PNRC多肽通过影响Ras信号途径抑制BT-474细胞的增殖

背景与目的：根据富含脯氨酸的核受体辅调节蛋白（proline-rich nuclear receptor coregulatory protein, PNRC）与Grb2相互作用位点资料和其他基于干扰Grb2／SH3与SOS的相互作用的富含脯氨酸短肽的设计原则，我们设计、合成了基于PNRC的抗Ras、PTD融合多肽（PTD—PARP），研究该多肽在BT474乳腺癌细胞中对Ras信号途径的影响及其抗肿瘤增殖活性。方法：用多肽合成仪合成PNRC的抗Ras PTD融合多肽PTD—PARP和其单独的PTD多肽。以PTD多肽为对照，将增加浓度的PTD—PARP与分离的、EGF刺激的BT474细胞裂解物共温育，采用免疫共沉淀结合Western blot检测Grb2免疫共沉淀复合物中SOS和PNRC的含量情况。用PTD—PARP-琼脂糖凝胶4B活化偶联磁珠免疫共沉淀BT474细胞裂解物，采用PI3K，Nck和Grb2的抗体检测沉淀复合物中这些含SH3结构域的蛋白与PTD-PARP的结合能力。Western blot检测PTD—PARP对EGF刺激的BT474细胞内Ras和MAPK活化的影响。采用软琼脂克隆形成实验考察PTD—PARP对BT474细胞体外增殖的影响。结果：PTD—PAR能以剂量依赖方式抑制SOS、PNRC与Grb2的结合，它与Grb2的结合具有特异性，PTD—PAR能降低BT474细胞中EGF刺激的Ras和MAKP活化，并能显著抑制BT474细胞的体外软琼脂克隆形成。结论：PNRC抗Ras PTD融合多肽可通过影响Ras信号途径抑制乳腺癌细胞的增殖。     

PNRC多肽通过干扰核受体途径抑制BT474细胞的增殖

目的：运用核受体辅活化子PNRC的抗Ras PTD融合多肽（PTD-PARP）研究其在乳腺癌细胞BT474中的分布、对核受体信号传导途径的影响及其抗肿瘤细胞增殖活性.方法：用多肽合成仪合成PTD-PARP、单独的PARP和PTD多肽以及FTFC标记的PTD-PARP、PARP.HPLC分析和纯化后,荧光显微镜结合流式细胞仪检测PTD-PARP、PARP在BT474细胞中的分布.虫荧光素酶报告基因检测PTD-PARP对野生型PNRC辅活化ER反式激活功能的影响.MTS、软琼脂克隆形成实验检测PTD-PARP对BT474细胞的抗增殖活性.结果：PTD-PARP能进入BT474细胞,抑制野生型PNRC辅活化ER的反式激活功能并抑制BT474细胞的增殖.结论：PNRC抗RasP DT融合多肽可通过干扰核受体途径抑制乳腺癌细胞的增殖.     

PNRC多肽通过干扰核受体途径抑制BT474细胞的增殖

目的:运用核受体辅活化子PNRC的抗Ras PTD融合多肽(PTD-PARP)研究其在乳腺癌细胞BT474中的分布、对核受体信号传导途径的影响及其抗肿瘤细胞增殖活性.方法:用多肽合成仪合成PTD-PARP、单独的PARP和PTD多肽以及FTFC标记的PTD-PARP、PARP.HPLC分析和纯化后,荧光显微镜结合流式细胞仪检测PTD-PARP、PARP在BT474细胞中的分布.虫荧光素酶报告基因检测PTD-PARP对野生型PNRC辅活化ER反式激活功能的影响.MTS、软琼脂克隆形成实验检测PTD-PARP对BT474细胞的抗增殖活性.结果:PTD-PARP能进入BT474细胞,抑制野生型PNRC辅活化ER的反式激活功能并抑制BT474细胞的增殖.结论:PNRC抗RasP DT融合多肽可通过干扰核受体途径抑制乳腺癌细胞的增殖.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂 SNDX-275对乳腺癌 BT474细胞增殖抑制作用

