肺癌原代细胞和细胞系A549对肿瘤浸润性淋巴细胞体外增殖的抑制作用

目的研究肺癌原代细胞和细胞系A549对肿瘤浸润性淋巴细胞的抑制作用及其临床意义.方法分离和培养肺癌细胞及TIL细胞,用MTT法检测原代肺腺癌细胞及腺癌细胞株A549对TIL体外增殖的抑制作用及FasL抗体对TIL的保护作用.结果原代肺癌细胞及A549细胞株对TIL均有不同程度的抑制作用.结论肺癌细胞对TIL细胞的抑制作用可能是机体逃避免疫攻击的机制之一.     

非小细胞肺癌FasL异常表达与肿瘤浸润性淋巴细胞凋亡的关系

目的 探讨非小细胞肺癌FasL 表达与肿瘤浸润淋巴细胞凋亡之间的关系.方法 采用免疫组织化学方法和末端脱氧核苷酸转移酶介导核苷酸缺口标记 (TUNEL) 技术对45 例非小细胞肺癌(NSCLC)FasL 表达和肿瘤浸润淋巴细胞凋亡进行检测.结果 非小细胞肺癌FasL 阳性表达率(65.89±17.02)%.受检45例NSCLC组织肿瘤浸润淋巴细胞凋亡指数为4.69 ± 1.97.TIL凋亡指数与肿瘤病理类型及分化程度有关,腺癌组织中TIL 凋亡指数高于鳞癌(P＜0.01);低分化肺癌TIL 凋亡指数高于高分化肺癌(P＜0.01);NSCLC组织中TIL 凋亡指数与TNM 分期及是否伴淋巴结转移无关(P＞0. 05).TIL凋亡指数随NSCLC FasL 表达强度增强而增加,与其表达强度呈显著正相关(r=0.707,P＜0.01).结论 NSCLC 表达FasL 为肿瘤反杀伤宿主肿瘤浸润性T 淋巴细胞提供了有利条件;NSCLC 异常表达FasL 和TIL 细胞凋亡异常在肿瘤逃避宿主免疫监视、对机体免疫系统实施反杀伤方面具有非常重要的生物学意义.     

肺腺癌恶性胸水中肿瘤浸润T淋巴细胞成分及其对自体肿瘤细胞的杀伤活性

目的：分析恶性胸水中的肿瘤浸润T淋巴细胞(tumor infiltrating T lymphocyte,TIL)的细胞成分,探究其对 自体肿瘤细胞的杀伤活性。方法：收集17例肺腺癌患者的胸水,采用Ficoll密度梯度离心法分离恶性胸水中的单个 核细胞,流式细胞检测仪分析TIL细胞成分,贴壁培养法分离肿瘤细胞和TIL,裸鼠成瘤实验明确贴壁细胞为肿瘤 细胞,MTT法检测培养的TIL对自体肿瘤细胞的杀伤活性。结果：恶性胸水TIL中T细胞占60.6%~79.3%,辅助性T细 胞占比显著高于细胞毒性T细胞(36.63%±1.90% vs 24.64%±2.32%,P<0.001),同时还含有少量自然杀伤(natural killer, NK)细胞和NK T细胞;采用贴壁培养法成功分离培养肿瘤细胞,体外培养增殖的TIL对自体肿瘤细胞杀伤活性为 39.14%±12.04%,且体外高增殖组的TIL对自体肿瘤细胞的杀伤活性高于低增殖组(50.51%±3.80% vs 29.04%±5.77%, P<0.001)。结论：肺腺癌恶性胸水中TIL主要以T细胞为主,辅助性T细胞多于细胞毒性T细胞,体外增殖能力强的TIL 对自体肿瘤细胞的杀伤活性高于增殖能力弱者,恶性胸水可能为肿瘤细胞免疫治疗提供细胞来源。     

IL-2激活的TIL对自体肿瘤细胞的杀伤活性及其与LAK细胞活性的比较

肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)经白细胞介素2(IL-2)体外培养后具有很强的体内外抗肿瘤作用,且有一定的靶细胞特异性,其抗肿瘤效果强于淋巴因子激活的杀伤细胞即LAK细胞(P<0.01)。从瘤体中新鲜分离到的TIL对自体肿瘤细胞的杀伤活性极低,经IL-2体外培养后,其杀伤活性逐渐增高,以培养至7～25d的杀伤活性最强,这与IL-2使TIL分泌3种抗癌淋巴因子包括IL-2、IFN-γ、淋巴毒素(LT)增加有关。体外培养25d后,TIL的抗肿瘤活性下降,实验表明这与培养过程中TIL的Lyt-2~+细胞(Tc)减少而L3T4~+细胞(T_H)增多有关。TIL经冻存复苏和IL-2体外培养后仍保持很强的抗肿瘤活性,冻存前后比较未见显著差异(P>0.05),这为间断地运用TIL治疗复发性、晚期肿瘤提供了一条可行的途径。     

