慢性乙型肝炎患者精子中乙型肝炎病毒DNA定位

国内外学者曾用斑点杂交和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交法检测精液中乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)ＤＮＡ的存在[1 ,2 ] 。为从形态上明确ＨＢＶＤＮＡ是否存在于男性慢性乙型肝炎患者成熟精子中及其分布情况 ,我们采用原位杂交法检测了 2 2例慢性乙型肝炎患者精子中ＨＢＶＤＮＡ。一、材料与方法1.标本收集 :精液采自 1990～ 1993年华西医科大学附属第一医院 2 2例男性慢性乙型肝炎患者 ,ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ均为阳性 ,年龄 19～ 2 5岁。为保持精子新鲜 ,采集后的标本尽快进行实验。2 .试剂 :Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ试剂盒购自西德Ｂｏｅｈｒｉｎ…     

乙型肝炎病毒携带者精子中HBV DNA的检测及意义

目的 检测乙型肝炎病毒携带者的精子是否携带乙肝病毒.方法 12例乙型肝炎病毒携带者的精子经辅助生育技术洗涤后制成精子涂片,应用特异性乙肝病毒DNA(HBV DNA)的探针以原位杂交法检测这些患者的精子涂片.结果 12例患者中有3例精子中检测到HBV DNA,分布于精子的核心部.结论 经辅助生育技术洗涤后的患者的精子仍存在向子代传播乙肝的可能性.     

乙型肝炎病毒DNA多聚酶基因YMDD突变的快速检测

同种异体原位肝移植已成为治疗晚期肝病的一种有效手段。我国肝移植患者基本上是伴有乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)感染的中壮年肝硬化或肝癌患者 ,因慢性ＨＢＶ感染性肝病而行肝移植的患者若术后不采用抗ＨＢＶ药物治疗 ,则几乎10 0 %都会有ＨＢＶ复发 ,导致患者移植肝的功能进行性恶化而不得不再次行肝移植术。而一般的抗ＨＢＶ药物 (如干扰素 )有效率 <40 % ,且副作用大。自从 1991年Ｄｏｏｎｇ首次报道拉米呋啶 (ｌａｍｉｖｕｄｉｎｅ)能明显抑制ＨＢＶ复制以来 ,拉米呋啶已成为目前最有希望的抗ＨＢＶ药物 ,且副作用小 ,临床已将它作为伴有慢…     

PUREGENE DNA 提取试剂盒快速克提取全血DNA

目的对于人类基因组的研究,寻求快速、经济地从外周血中提取高产量、高纯度的DNA的试剂盒及切实有效的实验方案.方法应用PUREGENE DNA提取试剂盒(Gentra Systems,Minneapolis,MN,USA)快速提取全血DNA的3种推荐实验方案.结果与结论通过应用3种推荐实验方案,对600人份全血DNA的提取,讨论并总结了所推荐的3ml实验方案减半为最佳高效、快速、经济方案.     

乙型肝炎病毒携带者睾丸中HBV DNA的检测研究

目的检测乙型肝炎病毒携带者的睾丸活检组织是否携带乙肝病毒。方法11例乙型肝炎病毒携带者的睾丸活检组织制成石蜡切片,应用特异性乙肝病毒DNA（HBV DNA）的探针以原位杂交法检测这些患者的睾丸组织切片。结果11例患者中有5例检测到HBV DNA,分布于间质细胞、支持细胞及各级生精细胞的细胞核。结论男性乙肝病毒携带者存在经生殖细胞向子代垂直传播乙肝的可能。     

人血清中神经生长因子的分子特征

在许多脊椎动物中、已查明有神经生长因子(NGF)。后者在遗传学上对交感神经元的发育和维持以及胚胎感觉神经元的发育都起着重要的作用。目前,关于NGF虽有多篇报道,但对其分子特征的研究甚少。基于此点、本文作者报道了人血清中的NGF及其分子特征。     

人血清中寨卡病毒微量中和抗体检测方法的建立和应用CSCD

目的 建立人血清寨卡病毒（ZIKV）微量中和抗体检测方法,并用10例经核酸检测和/或病毒分离确诊的寨卡输入病例的急性期和恢复期血清样本进行分析验证.方法 采用分离自输入寨卡病例的寨卡病毒株开展组织培养微量中和抗体测定,在BHK21、VERO和VERO-E6 3种细胞系中选择感染寨卡病毒后能产生典型CPE的细胞系制备病毒储备液,滴定病毒滴度;使用100TCID50的病毒液与连续4倍稀释的经56℃ 30 min灭活的血清于37℃中和2h,然后加入细胞悬液.5％二氧化碳培养箱孵育,逐日观察CPE.结果 BHK21、VERO和VERO-E63种细胞系对寨卡病毒感染的敏感度不同,其中VERO细胞最为敏感,可出现典型的CPE;应用VERO细胞系建立寨卡病毒微量中和抗体检测方法能准确反映寨卡确诊病例急性期和恢复期血清中和抗体水平,并能作为一种特异性诊断方法.结论 寨卡病毒微量中和抗体检测方法不仅可用于人感染寨卡病毒的实验室诊断,还可用于人群血清流行病学调查.     

