ＲｈｏＡ小干扰ＲＮＡ抑制乳腺癌细胞株ＭＣＦ-７及其裸鼠皮下移植瘤的实验研究

目的　观察ＲｈｏＡ小干扰ＲＮＡ（ｓｉＲｈｏＡ）对乳腺癌细胞株ＭＣＦ-７增殖、迁移、周期和凋亡的影响以及对裸鼠移植瘤生长的影响。方法　ｓｉＲｈｏＡＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００介导下转染乳腺癌细胞ＭＣＦ-７,转染４８ｈ后,采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ技术检测ＲｈｏＡ蛋白的表达,ＭＴＴ实验检测ｓｉＲｈｏＡ转染细胞的增殖变化,损伤刮擦实验检测ｓｉＲｈｏＡ转染细胞的迁移能力,流式细胞仪检测ｓｉＲｈｏＡ转染细胞的周期和凋亡,裸鼠移植瘤实验检测ｓｉＲｈｏＡ对肿瘤生长的影响。结果　成功转染ｓｉＲｈｏＡ的肿瘤细胞,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ显示ＲｈｏＡ蛋白表达在ＭＣＦ-７细胞中明显下降;ｓｉＲｈｏＡ对ＭＣＦ-７细胞的增殖、迁移均有显著的抑制作用并能促进肿瘤细胞凋亡及细胞周期中Ｓ期细胞减少,Ｇ１／Ｇ０期细胞增加;裸鼠移植瘤内重复注射ｓｉＲｈｏＡ后肿瘤生长明显减缓。结论　ｓｉＲｈｏＡ能够明显抑制ＲｈｏＡ基因在乳腺癌细胞ＭＣＦ-７中的表达,部分逆转ＭＣＦ-７的恶性生物学行为并抑制裸鼠移植瘤的生长。     

洛铂对肺癌Ａ５４９细胞作用的初步探讨

目的　探讨洛铂对肺癌Ａ５４９细胞增殖与凋亡的作用及其机制。方法　取对数生长期的肺癌Ａ５４９细胞进行实验,分为阴性对照组和实验组（加入不同浓度洛铂：２.５、５、１０、２０和４０μｍｏｌ／Ｌ）。采用ＭＴＴ比色法、流式细胞技术检测洛铂对肺癌细胞的增殖抑制、细胞周期阻滞、细胞凋亡诱导等作用,应用蛋白印迹法分析洛铂对Ａ５４９细胞Ｂｃｌ-２蛋白表达的影响。结果　洛铂能够抑制肺癌Ａ５４９细胞的增殖并诱导其凋亡,并呈浓度和时间依赖;流式细胞检测示细胞周期Ｇ１期前有低于二倍体细胞的凋亡峰;蛋白印迹检测结果显示洛铂可使Ａ５４９细胞Ｂｃｌ-２蛋白表达下降。结论　洛铂能显著抑制肺癌Ａ５４９细胞增殖,诱导细胞凋亡和细胞周期变化,可能与调节Ａ５４９细胞Ｂｃｌ-２蛋白的表达有关。     

ＮＳ-３９８对乳腺癌细胞ＭＣＦ-７增殖和凋亡的影响及其作用机制

目的　探讨环氧合酶-２（ＣＯＸ-２）选择性抑制剂ＮＳ-３９８对乳腺癌细胞ＭＣＦ-７增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。方法　用不同浓度ＮＳ-３９８作用ＭＣＦ-７细胞后,采用四甲基唑蓝法（ＭＴＴ）检测ＮＳ-３９８对ＭＣＦ-７细胞增殖的抑制率;流式细胞仪（ＦＣＭ）检测细胞周期、细胞凋亡以及ＣＯＸ-２、Ｂｃｌ-２和Ｂａｘ蛋白的表达;用放射免疫分析（ＲＩＡ）检测培养液上清中前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ２）含量。结果　ＮＳ-３９８可显著抑制ＭＣＦ-７细胞的生长,并随药物的浓度升高、时间延长其抑制作用增强。ＮＳ-３９８使ＭＣＦ-７Ｇ_０／Ｇ_１期细胞显著增多（Ｐ＜０.０１）,Ｓ期及Ｇ_２／Ｍ期细胞显著减少（Ｐ＜０.０１）,并引起显著的细胞凋亡。ＮＳ-３９８使ＭＣＦ-７细胞ＣＯＸ-２和Ｂｃｌ-２表达显著降低（Ｐ＜０.０１）,而Ｂａｘ表达显著增高（Ｐ＜０.０１）,并使ＭＣＦ-７细胞产生的ＰＧＥ２显著降低（Ｐ＜０.０１）。结论　ＮＳ-３９８可抑制乳腺癌细胞ＭＣＦ-７的增殖并可诱导其凋亡,其作用机制可能通过抑制ＣＯＸ-２活性,使ＰＧＥ_２产量降低,从而下调Ｂｃｌ-２表达及激活Ｂａｘ表达。     

