川芎嗪对哮喘大鼠GATA-3及Th2型细胞因子表达的影响

目的研究腹腔注射川芎嗪对大鼠哮喘模型的防治作用及机制。方法按常用方法制作大鼠哮喘模型并分为哮喘模型组(A组),川芎嗪治疗组(L组),地塞米松治疗组(D组)和正常对照组(N组)4组,每组8只。用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白介素-4(IL-4)和白介素-5(IL-5)的浓度。用HE染色法观察气道炎症变化。用免疫组化法研究肺组织GATA-3的表达。结果L组BALF中IL-4和IL-5的浓度以及肺组织GATA-3阳性细胞的光密度值(OD值)明显低于A组BALF的IL-4和IL-5的浓度以及肺组织GATA-3阳性细胞的OD值,差异有显著性(P<0.01),与D组无显著差异(P>0.05)。结论腹腔注射川芎嗪可以抑制哮喘大鼠IL-4和IL-5的合成,其机制可能与其降低GATA-3在肺组织的表达,从而继发抑制Th2型免疫反应有关。     

福莫特罗对过敏性哮喘大鼠气道中嗜酸性粒细胞浸润的抑制作用

目的:研究福莫特罗对过敏性哮喘大鼠嗜酸性粒细胞(eosinophil,EOS)炎症的作用,探讨影响肺组织内嗜酸性粒细胞浸润的机制.方法:48只雄性Wistar大鼠随机分为6组:正常对照组(A)、哮喘模型组(B)、小剂量(0.08 mg/kg)福莫特罗组(C)、中剂量(0.12 mg/kg)福莫特罗组(D)、大剂量(0.16 mg/kg)福莫特罗组(E)、地塞米松(0.5 mg/kg)组(F),每组8只.卵蛋白致敏诱发建立哮喘大鼠模型,福莫特罗口服,地塞米松腹腔注射给药7 d.常规HE染色观察病理变化;酶联免疫吸附法(ELISA)测肺组织匀浆中嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(eosinophil cationic protein,ECP)的含量.结果:(1)A组气道炎症没有明显变化;B组炎症变化明显,大量EOS浸润,较A组差异有显著性(P<0.01);各用药组炎症有所减轻,浸润EOS数量明显减少(P<0.01).(2)B组嗜酸性粒细胞趋化活化因子(eotaxin)较A组显著升高(P<0.01);各用药组下降(P<0.05).各用药组eotaxin与EOS数量呈正相关.(3)B组ECP含量较A组显著升高(P<0.01);各用药组均低于B组(P<0.01).结论:(1)哮喘气道中嗜酸性粒细胞增多.福莫特罗能够明显降低气道中EOS数量,与抑制EOS趋化有关.(2)福莫特罗可能是通过减少肺组织内eotaxin的表达来抑制EOS趋化的.(3)福莫特罗能够抑制EOS活化,减少肺组织中的ECP含量.     

B/T淋巴细胞弱化因子在急性哮喘小鼠模型CD4~+ T淋巴细胞表达的研究

目的研究负向共刺激受体B/T淋巴细胞弱化因子(B and T lymphocyte attenuator,BTLA)在急性哮喘小鼠模型脾脏CD4+T淋巴细胞中的表达特点及地塞米松对BTLA表达的影响。方法 18只BALB/C6小鼠按随机数字表法分为空白对照组、哮喘模型组、地塞米松治疗组。OVA联合AL(OH)3第1和第8天分别致敏和第15～17天激发,建立急性哮喘模型。HE染色观察3组气道炎症浸润情况;Elisa检测血清IL-4和IFN-γ;流式细胞术检测小鼠脾脏CD4+T淋巴细胞BTLA表达变化。结果 HE染色哮喘组肺部小气道和血管周围炎症细胞浸润(EOS)明显,上皮细胞增生;流式细胞仪检测哮喘组脾脏CD4+T淋巴细胞表面BTLA表达较对照组明显增高(P<0.01),BTLA在地塞米松治疗组比哮喘模型组和空白对照组均增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 BTLA在急性哮喘模型表达上调参与炎症调控;地塞米松能进一步上调BTLA表达,抑制气道炎症。     

