人群CGN与HLA-DRB1关联，且携有可能易感基因的患者预后较差。     

Cyr61、CTGF、NOV、WISP-1基因在肾癌中的表达

目的〓〖HTK〗探讨肾癌组织CCN蛋白中Cyr61、CTGF、NOV和WISP-1 基因的蛋白表达水平及意义。〖HTW〗方法〓〖HTK〗采用Western blot半定量方法检测31例肾癌组织和18例癌旁正常肾组织中Cyr61、CTGF、NOV、WISP-1基因的蛋白表达。 〖HTW〗结果〓〖HTK〗Cyr61、CTGF、NOV、WISP-1蛋白在肾癌组织中的表达水平均低于癌旁正常组织(P<0.05)，其中乳头状肾癌的NOV和WISP-1 表达水平高于透明细胞癌(P<0.05)，G1级肿瘤NOV表达水平高于G2，3肿瘤(P<0.05)。 〖HTW〗结论〓〖HTK〗Cyr61、CTGF、NOV和WISP-1在肾癌中低表达， CCN基因在肾癌的发生和发展中可能起抑制作用。     

慢性乙型肝炎外周血自然杀伤细胞的变化及其与HLA-Cw基因型的关系

目的〓〖HTK〗探讨慢性乙型肝炎外周血自然杀伤细胞（NK细胞）和活化NK细胞数量的变化及其与HLA-Cw基因型的关系。〖HTW〗方法〓〖HTK〗采用流式细胞术检测30例急性乙型肝炎发病期患者、51例慢性乙型肝炎患者及41例正常对照外周血NK细胞和活化NK细胞的数量，并通过序列特异性寡核苷酸分型(PCR-SSO)技术进行HLA-Cw的基因分型。〖HTW〗结果〓〖HTK〗急性肝炎组的NK细胞和活化NK细胞的数量均较正常对照组增高［(22.62±3.70)% vs (19.03±4.91)%,(65.28±14.45)% vs (53.88±14.01)%,P＜0.05］,慢性乙型肝炎组的NK细胞和活化NK细胞的数量均较正常对照组降低［(14.36±1.07)% vs (19.03±4.91)%,(47.14±5.67)% vs (53.88±14.01)%,P＜0.05］，且急性肝炎组与慢性乙型肝炎组间差异有统计学意义（P＜0.01）；急性肝炎组与正常对照组间HLA-Cw位点各等位基因的基因型无统计学差异（P＞0.05），HLA-Cw*03在慢性乙型肝炎组中基因频率明显高于正常对照组（P＜0.05），且与活化NK细胞数量呈显著负相关（γ=-0.394，P＜ 0.05）。〖HTW〗结论〓〖HTK〗慢性乙型肝炎患者NK细胞功能低下，HLA-Cw*03基因型可能是通过影响NK细胞而导致HBV感染持续存在的原因之一。     

大鼠酒精性脂肪肝中Fbw7的表达

目的〓〖HTK〗分析大鼠酒精性脂肪肝Fbw7 mRNA及蛋白的表达量，研究其在酒精性脂肪肝发病机制中的作用。〖HTW〗方法〓〖HTK〗利用酒精灌胃的方法建立大鼠酒精性脂肪肝模型，于12周末处死大鼠。肝脏石蜡切片HE染色观察病理学改变，采用荧光定量PCR及Western blot方法测定大鼠肝组织Fbw7 mRNA含量及蛋白表达量。〖HTW〗结果〓〖HTK〗光镜下，模型组肝脏出现明显脂肪病变，肝组织中甘油三酯含量明显高于正常对照组（P＜0.01），Fbw7 mRNA及蛋白水平亦降低（P＜0.01），并与甘油三酯含量呈负相关。〖HTW〗结论〓〖HTK〗大鼠酒精性肝病时，Fbw7 mRNA及蛋白表达下降，可能在酒精性脂肪肝发病机制中发挥重要作用。     

腺病毒介导的HSV-TK/GCV系统对PVNS滑膜细胞的杀伤作用

目的〓〖HTK〗探讨腺病毒介导HSV-TK/GCV系统对色素沉着绒毛结节滑膜炎(PVNS)滑膜细胞的体外杀伤作用。〖HTW〗方法〓〖HTK〗将含LacZ基因的重组腺病毒载体Ad-LacZ转染PVNS滑膜细胞, X-gal染色法确定腺病毒对该细胞的转染效率，PCR检测转染细胞中HSV-TK基因的表达，MTT法检测TK阳性细胞对GCV的体外敏感性及旁观者效应，流式细胞仪检测HSV-TK/GCV系统作用后细胞的凋亡及坏死。〖HTW〗结果〓〖HTK〗感染复数为120时，近100％的细胞可被转染。HSV-TK/GCV系统对PVNS滑膜细胞的杀伤作用十分明显，且存在明显的旁观者效应。HSV-TK/GCV系统作用后细胞出现明显的凋亡及坏死。〖HTW〗结论〓〖HTK〗HSV-TK/GCV系统可明显杀伤PVNS中过度增殖滑膜细胞，可望用于PVNS的治疗。     