阿蒂莫耶番荔枝内酯诱导MCF—7／ADR细胞凋亡的研究

目的：探讨阿蒂莫耶番荔枝内酯对有多药抗药性的阿霉素的人乳腺癌细胞ＭＣＦ－７／ＡＤＲ凋亡的诱导作用，揭示其抗癌机制。方法；用ＭＴＴ法观察药物对细胞的生长抑制作用，ＴＵＮＥＬ法，流式细胞仪及光镜，电镜等技术研究癌细胞凋亡。结果；药物对癌细胞有明显生长抑制作用，ＩＣ５０Ｏ １０．５ｍｇ／Ｌ；光１镜，电镜可见染色质浓缩，聚集核膜下，核碎裂等改变；流式细胞仪检测到凋亡峰；１０ｍｇ／Ｌ药物作用４８小时，ＴＵＮ     

洛铂联合５-ＦＵ／ＣＦ治疗晚期胃、结直肠癌的剂量爬坡试验

目的　观察国人对不同剂量洛铂联合５-ＦＵ／ＣＦ治疗晚期胃、结直肠癌的耐受性、毒性反应以及与剂量的关系,探讨洛铂在联合化疗中的人体安全耐受剂量。方法　选取洛铂从低剂量逐渐至高剂量,５-ＦＵ和ＣＦ剂量不变,每剂量组至少３例受试者。初始剂量为洛铂２５ｍｇ／ｍ^２ｄ_１,５-ＦＵ４００ｍｇ／ｍ^２ｄ_１～ｄ_５,ＣＦ２００ｍｇ／ｍ^２ｄ_１～ｄ_５,２１ｄ为１周期;如无明显毒性反应则进入下一剂量组,直至最大耐受量（ＭＴＤ）或５０ｍｇ／ｍ^２。结果　１８例晚期胃、结直肠癌患者进入试验,分别进行了６个剂量组的研究,最高剂量组为５０ｍｇ／ｍ２,未观察到ＭＴＤ。主要毒性反应为血红蛋白减少、白细胞减少,其次为恶心、呕吐和腹泻,所有患者未出现３～４级不良反应。结论　洛铂联合５-ＦＵ／ＣＦ毒性反应较轻,患者耐受性较好。推荐使用洛铂４５ｍｇ／ｍ^２联合５-ＦＵ４００ｍｇ／ｍ^２和ＣＦ２００ｍｇ／ｍ^２用于进一步临床研究。     

慢病毒介导ＲＮＡ干扰抑制脑胶质瘤细胞ＨＭＧＡ１表达对洛铂化疗敏感性的影响

目的：建立逆转录病毒介导入高迁移率族蛋白组Ａ１（ＨＭＧＡ１）基因ＲＮＡ干扰体外表达体系,并观察洛铂对脑胶质瘤细胞株ＳＨＧ-４４化疗敏感性的影响。方法：制备ＨＭＧＡ１ｓｉＲＮＡ慢病毒载体,ＰＣＲ筛选阳性克隆,测序鉴定;转染脑胶质瘤细胞株ＳＨＧ-４４后,ＲＴ-ＰＣＲ检测其对细胞ＨＭＧＡ１基因表达的影响;ＭＴＴ和克隆集落实验检测洛铂对阳性组和阴性组细胞生长、增殖的影响。结果：ＰＣＲ和测序证实,成功构建ＨＭＧＡ１ｓｉＲＮＡ的慢病毒载体;ＲＴ-ＰＣＲ证实阳性组细胞存在ＨＭＧＡ１基因表达下调;分别用不同浓度的洛铂处理两组细胞２４ｈ后,ＭＴＴ法和克隆集落实验显示阳性组细胞生长抑制率较阴性组细胞明显降低。结论：ＨＭＧＡ１ｓｉＲＮＡ能特异性下调脑胶质瘤细胞ＳＨＧ-４４中ＨＭＧＡ１的表达并抑制了其对洛铂的敏感性。     