目的：明确组蛋白去乙酰化酶抑制剂 SNDX-275对 ErbB2阳性乳腺癌 BT474细胞的增殖抑制作用及其机制。方法以磷酸盐缓冲液（PBS）处理的 BT474细胞作为对照组、SNDX-275处理的 BT474细胞作为实验组,使用终浓度为0、0．5、1．0、2．0、3．0、4．0μmol／L 的 SNDX-275处理细胞,利用 MTS 实验、克隆形成实验检测细胞增殖能力。采用 Western blotting 实验检测 ErbB2、ErbB3、p-Akt 的蛋白表达,实时荧光定量 PCR 检测 miR-125a、miR-125b 的表达。MTS 实验检测 SNDX-275对转染 miR-125抑制剂的乳腺癌BT474细胞的增殖抑制作用。结果MTS 实验检测结果发现 SNDX-275能明显抑制细胞的增殖且具有浓度依赖性,4．0μmol／L 的 SNDX-275对细胞的抑制率约（68．00±4．45）％。平板克隆实验结果表明,SNDX-275能明显抑制乳腺癌 BT474细胞克隆的形成。Western blotting 结果显示 SNDX-275明显抑制 ErbB2、ErbB3、p-AKT 的表达。实时荧光定量 PCR 分析发现,与 PBS 处理的 BT474细胞对比,2μmol／LSNDX-275 BT474细胞分别上调 miR-125a、miR-125b 约3．22±1．17倍、5．42±0．38倍,差异均具有统计学意义（t ＝4．338,P ＝0．049;t ＝21．805,P ＝0．002）。MTS 实验结果显示,与 PBS 对照组相比,SNDX-275组和转染 miR-125抑制剂组对乳腺癌细胞 BT474的抑制率分别为（56．97±3．56）％、（10．67±2．21）％,两组之间差异具有统计学意义（t ＝－10．993,P ＝0．008）。结论SNDX-275通过上调 miR-125a、miR-125b 抑制 ErbB2-ErbB3-Akt 信号通路,进而抑制 ErbB2阳性乳腺癌 BT474细胞的增殖。     

Trastuzumab对放射诱导下HER-2的入核及DNA损伤的影响

目的:通过观察HER-2单克隆抗体trastuzumab对BT474细胞中HER-2的入核效应和对核内DNA损伤修复的影响,来探讨HER-2直接入核通路上trastuzumab放疗增敏机制.方法:将BT474细胞随机分成单纯照射组和trastuzumab干预组,通过克隆形成实验来观察各剂量下放射后两组BT474细胞的存活分数的差异,共聚焦显微镜下观测trastuzumab对放射后HER-2核转运和DNA DSB标志物γH2AX表达的影响,免疫印迹实验检测trastuzumab对放射后早期BT474细胞核内HER-2蛋白、DNA-PKcs的表达影响.结果:与单纯照射组相比,trastuzumab干预组可降低放射后各剂量下BT474细胞的存活分数(SF),共聚焦显微镜可观察到trastuzumab推迟了照射后HER-2蛋白由细胞膜进入核内的过程,并增加放射后12 h时间点的γH2AX表达,Western blot实验结果显示trastuzumab干预下调了放射后早期核内DNA-PKcs和HER-2的表达.结论:trastuzumab能够通过减少HER-2的入核,并进一步下调DNA-PKcs活性,抑制放射诱导下BT474的早期DSB修复.     

胰岛素对子宫内膜癌细胞Shc/ERK通路活化的影响

背景与目的 探讨胰岛素对子宫内膜癌细胞src同源区结构域蛋白C(Shc)活化、Shc与生长因子受体结合蛋白2(Grb2)的结合水平及对细胞外信号调节激酶(ERK)活化程度的影响.方法 106mol/L胰岛素作用子宫内膜癌Ishikawa3-H-12细胞不同时间,检测不同时间点细胞Shc磷酸化、Shc·Grb2复合物水平以及ERK的磷酸化程度.结果 胰岛素以时间依赖方式活化导子宫内膜癌细胞shc/ERK通路,Shc在胰岛素作用1 min即出现活化增强,15 min时达到峰值[P-p52Shc/p52Shc(73.75±2.93 vs 16.89±1.92);p-p46shc/p46Shc(35.65±5.17 vs 13.71±2.77)].细胞静息状态下检测不到Shc·Grb2复合物,胰岛素能促进Shc·Grb2结合,与Shc活化时程一致,即1min可检测出Shc·Grb2结合,15min时结合程度最大.胰岛素显著诱导子宫内膜癌细胞ERK活化,具有时问依赖性,作用30min时达到峰值(p-ERK/ERK:63.40±4.52 vs 22.66±3.76).结论 胰岛素以时间依赖模式促进子宫内膜癌Ishikawa3-H-12细胞Shc活化、Shc·Grb2结合以及ERK的活化.     