用于分子生物学中DNA快速提取技术的研究

本文建立了应用碘化钾快速提取DNA的方法，提取55份外周血及14份骨髓标本，用紫外分光光度计检测其纯度和浓度，并用于一系列分子试验加以验证获得满意效果。     

慢性肝炎和肝癌病人血清中乙型肝炎病毒DNA的检测

为了了解慢性肝炎和肝癌病人患者体内乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）复制与ＨＢＶ血清标志之间的关系，用酶联免疫吸附实验（ＥＬＩＳＡ）、聚合酶链反应（ＰＣＲ）及斑点杂交方法对６１例慢性肝炎和４７例肝癌患者的ＨＢＶ表面抗原（ＨＢｓＡｇ）、相关ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）、表面抗体（抗－ＨＢｓ）、核心抗体（抗－ＨＢｃ）、相关ｅ抗体（抗－ＨＢｅ）进行了检测。结果表明：ＨＢＶＤＮＡ在ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、／抗－ＨＢｃ阳性的慢性肝炎和肝癌患者血清中的检出率分别为９０．５０％和５０．００％；在ＨＢｓＡｇ／抗－ＨＢｅ、抗－ＨＢｃ阳性者的检出率分别为４５．４０％和７．１４％；在ＨＢｓＡｇ阳性、ＨＢｅＡｇ阴性／抗－ＨＢｅ阴性者中的检出率分别为６０．００％和４０．００％；ＨＢｓＡｇ阴性、／抗－ＨＢｃ阳性或／抗－ＨＢｅ阳性或／抗－ＨＢｓ阳性者中的检出率分别为２０．００％和２２．２２％；在血清学指标全阴性时，慢性肝炎和肝癌患者血清中ＨＢＶＤＮＡ的检出率均为０。实验提示：无论是肝炎或肝癌，在ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ同时阳性时，ＨＢＶ复制最为活跃；在单独ＨＢｓＡｇ阳性时，ＨＢＶ有一定程度的复制；ＨＢＶ复制在肝癌细胞中受到一定程度的抑制。     

用聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒DNA

我们采用聚合酶链反应(ＰＣＲ)技术检测乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒(ＨＢＶ)ＤＮＡ,并用酶标法检测ＨＢＶＭ,从乙型肝炎临床分型和实验室ＨＢＶＭ分组两个角度时行回顾性比较与分析。1　材料和方法1.1　病例选择　168例乙型肝炎病例均来自嘉兴市第二医院和协作单位住院病人,全部检测过ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢＶＭ,男106例,女62例;年龄4～71岁,平均35.4岁。其中急性乙型肝炎26例,慢性乙型肝炎72例,重型肝炎9例,淤胆型肝炎24例,肝炎后肝硬化37例。诊断标准依据1995年北京第五次全国传染病寄生虫病学术会议修订的病毒性肝炎诊断标准。1.2　试剂和…     

人血清中早期妊娠因子的检测

近年来,国内一些免疫学论文已陆续在国外发表。为了使读者了解有关动态,我们将以摘要的形式,介绍这些论文的内容。     

血吸虫病人血清中IgE含量的检测

血吸虫病人血清中ＩｇＥ含量的检测湖北阳新县人民医院（４３５２００）翁建文，肖伟年为了解不同病期血吸虫病患者血清中ＩｇＥ含量的变化，我们选用上海医科大学华山医院提供的试剂盒，通过生物素─亲和素酶联免疫吸附试验（ＢＡ－ＥＬＩＳＡ）进行检测。表１血清ＩｇＥ...     

鸭乙型肝炎病毒DNA体内转染的研究

利用两种鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）ＤＮＡ双体质粒及环化的ＤＨＢＶＤＮＡ体内转染２ｄ龄鸭及４～２０ｄ龄鸭，大多数鸭产生了短暂病毒血症，少数鸭产持续病毒血症，转染鸭血清中检测得ＤＨＢｓ／ｐｒｅＳＡｇ，ＤＨＢＶＤＮＡ及ＤＨＢＶ病毒颗粒，转染鸭血清腹腔注射１ｄ龄鸭可感染成功，转染鸭肝组织检测到复制型ＤＨＢＶＤＮＡ，提示转染后既有抗原有的表达，又有病毒的复制。另外，用两种ＤＨＢＶＤＮＡ单体质粒体内转染２ｄｘ     