DC联合SEA激活TIL体外杀伤小鼠肝癌细胞活性研究

目的探讨H22细胞全细胞性抗原致敏的DC联合SEA激活的TIL体外抗小鼠肝癌活性作用。方法从荷瘤小鼠四肢长骨骨髓中获取DC,应用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)和H22细胞全细胞性抗原致敏DC,然后用已致敏的DC联合SEA激活从荷瘤小鼠中提取的TIL和脾淋巴细胞,观察受激活后的TIL和脾淋巴细胞作为效应细胞在体外对H22细胞的杀伤活性,并与对照组进行比较。结果TIL对H22细胞的杀伤活性[杀伤率为(50.63±2.52)%]高于脾淋巴细胞对H22细胞的杀伤活性[杀伤率为(12.26±1.28)%],用不同方式激活的TIL对H22细胞的杀伤活性均高于各自对应方式激活的脾淋巴细胞对H22细胞的杀伤活性;SEA激活的TIL对H22细胞的杀伤活性[杀伤率为(64.35±2.82)%]高于TIL对H22细胞的杀伤活性[杀伤率为(50.63±2.52)%],已致敏DC激活的TIL对H22细胞的杀伤活性更高[杀伤率为(75.23±3.21)%],而已致敏DC联合SEA激活的TIL对H22细胞的杀伤活性最高[杀伤率为(86.29±3.83)%]。结论用H22细胞全细胞性抗原致敏的DC联合SEA能显著激活TIL产生高效的对H22细胞的杀伤活性。     

葡萄球菌肠毒素A脂质体激活肿瘤浸润淋巴细胞抗肿瘤活性的实验研究

目的　研究葡萄球菌肠毒素 A(SEA)脂质体 (L- SEA)体外激活肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL)抗肿瘤的活性。方法　从 5例原发性肝癌患者癌组织中分离培养 TIL,分别以 L- SEA、SEA和 IL- 2刺激后 ,观察 TIL 的增殖曲线 ,EL ISA法检测细胞因子的分泌 ,流式细胞仪检测细胞亚群的变化 ,MTT法检测 TIL 的肿瘤杀伤活性。结果　L- SEA、SEA及 IL- 2均能有效刺激 TIL 的增殖 ,最高增殖倍数分别为 4 2 .5、5 1、12 .5倍。除第 4 d L- SEA组 TIL 的IFN- γ水平低于游离 SEA组外 ,此两组的细胞因子分泌没有显著性差异 (P>0 .0 5 ) ,且都高于 IL- 2组。 L- SEA刺激后 ,TIL 的 CD8+细胞亚群增殖更快 ,CD4 +细胞 / CD8+细胞出现倒置。经过 L- SEA培养后的 TIL 能有效杀伤Hep G- 2肿瘤细胞。结论　 L- SEA仍然具有游离 SEA的刺激 TIL 增殖、分泌细胞因子、杀伤肿瘤细胞的活性。     

IL-2激活的肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)的制备和体内外抗肿瘤作用及其与LAK细胞作用的比较

用机械、酶消化加不连续密度梯度离心的方法从C57BL/6小鼠的实体瘤(B16黑色素瘤和Lewis肺癌)中分离到TIL,发现刚分离的TIL产生IL-2、IFN-γ和淋巴毒素(LT)的能力及其自然杀伤活性均显著低下,已初步证明刚分离的TIL的功能低下状态与TIL在肿瘤微环境中受到肿瘤细胞分泌的免疫抑制因子的作用有关。加IL-2(500U/ml)培养后可以解除TIL的功能低下状     

DC联合香菇多糖激活TIL体外抗小鼠肝癌研究

目的:探讨H22细胞全细胞性抗原致敏的树突状细胞(dendritic cell,DC)联合香菇多糖激活的TIL体外抗小鼠肝癌活性作用。方法:从荷瘤小鼠四肢长骨骨髓中获取DC,体外致敏DC,然后用已致敏的DC联合香菇多糖激活从荷瘤小鼠中提取的TIL和脾淋巴细胞,观察受激活后的TIL和脾淋巴细胞作为效应细胞在体外对H22细胞和S180细胞的杀伤活性。结果:各组效应细胞对H22细胞的杀伤活性均高于各自对应的效应细胞对S180细胞的杀伤活性;TIL对H22细胞的杀伤活性[杀伤率为(42.56±2.52)%]高于脾淋巴细胞对H22细胞的杀伤活性[杀伤率为(9.89±1.28)%];香菇多糖激活的TIL对H22细胞的杀伤活性[杀伤率为(62.46±2.82)%]高于TIL对H22细胞的杀伤活性[杀伤率为(42.56±2.52)%],已致敏DC激活的TIL对H22细胞的杀伤活性更高[杀伤率为(72.35±3.21)%],而已致敏DC联合香菇多糖激活的TIL对H22细胞的杀伤活性最高[杀伤率为(82.32±3.83)%],它们之间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:用H22细胞全细胞性抗原致敏的DC联合香菇多糖能显...     

