羟氯喹对类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞基质金属蛋白酶-1表达的影响

目的探讨羟氯喹(hydroxychloroquine, HCQ)对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)诱导的类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)-1表达的调控作用及分子机制。方法对数生长期MH7A细胞分为空白组(细胞正常培养)、TNF-α组(细胞培养基中加入10μg/L TNF-α)、HCQ联合A组(细胞培养基中加入2.5μmol/L HCQ+10μg/L TNF-α)、HCQ联合B组(细胞培养基中加入5μmol/L HCQ+10μg/L TNF-α)、HCQ联合C组(细胞培养基中加入10μmol/L HCQ+10μg/L TNF-α)。5组细胞培养24 h,采用ELISA法检测细胞培养上清液MMP-1水平,采用实时荧光定量PCR法检测细胞MMP-1 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测细胞c-Jun氨基末端激酶(Jun N-terminal kinase, JNK)、磷酸化JNK(p-JNK)蛋白相对表达量。将MH7A细胞分为对照组和茴香霉素组,对照组细胞按HCQ联合C组培养方法培养24 h;茴香霉素组细胞培养基中先加入10μg/L茴香霉素培养2 h后,再按HCQ联合C组的培养方法继续培养至24 h;采用实时荧光定量PCR法检测2组MMP-1 mRNA相对表达量。结果 TNF-α组[(791.32±175.40)ng/L、6.89±1.20]、HCQ联合A组[(366.71±224.44)ng/L、4.12±0.71]、HCQ联合B组[(283.22±154.86)ng/L、2.99±0.18]、HCQ联合C组[(173.44±36.25)ng/L、2.01±0.80]、空白组[(133.13±62.19)ng/L、1.00±0.00]细胞MMP-1水平和MMP-1 mRNA相对表达量均依次降低(P0.05);TNF-α组(2.02±0.07)、HCQ联合A组(1.31±0.09)、HCQ联合B组(0.86±0.09)、HCQ联合C组(0.56±0.05)、空白组(0.43±0.03)细胞p-JNK蛋白相对表达量依次降低(P0.05),而TNF-α组(2.30±0.16)、HCQ联合A组(2.16±0.13)、HCQ联合B组(2.03±0.05)、HCQ联合C组(2.16±0.16)、空白组(2.23±0.11)JNK蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P0.05);茴香霉素组细胞MMP-1 mRNA相对表达量(5.13±1.43)高于对照组(2.01±0.80)(P0.05)。结论 HCQ能通过JNK信号通路调控MH7A细胞MMP-1的表达。     

腹膜透析感染期过氧化物酶体增殖物激活受体γ水平的变化及意义

目的探讨腹膜透析感染期过氧化物酶体增殖物激活受体γ水平的变化及意义。方法选择哈尔滨医科大学附属第一医院肾内科腹膜透析患者,分为实验组与对照组,应用RT-PCR对实验组和对照组腹膜透析液及外周抗凝血提取的巨噬细胞PPARγmRNA表达水平进行测定,ELISA测定外周血单核细胞TNF-α、IL-6水平。结果RT-PCR显示腹膜透析液及外周血单核细胞PPARγmRNA的表达水平,实验组第1天[分别为(0.52±0.06),(0.68±0.07)]均明显低于实验组第5天[分别为(0.66±0.09),(0.89±0.08)及对照组[分别为(0.68±0.08),(0.93±0.06)](P<0.01)。腹膜炎症初期,PPARγmRNA为低表达。ELISA测定外周抗凝血单核细胞TNF-α、IL-6水平,实验组第1天[分别为(20.16±11.26)ng/L,(26.89±13.46)ng/L]均明显高于实验组第5天[分别为(6.38±4.28)ng/L,(8.96±4.67)ng/L]及对照组[分别为(5.39±3.50)ng/L,(7.83±4.26)ng/L](P<0.01),与PPARγmRNA表达水平呈明显负相关。结论腹膜透析合并腹膜炎初期患者腹腔巨噬细胞PPARγmRNA低表达,PPARγ在腹腔局部免疫中可能有重要意义。     