ＭＭＰ-７和ｕＰＡＲ在非小细胞肺癌的表达及其意义

目的：检测ＭＭＰ-１、ＭＭＰ-３、ＭＭＰ-７和尿激酶纤溶酶原激活物受体（ｕＰＡＲ）在非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）的表达水平,分析其表达水平与肺癌侵袭转移以及相关临床病理特征之间的关系。方法：免疫组织化学方法检测６６例ＮＳＣＬＣ和１０例正常肺组织中ＭＭＰ-１、ＭＭＰ-３、ＭＭＰ-７和ｕＰＡＲ的蛋白表达水平。结果：免疫组织化学检测显示ＮＳＣＬＣ组织ＭＭＰ-１和ＭＭＰ-３表达率较低,而ＭＭＰ-７和ｕＰＡＲ表达率较高,分别达到５５％和６１％,明显高于正常肺组织。ＭＭＰ-７的表达与ＮＳＣＬＣ淋巴结转移、分化程度以及预后密切相关;ｕＰＡＲ的表达与ＮＳＣＬＣ预后密切相关,与相关临床病理因素无关;ＭＭＰ-７和ｕＰＡＲ的表达呈正相关。结论：ＭＭＰ-７和ｕＰＡＲ的表达可作为ＮＳＣＬＣ患者预后评价的指标,可能成为抗肿瘤治疗的靶点。     

８-溴-７-甲氧基白杨素对人小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的　观察８-溴-７-甲氧基白杨素（ＢｒＭＣｈＲ）对人类小细胞肺癌（ＳＣＬＣ）细胞株ＮＣＩ Ｈ４４６增殖和凋亡的影响。方法　体外培养ＮＣＩ-Ｈ４４６细胞,ＭＴＴ比色法测定ＢｒＭＣｈＲ对ＮＣＩ-Ｈ４４６细胞增殖的抑制作用,平皿克隆形成法测定ＢｒＭ ＣｈＲ对ＮＣＩ-Ｈ４４６细胞集落形成的抑制作用;ＤＮＡ凝胶电泳观察ＢｒＭＣｈＲ诱导基因ＤＮＡ梯形条带,流式细胞术（ＦＣＭ）分析ＢｒＭＣｈＲ对ＮＣＩ-Ｈ４４６细胞周期的影响。结果　ＭＴＴ法显示ＢｒＭＣｈＲ能明显抑制ＮＣＩ-Ｈ４４６细胞增殖,且呈浓度依赖性;平皿克隆形成法结果显示ＢｒＭＣｈＲ能明显抑制ＮＣＩ-Ｈ４４６细胞集落的形成;琼脂糖凝胶电泳检测呈现典型“梯形”ＤＮＡ条带;ＦＣＭ结果显示ＢｒＭＣｈＲ将ＮＣＩ-Ｈ４４６细胞周期阻滞在Ｇ１期。结论　ＢｒＭＣｈＲ具有抑制ＮＣＩ-Ｈ４４６细胞增殖并诱导其凋亡的作用。     

去甲斑蝥素对人乳腺癌细胞系的凋亡诱导作用及bcl-2基因的表达

目的：探讨去甲斑蝥素抗肿瘤作用的分子机制。方法：用１０μｇ／ｍｌ去甲斑蝥素处理体外培养的人乳腺癌细胞素ＭＣＦ－７。处理后,在不同时间点,采用普通光镜、电子显微观察去甲斑蝥素对乳腺癌细胞的诱导凋亡现象。利用流式细胞仪分析凋亡细胞百分比,用蛋白印迹杂交方法对凋亡抑制基因ｂｃｌ－２的表达情况进行检测。结果：经１０μｇ／ｍｌ去甲斑蝥素处理１２ｈ后,可观察到ＭＣＦ－７细胞变形、出泡,从培养瓶底脱离。细胞染色和电子显微镜可观察到染色质浓聚、边集,且随着药物作用时间的延长,凋亡细胞百分比逐渐增加。与对照组相比,凋亡抑制基因ｂｃｌ－２的表达降低。结论：诱导肿瘤细胞凋亡可能是去甲斑蝥素抗肿瘤作用的分子机制之一。     