增生期和成熟期皮肤瘢痕中的神经纤维形态学观察

目的〓〖HTK〗观察不同时期增生性瘢痕(HS)中神经纤维数量和形态的变化。〖HTW〗方法〓〖HTK〗标本取自烧伤或创伤后HS形成1月～23年的患者，分为增生期瘢痕组（≤6月）和成熟期瘢痕组(＞6月)，正常对照组取自患者的供皮区。利用单克隆抗神经丝蛋白(NF)抗体免疫荧光染色技术，在荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)下观察不同时期瘢痕组织和正常皮肤组织中神经纤维的差异。〖HTW〗结果〓〖HTK〗增生期瘢痕组神经纤维的阳性面积比明显高于正常对照组（P＜0.05），神经纤维分布杂乱，形态不规整，有局部的扭曲变细和肿胀断裂；成熟期瘢痕组神经纤维的阳性面积比明显低于正常对照组（P＜0.05），神经纤维排列较规整，内部结构和立体结构均接近正常。〖HTW〗结论〓〖HTK〗瘢痕增生过程中神经纤维的密度和形态皆随时间变化而变化。     

联合用药后替硝唑乳汁浓度与时间关系

目的〓〖HTK〗探讨联合用药后替硝唑乳汁浓度与时间关系，为临床合理用药并指导产妇母乳喂养新生儿提供依据。〖HTW〗方法〓〖HTK〗采用自身对照方法，以甲硝唑为内标物质应用高效液相色谱（HPLC）法测定同一患者应用替硝唑(800mg/d)2、3d后不同时间乳汁浓度。〖HTW〗结果〓〖HTK〗替硝唑乳汁浓度存在较大个体差异，同一患者静脉滴注替硝唑2、3d（800mg/d）后0、2、4、6、8、18、24h乳汁浓度差异有统计学意义（P＜0.05）。〖HTW〗结论〓〖HTK〗患者连续应用替硝唑3d，体内有药物蓄积现象,应尽可能减少替硝唑用药次数，减少新生儿被动用药。     

液相色谱质谱联用技术测定动物血浆和组织中莪术醇

目的〓〖HTK〗建立HPLC-MS/MS法测定动物组织和血浆中莪术醇浓度。〖HTW〗方法〓〖HTK〗以奥硝唑为内标物，DiamonsilTM色谱柱C18(150mm×4.6mm, 5μm)为固定相，流速1mL/min，采用多反应离子检测方式测定犬血浆和大鼠5种组织样品中莪术醇（m/z 254.3→219.3）和内标奥硝唑（m/z 220.3→128.2）的浓度。〖HTW〗结果〓〖HTK〗在动物血浆和组织匀浆中，莪术醇浓度与内标物峰面积之比呈良好的线性关系。〖HTW〗结论〓〖HTK〗所建立的HPLC-MS/MS方法操作简便快速，灵敏度高，专属性强，可用于莪术醇动物药代动力学和组织分布研究。     

三唑类药物与环孢菌素A的体外联合抗真菌作用

目的〓〖HTK〗评价氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑分别与环孢菌素A联合应用时对敏感与耐药白色念珠菌的体外抗真菌效果。〖HTW〗方法〓〖HTK〗采用棋盘法测定两类药物联用的体外抗真菌效果，以OD值测定法判读MIC值，并以FICI法对联用结果进行评价。〖HTW〗结果〓〖HTK〗两类药物联用对耐药白色念珠菌全部表现为协同作用，对敏感菌大多表现为无关作用。〖HTW〗结论〓〖HTK〗对于耐药白色念珠菌，环孢菌素A对3种三唑类药物均有明显的增敏作用，但对敏感菌的增敏作用不明显。以OD值测定法判读MIC值具有客观、迅速简便的特点。     