沉默Bax基因对TNF-α诱导肺泡上皮细胞凋亡的影响

目的探讨沉默Bcl-2相关X蛋白(Bax)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导肺泡上皮细胞凋亡的影响。方法用0 ng/ml、10 ng/ml的TNF-α作用于人A549细胞,RT-PCR和Western blot检测细胞中Bax表达水平。A549细胞转染Bax小干扰RNA(Bax siRNA)、小干扰RNA阴性对照(siRNA control),RT-PCR和Western blot检测细胞中Bax表达水平。细胞分为空白对照组(未转染细胞)、TNF-α组(未转染细胞,培养液中含有10 ng/ml的TNF-α)、阴性对照组(转染siRNA control后的细胞,培养液中含有10 ng/ml的TNF-α)、干扰组(转染Bax siRNA后的细胞,培养液中含有10 ng/ml的TNF-α)。流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blot检测细胞中p38、磷酸化的p38(p-p38)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)的表达。结果 10 ng/ml的TNF-α作用后的细胞中Bax mRNA和蛋白表达水平升高。转染Bax siRNA后细胞中Bax mRNA和蛋白水平均降低。空白对照组、TNF-α组、阴性对照组、干扰组细胞凋亡率依次为:(0.92±0.01)%、(7.94±0.19)%、(7.93±0.17)%、(4.62±0.13)%。TNF-α组、阴性对照组、干扰组细胞中p-p38、Cleaved Caspase-3表达水平均明显高于空白对照组(P0.01)。干扰组细胞中p-p38、Cleaved Caspase-3表达水平均明显低于TNF-α组(P0.01)。结论 TNF-α能够诱导肺泡上皮细胞凋亡,而沉默Bax能够部分逆转TNF-α促凋亡作用,作用机制可能与p38信号通路有关。     

慢性阻塞性肺疾病患者血清IL-8及TNF-α的意义

目的　探讨白介素-8(IL-8)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)发病机理中的作用。方法　采30例COPD急性发作期及缓解期患者血清,应用放射免疫法和液相竞争法分别测血清IL-8及TNF-α水平。结果　COPD患者急性发作期IL-8及TNF-α水平分别为:(1 .9608±2.0304)ng/L、(4 .6170±2 .2745)ng/L;缓解期IL-8及TNF-α水平分别为(1 6648±1 6786)ng/L、(3 8916±2 0820)ng/L;正常对照组IL-8及TNF-α水平分别为:(0. 3738±0 .1448)ng/L,(0 .7056±0. 5223)ng/L,急性发作期和缓解期IL-8 及TNF-α水平明显高于正常对照组(P<0 01),且急性发作期IL-8 及TNF-α水平又高于缓解期(P<0. 05)。结论　IL-8、TNF-α共同参与COPD气道炎症的形成,在COPD形成过程中可能起重要作用。     

胞壁酰二肽对烟曲霉孢子刺激A549细胞分泌细胞因子的影响及其可能机制

目的:研究胞壁酰二肽(muramyl dipeptide,MDP)对烟曲霉孢子刺激人肺腺癌细胞株A549分泌细胞因子的影响及其可能机制.方法:应用透射电镜观察A549细胞吞噬烟曲霉孢子；采用实时聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction,Real time PCR)检测MDP对烟曲霉孢子刺激A549细胞分泌肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)的影响；Real-time PCR检测烟曲霉孢子刺激A549细胞后核苷酸结合寡聚化结构域蛋白2(nucleotide-binding oligomerization domain protein 2,NOD2) mRNA的表达；采用免疫荧光法检测烟曲霉孢子刺激A549细胞后NOD2蛋白的表达.结果:与灭活的烟曲霉孢子共孵育10h后,A549细胞内可见吞噬的烟曲霉孢子；MDP联合烟曲霉孢子刺激显著增加了A549细胞中TNFαmRNA的表达(P＜0.05)；A549细胞吞噬烟曲霉孢子24 h时细胞NOD2 mRNA表达较0h显著增加(P＜0.05),48h时NOD2 mRNA表达较24 h时减少,差异有统计学意义(P＜0.05)；A549细胞吞噬烟曲霉孢子后24 h细胞内NOD2蛋白表达增加.结论:A549细胞能够吞噬烟曲霉孢子,MDP刺激可显著增加吞噬烟曲霉孢子的A549细胞分泌TNF-α,其作用可能是通过NOD2对烟曲霉孢子的识别来实现的.     

替米沙坦对维持性血液透析患者微炎症状态的影响

目的 观察血管紧张素Ⅱ1型受体桔抗剂--替米沙坦对维持性血液透析患者微炎症状态的作用.方法 选择我院血透中心40例维持性血液透析患者,测定C-反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)后,随机分为替米沙坦组(20例)和非替米沙坦组(20例).用药24周后复查CRP、IL-6、TNF-α,并与健康对照组20名作对照.结果 替米沙坦组治疗前、后CRP、IL-6、TNF-α[分别为(5.36±12.7)、(3.19±0.89)ms/L,(160.11±27.64)、(91.65±15.10)ng/L,(2.45±0.76)、(1.44±0.29)ng/L]比较,差异均有统计学意义(P均<0.01);非替米沙坦组治疗前、后CRP、IL-6、TNF-α[分别为(5.28±1.32)、(5.18±1.43)ms/L,(158.33±39.47)、(147.40±40.69)ng/L,(2.53±0.62)、(2.39±0.81)ng/L]比较,差异均无统计学意义(P均>0.05);治疗后替米沙坦组与非替米沙坦组以上各指标比较,差异均有统计学意义(P均<0.01),2组患者治疗前与健康对照组[CRP:(1.58±0.68)mg/L,IL-6:(13.54±4.12)ng/L,TNF-α:(0.18±0.12)ng/L]以上各指标比较,差异均有统计学意义(P均<0.01).结论 应用替米沙坦治疗能改善维持性血液透析患者的微炎症状态.     

