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1.
目的 观察RhoA小干扰RNA(siRhoA)对乳腺癌细胞株MCF-7增殖、迁移、周期和凋亡的影响以及对裸鼠移植瘤生长的影响。方法 siRhoALipofectamine2000介导下转染乳腺癌细胞MCF-7,转染48h后,采用Westernblot技术检测RhoA蛋白的表达,MTT实验检测siRhoA转染细胞的增殖变化,损伤刮擦实验检测siRhoA转染细胞的迁移能力,流式细胞仪检测siRhoA转染细胞的周期和凋亡,裸鼠移植瘤实验检测siRhoA对肿瘤生长的影响。结果 成功转染siRhoA的肿瘤细胞,Westernblot显示RhoA蛋白表达在MCF-7细胞中明显下降;siRhoA对MCF-7细胞的增殖、迁移均有显著的抑制作用并能促进肿瘤细胞凋亡及细胞周期中S期细胞减少,G1/G0期细胞增加;裸鼠移植瘤内重复注射siRhoA后肿瘤生长明显减缓。结论 siRhoA能够明显抑制RhoA基因在乳腺癌细胞MCF-7中的表达,部分逆转MCF-7的恶性生物学行为并抑制裸鼠移植瘤的生长。 相似文献
2.
目的 探讨洛铂对肺癌A549细胞增殖与凋亡的作用及其机制。方法 取对数生长期的肺癌A549细胞进行实验,分为阴性对照组和实验组(加入不同浓度洛铂:2.5、5、10、20和40μmol/L)。采用MTT比色法、流式细胞技术检测洛铂对肺癌细胞的增殖抑制、细胞周期阻滞、细胞凋亡诱导等作用,应用蛋白印迹法分析洛铂对A549细胞Bcl-2蛋白表达的影响。结果 洛铂能够抑制肺癌A549细胞的增殖并诱导其凋亡,并呈浓度和时间依赖;流式细胞检测示细胞周期G1期前有低于二倍体细胞的凋亡峰;蛋白印迹检测结果显示洛铂可使A549细胞Bcl-2蛋白表达下降。结论 洛铂能显著抑制肺癌A549细胞增殖,诱导细胞凋亡和细胞周期变化,可能与调节A549细胞Bcl-2蛋白的表达有关。 相似文献
3.
目的 探讨环氧合酶-2(COX-2)选择性抑制剂NS-398对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。方法 用不同浓度NS-398作用MCF-7细胞后,采用四甲基唑蓝法(MTT)检测NS-398对MCF-7细胞增殖的抑制率;流式细胞仪(FCM)检测细胞周期、细胞凋亡以及COX-2、Bcl-2和Bax蛋白的表达;用放射免疫分析(RIA)检测培养液上清中前列腺素E2(PGE2)含量。结果 NS-398可显著抑制MCF-7细胞的生长,并随药物的浓度升高、时间延长其抑制作用增强。NS-398使MCF-7G0/G1期细胞显著增多(P<0.01),S期及G2/M期细胞显著减少(P<0.01),并引起显著的细胞凋亡。NS-398使MCF-7细胞COX-2和Bcl-2表达显著降低(P<0.01),而Bax表达显著增高(P<0.01),并使MCF-7细胞产生的PGE2显著降低(P<0.01)。结论 NS-398可抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖并可诱导其凋亡,其作用机制可能通过抑制COX-2活性,使PGE2产量降低,从而下调Bcl-2表达及激活Bax表达。 相似文献
4.
阿蒂莫耶番荔枝内酯诱导MCF—7/ADR细胞凋亡的研究 总被引:1,自引:1,他引:1
目的:探讨阿蒂莫耶番荔枝内酯对有多药抗药性的阿霉素的人乳腺癌细胞MCF-7/ADR凋亡的诱导作用,揭示其抗癌机制。方法;用MTT法观察药物对细胞的生长抑制作用,TUNEL法,流式细胞仪及光镜,电镜等技术研究癌细胞凋亡。结果;药物对癌细胞有明显生长抑制作用,IC50O 10.5mg/L;光1镜,电镜可见染色质浓缩,聚集核膜下,核碎裂等改变;流式细胞仪检测到凋亡峰;10mg/L药物作用48小时,TUN 相似文献
5.