正畸治疗中龈沟液天冬氨酸转氨酶、碱性磷酸酶水平的变化

目的〓〖HTK〗探讨直丝弓正畸过程中龈沟液天冬氨酸转氨酶（aspartate transaminase，AST）、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）水平的变化对衡量牙周组织健康状况的参考价值。〖HTW〗方法〓〖HTK〗选择使用直丝弓矫治器的青少年患者44名,治疗前及安装矫治器1、3个月后采集龈沟液，采用生化分析仪检测分析龈沟液中AST、ALP的水平变化，并检查牙龈指数（GI）。〖HTW〗结果〓〖HTK〗矫治1个月时AST、 ALP水平比治疗前显著增高(P＜0.05)，3个月时AST、ALP酶水平趋于正常；1个月时GI比治疗前显著升高(P＜0.05)；3个月时GI比1个月时显著降低(P＜0.05)，但与治疗前比较差异无统计学意义(P＞0.05)。〖HTW〗结论〓〖HTK〗龈沟液AST、ALP可做为牙周组织炎性改变的重要衡量指标。     

肾素基因单核苷酸多态与心肌梗死的关系

目的 检测中国人群中肾素基因的单核苷酸多态（SNPs）及其分布，探讨其与中国华东地区汉族人群心肌梗死的关系。方法PCR一直接测序技术检测24份取自中国不同民族人群的DNA样本，筛查肾素基因启动子区、编码区和外显子-内含子连接区，明确SNPs及其分布；应用PCR-直接测序和SnaPshot法对所发现的SNPs进行基因分型。选择380份无血缘关系的中国华东地区汉族人群（195例心肌梗死和185例健康对照）DNA样本，进行肾素基因候选SNPs的病例一对照关联分析和单倍型分析。结果所检测的5247bp肾素基因序列中共发现8个SNPs，其基因型和等位基因频率分布，在对照组和心肌梗死组间无统计学差异（P〉0．05）；单倍型分析显示启动子区域单倍型频率分布，在两组人群间无显著性差异（P〉0．05）。结论肾素基因可能不是中国华东地区汉族人群心肌梗死发病的易感基因。     

河南省汉族人群肿瘤坏死因子α基因启动子区单核苷酸多态性

目的研究河南省汉族人群无关个体217例肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因启动子区的-238G/A、-308G/A、-850C/T、-863C/A共4个单核苷酸多态性(SNPs)位点的遗传多态性。方法采用限制性酶切片段长度多态性(RFLP),结合质量分数6%聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染法对SNPs位点进行分型。结果选择的TNF基因上4个SNPs位点等位基因和基因型频率分布在河南省汉族人群均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律,各等位基因频率均大于5%,等位基因最小频率分布在5.8%～14.1%。4个SNPs位点共观察到21种组合基因型,杂合度为0.461。根据SHEsis软件推测出11种单体型,单体型多样性为0.608。结论河南省汉族人群TNF基因4个SNPs位点及其组成的单体型具有较高的多态性,在法医学实践中有一定的应用价值,同时为人类遗传学的研究提供基础资料。     

慢白激酶Cζ亚型基因及Urotensin Ⅱ基因中各有一个单核苷酸位点与中国北方汉族人群2型糖尿病相关

目的 采用单核苷酸多态性（single mucleotide polymorphism,SNP)标记,在以往中国北方汉族人群2型糖尿病相关基因定位区域（1p36.33-p36.23)内寻找疾病易感基因位点。方法 通过生物信息学方法在公共SNP数据库中查找定位区域内10个候选基因中的23个SNP位点,用单碱基延伸反应（single base extension,SBE)法对北方汉族人群散发2型糖尿病患者（192例）及对照组（172例）进行分型及病例－对照关联分析。结果 23个SNP位点中有8个为中国北方人群常见SNP位点;对病例组和对照组分型分析显示,位于蛋白激酶Cζ亚型（PRKCZ）基因中的一个位点（rs436045)及urotensin Ⅱ（UTS2）基因中的一个位点（rs228648),其等位基因频率在两组的差异具有统计学意义9P＜0．05）。结论 上述两个SNP位点可能和中国北方汉族人群2型糖尿病相关,以上结果为进一步研究上述两个位点所在的基因与2型糖尿病的关系提供了理论依据。     

中国人群CYP1A1SNPrs4646903遗传多态性研究

目的研究CYP1A1SNPrs4646903在宁夏地区正常女性人群中的基因型频率和等位基因频率分布特征，并与国内其它人群进行比较，获得该位点人群的遗传学数据。方法应用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性（PcR—RFLP）技术及测序分析对154例宁夏地区汉族女性正常人的CYP1A1SNPrs4646903分布进行测定，并利用Χ^2检验比较本地与中国各地人群基因频率分布差异。结果SNPrs4646903突变纯合子（CC基因型）、突变杂合子（TC基因型）和野生纯合子（TT基因型）在宁夏人群中的基因型频率分别为11．7％、47．4％、40．9％；SNPrs4646903T和C等位基因频率在宁夏人群中为64．6％、35．4％，其等位基因和基因型频率分布与中国广州人和河南人群的差异有统计学意义（P〈0．05），但与其它各地的研究结果统计无差异。结论中国各地人群CYP1A1SNPrs4646903基因型频率和等位基因频率分布不同，具有其特有的群体遗传学特征。     