整合素 β１诱导人乳腺癌 ＭＣＦ-７细胞迁移侵袭及三苯氧胺耐药

目的：研究整合素 β１（ｉｎｔｅｇｒｉｎβ１,ＩＴＧＢ１）在人乳腺癌 ＭＣＦ-７细胞过表达对其迁移侵袭能力及三苯氧胺 （ｔａｍｏｘｉｆｅｎ,ＴＡＭ）耐药的影响。方法：构建携带 ＩＴＧＢ１的质粒（ｐＢＡＢＥ ｐｕｒｏ ｍｙｃ ＩＴＧＢ１）,通过包装反转录病毒转染人乳腺癌 ＭＣＦ-７细胞系,构建稳定高表达 ＩＴＧＢ１的细胞株 ＭＣＦ-７ ＩＴＧＢ１;实验设置 ＭＣＦ-７组（对照组）、ＭＣＦ-７ ｖｅｃｔｏｒ 组（阴性对照组）和 ＭＣＦ-７ ＩＴＧＢ１（实验组）;采用 ｑＲＴ ＰＣＲ和 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ技术分别检测各组 ＩＴＧＢ１ｍＲＮＡ和蛋白表 达量;ＭＴＴ法检测不同 ＴＡＭ浓度下细胞增殖活性;Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ实验检测不同 ＩＴＧＢ１表达情况下细胞迁移及侵袭能力; Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测上皮间质转换（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ,ＥＭＴ）标志物 Ｅ 钙黏蛋白（Ｅ ｃａｄｈｅｒｉｎ）、Ｎ 钙黏蛋白 （Ｎ ｃａｄｈｅｒｉｎ）、间质表型标志物波形蛋白（ｖｉｍｅｎｔｉｎ）、纤维黏连蛋白（ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ）等相关蛋白的表达情况。结果：在人 乳腺癌细胞 ＭＣＦ-７中,成功构建稳定高表达 ＩＴＧＢ１细胞系;ＭＣＦ-７及 ＭＣＦ-７ ＩＴＧＢ１的 ＴＡＭ半数抑制浓度（ｈａｌｆ ｍａｘｉ ｍａｌｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ,ＩＣ５０）分别为 １．２４ｎｍｏｌ／Ｌ和 ２０．２８ｎｍｏｌ／Ｌ;ＭＣＦ ７ ＩＴＧＢ１的耐药指数为 １６．３５。ＭＣＦ-７ ＩＴＧＢ１较 ＭＣＦ-７及 ＭＣＦ-７ ｖｅｃｔｏｒ细胞迁移及侵袭能力显著增强,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。ＭＣＦ-７ ＩＴＧＢ１的 ＥＭＴ标志物 Ｅ ｃａｄｈｅｒｉｎ显著下调（Ｐ＜０．０５）,ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ、Ｎ ｃａｄｈｅｒｉｎ、ｖｉｍｅｎｔｉｎ蛋白显著上调（Ｐ＜０．０５）。结论：稳定 过表达 ＩＴＧＢ１促进乳腺癌 ＭＣＦ-７细胞迁移侵袭能力增强及三苯氧胺的耐药,其作用机制可能与 ＩＴＧＢ１活化上皮间质转换通路诱导细胞 ＥＭＴ相关。     

贝母素乙通过调控PI3K/Akt信号通路诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡

目的：探究贝母素乙（Peiminine）对乳腺癌细胞MCF-7细胞凋亡的影响及其可能作用机制。方法：采用不同浓度贝母素乙或联合PI3K抑制剂LY294002干预MCF-7细胞,MTT法检测细胞增殖能力;Hoechst33258染色和Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡情况;JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位变化;Western blotting检测细胞中PI3K(p110α)、Akt、p-Akt(ser473)、Bad、Bax、Bcl-2、cleaved-Caspase-3以及线粒体和胞浆中细胞色素C(Cyt C)等蛋白表达水平。结果：贝母素乙可呈时间-浓度依赖性抑制MCF-7细胞增殖,诱导细胞出现凋亡形态改变,促进细胞凋亡,并降低线粒体膜电位,上调细胞中Bad、Bax、cleaved-Caspase-3及胞浆中Cyt C蛋白表达水平,下调PI3K(p110α)、p-Akt、Bcl-2和线粒体中Cyt C蛋白表达水平,而Akt蛋白表达水平无显著变化。然而,联合LY294002干预可增强贝母素乙对MCF-7细胞凋亡的促进作用。结论：贝母素乙可诱导乳腺癌MCF-7细胞凋...     