目的 观察国人对不同剂量洛铂联合5-FU/CF治疗晚期胃、结直肠癌的耐受性、毒性反应以及与剂量的关系,探讨洛铂在联合化疗中的人体安全耐受剂量。方法 选取洛铂从低剂量逐渐至高剂量,5-FU和CF剂量不变,每剂量组至少3例受试者。初始剂量为洛铂25mg/m2d1,5-FU400mg/m2d1~d5,CF200mg/m2d1~d5,21d为1周期;如无明显毒性反应则进入下一剂量组,直至最大耐受量(MTD)或50mg/m2。结果 18例晚期胃、结直肠癌患者进入试验,分别进行了6个剂量组的研究,最高剂量组为50mg/m2,未观察到MTD。主要毒性反应为血红蛋白减少、白细胞减少,其次为恶心、呕吐和腹泻,所有患者未出现3~4级不良反应。结论 洛铂联合5-FU/CF毒性反应较轻,患者耐受性较好。推荐使用洛铂45mg/m2联合5-FU400mg/m2和CF200mg/m2用于进一步临床研究。 相似文献
6.
目的:建立逆转录病毒介导入高迁移率族蛋白组A1(HMGA1)基因RNA干扰体外表达体系,并观察洛铂对脑胶质瘤细胞株SHG-44化疗敏感性的影响。方法:制备HMGA1siRNA慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定;转染脑胶质瘤细胞株SHG-44后,RT-PCR检测其对细胞HMGA1基因表达的影响;MTT和克隆集落实验检测洛铂对阳性组和阴性组细胞生长、增殖的影响。结果:PCR和测序证实,成功构建HMGA1siRNA的慢病毒载体;RT-PCR证实阳性组细胞存在HMGA1基因表达下调;分别用不同浓度的洛铂处理两组细胞24h后,MTT法和克隆集落实验显示阳性组细胞生长抑制率较阴性组细胞明显降低。结论:HMGA1siRNA能特异性下调脑胶质瘤细胞SHG-44中HMGA1的表达并抑制了其对洛铂的敏感性。 相似文献
7.
目的:检测MMP-1、MMP-3、MMP-7和尿激酶纤溶酶原激活物受体(uPAR)在非小细胞肺癌(NSCLC)的表达水平,分析其表达水平与肺癌侵袭转移以及相关临床病理特征之间的关系。方法:免疫组织化学方法检测66例NSCLC和10例正常肺组织中MMP-1、MMP-3、MMP-7和uPAR的蛋白表达水平。结果:免疫组织化学检测显示NSCLC组织MMP-1和MMP-3表达率较低,而MMP-7和uPAR表达率较高,分别达到55%和61%,明显高于正常肺组织。MMP-7的表达与NSCLC淋巴结转移、分化程度以及预后密切相关;uPAR的表达与NSCLC预后密切相关,与相关临床病理因素无关;MMP-7和uPAR的表达呈正相关。结论:MMP-7和uPAR的表达可作为NSCLC患者预后评价的指标,可能成为抗肿瘤治疗的靶点。 相似文献
8.
目的 观察8-溴-7-甲氧基白杨素(BrMChR)对人类小细胞肺癌(SCLC)细胞株NCI H446增殖和凋亡的影响。方法 体外培养NCI-H446细胞,MTT比色法测定BrMChR对NCI-H446细胞增殖的抑制作用,平皿克隆形成法测定BrM ChR对NCI-H446细胞集落形成的抑制作用;DNA凝胶电泳观察BrMChR诱导基因DNA梯形条带,流式细胞术(FCM)分析BrMChR对NCI-H446细胞周期的影响。结果 MTT法显示BrMChR能明显抑制NCI-H446细胞增殖,且呈浓度依赖性;平皿克隆形成法结果显示BrMChR能明显抑制NCI-H446细胞集落的形成;琼脂糖凝胶电泳检测呈现典型“梯形”DNA条带;FCM结果显示BrMChR将NCI-H446细胞周期阻滞在G1期。结论 BrMChR具有抑制NCI-H446细胞增殖并诱导其凋亡的作用。 相似文献
9.