乌司他丁对脓毒症大鼠急性肺损伤的保护作用及其机制研究

目的研究乌司他丁对脂多糖诱导的脓毒症大鼠急性肺损伤的保护作用及其机制。方法将52只大鼠分为乌司他丁组和对照组,每组26只。两组大鼠腹腔注射脂多糖溶液(10 mg/kg)以制备脓毒症模型,分别于建模前18 h和3 h,乌司他丁组大鼠给予乌司他丁(100 000 U/kg),对照组注射等量生理盐水。于造模成功后0.5、2、4、12、24、72 h各时间点采血检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、IL-10及肺泡灌洗液蛋白浓度,并通过光学显微镜观察肺组织病理学改变。结果两组大鼠血浆TNF-α、IL-6、IL-10及肺泡灌洗液总蛋白浓度各时间点比较,差异均有统计学意义(F=5.899,P=0.040;F=7.932,P=0.029;F=18.450,P=0.005;F=6.467,P=0.038),且与对照组相比较,乌司他丁组在0.5、2、4、12、24、72 h各时间点的血浆TNF-α[(21.6±3.8)ng/L vs.(14.8±2.5)ng/L,(69.2±3.2)ng/L vs.(48.8±3.9)ng/L,(74.8±6.9)ng/L vs.(56.3±4.2)ng/L,(120.2±43.8)ng/L vs.(106.4±65.8)ng/L,(190.2±30.4)ng/L vs.(119.8±28.9)ng/L,(159.7±10.5)ng/L vs.(112.3±10.2)ng/L]、IL-6[(145±6)ng/L vs.(119±5)ng/L,(344±19)ng/L vs.(225±22)ng/L,(458±36)ng/L vs.(273±28)ng/L,(949±64)ng/L vs.(328±27)ng/L,(841±61)ng/L vs.(306±6)ng/L,(899±35)ng/L vs.(278±16)ng/L]及肺泡灌洗液总蛋白浓度[(320±8)mg/L vs.(290±17)mg/L,(400±7)mg/L vs.(336±9)mg/L,(536±10)mg/L vs.(492±14)mg/L,(806±10)mg/L vs.(608±17)mg/L,(781±17)mg/L vs.(579±16)mg/L,(662±24)mg/L vs.(505±9)mg/L]均明显降低(P均0.05),而血浆IL-10浓度[(5.7±0.8)ng/L vs.(11.7±0.9)ng/L,(17.2±1.6)ng/L vs.(31.9±2.6)ng/L,(22.3±2.1)ng/L vs.(54.7±4.8)ng/L,(42.3±4.9)ng/L vs.(80.7±1.9)ng/L,(29.7±1.4)ng/L vs.(69.4±3.4)ng/L,(21.4±2.9)ng/L vs.(74.3±5.5)ng/L]均明显升高(P均0.05)。对照组大鼠肺泡间隔增厚,间质充血水肿,炎性细胞浸润,肺泡塌陷,而乌司他丁组大鼠上述病理学改变明显减轻。结论乌司他丁是通过下调TNF-α、IL-6,上调IL-10水平,从而抑制炎症细胞在肺部的浸润以及肺组织中蛋白酶的表达来保护脂多糖诱导的脓毒症大鼠急性肺损伤。     