川芎嗪对哮喘大鼠GATA-3及Th2型细胞因子表达的影响

目的研究腹腔注射川芎嗪对大鼠哮喘模型的防治作用及机制。方法按常用方法制作大鼠哮喘模型并分为哮喘模型组（A组），川芎嗪治疗组（L组），地塞米松治疗组（D组）和正常对照组（N组）4组，每组8只。用酶联免疫吸附实验（ELIsA）检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中白介素-4（IL-4）和白介素-5（IL-5）的浓度。用HE染色法观察气道炎症变化。用免疫组化法研究肺组织GATA-3的表达。结果L组BALF中IL-4和IL-5的浓度以及肺组织GATA-3阳性细胞的光密度值（OD值）明显低于A组BALF的IL-4和IL-5的浓度以及肺组织GATA-3阳性细胞的OD值，差异有显著性（P〈0．01），与D组无显著差异（P〉005）。结论腹腔注射川芎嗪可以抑制哮喘大鼠IL-4和IL-5的合成，其机制可能与其降低GATA-3在肺组织的表达，从而继发抑制Th2型免疫反应有关。     

神经元谷氨酸转运体反义寡核苷酸对急性脑缺血损伤大鼠的神经保护作用

目的:测定神经元谷氨酸转运体(excitaforyaminoacidcarrierl,EAAC1)反义寡核苷酸对急性脑缺血损伤大鼠的神经功能缺损评分、梗死体积和海马数密度值的影响,探讨脑缺血神经保护新方法。方法:将大鼠分为假手术组、模型组、反义寡核苷酸组(简称反义组)和正义寡核苷酸组(简称正义组),用插线法建立大鼠局灶性脑缺血模型(MCAO)。运用Westernblot法、神经功能缺损评分、TTC染色、尼氏染色观察缺血区EAAC1表达和EAAC1反义寡核苷酸对缺血大鼠神经功能缺损评分、梗死体积和海马数密度值的影响。结果:模型组缺血区EAAC1表达(0.61±0.03)明显高于假手术组(0.20±0.01),差异有显著性意义(F=49.49,P<0.01),而反义组表达(0.31±0.01)低于模型组,差异有显著性意义(F=49.33,P<0.05)。反义组大鼠梗死体积(101.33±15.08)mm3显著小于模型组(140.5±20.27)mm3,差异有显著性意义(F=6.66,P<0.01),反义组大鼠神经功能缺损评分(3.33±0.41)分,显著高于模型组(1.42±0.34)分,差异有显著性意义(F=48.51,P<0.01),海马各区数密度值均高于模型组(P<0.01和P<0.05)。结论:EAAC1反义寡核苷酸对急性脑缺血损伤有神经保护作用。     

地塞米松对哮喘大鼠局部气道白细胞介素5及其基因表达的影响

为了研究地塞米松抑制气道变应性炎症的机理，采用酶联免疫吸附实验和逆转录一多聚酶链反应分析哮喘大鼠肺泡灌洗液IL-5含量及肺组织IL-5mRNA表达水平的变化，结果显示：哮喘时肺组织局部IL-5mRNA表达增强，肺泡灌洗液IL-5含量增加，经地塞米松治疗后，IL-5含量及其表达显著降低，接近于正常水平。提示：地塞米松能够抑制肺组织中IL-5基因转录，进而抑制IL-5对嗜酸性粒细胞(E0s)的聚集、活化，从而减轻气道炎症。     

转录因子T-bet与哮喘大鼠气道炎症及川芎嗪的干预效应

目的:转录因子T-bet在支气管哮喘的发病中起重要作用,川芎嗪治疗哮喘有效。实验拟观察川芎嗪对哮喘大鼠气道炎症的影响和转录因子T-bet的调控作用。方法:实验于2005-11/2006-06在南京医科大学完成。①实验材料及分组:72只SPF级SD大鼠随机分为正常对照组、哮喘模型组、川芎嗪小剂量组(20mg/kg)、川芎嗪中剂量组(40mg/kg)、川芎嗪大剂量组(80mg/kg)和地塞米松组,每组12只。实验用磷酸川芎嗪注射液为丽珠集团利民制药厂生产)。②实验过程及评估:以卵蛋白腹腔注射并雾化吸入制备大鼠哮喘模型,末次雾化后24h内麻醉后处死大鼠。观察6组大鼠肺组织形态学变化;测定支气管壁厚度、支气管平滑肌厚度、嗜酸粒细胞和淋巴细胞数。采用免疫组织化学半定量法测定肺组织T-bet蛋白的表达;进行转录因子T-bet蛋白表达量与气道炎症的相关性分析。实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。结果:①哮喘模型组嗜酸粒细胞、淋巴细胞、支气管壁厚度和支气管平滑肌厚度,明显高于正常对照组相应指标(P均<0.01);与哮喘模型组比较,川芎嗪小、中、大剂量组和地塞米松组上述4项指标均减少(P均<0.01)。②哮喘模型组、川芎嗪小、中、大剂量组和地塞米松组的T-bet表达量低于正常对照组(P均<0.01);与哮喘模型组比较,川芎嗪小、中、大剂量组T-bet表达量增加(P均<0.01);随着川芎嗪剂量增加,T-bet表达量亦相应增加,川芎嗪小、中、大剂量组之间两两比较,差异均有统计学意义(P均<0.01)。③相关分析显示哮喘模型组T-bet蛋白表达量与嗜酸性粒细胞和淋巴细胞浸润数呈负相关(r=-0.81,-0.85,P<0.01),与支气管管壁厚度和支气管平滑肌厚度呈负相关(r=-0.77,-0.79,P<0.01)。结论:支气管哮喘大鼠存在T-bet低表达;川芎嗪可抑制气道炎症,增加转录因子T-bet蛋白的表达,纠正Th1/Th2失衡,从而治疗支气管哮喘。     

