奥沙利铂处理HepG2细胞后DR5、caspase-8及survivin、bcl-2表达的变化

目的：研究奥沙利铂作用于HepG2细胞后DR5、caspase-8、survivin、bcl-2的表达,对奥沙利铂诱导HepG2细胞凋亡的机制进行初步探讨。方法：实验分为对照组和奥沙利铂组,应用MTT法、流式细胞仪体外研究奥沙利铂对HepG2细胞增殖的影响;采用免疫细胞化学及western blot的方法,观察奥沙利铂作用于HepG2细胞24h后DR5、caspase-8、survivin、bcl-2的表达情况。结果：奥沙利铂对肝癌HepG2细胞的抑制作用呈时间依赖性和浓度依赖性;奥沙利铂作用于HepG2细胞24小时后细胞表面DR5及caspase-8的表达增强,而survivin和bcl-2的表达减弱。结论：奥沙利铂诱导肝癌HepG2细胞凋亡的机制可能与其上调DR5及caspase-8表达和下调survivin及bcl-2表达有关。     

恩度联合吉西他滨对肝癌HepG2细胞的抑制作用及对HIF-1α、VEGF表达的影响

目的:探讨恩度(ES)、吉西他滨(GEM)单药及联合作用在体外对人肝癌细胞系HepG2细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用,以及加药前后HIF-1α、VEGF表达的变化。方法:MTT比色法观察不同浓度恩度、吉西他滨及联合应用对HepG2细胞生长的抑制作用。采用流式细胞仪检测上述药物单独或联合应用对HepG2细胞凋亡率的影响。免疫组织化学技术检测上述药物单独或联合应用时HIF-1α、VEGF的表达差异。结果:恩度单药对HepG2细胞无明显增殖抑制及诱导细胞凋亡作用;吉西他滨单药及联合恩度对HepG2细胞有明显抑制作用,且均呈明显的剂量依赖关系,均可诱导细胞凋亡,联用时有协同作用(P<0.05)。加药组与空白组相比、联合用药组与单药组相比,HIF-1α、VEGF的表达水平均显著降低(P<0.05)。结论:吉西他滨单药以及与恩度联合能够抑制人肝癌HepG2细胞并诱导凋亡。两药联合有协同作用。其机制可能与HIF-1α、VEGF有关。     

吉西他滨对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡影响的实验研究

目的:探讨吉西他滨对肝癌HepG2细胞株增殖和凋亡的影响及其可能的分子机制. 方法:MTT法测定吉西他滨不同浓度和时间作用后肝癌HepG2细胞的增殖抑制率;流式细胞仪检测吉西他滨作用HepG2细胞后细胞周期分布及凋亡情况;免疫细胞化学法、Western blot法分别检测吉西他滨作用后细胞凋亡相关因子Survivin及Bcl-2的表达. 结果:在0.3715-5mg/L 浓度范围内,吉西他滨对HepG2的生长具有明显的抑制作用,并呈时间和剂量依赖性;0.3715mg/L的吉西他滨可导致HepG2细胞G0/G1期阻滞,并引起细胞凋亡;免疫细胞化学和Western blot的结果显示吉西他滨作用后Survivin和Bcl-2的表达下调. 结论: 吉西他滨可抑制HepG2细胞增殖并诱导凋亡,其诱导凋亡的机制与Survivin和Bcl-2的表达下调有关.     

奥沙利铂处理HepG2细胞后DR5、caspase-8及survivin、bcl-2表达的变化

目的:研究奥沙利铂作用于HepG2细胞后DR5、caspase-8、survivin、bcl-2的表达,对奥沙利铂诱导HepG2细胞凋亡的机制进行初步探讨.方法: 实验分为对照组和奥沙利铂组,应用MTT法、流式细胞仪体外研究奥沙利铂对HepG2细胞增殖的影响;采用免疫细胞化学及western blot的方法,观察奥沙利铂作用于HepG2细胞24h后DR5、caspase-8、survivin、bcl-2的表达情况.结果: 奥沙利铂对肝癌HepG2细胞的抑制作用呈时间依赖性和浓度依赖性;奥沙利铂作用于HepG2细胞24小时后细胞表面DR5及caspase-8的表达增强,而survivin和bcl-2的表达减弱.结论: 奥沙利铂诱导肝癌HepG2细胞凋亡的机制可能与其上调DR5及caspase-8表达和下调survivin及bcl-2表达有关.     