肿瘤细胞不同程度表达HLA-G对NK细胞杀伤活性影响研究

目的 探讨肿瘤细胞不同程度表达HLA-G对NK细胞杀伤活性的影响.方法 基因克隆建立稳定表达HLA-G抗原的肿瘤细胞株,以及通过基于CD107a标记的流式细胞术检测肿瘤细胞表达HLA-G前后对NK细胞杀伤功能的影响.结果HLA-G抗原在细胞表面获得不同程度的表达且能显著抑制NK对肿瘤细胞的杀伤活性(P＜0.05).HLA-G特异性抗体87G阻断或其受体KIR2DL4特异性抗体#33阻断后,均能明显恢复NK细胞对转染HLA-G肿瘤细胞的杀伤功能.结论 肿瘤细胞HLA-G表达量不同,均能抑制NK细胞的杀伤活性,提示HLA-G分子表达在恶性肿瘤细胞的免疫逃逸中起重要作用.     

细胞因子诱导的杀伤细胞对Lewis肺癌细胞的抑瘤作用及抑瘤机制的研究

目的观察细胞因子诱导的杀伤(cytokine induced killer,CIK)细胞对Lewis肺癌细胞增殖和Lewis肺癌移植瘤生长的抑制作用,探讨其抑瘤机制。方法常规方法培养CIK细胞,以CIK细胞为效应细胞,Lewis肺癌细胞为靶细胞,以不同效靶比共同培养,MTT法检测细胞增殖情况,同时电镜观察Lewis肺癌细胞形态特征改变;流式细胞仪检测Lewis肺癌细胞的凋亡;免疫细胞化学法检测并比较FasL在单个核细胞和CIK细胞表面的表达;用MTT法检测抗FasL单克隆抗体对CIK细胞杀伤Lewis肺癌细胞的影响;用ELISA方法检测Lewis肺癌荷瘤小鼠脾细胞上清液中IL-2、IL-4、IFN-γ和TNF-α浓度。结果电镜观察:CIK细胞能促进Lewis肺癌细胞凋亡超微结构的改变;流式细胞仪检测:CIK细胞组凋亡率明显高于对照组;FasL在CIK细胞表达增加;抗Fas单抗可抑制CIK杀伤Lewis肺癌细胞的活性;CIK细胞治疗的Lewis肺癌小鼠脾细胞培养上清液中细胞因子水平明显高于对照组。结论CIK细胞可在体内及体外抑制Lewis肺癌细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡,Fas/FasL途径在其中发挥一定作用,同时CIK细胞抗肿瘤作用可能与淋巴细胞活化和分泌细胞因子有关。     

肺癌患者TCR Vβ亚家族表达及记忆性T细胞表达的研究

目的 探讨肺癌患者外周血T细胞及胸水肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)的T细胞受体(TCR)Vβ亚家族及记忆性T细胞的表达情况.方法 分离健康人和肺癌患者的T细胞,采用流式方法检测Vβ24个亚家族及CD45RO和CD28的表达情况,统计分析Vβ24个亚家族及记忆性T细胞的特点.结果 43例肺癌患者外周血TCR Vβ亚家族主要...     

Induction of antitumor activity and experimental expansion of human lung cancer-infiltrating lymphocytes.

In order to look for effector cells which are more efficient and less toxic than LAK cells induced from PBL for use in adoptive immunotherapy, we studied the antitumor activity and in vitro expansion of tumor infiltrating lymphocytes (TIL) from human lung cancers and compared their cytological properties with those of autologous PBL. The results showed: 1) Large numbers of TIL could be obtained from lung cancer tissue, approximately 1-5 x 10(8)/g tumor tissue, with an average TIL to tumor cell ratio of 2.3:1 (21 samples). 2) Fresh TIL were not cytotoxic against either NK-sensitive or -resistant tumor targets. After culturing for 6 to 8 d in the presence of rIL-2, TIL showed significant cytotoxicity and were able to kill autologous and allogeneic tumor targets and fresh solid tumor targets. 3) When maintained in the presence of rIL-2, TIL were able to continue proliferating and expanding for more than 2 mon, with expansion indices of 4-512. TIL stopped proliferating following the disappearance of autologous tumor cells in the culture. 4) Chronological studies revealed that the cytotoxicity appeared after 4 days in culture and reached a peak on the 14th day, and cultured TIL remained cytotoxic for at least 4 wk.     