中国人CAPN10基因单核苷酸多态性的分布及其在北方汉族2型糖尿病人群中的关联分析

目的 检测始发现于墨西哥裔美国人群中的2型糖尿病易感基因CAPN10的苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP)在中国人群中的分布,并探讨其与中国北方汉族人群2型糖尿病的关联关系。方法 对27份取自中国不同民族人群DNA标本进行测序,以确定CAPN10基因中的SNP位点分布;选择其中5个位点,用单碱基延伸（single-extension,SBE)法对156例北方汉族正常人和173例2型糖尿病患者DNA标本进行SNP分型及病例－对照关联分析;对文献报道的易感基因CAPN10中的3个阳性位点进行单体型分析,并对其中1个位点在68个2型糖尿病家系（377例）中进行传递不平衡检验（transmission-disequilibrium test,TDT)和同胞传递不平衡检验（sib transmission-disequilibrium test,STDT）。结果 在所检测的8936bp长度范围内共检出40个SNP,平均约223bp1出现一个SNP,各多态性在基因中呈不均匀分布;中国人CAPN10的SNP与文献报道的墨西哥裔美国人群中该基因多态性存在较大的差异;所选择的5个SNP位点等位基因频率分布在正常人群和2型糖尿病患者间的差异无统计学意义（P＞0.05);上述3个阳性位点单体型频率在两组人群间差异无统计学意义（P＞0.05);TDT和STDT均无统计学意义（P＞0.05)。结论 CAPN10基因SNP具有民族差异;所检测的几个位点可能不是中国北方汉族2型糖尿病的主要易感基因位点。     

TRAIL基因启动子区单核苷酸多态性与脂肪肝的相关性

目的探讨中国山东汉族人群肿瘤坏死因子凋亡相关诱导配体（Tumor necrosis factor(TNF) related apoptosis inducing ligand, TRAIL）基因启动子区单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)与脂肪肝（FLD）的相关性。方法采用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性（PCR RFLP）分析和四引物法聚合酶链反应（Tetra primer ARMS PCR）的方法检测了42例非酒精性脂肪肝、67例酒精性脂肪肝和132例健康对照者的TRAIL基因启动子区单核苷酸多态性位点-707C/T、-665T/C、-621C/T和-597A/G的基因型,计算相应的基因型频率及等位基因频率,进行χ2检验。结果-707C/T、-665T/C和-597A/G位点在中国山东汉族人群中未检测到单核苷酸多态性;-621C/T位点在中国山东汉族人群中存在单核苷酸多态性,且该位点CC/CT/TT基因型频率在非酒精性脂肪肝、酒精性脂肪肝以及正常对照组中分别为0.238/0.500/0.262、0.269/0.448/0.284和0.280/0.394/0.326。但该位点的基因型频率和等位基因频率在三组之间均没有统计学差异。结论在中国山东汉族人群中,仅检测到TRAIL基因启动子区-621C/T位点的单核苷酸多态性,该多态性与脂肪肝的易感性没有统计学差异(P＞0.05)。     

组织因子途径抑制物2 (TFPI-2)基因多态性与急性冠脉综合征的关联性

 目的 探讨在中国汉族人群中基因多态性与急性冠脉综合征的关系。方法 采用病例对照研究设计,选择急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)患者140例,其中包括不稳定型心绞痛患者(unstable angina,UA)68例、急性心肌梗死患者(acute myocardium infarction,AMI)72例;另有稳定型心绞痛患者(stable angina,SA)273例;以及正常对照306例。采用聚合酶链反应产物直接测序的方法对所有纳入对象进行组织因子途径抑制物2 (tissue factor pathway inhibitor 2,TFPI-2)基因多态性分析和关联分析。 结果 在所有对象的TFPI-2基因中共检测出8个单核苷酸多态性位点,其中rs59805398和rs34489123位点基因型频率和等位基因频率分布在ACS组和SA组,与对照组间差异有统计学意义。rs3763473、rs59999573、rs59740167、rs34489123位点在ACS组中存在连锁不平衡,与rs59805398位点关联分析提示主要有C-C-G-G-G和T-C-G-G-G两种单倍型。rs59999573、rs59740167、rs34489123位点在SA组中存在连锁不平衡,与rs59805398位点进行关联分析,主要有C-G-G-G和G-A-A-A两种单倍型。ACS组与SA组之间未见明显差异。结论 TFPI-2基因rs59805398位点C等位基因和rs34489123位点A等位基因与冠心病(coronary heart disease,CHD)发病存在关联性,其变异可能是中国人群冠心病发病的危险因子之一。TFPI-2基因SNP在冠心病患者中存在连锁不平衡。     