吉西他滨联合YH-16对肝癌干细胞样细胞的影响

目的：探讨吉西他滨联合重组人血管内皮抑制素YH-16对裸鼠CD133+MHCC97H肝癌移植瘤中肝癌干细胞样细胞的影响。方法：用免疫磁珠分选MHCC97H中肝癌干细胞样细胞,将其接种到20只裸鼠皮下,建立移植瘤模型。治疗组给予吉西他滨和YH-16,对照组给予等量生理盐水,比较两组移植瘤大小变化及原代培养细胞球形成情况,流式细胞术检测原代培养中CD133+细胞百分率。结果：治疗组的移植瘤明显缩小,治疗组和对照组细胞球形成数目分别为(7.5±2.4)个 vs (16.0±3.5)个,细胞球直径分别为(178.30±19.21) μm vs (131.06±20.96) μm（P＜0.05）;治疗组和对照组原代培养中CD133+细胞百分数分别为（6.24±0.96）% vs（18.26±1.76）%（P＜0.05）。结论：低剂量吉西他滨联合YH-16可抑制血管内皮细胞破坏肝癌干细胞样细胞的血管巢,进而选择性清除肝癌干细胞样细胞。     

全反式维甲酸诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的初步研究

[目的]研究全反式维甲酸（ATRA）体外诱导人肝癌细胞株HepG2的凋亡及其作用机制。[方法]ATRA处理HepG2细胞。MTT法分析细胞增殖反应;Hoechst染色法检测细胞凋亡情况;Western blot检测细胞中caspase-9、caspase-3和NF-κB蛋白表达情况。[结果]A-TRA可抑制HepG2细胞增殖并诱导细胞凋亡,可上调细胞中caspase-9、caspase-3表达水平（P〈0.05）。[结论]ATRA可抑制HepG2细胞增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与cas-pase-9、caspase-3表达上调有关。     

吉西他滨对人非小细胞肺癌A549细胞增殖与凋亡的影响

目的研究吉西他滨体外对人非小细胞肺癌A549细胞增殖及凋亡的作用。方法应用MTT法,流式细胞仪,Annexin V-PI双标法,Tunel法等多项方法,体外研究吉西他滨对A549细胞的促凋亡作用;采用免疫组化的方法,观察药物作用后bcl-2表达的变化。结果吉西他滨对A549细胞生长具有抑制作用,并有促凋亡效应,对细胞周期的影响表现为S期的阻滞,药物处理的细胞凋亡,可见伴有bcl-2的下调。结论吉西他滨可抑制人非小细胞肺癌A549细胞的生长,并诱导细胞发生凋亡,其诱导凋亡是吉西他滨抗肿瘤作用机制的原因之一,而且凋亡与bcl-2的表达有一定关系。     

吉西他滨加低剂量5-氟尿嘧啶持续静脉输注治疗晚期原发性肝癌

目的:评价吉西他滨加低剂量5-氟尿嘧啶(5-Fu)持续静脉输注治疗晚期原发性肝癌(PHC)患者的疗效、临床受益反应(clinicalbenefit response,CBR)以及不良反应。方法:l5例晚期PHC患者,采用吉西他滨800-1000mg/m2,静滴,d1,8,5-Fu250mg/(m2.day)经锁骨下静脉持续输注12天,21天为一周期。结果:15例患者中,13例可以评价疗效,其中2例PR,6例SD,5例PD。患者的肿瘤进展时间(TTP)为1-6.2个月,中位TTP3.2个月。CBR率为60%(9/15)。主要毒副反应为骨髓抑制,Ⅲ度-Ⅳ度贫血3例(20%),Ⅲ度粒细胞减少和血小板减少各2例(13.3%)和1例(6.7%)。消化道反应较轻,Ⅲ度腹泻和口腔粘膜炎各1例(6.7%)。结论:吉西他滨加低剂量5-Fu持续静脉输注治疗晚期原发性肝癌有一定的疗效,CBR率较高,毒副反应可以耐受,在晚期PHC尚无特别有效治疗措施的情况下,值得临床试用。     