RANKL诱导乳腺癌BT-474细胞迁移机制的探讨

目的:探讨细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路在核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导的乳腺癌细胞BT474迁移中的作用.方法:流式细胞术及蛋白质印迹法检测BT474细胞表面RANK蛋白的表达;蛋白质印迹法检测RANKL刺激后细胞磷酸化ERK(p-ERK)及ERK的表达;Transwell法测定RANKL刺激后BT-474细胞迁移能力的改变.结果:BT-474细胞表面表达RANK蛋白,RANKL诱导BT-474细胞迁移能力增强,应用RANKL的圈套受体OPG可阻断RANKL诱导的细胞迁移,迁移增加率分别为(73.67±7.57)％和(9.67±3.06)％,P=0.001 5.BT-474细胞的P-ERK水平在RANKL刺激30 min后明显升高,应用MEK/ERK通路抑制剂PD98059可显著抑制RANKL诱导的细胞迁移.RANKL迁移增加率为(72.50±6.61)％,RANKL+PD98059迁移增加率为(15.00±2.16)％,P=0.0001.结论:ERK1/2信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌BT-474细胞迁移.     

人热休克蛋白对树突状细胞表面共刺激分子表达影响的研究

目的:研究人热休克肿瘤抗原复合物对树突状细胞(dendritic cells,DC)表面共刺激分子表达的影响。方法:分离培养人外周血来源的DC细胞,在培养过程中加入分离纯化的人热休克蛋白70(HSP70)抗原复合物及肿瘤细胞裂解物,流式细胞技术分析比较负载HSP70肿瘤抗原复合物、负载肿瘤细胞裂解物及负载前DC细胞表面分子CD80、CD83、CD86及HLA-DR表达水平的变化。结果:培养基中加入HSP70肿瘤抗原复合物后,其表面共刺激分子CD80、CD86和成熟标记分子CD83的表达水平分别为(98.9±1.5)%、(98.3±1.3)%和(53.1±0.8)%,与负载前CD80、CD86和CD83的(66.2±1.6)%、(94.2±2.0)%和(16.3±1.4)%相比显著提高,P=0.013;与肿瘤细胞裂解物负载的DC表面CD80、CD86和CD83的(86.2±1.9)%、(96.5±1.1)%和(55.1±1.0)%相比,共刺激分子CD80的表达显著提高,P=0.020。结论:人热休克肿瘤抗原复合物可提高DC表面共刺激分子的表达水平,促进DC功能活化,有可能在抗肿瘤免疫机制中起重要作用。     