肝癌瘤苗激活的TIL在体外抗肿瘤活性的研究

目的：为了提高肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）的抗瘤活性。方法：使用肝癌瘤苗来激活ＴＩＬ，观察其抗瘤活性的改变。结果：经瘤苗激活的ＴＩＬ在培养护增１０、２０、３０和４０ｄ的体外对自体肝癌细胞的杀伤率均有明显提高，其中以培养扩增３０ｄ时为最高。结果：经肝癌瘤苗激活的ＴＩＬ具有更高的体外杀伤自体肝癌细胞的能力。     

肝癌瘤苗激活的TIL对K562细胞杀伤活性的研究

目的：为也提高ＴＩＬ的抗肿瘤细胞活性。方法；使用冷冻方法制成肝癌瘤苗。用于激活ＴＩＬ，观察基杀伤Ｋ５６２细胞活性的改变。结果：经瘤苗激活的ＴＩＬ在培养扩增１０天，２０天，３０天和４０天对Ｋ５６２细胞的杀伤率均有明显提高，其中以培养扩增３０天时为最高。     

bcl-2基因表达与小细胞肺癌对抗机体免疫所致细胞凋亡的关系

目的 观察小细胞肺癌细胞株bcl-2基因表达与其耐受肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)免疫攻击的关系,探索应用bcl-2硫代反义寡核苷酸(bcl-2SON)治疗肺癌的途径。方法 bcl-2SON处理小细胞肺癌细胞株NCI-H69,Westernblotting检测其对bcl-2表达作用;分别把bcl-2表达不同的小细胞肺癌细胞株与肺癌标本分离出来的TIL共同培养,并通过JAM试验观察TIL诱导肺癌细胞凋亡的情况。结果 经bcl-2SON处理后NCI-H69细胞的bcl-2表达明显受抑制。JAM试验结果显示,bcl-2SON处理的H69细胞及无bcl-2表达的NCI-H82细胞在与TIL混合培养中,随着TIL浓度增加,凋亡细胞也增加;对照的NCI-H69可见bcl-2表达,JAM试验中随着TIL浓度增加,凋亡细胞的量无明显变化。结论 表达bcl-2的肺癌细胞可对抗肿瘤浸润淋巴细胞的免疫攻击,bcl-2SON可作为治疗肺癌的新途径。     

bcl-2基因表达与小细胞肺癌对抗机体免疫所致细胞凋亡的关系

目的 观察小细胞肺癌细胞侏bcl-2基因表达与其耐受肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）免疫攻击的关系，探索应用bcl-2硫代反义寡核苷酸（bcl-2 SON）治疗肺癌的途径。方法 bcl-2 SON处理小细胞肺癌细胞株NCI-H69，Western blotting检测其对bcl-2表达作用；分别把bcl-2表达不同的小细胞肺癌细胞株与肺癌标本分离出来的TIL共同培养，并通过JAM试验观察TIL诱导肺癌细胞凋亡的情况。结果 经bcl-2 SON处理后NCI-H69细胞的bcl-2表达明显受抑制。JAM试验结果显示，bcl-2SON处理的H69细胞及尢bcl-2表达的NCI-H82细胞在与TIL混合培养中，随着TIL浓度增加．凋亡细胞也增加；对照的NCI-H69可见bcl-2表达，JAM试验中随着TIL浓度增加，凋亡细胞的量无明显变化。结论 表达bcl-2的肺癌细胞可对抗肿瘤浸润淋巴细胞的免疫攻击，bcl-2 SON呵作为治疗肺癌的新途径。     

肝癌癌周组织淋巴细胞和TIL的分布及抗瘤活性的研究

目的：研究肝癌癌周组织淋巴细胞和肝癌TIL的分布及抗瘤活性，方法：用冷胶原酶消化分离法来分离肝癌癌周组织淋巴细胞及肝癌实质部和中心部TIL并测定它们的获得率，用^3T-TdR释放法测定它们对自体肝癌细胞的杀伤活性。结果：肝癌实质部TIL获得率最高，肝癌癌周组织淋巴细胞获得率次之，肝癌中心部TIL获得率最低，它们对自体肝癌细胞的杀伤活性从高到低则分别为肝癌实质部TIL，肝癌中心部TIL和肝癌癌周组织淋巴细胞，结论：肝癌癌周组织和肝癌组织不同部位的淋巴细胞分布有所不同，它们的抗瘤活性也各不相同，为了获得数量多和抗瘤活性高的淋巴细胞，应尽量从肝癌实质部来分离获取。     

肝癌癌周组织淋巴细胞和TIL的分布及抗瘤活性的研究

目的研究肝癌癌周组织淋巴细胞和肝癌TIL的分布及抗瘤活性。方法用冷胶原酶消化分离法来分离肝癌癌周组织淋巴细胞及肝癌实质部和中心部TIL并测定它们的获得率。用