Caspase-8和Bcl-2在PIG11诱导HepG2细胞凋亡中的作用

目的:利用本实验室已建立PIG11蛋白稳定低表达的HepG2细胞株和PIG11蛋白稳定高表达HepG2细胞株,研究Caspase-8和Bcl-2在PIG11诱导HepG2细胞凋亡中的作用,进一步探讨PIG11基因表达对HepG2细胞凋亡的机制。方法:细胞培养,分组:HepG2细胞、pLXSN-PIG11-HepG2(pLXSN-PIG11转染建立PIG11蛋白高表达HepG2细胞)、pLXSN-HepG2(pLXSN空载体转染HepG2细胞)、miR-PIG11-HepG2(miRNA干扰PIG11蛋白低表达HepG2细胞)、miR-HepG2(干扰空载体HepG2细胞)。Hoechst33342染色荧光和PI染色流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况。Western blot检测Caspase-8蛋白、Bcl-2蛋白的表达情况。结果:Hoechst 33342染色荧光显微镜下pLXSN-PIG11-HepG2细胞组可见核染色质浓缩,核碎片,荧光增强,以及凋亡小体。PI染色流式细胞仪检测结果显示:HepG2细胞、miR-PIG11-HepG2细胞、miR-HepG2细胞、pLXSN-PIG11-HepG2细胞、pLXSN-HepG2细胞的凋亡率分别为5.72%±0.81%、1.34%±0.71%、5.10%±0.40%、34.83%±2.29%、5.34%±0.60%。PIG11高表达的pLXSN-PIG11-HepG2细胞组凋亡率比其它各组增高(P<0.01),PIG11低表达的miR-PIG11-HepG2细胞组凋亡率降低(P<0.01)。Western blot检测结果显示PIG11高表达的pLXSN-PIG11-HepG2细胞Caspase-8蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调(P<0.01),PIG11低表达的miR-PIG11-HepG2细胞Caspase-8蛋白的表达下调,Bcl-2蛋白表达上调(P<0.01)。结论:PIG11蛋白高表达能诱导HepG2细胞凋亡,其机制可能与Caspase-8蛋白及Bcl-2蛋白表达相关。     

Caspase-8和Bcl-2在PIG11诱导HepG2细胞凋亡中的作用

目的：利用本实验室已建立PIG11蛋白稳定低表达的HepG2细胞株和PIG11蛋白稳定高表达HepG2细胞株,研究Caspase-8和Bcl-2在PIG11诱导HepG2细胞凋亡中的作用,进一步探讨PIG11基因表达对HepG2细胞凋亡的机制。方法：细胞培养,分组：HepG2细胞、pLXSN-PIG11-HepG2（pLXSN-PIG11转染建立PIG11蛋白高表达HepG2细胞）、pLXSN-HepG2（pLXSN空载体转染HepG2细胞）、miR-PIG11-HepG2（miRNA干扰PIG11蛋白低表达HepG2细胞）、miR-HepG2（干扰空载体HepG2细胞）。Hoechst33342染色荧光和PI染色流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况。Western blot检测Caspase-8蛋白、Bcl-2蛋白的表达情况。结果：Hoechst 33342染色荧光显微镜下pLXSN-PIG11-HepG2细胞组可见核染色质浓缩,核碎片,荧光增强,以及凋亡小体。PI染色流式细胞仪检测结果显示：HepG2细胞、miR-PIG11-HepG2细胞、miR-HepG2细胞、pLXSN-PIG11-HepG2细胞、pLXSN-HepG2细胞的凋亡率分别为5.72%±0.81%、1.34%±0.71%、5.10%±0.40%、34.83%±2.29%、5.34%±0.60%。PIG11高表达的pLXSN-PIG11-HepG2细胞组凋亡率比其它各组增高（P〈0.01）,PIG11低表达的miR-PIG11-HepG2细胞组凋亡率降低（P〈0.01）。Western blot检测结果显示PIG11高表达的pLXSN-PIG11-HepG2细胞Caspase-8蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调（P〈0.01）,PIG11低表达的miR-PIG11-HepG2细胞Caspase-8蛋白的表达下调,Bcl-2蛋白表达上调（P〈0.01）。结论：PIG11蛋白高表达能诱导HepG2细胞凋亡,其机制可能与Caspase-8蛋白及Bcl-2蛋白表达相关。     