Single nucleotide polymorphisms of the SCN5A gene in Han Chinese and their relation with Brugada syndrome

Background Mutations in the cardiac sodium channel gene (SCN5A) may lead to a broad spectrum of familial arrhythmias, including long QT syndrome (LQTS), idiopathic ventricular fibrillation (IVF), and isolated cardiac conduction diseases. Recent studies have shown that polymorphisms in the SCN5A gene also play an important role in the manifestation of disorders involving cardiac excitability. In this study, we investigated the polymorphisms of the SCN5A gene in Han Chinese and its relation to Brugada syndrome (BS).Methods Genomic DNA was isolated from 120 unrelated healthy volunteers and 48 unrelated Brugada syndrome patients by means of standard procedures. All exons including the putative splicing sites of the SCN5A gene were amplified by PCR and sequenced directly or after subcloning using an ABI Prism 377 DNA sequencer. Results A total of 5 single nucleotide polymorphisms (SNPs) were identified in the Han Chinese population, including 3 novel ones: G87A(A29A), 4245＋82A&gt;G, and G6174A. The allele frequencies of each SNP in the Han Chinese population were as follows: G87A (A29A) 27.5%, A1673G (H558R) 10.4%, 4245+82A&gt;G 32.8%, C5457T (D1819D) 41.3%, and G6174A 44.9%. S1102Y and 10 other SNPs identified in other ethnic populations were not detected in this study. There was no significant difference in the allele frequency of A1673G (H558R) between different ethnic populations (all P&gt;0.5). On the other hand, the allele frequency of C5457T (D1819D) among Han Chinese was similar to its frequency among Japanese (P&gt;0.5), but higher than that among Americans (P&lt;0.005). The allele G1673 (R558) was over-represented in BS patients compared to controls (P&lt;0.005), but there was no significant difference in genotype frequencies at this locus. There were also no differences in either the allele or genotype frequencies of the 4 other identified SNPs when comparing BS patients with healthy controls. Conclusions The distribution of SCN5A SNPs may vary between different ethnicities. The polymorphism of A1673G might be associated with BS and may contribute to a susceptibility to BS in Han Chinese.     

Single Nucleotide Polymorphisms in CAPN10 Gene of Chinese People and Its Correlation With Type 2 Diabetes Mellitus in Han People of Northern China

To investigate the distribution of single nucleotide polymorphisms (SNPs) in CAPN10 gene in Chinese population and their relation with type 2 diabetes mellitus in Han people of Northern China. Methods CAPN10 gene was sequenced to detect SNPs in different nationalities of China. Five SNPs were chosen to perform case-control study and haplotype analysis in 156 normal Han people of Northern China and 173 type 2 diabetes. One SNP was also analyzed with transmission-disequilibrium test (TDT) and sib transmissiondisequilibrium test (STDT) in 68 type 2 diabetes pedigrees (37Tpeople). Results A total of 40 SNPs were identified in length of 8 936bp, with an average of 1 in every 223bp. The SNPs in CAPN10 gene did not distribute evenly and the SNPs in Chinese were different from those reported in Mexican American. There was no significantly statistical difference in the allele frequency of the 5 SNPs between case and control, and the haplotype frequencies in the two groups were not significantly different. No positive results was found in TDT and STDT analysis. Conclusions The SNP distribution of CAPN10 gene differs in different nationalities. The studied SNPs in CAPN10 gene may not be the major susceptibility ones of type 2 diabetes mellitus in Han people of Northern China.     

蛋白激酶Cξ亚型基因内SNP功能分析

目的对中国北方汉族人群2型糖尿病易感基因蛋白激酶Cξ亚型(PRKCZ)基因内的5个单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphismSNP)标记在疾病发生中的作用进行分析。方法通过生物信息学比对及报告基因活性测定等方法分析PRKCZ基因内5个SNP位点对基因表达的影响。结果PRKCZ基因中rs427811和rs809912位点两种等位基因重组质粒报告基因活性存在明显差异,提示这两个位点可能影响PRKCZ基因表达。结论PRKCZ基因中两个SNP位点可能通过影响基因的表达水平而在中国人2型糖尿病发生中发挥作用。