辛伐他汀对脂多糖诱导的Ⅱ型肺泡上皮细胞钠通道α亚基的影响

目的 通过体外给药的方式观察辛伐他汀对脂多糖(LPS)诱导的原代培养大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(ATⅡ)钠通道α亚基(α-ENaC)mRNA表达的影响.方法 ATⅡ细胞原代培养,分为空白对照组、LPS损伤组(终浓度1 mg/L)、辛伐他汀低和高剂量组(20μmol/L、30μmol/L)、溶剂对照组.分别于培养1、12、24 h用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清中肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、白细胞介素-1 β(IL-1β)的浓度,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中α-ENaC mRNA表达.结果 LPS损伤后1、12、24 h时TNF-α、IL-1β浓度均较空白对照组显著升高.辛伐他汀低剂量组1、12、24h TNF-α(ng/L)和IL-1β(ng/L)均较LPS损伤组明显下降(TNF-α 1h:1178.80±127.43比2336.00±170.04,12 h:1003.60±59.61比2479.80±210.41,24 h:695.80±25.24比1167.60±132.72;IL-1β 1 h:285.00±42.60比429.60±27.39,12 h:238.60±24.12比822.20±12.74,24 h:213.40±17.87比637.60±22.96,均P＜0.05),高剂量组较低剂量组下降更明显(TNF-α1h:965.60±24.45比1178.80±127.43,12 h:522.80±16.89比1003.60±59.61,24 h:252.40±17.64比695.80 ±25.24;IL-1β 1 h:225.60±34.44比285.00 ±42.60,12 h:190.60 ±17.64比238.60±24.12,24 h:152.80±14.70比213.40±17.87,均P＜0.05),但仍较空白对照组明显上升.在培养1h时各组α-ENaC mRNA表达差异均无统计学意义.培养12h、24 h时,LPS损伤组α-ENaC mRNA表达(A值)明显低于空白对照组(12 h:0.211±0.021比0.496±0.027,24 h:0.253±0.030比0.482±0.030,均P＜0.05);辛伐他汀低剂量组α-ENaC mRNA表达均较LPS损伤组明显上升(12 h:0.363 ±0.030比0.211±0.021,24 h:0.309±0.024比0.253±0.030,均P＜0.05),高剂量组较低剂量组升高更明显(12h:0.413±0.034比0.363±0.030,24h:0.346±0.024比0.309±0.024,均P＜0.05),但仍较空白对照组明显下降.空白对照组与溶剂对照组各指标差异无统计学意义.结论 大剂量辛伐他汀可上调LPS诱导的大鼠ATⅡ细胞α-ENaC mRNA表达,其机制可能与调节TNF-α、IL-β的分泌有关.     

高氧所致氧化应激状态下肺泡上皮细胞Toll样受体的表达及其功能研究

目的 观察高氧暴露后肺泡上皮细胞内活性氧(ROS)水平与Toll样受体(TLRs)基因、蛋白表达变化及其与信号通路功能之间的关系,探讨高氧所致肺损伤炎症反应的可能机制.方法 将体外培养的人肺腺癌A549细胞株分为空气对照组、高氧组、N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理组;高氧组细胞在＞90％O2的高氧环境中暴露2、6、12、24及48 h,NAC预处理组细胞予以ROS清除剂NAC预处理后高氧暴露6h.于相应时间点用流式细胞术检测细胞内ROS含量以及TLR2/4蛋白在细胞中的分布和表达;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测TLR2/4 mRNA表达;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中白细胞介素(IL-6、IL-8)的含量.结果 A549细胞有TLR2/4表达,并且以细胞质内表达为主.与空气对照组比较,高氧组暴露2h细胞内ROS含量(荧光强度)即明显增高(11.820±3.123比7.223±1.170,P＜0.01),随高氧暴露时间延长呈进行性增高,于48 h达高峰(113.837±5.247,P＜0.01);高氧暴露2 h TLR2/4 mRNA表达至高峰(TLR2 mRNA:1.820±0.056比1.263±0.023;TLR4 mRNA:2.080±0.220比1.317±0.107,均P＜0.01),随高氧暴露时间延长,TLR2/4 mRNA表达虽仍有增多,但无显著变化;高氧暴露后TLR2/4蛋白表达显著增高,6h表达至高峰(TLR2蛋白:8.370±1.548比3.930±0.277;TLR4蛋白:25.803±5.783比8.867±2.230,均P＜0.01),以细胞质内表达为主;随高氧暴露时间延长,细胞上清液中IL-6(ng/L)、IL-8(ng/L)水平呈进行性增高,于48 h达高峰(IL-6:2 213.41±69.99比9.76±1.47;IL-8:11 520.38±429.93比159.56±20.80,均P＜0.01).在NAC预处理情况下,高氧刺激后,细胞内ROS水平明显降低(14.050±1.257比31.180±2.336,P＜0.01),细胞TLR2/4 mRNA和蛋白表达显著降低(TLR2 mRNA:1.270±0.061比1.683±0.025; TLR4 mRNA:1.507±0.058比1.650±0.139;TLR2蛋白:3.458±0.258比8.370±1.548;TLR4蛋白:11.611±3.403比25.803±5.783,均P＜0.05),细胞上清液中IL-6、IL-8水平显著下降(IL-6:8.42±0.70比73.51±16.70;IL-8:134.94±5.19比772.82±96.05,均P＜0.05),与空气对照组比较差异均无统计学意义.结论 A549细胞在高氧暴露后,细胞内ROS能够激活人肺泡上皮细胞TLR2/4的表达,导致前炎症细胞因子IL-6和IL-8的大量释放.     