FGFR1抑制剂Ponatinib对乳腺癌细胞增殖凋亡的影响

目的:研究FGFR1(成纤维生长因子受体1)抑制剂Ponatinib对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响以及机制.方法:依据前期Western Blot结果筛选出实验组和对照组,用不同浓度Ponatinib处理人乳腺癌细胞株实验组和对照组.CCK-8法检测乳腺癌细胞增殖抑制率;流式细胞术检测乳腺癌细胞凋亡的影响;WesternBlot法检测Poantinib对FGFR1及其下游通路及凋亡相关蛋白的影响.结果:依据前期Western Blot结果,选取不表达FGFR1的MCF-7为对照组细胞,高表达FGFR1的MDA-MB-231、BT-549为实验组细胞.CCK-8结果及Annexin V-APC/7-AAD法结合流式细胞仪检测结果显示:Ponatinib呈浓度依赖性地诱导MDA-MB-231、BT-549细胞的增殖抑制和凋亡,对MCF-7细胞也有一定的增殖抑制和诱导凋亡作用,实验组细胞的增殖抑制率及凋亡率较对照组细胞高.Western Blot结果显示:MDA-MB-231、BT-549细胞中,p-FGFR1、p-Stat5、p-PLCγ1蛋白表达量均明显下调;Bcl-2、Mcl-1表达量下调,Bak表达量上调(BT-549中Bak、Bax表达量均上调).MCF-7细胞中,p-Stat5、p-PLCγ1蛋白表达量下调.结论:Ponatinib抑制MDA-MB-231、BT-549细胞增殖可能与下调p-FGFR1,进而下调p-Stat5、p-PLCy1有关,促进细胞凋亡的机制可能与下调Bcl-2、Mcl-1,上调Bak有关.     

lncRNA H19靶向miR-106a-5p调控乳腺癌细胞放射敏感性的分子机制

目的:研究lncRNA H19对乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡及放射敏感性的影响,并探讨其机制。方法:运用qRT-PCR检测MCF-7细胞中H19、miR-106a-5p的表达;将si-NC组（转染si-con）、si-H19组（转染si-H19）、si-H19+anti-miR-NC组（si-H19和anti-miR-NC共转染）、si-H19+anti-miR-106a-5p组（si-H19和anti-miR-106a-5p共转染）,均用脂质体转染至MCF-7细胞,再用4 Gy放射照射;MTT法检测各组细胞的增殖情况;流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果:与对照组相比,放射照射组（IR）MCF-7细胞中H19显著降低,miR-106a-5p显著升高（P＜0.05）;敲减H19、过表达miR-106a-5p均可抑制MCF-7细胞增殖并促进凋亡,增强细胞的放射敏感性;H19靶向miR-106a-5p。抑制miR-106a-5p可逆转敲减H19对MCF-7细胞放射敏感性的增强作用。结论:敲减H19可抑制乳腺癌细胞增殖,促进凋亡,增强放射治疗的敏感性,其机制可能与靶向miR-106a-5p有关,可为提高乳腺癌的放射敏感性提供新靶点。     

洛铂对骨肉瘤MG-63细胞增殖、凋亡的影响及其机制

目的 探讨洛铂对骨肉瘤MG-63细胞增殖与凋亡的作用及其机制。方法 取对数生长期的MG-63细胞进行实验,分为对照组和实验组 (加入不同浓度洛铂: 2、4和8 μg/ml)。采用噻唑盐（MTT）比色法、流式细胞技术(FCM)检测洛铂对MG-63细胞的形态改变、生长及增殖抑制、细胞周期阻滞和细胞凋亡诱导等作用,并绘制不同浓度时MG-63细胞的生长曲线,应用Western blot的方法分析洛铂对MG-63细胞的Bcl-2蛋白表达的影响。结果 洛铂能够抑制MG-63细胞的生长、增殖并诱导其凋亡,并呈浓度和时间依赖效应。Western blot检测结果显示洛铂可使MG-63细胞Bcl-2蛋白表达下降。结论 洛铂能显著抑制MG-63细胞增殖,诱导细胞凋亡和细胞周期变化,可能与调节 MG-63细胞Bcl-2蛋白的表达有关。     