青蒿琥酯对人肺腺癌A549细胞中caspase-9及caspase-3活性的影响

 目的 研究青蒿琥酯（artesunate,Art）体外诱导人肺腺癌A549细胞凋亡及对半胱天冬氨酸蛋白酶9（cysteine containing aspartate9,caspase-9）和caspase-3活性的影响。方法 Art处理A549细胞,流式细胞计数（Flow Cytometry,FCM）检测细胞周期和细胞凋亡,比色法检测caspase-9活性,westernblot检测caspase-3变化。结果 FCM显示A549细胞经100mg/L Art作用24h,出现S期细胞减少（P〈0.01）,G2/M期细胞数目增多（P〈0.01）,细胞凋亡率增加（P〈0.0）。不同浓度（10mg/L、25mg/L、50mg/L、100mg/L）的Art作用A549细胞24h,caspase-9活性呈浓度依赖性增加,分别为对照组的9.87倍、23.33倍（P〈0.01）、38.47倍（P〈0.01）和60.47倍（P〈0.01）。Western blot显示A549细胞经100mg/L Art作用6、12、24h后,细胞浆中caspase-3活化,分别为对照组1.2倍、1.6倍（P〈0.01）、1.8倍（P〈0.01）。结论 青蒿琥酯可通过增加caspase-9和caspase-3的活性,诱导A549细胞凋亡,为阐明Art的抗癌机理,指导青蒿琥酯用于肿瘤治疗提供实验依据。     

罗格列酮对肝癌HepG2细胞周期和凋亡的影响

目的研究罗格列酮对人肝癌HepG2细胞周期和凋亡的影响。方法设不同浓度罗格列酮组(10、25、50.0、100.0μg/ml)、2‰二甲基亚砜的RPMI1640培养基加细胞为阴性对照组。应用MTT法检测罗格列酮对肝癌HepG2细胞的增殖抑制和生长活性,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。结果罗格列酮对肝癌HepG2细胞具有较强的体外毒性,48 h IC50为41.6μg/ml。肝癌HepG2细胞活性随着用药剂量和作用时间的增加而不断下降,出现剂量-效应和时间-效应的关系。罗格列酮作用48 h后,肝癌HepG2细胞G_0/G_1期比例显著升高,S期细胞比例有所降低,到G_2/M期细胞的比例明显下降,并呈明显的剂量依赖性。罗格列酮对HepG2细胞作用48 h后可以诱导肿瘤细胞产生凋亡,并且呈剂量依赖性。结论罗格列酮能抑制肝癌HepG2细胞生长并促进其凋亡。     

半胱氨酸酶在NS-398诱导HepG2细胞凋亡中的作用

目的 探讨选择性环氧合酶(COX-2)抑制剂NS-398诱导肝癌HepG2细胞凋亡的分子机制。方法 采用流式细胞术测定细胞凋亡情况;Western blot法检测不同浓度NS-398处理后凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase3表达的变化; 并以流式细胞术检测半胱氨酸酶-3(Caspase-3) 酶活性的变化。结果 流式细胞术显示NS-398(0、100、200、300、400μmol/L)作用HepG2细胞24h后,对照处理组没有出现凋亡峰,其余各组(100、200、300、400μmol/L)出现明显的凋亡峰,其凋亡率分别为(10.51±1.04)%、(27.79±2.40)%、(45.72±3.32)%,(60.22±2.03)%(P<0.01),不同浓度NS-398处理后凋亡相关蛋白Bcl-2表达下降,Caspase-3蛋白表达增加,随着NS-398处理浓度的增加,表达活性Caspase3的细胞百分率分别为(2.67±0.22)%、(9.53±0.15)%、(21.28±0.43)%、(39.63±0.8)%、(63.40±0.69)%(P<0.01)。结论 选择性COX-2 抑制剂可能通过调节Bcl-2蛋白表达活化Caspase3,从而诱导肝癌细胞HepG2凋亡。     

肝癌细胞自噬性凋亡过程中caspase-3基因的克隆与鉴定

目的从长春新碱诱导发生自噬性凋亡的肝癌细胞系HepG2中克隆caspase-3基因。方法提取细胞总RNA,采用RT-PCR技术扩增目的片段,构建重组克隆载体,测序鉴定及分析。结果经RT-PCR获得了预期的扩增产物即caspase-3基因625bp的核苷酸片段,其测序结果与文献报道一致。结论初步证明该caspase-3基因片段参与了长春新碱诱导的HepG2细胞自噬性凋亡过程。     