CD155通过Ras/Erk通路促进肺腺癌细胞增殖及抑制其凋亡的分子机制

目的:研究CD155通过调控Ras/Erk通路对肺腺癌细胞活性、增殖、凋亡的影响,并探讨其作用的分子机制。方法:通过慢病毒转染法构建过表达或敲低CD155的人肺腺癌H23和H522细胞株,qRT-PCR检测肺腺癌细胞中CD155 mRNA表达水平,CCK-8法检测细胞活力,免疫荧光法测定细胞增殖和凋亡水平;Western blot检测PCNA、caspase-3、Ras、Erk1蛋白的表达及活化水平;小分子药物FTI 277或FR 180204处理过表达CD155的H23和H522细胞抑制Ras及Erk通路,检测对细胞活性、增殖、凋亡的影响;采用慢病毒共转染的方法构建CD155与SPRY2共同过表达的H23细胞系,免疫共沉淀法检测细胞中SPRY2、CD155蛋白间的结合关系,以同样的方法检测对细胞活性、增殖、凋亡的影响。结果:慢病毒转染肺腺癌H23和H522细胞可上调或下调细胞中CD155的表达,差异具有统计学意义（P＜0.05）;CD155过表达可促进肺腺癌细胞活性、增殖及PCNA蛋白的表达,抑制细胞凋亡及caspase-3的活化,敲低CD155则表现出相反的作用,差异具有统计学意义（P＜0.05）;CD155过表达可激活Ras和Erk1,敲低CD155则抑制Ras和Erk1的激活,差异具有统计学意义（P＜0.05）;抑制Ras和Erk通路可抑制过表达CD155引起的细胞增殖及活性的促进作用,缓解过表达CD155诱导的细胞凋亡,差异具有统计学意义（P＜0.05）;SPRY2过表达逆转CD155过表达对H23细胞增殖及活性的促进作用,抑制对Ras/Erk通路激活的促进作用,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论:CD155可通过提高Ras/Erk通路的激活程度,促进肺腺癌细胞在体外的增殖及活性,其作用机制可能是部分由CD155与SPRY2蛋白发生相互作用,降低了SPRY2蛋白对Ras/Erk通路的抑制作用引起的。     

依维莫司与PI3K抑制剂联合他莫昔芬对ER阳性乳腺癌细胞系作用的观察

目的:探讨他莫昔芬(TAM)联合mTORC抑制剂依维莫司(EVE)和PI3K抑制剂LY294002(LY)阻断负反馈激活,分析对ER(+)乳腺癌细胞系增殖、凋亡和周期的影响。方法:乳腺癌细胞系MCF-7和BT474分为对照组、TAM、TAM+EVE、TAM+LY和TAM+EVE+LY 5组,分别检测肿瘤细胞的增殖、凋亡与周期以及信号通路的改变情况。结果:MCF-7和BT474接受药物处理以后,EVE明显抑制肿瘤细胞的增殖,A450分别为0.23和0.32,特别是在三药联合组,抑制细胞增殖更加显著,A450分别为0.16和0.20,P<0.05。细胞凋亡的研究显示,EVE可促进肿瘤细胞凋亡,三药联合以后,乳腺癌细胞MCF-7和BT474的凋亡率分别为30.1%和54.2%。细胞周期的研究显示,G1期比例升高,三药联合后MCF-7和BT474G1期比率分别为86.02%和84.91%。EVE可有效阻断mTOR信号通路的活化,但通过负反馈作用可导致磷酸化AKT 473位点的激活,而联合PI3K抑制剂后,这种负反馈作用被阻断。结论:内分泌治疗药物TAM联合mTOR抑制剂EVE和PI3K抑制剂可抑制ER(+)乳腺癌细胞增殖、促进细胞凋亡、阻滞细胞生长,达到更好的治疗效果。     

Pharmacogénétique des fluoropyrimidines. La méthylènetétrahydrofolate réductase

Résumé: Lefficacité optimale des fluoropyrimidines nécessite des concentrations élevées en 5-10 méthylènetétrahydrofolate (CH₂FH₄), contrôlées par la méthylènetétrahydrofolate réductase (MTHFR) qui convertit irréversiblement le CH₂FH₄ en 5-méthyltétrahydrofolate (CH₃FH₄). Les polymorphismes 677CT et 1298AC du gène MTHFR sont associés à une baisse dactivité de lenzyme. Les tumeurs «MTHFR mutées» devraient donc être plus sensibles aux fluoropyrimidines que les tumeurs «MTHFR sauvages». Les études expérimentales et cliniques publiées à ce jour tendent à montrer une plus grande sensibilité au 5-FU (associé ou non à lacide folinique) dans les tumeurs MTHFR mutées par rapport aux tumeurs sauvages. Ces résultats montrent la nécessité de poursuivre ces recherches afin de confirmer limpact de ces polymorphismes sur lefficacité des fluoropyrimidines.     

Oncogénétique et psycho-oncologie, une collaboration recommandée...