姜黄素对哮喘大鼠气道炎症与核因子κB表达的影响

目的：探讨姜黄素对支气管大鼠气道炎症及核因子-κB(NF-κB)的影响。方法：Wistar大鼠随机分为正常对照组、哮喘模型组、姜黄素组各12只，采用卵蛋白(OVA)等致敏大鼠哮喘模型，观察3组动物哮喘发作症状、气道炎症情况及免疫组化染色后NF-κB的核着色情况。结果：哮喘模型组大鼠哮喘发作症状最明显，姜黄素组大鼠症状轻，正常对照组无症状。哮喘模型组支气管周围明显炎细胞浸润，且以浆细胞，嗜酸性粒细胞浸润为主，姜黄素组较哮喘模型组明显减轻，正常对照组无明显炎细胞浸润。肺泡灌洗液总细胞数及嗜酸性粒细胞哮喘模型组明显高于正常对照组和姜黄素组。肺组织石蜡切片免疫组化发现哮喘模型组NF-κB的核着色最强，姜黄素组较弱，正常对照组微弱表达。结论：姜黄素可抑制哮喘的慢性气道炎症，其机制可能与姜黄素抑制哮喘大鼠NF-κB的活性有关。     

白三烯受体拮抗剂和激素对哮喘小鼠精氨酸酶-Ⅰ转录水平影响的研究

目的观察哮喘小鼠模型的病理特点及精氨酸酶-I在哮喘小鼠中的转录水平及白三烯受体拮抗剂和激素干预对精氨酸酶-I转录水平的影响。方法建立小鼠哮喘模型;实验分为对照组、哮喘组、孟鲁司特(MK)干预组、地塞米松(DXM)干预组;图像分析肺内支气管平滑肌厚度;阿尔新兰染色,观察粘液分泌情况;半定量PCR检测精氨酸酶-I mRNA水平。结果哮喘组出现管壁增厚、平滑肌增生、粘液分泌增加、炎症细胞浸润等特征,精氨酸酶-I mRNA水平明显增高;MK组、DXM组与哮喘组比较,炎症反应轻微,平滑肌增生、粘液分泌不明显;DXM组精氨酸酶-mRNA水平降低,与哮喘组比较差异有显著性。结论少量、多次变应原吸入可导致气道炎症和重构,精氨酸酶-I在哮喘小鼠中的表达水平升高,DXM干预可降低精氨酸酶-I mRNA水平,一定程度上延缓气道重构的发生。     