去甲斑蝥素对人乳腺癌细胞系的凋亡诱导作用及bcl-2基因的表达 总被引:45,自引:0,他引:45
目的:探讨去甲斑蝥素抗肿瘤作用的分子机制。方法:用10μg/ml去甲斑蝥素处理体外培养的人乳腺癌细胞素MCF-7。处理后,在不同时间点,采用普通光镜、电子显微观察去甲斑蝥素对乳腺癌细胞的诱导凋亡现象。利用流式细胞仪分析凋亡细胞百分比,用蛋白印迹杂交方法对凋亡抑制基因bcl-2的表达情况进行检测。结果:经10μg/ml去甲斑蝥素处理12h后,可观察到MCF-7细胞变形、出泡,从培养瓶底脱离。细胞染色和电子显微镜可观察到染色质浓聚、边集,且随着药物作用时间的延长,凋亡细胞百分比逐渐增加。与对照组相比,凋亡抑制基因bcl-2的表达降低。结论:诱导肿瘤细胞凋亡可能是去甲斑蝥素抗肿瘤作用的分子机制之一。 相似文献
10.
目的:研究整合素 β1(integrinβ1,ITGB1)在人乳腺癌 MCF-7细胞过表达对其迁移侵袭能力及三苯氧胺 (tamoxifen,TAM)耐药的影响。方法:构建携带 ITGB1的质粒(pBABE puro myc ITGB1),通过包装反转录病毒转染人乳腺癌 MCF-7细胞系,构建稳定高表达 ITGB1的细胞株 MCF-7 ITGB1;实验设置 MCF-7组(对照组)、MCF-7 vector 组(阴性对照组)和 MCF-7 ITGB1(实验组);采用 qRT PCR和 Westernblot技术分别检测各组 ITGB1mRNA和蛋白表 达量;MTT法检测不同 TAM浓度下细胞增殖活性;Transwell实验检测不同 ITGB1表达情况下细胞迁移及侵袭能力; Westernblot检测上皮间质转换(epithelial mesenchymaltransition,EMT)标志物 E 钙黏蛋白(E cadherin)、N 钙黏蛋白 (N cadherin)、间质表型标志物波形蛋白(vimentin)、纤维黏连蛋白(fibronectin)等相关蛋白的表达情况。结果:在人 乳腺癌细胞 MCF-7中,成功构建稳定高表达 ITGB1细胞系;MCF-7及 MCF-7 ITGB1的 TAM半数抑制浓度(half maxi malinhibitoryconcentrations,IC50)分别为 1.24nmol/L和 20.28nmol/L;MCF 7 ITGB1的耐药指数为 16.35。MCF-7 ITGB1较 MCF-7及 MCF-7 vector细胞迁移及侵袭能力显著增强,差异有统计学意义(P<0.05)。MCF-7 ITGB1的 EMT标志物 E cadherin显著下调(P<0.05),fibronectin、N cadherin、vimentin蛋白显著上调(P<0.05)。结论:稳定 过表达 ITGB1促进乳腺癌 MCF-7细胞迁移侵袭能力增强及三苯氧胺的耐药,其作用机制可能与 ITGB1活化上皮间质转换通路诱导细胞 EMT相关。 相似文献
11.