Résumé: La possibilité depuis 1994, de connaître la probabilité individuelle de développer certains cancers a permis de proposer de nouvelles modalités de prévention, de traitements et contribué au développement actuel de loncogénétique. Une meilleure connaissance des répercussions psychologiques tant pour les patients que pour les apparentés est désormais possible et limplication des psycho-oncologues dans ce cadre de la réalisation des tests prédictifs, recommandée. La mission de «messager» qui incombe au «cas-index» doit faire lobjet dune attention particulière. La complexité de linformation et la dimension paradoxale que peut avoir parfois la communication à propos des choix, rend difficile lévaluation de la qualité du consentement. La situation particulièrement délicate dune aide à la décision à légard de la chirurgie prophylactique, exige une collaboration étroite des généticiens et des psycho-oncologues.Les soins de support en oncologie     

The role of papillomaviruses in human cancers

This review comprehensively evaluates the influence of gene-gene, gene-environment and multiple interactions on the risk of colorectal cancer (CRC). Methods of studying these interactions and their limitations have been discussed herein. There is a need to develop biomarkers of exposure and of risk that are sensitive, specific, present in the pathway of the disease, and that have been clinically tested for routine use. The influence of inherited variation (polymorphism) in several genes has been discussed in this review; however, due to study limitations and confounders, it is difficult to conclude which ones are associated with the highest risk (either individually or in combination with environmental factors) to CRC. The majority of the sporadic cancer is believed to be due to modification of mutation risk by other genetic and/or environmental factors. Micronutrient deficiency may explain the association between low consumption of fruit/vegetables and CRC in human studies. Mitochondrial modulation by dietary factors influences the balance between cell renewal and death critical in colon mucosal homeostasis. Both genetic and epigenetic interactions are intricately dependent on each other, and collectively influence the process of colorectal tumorigenesis. The genetic and environmental interactions present a good prospect and a challenge for prevention strategies for CRC because they support the view that this highly prevalent cancer is preventable.     

Antifungal combination therapy in localized candidosis

A mouse model of localized candidosis in air-filled subcutaneous cysts imitating thrush has been developed. We have now tested various antifungal combinations in this animal model. Flucytosine (5-FC) + amphotericin B (Amph B) showed the highest efficacy, a clear additive or even synergistic effect was seen. The combination of 5-FC + imidazole or triazole derivative was less efficacious, an additive effect was rare. The combination of 5-FC + Amph B was also tested against Candida albicans strains showing various degrees of 5-FC-resistance. A significant reduction in 5-FC-resistant mutants was seen after the treatment with the combination.     

Les génériques en cancérologie: à molécule identique, médicaments identiques? Les biosimilaires, des super-génériques?

Résumé: Les biosimilaires vont bientôt voir leur apparition en Europe. Comment un laboratoire peut-il aborder le développement de son dossier dAMM? Quelles sont les bases légales et les recommandations officielles? Comment la similarité et/ou le caractère générique peuvent-ils être démontrés? Les règles sont-elles identiques à celles des produits chimiques conventionnels pour lesquels, notamment en cancérologie, il existe des médicaments génériques? Comment faire pour que la sécurité et lefficacité des médicaments biosimilaires soient assurées pour les patients?     

PSA-Test zur Früherkennung des Prostatakarzinoms

Zusammenfassung Prostatakrebs ist hierzulande seit einigen Jahren die häufigste Krebserkrankung bei Männern. Da über die Ätiologie wenig gesichertes Wissen vorliegt und daher kaum Möglichkeiten zur primären Prävention bestehen, konzentrieren sich die Anstrengungen auf die Suche nach wirksamen Verfahren zur sekundären Prävention. Hierbei gilt die Verwendung des PSA-Tests zur Früherkennung des Prostatakarzinoms als derzeit aussichtsreichstes Verfahren. Bevor ein neues Früherkennungsverfahren zur breiten Anwendung empfohlen oder in das gesetzliche Früherkennungsprogramm aufgenommen wird, muss jedoch seine Wirksamkeit in hierfür geeigneten wissenschaftlichen Untersuchungen nachgewiesen werden. Bis jetzt gibt es bereits eine ganze Reihe epidemiologischer Studien zur Effektivität des PSA-Screenings, doch konnte ein Wirksamkeitsnachweis bisher nicht erbracht werden. Zwei große randomisierte Studien in Europa und den USA lassen für die Jahre 2005–08 erste Ergebnisse erwarten. Da epidemiologische Arbeiten belegen, dass durch PSA-Screening eine nicht unerhebliche Überdiagnostik und Übertherapie eintritt, d. h. Schaden angerichtet werden kann, ist das Ergebnis der genannten randomisierten Studien vor weitergehenden Entscheidungen unbedingt abzuwarten. Bis dahin sollte von der Anwendung des PSA-Tests zur Prostatakrebsfrüherkennung unmissverständlich abgeraten werden. Da für den Test bereits ausgiebig Werbung betrieben wurde, kommt einer gründlichen ärztlichen Aufklärung von an dem Test interessierten Personen eine Schlüsselrolle zu.     