RNA干扰HIF-2α基因对人肺腺癌A549细胞株侵袭转移的影响

目的:探讨小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制缺氧诱导因子(hyposia-inducible factor 2α,HIF-2α)基因表达对人肺腺癌A549细胞株侵袭转移的影响。方法:构建针对HIF-2α-siRNA并转染A549细胞株,采用实时荧光定量多聚酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和Western blot方法检测HIF-2α表达水平,通过Tran-swell试验及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白检测,探讨HIF-2α-siRNA对A549细胞侵袭力的影响。结果:将HIF-2α-siRNA转染A549细胞后,HIF-2α的mRNA和蛋白表达水平均下调。qRT-PCR检测显示,第4号siRNA表达载体抑制作用最强,转染后24 h和48h对HIF-2α基因mRNA表达水平抑制率分别为(60.63±5.10)%和(80.00±3.55)%。Western blot检测同样证实,第4号siRNA表达载体对于HIF-2α蛋白表达抑制作用最强,转染后24 h和48 h抑制率分别为(31.69±11.56)%和(82.87±4.09)%。Transwell试验发现,转染HIF-2α-siRNA后,穿膜细胞数显著减少(P<0.05),表明细胞侵袭力下降。转染HIF-2α-siRNA后,VEGF表达水平显著下调(P<0.01)。结论:转染HIF-2α-siRNA可有效降低A549细胞的侵袭转移力。     

高容量血液滤过对内毒素休克犬心肌组织Toll样受体4表达的影响

目的 探讨高容量血液滤过(HVHF)对内毒素休克心肌组织Toll样受体4(TLR4)mRNA表达的影响.方法 健康犬16只,静脉注射脂多糖(LPS)650 μg/kg诱导犬内毒素休克模型.将制摸成功的动物按随机数字表法分为对照组和HVHF治疗组,每组8只.用放射免疫法测定血中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-10含量,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定心肌TLR4 mRNA表达,电镜下观察心肌组织病理改变.结果 治疗组HVHF后1、2、4 h血清TNF-α(μg/L:0.59±0.15、0.51±0.12、0.41±0.10)、IL-6(ng/L:11.08±2.83、9.82±2.58、8.25±2.05)、IL-10(μg/L:57.28±5.93、53.81±5.83、50.67±6.33)的含量显著低于本组成模时[(0.84±0.16)μg/L、(16.97±2.50)ng/L、(70.86±5.43)μg/L]和对照组相应时间点[TNF-α(μg/L):0.75±0.14、0.74±0.11、0.72±0.11,IL-6(ng/L):15.33±3.20、14.66±3.24、14.20±3.33,IL-10(μg/L):71.54±4.73、70.71±4.34、69.35±4.60],差异均有统计学意义(均P<0.01).治疗组较对照组心肌TLR4 mRNA表达明显下调(t=3.58,P<0.01).相关分析显示,TLR4 mRNA表达与循环血中TNF-α、IL-6、IL-10浓度呈正相关(r1=0.785,r2=0.569,r3=0.635,均P<0.05).电镜下观察治疗组心肌病理损伤较对照组减轻.结论 HVHF能下调内毒素诱导休克犬心肌TLR4mRNA 表达,减轻心肌炎症反应和心肌损伤.     

低强度脉冲超声增强人外周血淋巴细胞增殖及抗癌活性的实验研究

目的探讨低强度脉冲超声(LIPUS)对人外周血淋巴细胞(HPBL)增殖和抗肿瘤效应的影响。方法采用Ficoll梯度离心法分离HPBL;将LIUPS强度0设为对照组,10 mW/cm^2组、20 mW/cm^2组、30 mW/cm^2组、40 mW/cm^2组、50 mW/cm^2组为刺激组刺激HPBL增殖,每天一次,每次刺激10 min,连续刺激2 d。CCK-8法检测各组细胞增殖活性;酶联免疫吸附法检测抗肿瘤因子[γ干扰素(INF-γ)、白介素2(IL-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)]表达情况;采用共培养HPBL与人肺巨细胞癌95D细胞检测其抗肿瘤活性。结果 LIPUS刺激HPBL2 d共2次后,30 mW/cm^2组的细胞增殖能力增强,与对照组和其他强度刺激组比较,细胞数量和细胞团块数量均增多。CCK-8检测结果显示,30 mW/cm^2组光密度值与对照组、20 mW/cm^2组、40 mW/cm^2组、50 mW/cm^2组比较差异均有统计学意义(P=0.032、0.027、0.027、0.001)。抗肿瘤因子检测显示,30 mW/cm^2组INF-γ、IL-2、TNF-α和GM-CSF分别为(39.66±8.30)ng/L、(619.84±125.94)ρg/ml、(461.29±14.08)ng/L、(108.11±2.07)ng/L,均高于对照组[(24.40±6.84)ng/L、(279.56±128.18)ρg/ml、(417.17±21.44)ng/L和(96.53±1.56)ng/L]和50 mW/cm^2组[(16.52±0.87)ng/L、(141.00±93.71)ρg/ml、(171.96±9.46)ng/L、(72.56±8.95)ng/L],差异均有统计学意义(均P<0.01)。共培养实验显示,30 mW/cm^2组人肺巨细胞癌95D细胞杀伤率为51.11%±5.21%,显著高于对照组(42.86%±0.55%)和50 mW/cm^2组(42.00%±3.67%),差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 LIPUS刺激可提高HPBL的增殖活性和杀伤率。     