目的:探究贝母素乙(Peiminine)对乳腺癌细胞MCF-7细胞凋亡的影响及其可能作用机制。方法:采用不同浓度贝母素乙或联合PI3K抑制剂LY294002干预MCF-7细胞,MTT法检测细胞增殖能力;Hoechst33258染色和Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡情况;JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位变化;Western blotting检测细胞中PI3K(p110α)、Akt、p-Akt(ser473)、Bad、Bax、Bcl-2、cleaved-Caspase-3以及线粒体和胞浆中细胞色素C(Cyt C)等蛋白表达水平。结果:贝母素乙可呈时间-浓度依赖性抑制MCF-7细胞增殖,诱导细胞出现凋亡形态改变,促进细胞凋亡,并降低线粒体膜电位,上调细胞中Bad、Bax、cleaved-Caspase-3及胞浆中Cyt C蛋白表达水平,下调PI3K(p110α)、p-Akt、Bcl-2和线粒体中Cyt C蛋白表达水平,而Akt蛋白表达水平无显著变化。然而,联合LY294002干预可增强贝母素乙对MCF-7细胞凋亡的促进作用。结论:贝母素乙可诱导乳腺癌MCF-7细胞凋... 相似文献
12.
目的:研究FGFR1(成纤维生长因子受体1)抑制剂Ponatinib对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响以及机制.方法:依据前期Western Blot结果筛选出实验组和对照组,用不同浓度Ponatinib处理人乳腺癌细胞株实验组和对照组.CCK-8法检测乳腺癌细胞增殖抑制率;流式细胞术检测乳腺癌细胞凋亡的影响;WesternBlot法检测Poantinib对FGFR1及其下游通路及凋亡相关蛋白的影响.结果:依据前期Western Blot结果,选取不表达FGFR1的MCF-7为对照组细胞,高表达FGFR1的MDA-MB-231、BT-549为实验组细胞.CCK-8结果及Annexin V-APC/7-AAD法结合流式细胞仪检测结果显示:Ponatinib呈浓度依赖性地诱导MDA-MB-231、BT-549细胞的增殖抑制和凋亡,对MCF-7细胞也有一定的增殖抑制和诱导凋亡作用,实验组细胞的增殖抑制率及凋亡率较对照组细胞高.Western Blot结果显示:MDA-MB-231、BT-549细胞中,p-FGFR1、p-Stat5、p-PLCγ1蛋白表达量均明显下调;Bcl-2、Mcl-1表达量下调,Bak表达量上调(BT-549中Bak、Bax表达量均上调).MCF-7细胞中,p-Stat5、p-PLCγ1蛋白表达量下调.结论:Ponatinib抑制MDA-MB-231、BT-549细胞增殖可能与下调p-FGFR1,进而下调p-Stat5、p-PLCy1有关,促进细胞凋亡的机制可能与下调Bcl-2、Mcl-1,上调Bak有关. 相似文献
13.
目的:研究lncRNA H19对乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡及放射敏感性的影响,并探讨其机制。方法:运用qRT-PCR检测MCF-7细胞中H19、miR-106a-5p的表达;将si-NC组(转染si-con)、si-H19组(转染si-H19)、si-H19+anti-miR-NC组(si-H19和anti-miR-NC共转染)、si-H19+anti-miR-106a-5p组(si-H19和anti-miR-106a-5p共转染),均用脂质体转染至MCF-7细胞,再用4 Gy放射照射;MTT法检测各组细胞的增殖情况;流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果:与对照组相比,放射照射组(IR)MCF-7细胞中H19显著降低,miR-106a-5p显著升高(P<0.05);敲减H19、过表达miR-106a-5p均可抑制MCF-7细胞增殖并促进凋亡,增强细胞的放射敏感性;H19靶向miR-106a-5p。抑制miR-106a-5p可逆转敲减H19对MCF-7细胞放射敏感性的增强作用。结论:敲减H19可抑制乳腺癌细胞增殖,促进凋亡,增强放射治疗的敏感性,其机制可能与靶向miR-106a-5p有关,可为提高乳腺癌的放射敏感性提供新靶点。 相似文献
14.