Cancer immunotherapy

Unprecedented progress has seen made in the last decade in the field of cancer immunotherapy. The recent approval of nivolumab （Opdivo）, the first anti-programmed cell death-1 （PD-1） antibody, for metastatic melanoma in Japan, marked a milestone in the rapidly advancing field of cancer immunotherapy. Nivolumab together with ipilimumab （Yervoy）, the anti-cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen-4 （CTLA-4） antibody, are the first 2 drugs in the class of ＂immune checkpoint inhibitors＂ that have delivered impressive responses in patients with metastatic melanoma and renal cell cancer （RCC） as well as a variety of solid tumors.     

异基因造血干细胞移植后患者肝损害病因与临床特征分析

 【摘要】　目的　总结异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后患者肝损害的发生率、发生原因、诊断方法与治疗选择。方法　回顾性分析郑州大学附属肿瘤医院2006～2010年接受allo-HSCT的83例良、恶性血液病患者中Ⅱ～Ⅳ级肝损害的发生率、各种病因的构成比、临床表现以及诊断方法,分析移植后不同时期肝损害病因的差异、治疗方法、疗效。结果　83例allo-HSCT患者中,发生Ⅱ～Ⅳ级肝损害45例（54.2 %）。按肝损害致病病因分类,预处理化疗所致7例,环孢素所致9例,肝静脉闭塞病（HVOD）所致2例,肝脏移植物抗宿主病（GVHD）所致24例,乙型肝炎病毒再激活所致2例,多器官衰竭所致1例。发生于移植后1个月内者20例（44.4 %）,以药物性肝损害为主,1个月～100 d者13例（28.9 %）,101 d～1年者12例（26.7 %）,均以肝脏GVHD为主。经减停肝损害药物、抗排异、保肝等治疗后,27例治愈,10例好转,2例未愈,6例死于原发病复发或移植相关并发症。结论　肝损害是allo-HSCT后常见的并发症,药物及肝脏GVHD是其最主要的致病原因,肝损害与其发生时间的相关性可作为肝损害病因学诊断的参考依据。根据肝损害的病因选择针对性的治疗方法,可取得较好的疗效。     

Pharmacokinetics and dosage of fluconazole in continuous hemofiltration (CAVH, CVVH) and hemodialysis (CAVHD, CVVHD)

Continuous haemofiltration (CAVH, CVVH) and haemodialysis (CAVHD, CVVHD) are increasingly used in patients with acute renal failure (ARF). The elimination rates of fluconazole vary considerably among the different procedures. In CVVHD, the elimination rate is, depending on the combined dialysate/ultrafiltrate flow rate, the most marked compared to CVVH and intermittent dialysis with a fluconazole clearance exceeding the values of healthy persons in CVVHD 2 L/h. To achieve therapeutic plasma levels during continuous renal replacement therapy, the same loading dose as in patients without renal failure should be applied, followed by the adjusted maintenance dose for anuric patients multiplied by a factor taking the extracorporeal elimination of the absorbed dose into account (CAVH, CVVH: x 2.2, ultrafiltrate flow 0.5 L/h; CAVHD, CVVHD: x 3.8, combined dialysate/ultrafiltrate flow 1.5 L/h). Despite the broad therapeutic margin of fluconazole, drug monitoring is recommended with respect to the very limited number of investigations with relatively low dosages up to 200 mg/day and--which is of paramount importance--to achieve therapeutic drug levels in vital indications.