丹参酮ⅡA磺酸钠对海水浸泡人肺上皮A549细胞水通道蛋白5的影响

目的 探讨水通道蛋白5(AQP5)在海水浸泡致细胞损伤中的变化,同时了解丹参酮Ⅱ A可能的作用机制.方法 体外传代培养肺腺癌细胞株A549细胞,接种于培养皿中,按不同海水含量分为空白对照组及15%、25%、50%、75%、100%海水组;以25%海水浸泡不同时间分为空白对照组及海水1、4、8 h组;按给予不同剂量丹参酮ⅡA干预分为空白对照组、25%海水组及25、50、75、100μg/ml丹参酮ⅡA干预4 h组.用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测AQP5蛋白表达;用免疫组化法检测AQP5阳性表达.结果 Western blotting结果显示,25%与50%海水组8 h时A549细胞AQP5蛋白表达均较空白对照组明显增高(1.053±0.231、1.116±0.316比0.101±0.081,均P＜0.05);海水1 h组AQP5表达较空白对照组稍有增加(0.306±0.125比0.288±0.098,P＞0.05),4 h组(1.423±0.377)明显增加(P＜0.01),8 h组AQP5表达(1.507±0.461)较4 h组略有增加,但差异无统计学意义;25μg/ml与50 μg/ml丹参酮Ⅱ A组4 h时AQP5蛋白表达较25%海水组明显减少(0.580±0.186、0.499±0.172比1.013±0.287,均P＜0.05).免疫组化显示,25%海水4 h组AQP5阳性表达较空白对照组明显增多(7.21±0.78比0.41±0.07,P＜0.01),染色变深;25μg/ml丹参酮ⅡA干预4 h组AQP5阳性表达(3.02±0.23)较25%海水4 h组明显减少(P＜0.05).结论 丹参酮Ⅱ A在25μg/ml浓度时毒副作用最小,对海水浸泡A549细胞的保护作用最佳,其机制可能与抑制AQP5的过度表达有关.

Abstract：

Objective To explore the effects of tanshinone Ⅱ A on the activity of aquaporin-5 (AQP5)in human alveolar epithelial cells (A549) after seawater exposure and its possible mechanism. Methods Routinely cultured A549 cells were divided into different groups according to different content of seawater:blank control group, 15%, 25%, 50%, 75%, 100% seawater groups; they were divided into different groups according to the duration of exposure to 25 % seawater : blank control group, 1, 4, 8 hours groups ;they were also divided into different groups according to concentration of tanshinone ⅡA and exposed to seawater for 4 hours: blank control group, 25% seawater group, 25, 50, 75, 100 μg/ml tanshinone ⅡA intervention groups. The expressions of AQP5 were respectively assayed by Western blotting and immunohistochemistry. Results The results of Western blotting showed that the expressions of AQP5 were remarkably higher at 8 hours of exposure to seawater in 25% and 50% seawater groups than those in blank control group (1. 053±0. 231, 1. 116±0. 316 vs. 0. 101±0. 081, both P＜0. 05); the expression of AQP5 in 1-hour group showed a slight increase compared with blank control group (0. 306±0. 125 vs. 0. 288±0. 098,P＞0. 05), that in 4-hour group was increased significantly (1. 423±0. 377, P＜0. 01), and in 8-hour group (1. 507± 0. 461 ) it was slightly higher than that in 4-hour group without statistical significance. The AQP5 expression was significantly lower in tanshinone ⅡA 25 μg/ml and 50μg/ml intervention groups than that in 25% seawater group (0. 580 ± 0. 186, 0. 499 ± 0. 172 vs. 1.013 ± 0. 287, both P ＜ 0. 05). Immunohistochemistry showed that the expression of AQP5 was markedly up-regulated after A549 cells were stimulated with 25% seawater for 4 hours as compared with blank control group (7.21±0. 78 vs. 0. 41 ±0.07, P＜0.01), but intervention of tanshinone ⅡA significantly inhibited the up-regulation of AQP5 expression (3.02±0.23) induced by 25% seawater (P＜0.05). Conclusion The experimental results showed that tanshinone ⅡA is innocuous to A549 at a dosage of 25 μg/ml, and it can decrease the overexpression of AQP5 induced by seawater.     