雾化吸入氯胺酮对哮喘大鼠肺组织一氧化氮及一氧化氮合酶的影响

目的通过建立大鼠支气管哮喘模型,观察不同浓度氯胺酮对哮喘大鼠肺组织iNOS活性及NO含量的影响。方法SD大鼠随机分成对照组(N组)、哮喘模型组(A组)、不同浓度氯胺酮预处理组(分别为K1组、K2组)和地塞米松组(D组),每组8只。A组大鼠用卵白蛋白辅以百日咳杆菌菌苗和氢氧化铝为佐剂注射致敏,2周后雾化吸入卵蛋白激发哮喘;氯胺酮处理组大鼠用同样方法致敏,但在激发前分别给予雾化吸入氯胺酮25 g/L(K1组)和50 g/L(K2组);D组在激发前给予雾化吸入0.01%地塞米松;N组用生理盐水替代卵蛋白进行注射和吸入。每组分别测定其肺组织NO2-/NO3-水平、肺组织诱导型NOS(iNOS)和原生型NOS(cNOS)活性水平,并用免疫组织化学法观察iNOS在大鼠哮喘模型肺组织中的分布。结果A组肺组织中NO2-/NO3-和iNOS水平升高,iNOS和肺组织NO2-/NO3-水平呈高度正相关;K1、K2组肺组织中NO2-/NO3-和iNOS水平低于A组(P<0.05);D组肺组织中NO2-/NO3-和iNOS水平亦低于A组(P<0.05)。结论25 g/L或50 g/L的氯胺酮雾化吸入可抑制哮喘大鼠肺组织iNOS活性,降低NO含量,减轻大鼠肺部炎症。     

Strain specific differences in a cardio-pulmonary resuscitation rat model

An asphyxial cardiac arrest rat model, originally developed for Sprague-Dawley rats, was transferred to a Wistar rat model. Several strain specific life support adjustments, i.e. ventilator settings, anaesthesia, and drug requirements, were necessary to stabilize the model for Wistar rats. Despite these arrangements numerous resuscitation related variables appeared different. Three groups were evaluated and compared: a temperature monitored Wistar group 1 (n=34), a temperature controlled Wistar group 2 (n=26) and a temperature controlled Sprague-Dawley group 3 (n=7). Overall, Wistar rats seem to have more sensitive cardio-circulatory system evidenced by a more rapid development of cardiac arrest (164 vs. 201 s), requiring higher adrenaline/epinephrine doses (10 vs. 5 microg/kg) and requiring more time for recovery after resuscitation (i.e. for return of blood pressure and blood gases). Without strict temperature control (as in groups 2+3 rats) group 1 rats went into spontaneous mild to moderate hypothermia during the first 24 h after restoration of spontaneous circulation (ROSC). Spontaneous hypothermia delayed the development of overall visible CA1 neuronal damage 24-48 h, but did not prevent it; therefore the model seemed to be suitable for future studies. Neuronal damages in the CA1 region in Wistar rats appeared to be more as shrunken cell bodies and pyknotic nuclei before resorption took place, whereas in Sprague-Dawley rats appeared in the same region.     

电针对急性高血压大鼠肾上腺素和去甲肾上腺素的影响

目的观察电针对急性高血压大鼠的降压作用。方法36 只Wistar 雄性大鼠随机分为对照组(n=8)、模型组(n=8)、药物组(n=10)和电针组(n=10)。应用肾上腺素法制备急性高血压大鼠模型,电针百会和足三里穴,测定电针后各组血压的变化以及血清肾上腺素和去甲肾上腺素的变化。结果药物组和电针组大鼠收缩压和舒张压均低于模型组(P<0.05),且两组疗效无显著性差异(P>0.05)。模型组血清肾上腺素和去甲肾上腺素水平高于对照组(P<0.05),电针组与药物组血清肾上腺素和去甲肾上腺素水平低于模型组(P<0.05)。结论电针百会和足三里可能通过降低血中肾上腺素和去甲肾上腺素来降低急性高血压大鼠的血压水平。     

骨碎补总黄酮对胶原诱导大鼠类风湿关节炎骨破坏治疗作用的实验研究

目的建立模拟类风湿关节炎(RA)发病的胶原诱导关节炎(CIA)大鼠模型,明确骨碎补总黄酮对CIA大鼠关节局部骨破坏的改善作用,为临床提供实验依据。方法利用皮下注射牛Ⅱ型胶原诱导Wistar大鼠发病,建立CIA大鼠模型。将大鼠随机分为正常对照组(10只)、灭菌用水治疗组(10只)、骨碎补总黄酮治疗组(10只)。每只大鼠均在炎症分值达到2分及以上时开始治疗,分别在治疗4周和8周,取胫骨上段做硬组织切片,观察胫骨上段骨小梁变化及骨量变化情况。结果骨碎补总黄酮具有明显抑制CIA大鼠关节周围骨量丢失的作用,且其抑制骨量减少主要是通过抑制骨小梁数量减少来实现的,与抑制骨小梁宽度丢失关系较小。结论骨碎补总黄酮能明显抑制CIA大鼠关节侵蚀及关节周围骨丢失。     