5-脂氧合酶抑制剂对人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响

目的:研究5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-Lox)在人肝癌细胞株HepG2中的表达,以及5-Lox抑制剂对人肝癌细胞株HepG2增殖、凋亡的影响。方法:应用免疫细胞化学染色及RT-PCR分别检测5-Lox的蛋白和mRNA在人肝癌细胞株HepG2中的表达,采用MTT法及流式细胞术检测5-Lox抑制剂齐留通(Zileuton)对人肝癌细胞株HepG2增殖、凋亡的影响。结果:5-Lox蛋白表达于肝癌细胞浆,局灶细胞核膜亦见阳性染色,RT-PCR可检测到肝癌细胞5-Lox的mRNA的表达。人肝癌细胞株HepG2给予不同浓度的齐留通处理24小时后,细胞存活率呈剂量依赖性下降;流式细胞术检测可见细胞凋亡率呈剂量依赖性升高。结论:人肝癌细胞株HepG2存在5-Lox的表达,5-Lox抑制剂齐留通可抑制人肝癌细胞株HepG2的增殖,诱导细胞凋亡。     

吉西他滨联合放射对人高转移卵巢癌细胞的体外实验研究

目的 探讨吉西他滨（GEM）联合放射对人高转移卵巢癌细胞系HO-8910PM的作用机理。方法 ①用不同浓度的GEM作用于体外培养的HO-8910PM细胞,观察其对细胞的增殖抑制;②GEM加不同放射条件照射细胞后,观察其对细胞的集落形成率、DNA及细胞凋亡的影响;③GEM联合放射对人卵巢癌细胞的时间依赖性实验,用细胞增殖抑制及核分裂指数的方法 ,对实验后24、48、72、96h的人卵巢癌细胞进行观察。结果 ①GEM对人卵巢癌细胞有一定的生长抑制作用,并随GEM的浓度增高而活细胞数下降,对照组与各药物组比较有显著性差异（P〈0.05）;高浓度组与低浓度组之间差异有显著性意义（P〈0.05）。②GEM加不同放射条件照射细胞后,随放射剂量的增高而细胞增殖明显抑制,呈正相关;细胞集落形成率,随放射剂量的增高而集落形成率下降;从流式细胞仪检测细胞周期结果 显示：经GEM加不同放射条件照射后的细胞,可见G0~G1期细胞明显阻滞,进入S期的细胞明显减少;细胞凋亡结果 分析表明,凋亡现象随放射剂量的增加,细胞凋亡率升高,尤以4Gy和6Gy时细胞凋亡现象更为明显。③用GEM联合放射对人卵巢癌细胞作用24、48、72、96h后,从细胞计数及核分裂指数结果 可见：细胞增殖抑制呈明显的时间依赖性,各组细胞随实验时间的增加,细胞增殖抑制明显,对照组与各实验组比较,在各时间点差异均有显著性意义（P〈0.05）,单纯药物组与联合组在实验96h后,有显著性差异（P〈0.05）。结论 GEM能抑制人卵巢癌细胞生长,当GEM联合放射可诱导HO-8910PM细胞阻滞和细胞凋亡,且有时间依赖性和一定的放射增敏作用。     

Suppression of death receptor 5 enhances cancer cell invasion and metastasis through activation of caspase-8/TRAF2-mediated signaling

The role of death receptor 5 (DR5), a well-known cell surface pro-apoptotic protein, in the negative regulation of invasion and metastasis of human cancer cells and the underlying mechanisms are largely unknown and were hence the focus of this study. In this report, we have demonstrated that DR5 functions to suppress invasion and metastasis of human cancer cells, as evidenced by enhanced cancer cell invasion and metastasis upon genetic suppression of DR5 either by gene knockdown or knockout. When DR5 is suppressed, FADD and caspase-8 may recruit and stabilize TRAF2 to form a metastasis and invasion signaling complex, resulting in activation of ERK and JNK/AP-1 signaling that mediate the elevation and activation of matrix metalloproteinase-1 (MMP1) and eventual promotion of cancer invasion and metastasis. Our findings thus highlight a novel non-apoptotic function of DR5 as a suppressor of human cancer cell invasion and metastasis and suggest a basic working model elucidating the underlying biology.