肠道病毒性脑炎患儿外周血T淋巴细胞亚群与自然杀伤细胞及相关免疫细胞因子水平变化

目的探讨肠道病毒性脑炎(enteroviral encephalitis,EVE)患儿外周血T淋巴细胞亚群、自然杀伤(natural killer,NK)细胞、相关免疫细胞因子水平变化及其临床意义。方法246例EVE患儿为EVE组,同期体检健康儿童100例为对照组,测定2组外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞、免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)A、IgG、IgM、白细胞介素(interleukin,IL)-2、IL-4、IL-6、IL-10、干扰素-γ(interferonγ,IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)水平。结果EVE组CD8^+T淋巴细胞比率[(24.13±9.71)%]、CD3^+T淋巴细胞比率[(61.42±12.26)%]及血清IL-6[(41.63±34.26)ng/L]、TNF-α[(2.92±1.55)ng/L]、IFN-γ[(9.45±4.26)ng/L]水平高于对照组[(20.11±5.98)%、(57.94±10.53)%、(12.45±10.46)ng/L、(2.04±0.73)ng/L、(6.27±3.44)ng/L](P<0.05),CD4^+/CD8^+(1.37±0.75)、CD20^+T淋巴细胞比率[(0.87±0.75)%]、CD3^-CD16^+CD56^+T淋巴细胞比率[(7.87±5.26)%]、IgA[(0.45±0.32)g/L]、IgG[(7.67±1.35)g/L]及血清IL-2[(3.52±1.02)ng/L]水平低于对照组[1.83±1.23、(1.47±1.41)%、(13.23±6.11)%、(1.05±0.22)g/L、(8.02±1.42)g/L、(4.13±1.28)ng/L](P<0.05);EVE组CD4^+T淋巴细胞比率[(28.81±9.56)%]、IgM[(1.35±0.21)g/L、IL-4[(3.17±0.81)ng/L]与对照组[(30.95±9.22)%、(1.34±0.19)g/L、(3.12±0.86)ng/L]比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论T淋巴细胞调节紊乱、体液免疫紊乱可能参与EVE的发病过程。     

微小RNA-146a在脂多糖诱导肺泡巨噬细胞中的表达

目的 观察脂多糖(LPS)诱导对NR8383肺泡巨噬细胞微小RNA-146a(miRNA-146a)表达的影响.方法 将体外培养的肺泡巨噬细胞株NR8383分成LPS刺激组和磷酸盐缓冲液(PBS)对照组,培养6 h后,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测细胞miRNA-146a的表达.结果 LPS刺激组细胞培养上清液中TNF-α含量(ng/L)较PBS对照组明显升高(650.26±40.53比6.23±1.76,P<0.01),细胞miRNA-146a表达水平较PBS对照组上调了约(5.33±0.81)倍(P<0.01).结论 LPS刺激后,miRNA-146a在NR8383细胞中表达增高,其可能参与了NR8383肺泡巨噬细胞的炎症反应调控.     

CCL20单克隆抗体与雷公藤治疗胶原诱导性关节炎模型小鼠的对照研究

目的 研究趋化因子CCL20在胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠中的表达,探讨CCL20单克隆抗体对CIA小鼠的治疗作用及临床治疗类风湿关节的潜在价值.方法 ①建立CIA小鼠模型:40只DBA/1小鼠随机分为健康对照组、模型组、CCL20单克隆抗体治疗组、雷公藤治疗组;②观察不同时间点小鼠一般情况、关节肿胀度;③测定造模42天后小鼠血清CCL20、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)的表达水平;④观察各组小鼠关节病理变化.结果 ①模型组、雷公藤组和单抗组CCL20,TNF-α和IL-1β均高于对照组,CCL20(29.45±4.92) ng/L、(18.32±4.80) ng/L、(14.13±3.82) ng/L vs (2.83±1.37) ng/L;TNF-α(63.1±2.82) ng/L、(43.15±2.31) ng/L、(42.91±2.02) ng/L vs (26.78±3.50) ng/L;IL-1β(83.72±4.04) ng/L、(53.78±5.89) ng/L、(56.77±4.98)ng/L vs(16.54±2.45)ng/L,雷公藤组和单抗组的CCL20、TNF-α和IL-1β均低于模型组.②HE染色观察,模型组较正常组滑膜肥厚,排列紊乱、滑膜内有大量炎症细胞浸润,有血管翳形成.雷公藤组和单抗组较模型组明显减轻.结论 CCL20在CIA小鼠中异常高表达,以CCL20单克隆抗体阻断CCL20作用可有效缓解关节炎症,且与雷公藤效果相当,CCL20单克隆抗体在临床治疗类风湿关节炎方面具有潜在价值.     