PTPRZ1通过调控PI3K/Akt通路促进乳腺癌细胞增殖和多西他赛耐药

目的:探讨蛋白酪氨酸磷酸酶受体Z1型(protein tyrosine phosphatase receptor type Z1,PTPRZ1)对人乳腺癌MCF-7细胞多西他赛耐药性的影响及其作用机制。方法:将MCF-7细胞暴露于逐渐增强浓度的多西他赛中建立对多西他赛耐药的乳腺癌细胞（MCF-7/Doc）。采用CCK-8法分别检测MCF-7和MCF-7/Doc细胞对多西他赛的耐药性。qRT-PCR和Western blot检测细胞中PTPRZ1 mRNA及蛋白表达水平。克隆形成实验检测细胞增殖情况,流式实验检测细胞凋亡情况。最后采用Western blot检测PTPRZ1调控乳腺癌化疗敏感性的作用机制。结果:CCK-8实验表明成功构建了乳腺癌多西他赛耐药细胞株MCF-7/Doc,克隆形成实验表明MCF-7/Doc细胞增殖能力显著高于亲本MCF-7细胞（P＜0.05）;MCF-7/Doc细胞中,PTPRZ1 mRNA及蛋白水平均显著上调（P＜0.05）。过表达PTPRZ1能显著增强MCF-7/Doc细胞对多西他赛的耐药性和增殖能力,显著抑制细胞凋亡（P＜0.05）;敲减PTPRZ1能显著降低MCF-7/Doc细胞对多西他赛的耐药性,并能显著诱导细胞凋亡（P＜0.05）。Western blot结果显示,PTPRZ1能够激活PI3K/Akt信号通路。结论:PTPRZ1通过介导PI3K/Akt信号通路促进乳腺癌对多西他赛的耐药性。     

异黏蛋白调控鼻咽癌细胞增殖及紫杉醇耐药的研究

 目的 探讨异黏蛋白（Metadherin, MTDH）对鼻咽癌细胞增殖及紫杉醇耐药的影响。方法 采用慢病毒介导的MTDH cDNA和MTDH-shRNA转染鼻咽癌细胞，分别上调和抑制MTDH的表达。CCK-8法、流式细胞实验分别检测细胞增殖能力、细胞周期及凋亡改变。CCK-8法确定紫杉醇对鼻咽癌细胞的IC₃₀、IC₅₀、IIC₇₀，并检测IC₃₀、IC₅₀、IC₇₀浓度下MTDH过表达组与沉默组细胞生存率改变。结果 MTDH上调后5-8F、HNE-1细胞的增殖能力均增强，而沉默MTDH后细胞的增殖能力均降低。MTDH沉默组的G1期细胞比例明显增加。MTDH过表达组细胞凋亡率降低，MTDH沉默组细胞凋亡率增加。MTDH表达上调之后，鼻咽癌细胞对紫杉醇的敏感度降低，在IC₇₀、IC₅₀浓度下，MTDH过表达组细胞的生存率高于对照组细胞。沉默MTDH之后，鼻咽癌细胞对紫杉醇的敏感度升高，在IC₅₀、IC₃₀浓度下，MTDH沉默组细胞的生存率低于对照组细胞。结论 MTDH在促进鼻咽癌细胞增殖中起重要作用，其高表达可促进鼻咽癌细胞紫杉醇耐药性的产生。     