目的 探讨洛铂对骨肉瘤MG-63细胞增殖与凋亡的作用及其机制。方法 取对数生长期的MG-63细胞进行实验,分为对照组和实验组 (加入不同浓度洛铂: 2、4和8 μg/ml)。采用噻唑盐(MTT)比色法、流式细胞技术(FCM)检测洛铂对MG-63细胞的形态改变、生长及增殖抑制、细胞周期阻滞和细胞凋亡诱导等作用,并绘制不同浓度时MG-63细胞的生长曲线,应用Western blot的方法分析洛铂对MG-63细胞的Bcl-2蛋白表达的影响。结果 洛铂能够抑制MG-63细胞的生长、增殖并诱导其凋亡,并呈浓度和时间依赖效应。Western blot检测结果显示洛铂可使MG-63细胞Bcl-2蛋白表达下降。结论 洛铂能显著抑制MG-63细胞增殖,诱导细胞凋亡和细胞周期变化,可能与调节 MG-63细胞Bcl-2蛋白的表达有关。 相似文献
15.
目的:探讨蛋白酪氨酸磷酸酶受体Z1型(protein tyrosine phosphatase receptor type Z1,PTPRZ1)对人乳腺癌MCF-7细胞多西他赛耐药性的影响及其作用机制。方法:将MCF-7细胞暴露于逐渐增强浓度的多西他赛中建立对多西他赛耐药的乳腺癌细胞(MCF-7/Doc)。采用CCK-8法分别检测MCF-7和MCF-7/Doc细胞对多西他赛的耐药性。qRT-PCR和Western blot检测细胞中PTPRZ1 mRNA及蛋白表达水平。克隆形成实验检测细胞增殖情况,流式实验检测细胞凋亡情况。最后采用Western blot检测PTPRZ1调控乳腺癌化疗敏感性的作用机制。结果:CCK-8实验表明成功构建了乳腺癌多西他赛耐药细胞株MCF-7/Doc,克隆形成实验表明MCF-7/Doc细胞增殖能力显著高于亲本MCF-7细胞(P<0.05);MCF-7/Doc细胞中,PTPRZ1 mRNA及蛋白水平均显著上调(P<0.05)。过表达PTPRZ1能显著增强MCF-7/Doc细胞对多西他赛的耐药性和增殖能力,显著抑制细胞凋亡(P<0.05);敲减PTPRZ1能显著降低MCF-7/Doc细胞对多西他赛的耐药性,并能显著诱导细胞凋亡(P<0.05)。Western blot结果显示,PTPRZ1能够激活PI3K/Akt信号通路。结论:PTPRZ1通过介导PI3K/Akt信号通路促进乳腺癌对多西他赛的耐药性。 相似文献
16.
目的 探讨异黏蛋白(Metadherin, MTDH)对鼻咽癌细胞增殖及紫杉醇耐药的影响。方法 采用慢病毒介导的MTDH cDNA和MTDH-shRNA转染鼻咽癌细胞,分别上调和抑制MTDH的表达。CCK-8法、流式细胞实验分别检测细胞增殖能力、细胞周期及凋亡改变。CCK-8法确定紫杉醇对鼻咽癌细胞的IC30、IC50、IIC70,并检测IC30、IC50、IC70浓度下MTDH过表达组与沉默组细胞生存率改变。结果 MTDH上调后5-8F、HNE-1细胞的增殖能力均增强,而沉默MTDH后细胞的增殖能力均降低。MTDH沉默组的G1期细胞比例明显增加。MTDH过表达组细胞凋亡率降低,MTDH沉默组细胞凋亡率增加。MTDH表达上调之后,鼻咽癌细胞对紫杉醇的敏感度降低,在IC70、IC50浓度下,MTDH过表达组细胞的生存率高于对照组细胞。沉默MTDH之后,鼻咽癌细胞对紫杉醇的敏感度升高,在IC50、IC30浓度下,MTDH沉默组细胞的生存率低于对照组细胞。结论 MTDH在促进鼻咽癌细胞增殖中起重要作用,其高表达可促进鼻咽癌细胞紫杉醇耐药性的产生。 相似文献
17.