腹腔镜与传统开腹手术治疗小儿腹股沟疝的临床效果对比分析

目的探讨腹腔镜与传统开腹手术治疗小儿腹股沟疝的效果差异。方法回顾性选取2018年1月至2020年1月重庆市南川区人民医院收治的接受腹腔镜疝修补术治疗的54例腹股沟疝患儿作为腔镜组,同期采用传统开腹手术治疗的35例腹股沟疝患儿作为传统组。比较2组患儿的手术时间、手术出血量、切口大小、术后下地时间、住院时间、术后2、4、12、24、48 h的疼痛视觉模拟疼痛评分法(VAS)评分、术前和术后24 h炎性应激指标[血清C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]和手术并发症发生情况。结果腔镜组患儿的手术时间、手术出血量、切口大小、术后下地时间、住院时间分别为(18.5±3.2) min、(7.5±2.6) mL、(0.6±0.2) cm、(13.6±3.6)h、(3.7±1.0) d,均显著低于对照组[(23.7±4.6) min、(28.5±8.5) mL、(5.1±1.0) cm、(19.6±6.2) h、(5.6±1.7) d],差异均有统计学意义(P <0.05)。术后2~48 h,腔镜组患儿的VAS评分分别为(2.10±0.61)、(2.67±0.81)、(2.50±0.69)、(1.77±0.56)、(1.46±0.48)分,均低于同一时间点的对照组患儿[(2.78±0.84)、(3.28±0.95)、(3.40±0.86)、(3.11±0.74)、(2.50±0.67)分],差异均有统计学意义(P <0.05);术前,腔镜组与传统组患儿的血清CRP、IL-6、TNF-α水平比较,差异无统计学意义(P> 0.05);术后24 h,腔镜组患儿的CRP、IL-6、TNF-α水平分别为(5.58±1.80) mg/L、(66.74±15.28) ng/mL、(28.67±8.78) ng/mL,均显著低于对照组[(10.30±3.17) mg/L、(87.50±18.40) ng/mL、(40.25±12.00) ng/mL],差异均有统计学意义(P <0.05)。术后腔镜组患儿的手术并发症率(1.85%)低于对照组(14.29%),差异有统计学意义(P <0.05)。结论与传统开腹手术相比,腹腔镜疝修补术治疗小儿腹股沟疝具有手术效果可靠、手术创伤小、术后恢复快、术后疼痛程度降低、并发症少的优势。     

乌司他丁联合血必净注射液治疗脓毒症的临床疗效及对炎性因子的影响

目的：探讨乌司他丁联合血必净对脓毒症的临床疗效及炎性因子的影响。方法选择2013年12月至2015年2月上海交通大学医学院附属新华医院收治的脓毒症患者76例,依据随机数字表法分为对照组和观察组,各38例。对照组在常规治疗基础上加用血必净30 mL ,加至0．9％ NaCl溶液10 mL ,静脉滴注,每日1次,连续使用1周;观察组在对照组治疗的基础上使用乌司他丁10万U ,加至0．9％ NaCl溶液50 mL ,静脉滴注,每日2次,连续使用1周。比较两组患者的治疗效果。结果治疗后,观察组总有效率显著高于对照组,差异有统计学意义[94．7％（36／38）比57．9％（22／38）,P＜0．05],且观察组患者的肿瘤坏死因子（TNF）-α（86±26） ng／L、白细胞介素（IL）-6（26±8） ng／L、IL-8（26±13） ng／L、C-反应蛋白（CRP）（26±3） mg／L、降钙素原（PCT ）（0．83±0．23）μg／L、内毒素（2．2±0．9）μg／L等指标以及急性生理学及慢性健康状况评分系统Ⅱ（APACH-Ⅱ评分）（15±5）均明显少于对照组患者[（119±24） ng ／L、（60±7） ng ／L、（50±12） ng ／L、（78±7） mg ／L、（2．84±1．18）μg／L、（3．9±1．0）μg／L、（20±5）分],差异有统计学意义（ P＜0．05）;机械通气时间（11±4）d、重症监护病房住院时间（13±3）d等也较对照组患者（14±3）d、（18±4）d有明显缩短,差异有统计学意义（ P＜0．05）。结论乌司他丁联合血必净可有效降低脓毒症患者的炎性因子水平,保护患者的脏器功能,降低患者的APACH-Ⅱ评分,缩短患者住院时间,提高患者的生活质量,值得临床应用。