miR-4728-3p通过PI3K/AKT信号通路调控DOT1L基因抑制乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的:探讨miR-4728-3p通过调控类端粒沉默干扰体-1(disruptor of telomeric silencing 1-like,DOT1L)基因对乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:使用乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231及人正常乳腺细胞MCF-10A。转染MCF-7和MDA-MB-231细胞随机分为NC组(转染miR-4728-3p-NC)和敲低组(转染miR-4728-3p-inhibitor)。利用RT-qPCR技术检测不同的细胞中miR-4728-3p和DOT1L的表达量改变情况。集落克隆形成实验和EDU实验可以同时检测体内各个细胞异常增殖的情况;TUNEL荧光标记检测法和流式细胞术实验可以同时检测不同组癌细胞的凋亡变化;划痕实验和Transwell实验可以同时检测到在各个细胞内因不同处理而可能产生的细胞迁移率和侵袭力的改变;Western blot检测与细胞凋亡状态相关细胞蛋白以及与细胞通路凋亡相关细胞蛋白p-AKT和p-PI3K相对表达的含量。结果:在乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231以及SKBR3中发现miR-4728-3p和DOT1L的表达高于人正常乳腺细胞MCF-10A(P＜0.05)。转染细胞miR-4728-3p后,与NC组细胞进行实验比较,发现敲低组细胞中miR-4728-3p和DOT1L的表达量明显降低,且敲低组细胞的增殖能力明显减弱,细胞凋亡率明显升高,细胞迁移能力大大降低。敲低组的细胞凋亡活性蛋白相对表达明显发生变化。其中p-AKT与p-PI3K蛋白均被抑制激活。RT-qPCR和Western blot实验验证DOT1L是miR-4728-3p的下游靶向基因。结论:敲低miR-4728-3p可以下调DOT1L的表达从而促进乳腺癌细胞凋亡,抑制乳腺癌细胞增殖,同时使乳腺癌细胞侵袭和迁移能力减弱。     

乳腺癌中COX-2表达及其抑制剂塞来昔布对乳腺癌细胞系增生和凋亡的影响

目的为进一步观察COX-2对乳腺癌的作用,我们检测了乳腺癌组织、乳腺癌细胞株MCF-7和B37中COX-2的表达,并观察选择性COX-2抑制剂塞来昔布对乳腺癌细胞株生长和凋亡的影响。方法应用免疫组织化学染色的方法检测132例乳腺癌组织标本中COX-2蛋白的表达;应用免疫细胞化学染色、原位杂交、逆转录多聚酶联反应（RT-PCR）的方法,分别检测COX-2蛋白和mRNA在乳腺癌细胞株MCF-7、B37中的表达;采用MTT法、AO/EB双荧光染色法和流式细胞术,研究塞来昔布对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。结果52.3%(69/132)的乳腺癌组织标本表达COX-2蛋白;在乳腺癌细胞株MCF-7和B37中均有COX-2的表达,25μmol/L塞来昔布作用72h后,COX-2表达明显减少;25、50、100μmol/L的塞来昔布与MCF-7细胞作用72h,生长抑制率分别为36.3%、57.7%、74.5%。100μmol/L塞来昔布作用72h后,MCF-7细胞凋亡率为38.5％。结论乳腺癌组织和乳腺癌细胞株MCF-7、B37中存在COX-2的表达;塞来昔布可抑制乳腺癌细胞增殖,并促进细胞凋亡,塞来昔布可能作为新的药物治疗乳腺癌。     

5-Aza-CdR诱导抑癌基因PTEN重新表达对乳腺癌细胞的影响及机制

目的观察5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人乳腺癌细胞系MCF-7增殖、凋亡及体外侵袭能力的影响并初步探讨其机制。方法体外培养MCF-7细胞,采用不同浓度的5-Aza-CdR(1×10-6、2×10-6、5×10-6和1×10-5mol/L)分别作用24h、48h和72h,分别采用MTT法检测细胞增殖抑制率、流式细胞仪检测细胞凋亡、Transwell法检测细胞侵袭能力、Western-blot检测PTEN和VEGF-C蛋白表达的变化。结果经不同浓度的5-Aza-CdR作用后,MCF-7细胞的增殖受到不同程度的抑制并发生凋亡,细胞侵袭能力也发生不同程度的降低,且其作用随浓度增加和时间延长而增强(P<0.05)。在5-Aza-CdR作用后,MCF-7细胞PTEN的表达逐渐增强,而VEGF-C的表达逐渐减弱。结论 5-Aza-CdR可抑制乳腺癌细胞增殖、诱导其发生凋亡、降低其体外侵袭能力,其可能是通过去甲基化作用使抑癌基因PTEN重新表达并下调VEGF-C的表达而发挥作用的。