人角质形成细胞中K14基因及蛋白表达与角蛋白14反义寡核苷酸的抑制效应

背景:反义药物的研究仍然是当前生物医学领域较为活跃的热点之一,其具有高效特异的优势,作为基因治疗的途径已受到许多研究者的关注。目的:观察脂质体介导角蛋白14反义寡核苷酸对人角质形成细胞K14基因和蛋白表达及体外增殖活性的影响。设计:单一样本观察。单位:解放军第四军医大学西京医院皮肤科。材料:人表皮角质形成细胞、K14寡核苷酸基因片段(全硫代修饰,以上序列均由上海生工生物工程公司合成)。反转录酶、TaqDNA聚合酶均购自Invitrogen公司,K14单抗购自Antibody公司,SABC试剂盒购自博士德。EPlCS-PRO-FILEⅡ流式细胞仪(美国Coulter)。方法:人表皮角质形成细胞原代培养,3～10代用于实验,利用脂质体将人工合成的正义、反义及错配K14寡核苷酸基因片段导入角质形成细胞,并设空白组作对照。应用流式细胞仪、反转录聚合酶链式反应和免疫组化方法检测反义寡核苷酸对角质形成细胞的细胞周期、K14基因和蛋白表达的影响。主要观察指标:寡核苷酸转染人角质形成细胞后对角质形成细胞增殖和K14表达的影响。结果:①反转录聚合酶链反应产物电泳显示:各组均出现特异的K14基因条带,反义组基因表达明显低于正义组、错义组和空白组。正义组、错义组和空白组K14/β-actin比值相近(P>0.05);而反义组明显低于前述3组(F=47.554,P<0.01)。②免疫组化法检测K14蛋白表达:培养的角质形成细胞均表达一定水平的K14,加入反义寡核苷酸(ASODN)后,K14表达明显减少,20μmol/L浓度的反义寡核苷酸即可显著抑制K14的表达;而对照细胞组K14的表达没有明显变化。③流式细胞仪检测DNA含量变化:经K14反义寡核苷酸处理细胞48h,可见细胞处于G1期细胞比例明显上升(74.6%),S期细胞比例明显下降(19.4%),而正义组,错义组及空白组均无此变化。结论:反义寡核苷酸可特异地抑制K14的合成,从而抑制人角质形成细胞的增殖。     

胰岛素抵抗与解偶联蛋白基因表达变化的关系研究

目的:探讨胰岛素抵抗(IR)动物模型中胰岛素敏感性和肌肉、肝脏解偶联蛋白(UCPs)基因表达变化的关系。方法:高脂喂养大鼠制作IR模型,用半定量的逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测UCPs基因mRNA表达变化,用高胰岛素-正葡萄糖钳夹术评价胰岛素敏感性变化。结果:高脂喂养可以显著增加动物的体重,升高血清甘油三酯(TG),显著降低葡萄糖输注率(GIR,28.03±8.02vs9.89±3.28,P<0.01),可使肝脏内UCP-2基因、肌肉内UCP-3基因mRNA表达降低(0.63±0.18vs0.43±0.15,P<0.05;1.22±0.24vs0.78±0.17,P<0.01)。结论:高脂喂养可降低胰岛素的敏感性,胰岛素敏感性降低可能与UCPs基因表达减弱有关。     

左卡尼汀对心肺复苏后大鼠肾脏保护作用的实验研究

目的 通过观察左卡尼汀对复苏后大鼠血清、肾组织中细胞因子的影响,探讨左卡尼汀对复苏后肾脏保护作用的机制.方法 建立心肺复苏大鼠模型,30只Wistar大鼠随机分为手术对照组(S组)、常规复苏组(C组)和左卡尼汀组(L组),每组10只,S组只行手术操作,不致颤;C组造成心搏骤停并行常规复苏;L组在心搏骤停并复苏成功后静脉注射左卡尼汀.动态观察,血清中TNF-α、IL-1β、iNOS、SU、Scr及肾组织中TNF-α、IL-1β、iNOS的变化.结果 与S组比较,C组和L组复苏成功后血清TNF-α、IL-1β、iNOS、SU、Scr及肾组织TNF-α、IL-1β、iNOS有不同程度升高(P＜0.01).L组与同时相C组比较,血清TNF-α、IL-1β、iNOS、SU、Scr及肾组织TNF-α、IL-1β、iN-OS升高程度减轻(P＜0.05).结论 左卡尼汀能减轻炎性细胞因子介导的肾脏损伤,对复苏后肾脏有保护作用.