目的:探讨miR-4728-3p通过调控类端粒沉默干扰体-1(disruptor of telomeric silencing 1-like,DOT1L)基因对乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:使用乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231及人正常乳腺细胞MCF-10A。转染MCF-7和MDA-MB-231细胞随机分为NC组(转染miR-4728-3p-NC)和敲低组(转染miR-4728-3p-inhibitor)。利用RT-qPCR技术检测不同的细胞中miR-4728-3p和DOT1L的表达量改变情况。集落克隆形成实验和EDU实验可以同时检测体内各个细胞异常增殖的情况;TUNEL荧光标记检测法和流式细胞术实验可以同时检测不同组癌细胞的凋亡变化;划痕实验和Transwell实验可以同时检测到在各个细胞内因不同处理而可能产生的细胞迁移率和侵袭力的改变;Western blot检测与细胞凋亡状态相关细胞蛋白以及与细胞通路凋亡相关细胞蛋白p-AKT和p-PI3K相对表达的含量。结果:在乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231以及SKBR3中发现miR-4728-3p和DOT1L的表达高于人正常乳腺细胞MCF-10A(P<0.05)。转染细胞miR-4728-3p后,与NC组细胞进行实验比较,发现敲低组细胞中miR-4728-3p和DOT1L的表达量明显降低,且敲低组细胞的增殖能力明显减弱,细胞凋亡率明显升高,细胞迁移能力大大降低。敲低组的细胞凋亡活性蛋白相对表达明显发生变化。其中p-AKT与p-PI3K蛋白均被抑制激活。RT-qPCR和Western blot实验验证DOT1L是miR-4728-3p的下游靶向基因。结论:敲低miR-4728-3p可以下调DOT1L的表达从而促进乳腺癌细胞凋亡,抑制乳腺癌细胞增殖,同时使乳腺癌细胞侵袭和迁移能力减弱。 相似文献
18.
目的为进一步观察COX-2对乳腺癌的作用,我们检测了乳腺癌组织、乳腺癌细胞株MCF-7和B37中COX-2的表达,并观察选择性COX-2抑制剂塞来昔布对乳腺癌细胞株生长和凋亡的影响。方法应用免疫组织化学染色的方法检测132例乳腺癌组织标本中COX-2蛋白的表达;应用免疫细胞化学染色、原位杂交、逆转录多聚酶联反应(RT-PCR)的方法,分别检测COX-2蛋白和mRNA在乳腺癌细胞株MCF-7、B37中的表达;采用MTT法、AO/EB双荧光染色法和流式细胞术,研究塞来昔布对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。结果52.3%(69/132)的乳腺癌组织标本表达COX-2蛋白;在乳腺癌细胞株MCF-7和B37中均有COX-2的表达,25μmol/L塞来昔布作用72h后,COX-2表达明显减少;25、50、100μmol/L的塞来昔布与MCF-7细胞作用72h,生长抑制率分别为36.3%、57.7%、74.5%。100μmol/L塞来昔布作用72h后,MCF-7细胞凋亡率为38.5%。结论乳腺癌组织和乳腺癌细胞株MCF-7、B37中存在COX-2的表达;塞来昔布可抑制乳腺癌细胞增殖,并促进细胞凋亡,塞来昔布可能作为新的药物治疗乳腺癌。 相似文献
19.
目的观察5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人乳腺癌细胞系MCF-7增殖、凋亡及体外侵袭能力的影响并初步探讨其机制。方法体外培养MCF-7细胞,采用不同浓度的5-Aza-CdR(1×10-6、2×10-6、5×10-6和1×10-5mol/L)分别作用24h、48h和72h,分别采用MTT法检测细胞增殖抑制率、流式细胞仪检测细胞凋亡、Transwell法检测细胞侵袭能力、Western-blot检测PTEN和VEGF-C蛋白表达的变化。结果经不同浓度的5-Aza-CdR作用后,MCF-7细胞的增殖受到不同程度的抑制并发生凋亡,细胞侵袭能力也发生不同程度的降低,且其作用随浓度增加和时间延长而增强(P<0.05)。在5-Aza-CdR作用后,MCF-7细胞PTEN的表达逐渐增强,而VEGF-C的表达逐渐减弱。结论 5-Aza-CdR可抑制乳腺癌细胞增殖、诱导其发生凋亡、降低其体外侵袭能力,其可能是通过去甲基化作用使抑癌基因PTEN重新表达并下调VEGF-C的表达而发挥作用的。 相似文献