乙型肝炎病毒e抗源单克隆抗体研制及临床初步应用

基因工程菌生产的HBeAg,用十二烷基磺酸钠(SDS)和2-巯基乙醇(2-ME)处理后作为抗原免疫雌牲BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与同系小鼠骨髓瘤细胞(Sp2/0)融合,共获约3000个杂交瘤细胞克隆。经二种不同的ELISA筛选,得到16个分泌抗HBe McAb的杂交瘤细胞系。其中以94.127二株杂交瘤细胞分泌的抗HBe McAb效价较高(ELISA效价均为10~(-6),与HBeAg作琼脂糖双向扩散时还可出现肉眼所见沉淀线)。染色体检查证实为杂交瘤     

人血清中甘露聚糖结合凝集素的检测及意义

建立检测甘露聚糖结合凝集素 (MBL )的酶联免疫法 ,检测 2 2 6例不同性别、年龄正常人和 115例病人血清中的MBL水平。结果发现儿童组显著低于成人组。术后、烧 (烫 )伤和支原体肺炎患者的血清MBL水平 ( x±s)分别为 (6 73± 3 2 9)mg/L、 (5 86± 3 37)mg/L和 (5 18± 3 4 3)mg/L ,较正常对照组 (2 6 5± 1 5 6 )mg/L显著增高 ,而慢性肾脏病患者的血清MBL水平 (1 0 4± 0 4 8)mg/L显著降低。结果提示血清MBL水平可作为监测个体天然免疫功能的一项指标     

用热启动聚合酶链反应检测血清中乙型肝炎病毒DNA技术的建立和应用

建立了热启动聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测乙型肝炎病毒ＤＮＡ（ＨＢＶＤＮＡ）的技术。ＰＣＲ所有反应成分被２次加样。先加Ａ液（含ｄＮＴＰｓ、一对引物和ＭｇＣｌ＿２）与一粒石蜡珠。７０℃加热后冷却至室温，使蜡珠先融化后凝固形成蜡盖封住Ａ液，然后在向其上加入Ｂ液（含耐热性ＤＮＡ聚合酶、ＨＢＶＤＮＡ模板和ＫＣｌ）并开始循环扩增。当反应管内第一次变性温度升至６０℃以上时，中隔蜡层融化，蜡上浮形成防蒸发屏障，Ａ、Ｂ两液则由于热分子运动而混匀，从而保证引物与靶基因在较高温度下严格退火以减少错导非特异性扩增和引物聚体形成。提高了ＰＣＲ的特异性和灵敏性，应用这种技术对７６例肝炎血清进行了检测，结果ＨＢＶＤＮＡ检出率为６８％，其中ＨＢｓＡｇ（＋）、ＨＢｅＡｇ（＋）、抗－ＨＢｃ（＋）血清检出率为１００％；ＨＢｓＡｇ（＋）、抗－ＨＢｅ（＋）、抗－ＨＢｃ（＋）血清检出率为７０％；ＨＢｓＡｇ（＋）、抗－ＨＢＣ（＋）血清检出率为８９％；抗ＨＢＣ（＋）血清检出率为对％；标记全阴性血清检出率为３３％。     

HBsAg阳性产妇血清和初乳中乙型肝炎病毒DNA的定量分析

据统计，我国乙型肝炎病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）携带者占总人口的１０％左右，其中每年约有数十万ＨＢｓＡｇ阳性妇女分娩。母婴传播是乙型肝炎主要的传播途径之一，除宫内感染和分娩过程中感染外，产后哺乳能否引起ＨＢＶ传播愈来愈受到重视。已有作者对产妇初乳中ＨＢ...     

荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒DNA

目的 建立检测HBV病毒DNA的荧光定量PCR法（FQ-PCR）,并与运用常规凝胶电泳技术观察特异扩增带检测的结果加以比较。方法 合成扩增HBV DNA314bp特异保守序列的1对引物及1条带2个荧光基团的寡核苷酸探针。用PE-5700型定量PCR仪完成PCR反应及产物的荧光定量检测。同是PCR产物经琼脂糖凝胶电泳,EB染色,UVP（凝胶成像仪）检出有314bp带者为阳性或弱阳性。结果 建立了检测HBVDNA的荧光定量PCR技术,用已知HBV阳性模板不同拷贝数的标准溶液测得标准曲线Ct,原始拷贝数在10^5/ml以上者为阳性,用定量及定性PCR2种方法检测698例血清标本的结果表明：用FQ-PCR技术共检测出204例为阳性,阳性率29.2%;用定量及定性PCR2种方法检测698例血清标本的结果表明：用FQ-PCR技术共检测出204例为阳性,阳性率29.2%;用定性PCR观察到193例有阳性特异带,阳性检出率为27.65%。没有发现用定性PCR检测为阳性而用FQ-PCR检测为阴性者。结论 FQ-PCR检测HBVDNA较普通定性PCR技术具有操作简便,灵敏度更高、减少发生污染可导致假阳性结果的可能性及自动化程度高等优点,值得在临床检验中推广应用。