免疫对辐射损伤小鼠造血重建的影响——(一)辐射损伤小鼠造血重建规律

为了减轻或避免骨髓移植受体发生移植物抗宿主反应(GVHR),深入揭示免疫嵌合体形成机制,我们开展了“辐射损伤小鼠造血重建免疫学影响的研究。本文主要观察了骨髓移植后各类造血细胞重建规律。结果表明,每根股骨骨髓细胞数和每脾细胞数均随照后时间后延而不断增加,二者间呈明显正相关关系;每根股骨内CFU—S、CFU—C、CFU—E含量则随照后时间延长呈指数增加。各类造血细胞重建过程中,CFU—S起步早、增殖速率快、CFU—E、BFU—E后照9天才开始再建。说明致死剂量照射机体仍具有调控造血重建能力,其程序为先促进CFU—S增殖机能,待干细胞池数目抵一定程度时,再增强其分化机能,从而,渐渐恢复正常造血过程。     

无细胞胎肝液对大剂量化疗后小鼠骨髓造血细胞的影响

采用小鼠体内液体扩散盒及脾结节法观察了胎鼠和成年小鼠肝脏无细胞液对大剂量环磷酰胺化疗后小鼠骨髓造血细胞增殖与分化的影响。发现无细胞胎肝液能明显促进受抑制骨髓中多能造血干细胞(CFU—S)的集落形成率,但对扩散盒内粒系祖细胞(CFU—D)的增殖分化无促进作用。成年鼠肝无细胞液则对造血细胞的增殖无刺激活性,不能促进化疗后小鼠骨髓中造血干细胞恢复。认为无细胞胎肝液中存在的造血刺激因子能有效缓解细胞毒剂对骨髓多能造血干细胞的抑制。     

人脐血干细胞对裸小鼠移植的实验研究

目的　探讨脐血干细胞移植到小鼠体内的增殖、分化以及维持情况。方法　将人脐血单个核细胞注入经致死量照射后的免疫缺陷小鼠— BAL B/C nu 小鼠。观察小鼠的生存、造血重建和植入指标情况。结果　移植组小鼠生存、造血重建及植入指标表达明显优于对照组 (P<0 .0 5 ) ,人脐血中的 CD34 细胞可植入且定居于小鼠骨髓中 ,并可在其中增殖、分化。结论　人脐血干细胞移植入裸鼠显示脐血的造血干 /祖细胞在体内具有长期重建造血的能力     

当归补血汤对内皮细胞和骨髓造血细胞的增殖和分化作用

目的：探讨当归补血汤对内皮细胞及骨髓造血细胞的刺激增殖和诱导分化作用。方法：在培养的内皮细胞及骨髓造血细胞半固体和液体培养体系中加入不同浓度的当归补血汤，采用流式细胞术、双抗夹心法检测其对内皮细胞及骨髓造血细胞增殖的影响。结果：当归补血汤能够促进内皮细胞由G1期进入S期及细胞因子的分泌，但对BFU—E，CFU—E，CFU—GM和CFU—MK集落产率的提高及细胞表面表达CD13和CD71的细胞数量没有统计学上的意义。结论：在体外，当归补血汤能够促进内皮细胞的增殖及细胞因子的分泌，但未发现促进骨髓造血干细胞增殖与分化的作用。     

几种不同部位的巨噬细胞对小鼠造血干细胞的影响

目的 :研究腹腔巨噬细胞 (PM)、肺泡巨噬细胞 (AM)和肝脏Kupffer细胞 (KC)对小鼠造血干细胞 (CFU S)的影响。方法 :采用外源性脾集落形成和组织学技术观察了三种不同部位的巨噬细胞对CFU S、脾结节有丝分裂相及脾重的影响。结果 :Kupffer细胞能刺激CFU S的增殖 ,使脾结节中红系、粒系及巨核系细胞的有丝分裂活跃 ,脾重量增加 ,但腹腔和肺的巨噬细胞无此作用。结论 :三种巨噬细胞对CFU S的增殖与分化效果不同     

螺旋藻多糖对骨髓造血干/祖细胞增殖能力影响的实验研究

目的 了解丁钝螺旋藻多糖（SPP）对造血干／祖细胞的刺激活性，以期发现恢复放射损伤造血功能的新药。方法 用内外源性脾集落和体外琼脂培养法。观察放射损伤小鼠注射SPP后CFU－S、CFU－GM及骨髓有核细胞数的改变。结果 给药组小鼠CFU－S、CFU－GM及骨髓有核细胞数均有显著的升高，与对照组比较有非常显著的差异（P＜0.001)。结论 SPP对造血干／祖细胞有显著的促增殖和分化的作用。     

小鼠颌下腺组织培养上清液促进粒—单系和巨核系造血的实验研究

目的 证实颌下腺是否合成影响造血的细胞因子,并探讨其对粒－单系和巨核系造血细胞增殖分化有何影响,为重新认识颌下腺的生理功能提供实验证据。方法 采用造血祖细胞体外培养和流式细胞术检测CD13膜抗原及细胞周期,研究小鼠颌下腺组织培养上清液（SGCM）对小鼠粒－单系和巨核系造血发生的影响。结果 SGCM对粒－单系祖细胞（CFU－GM）集落生长有明显促进作用,能明显促进巨核系造血祖细胞（CFU－M eg）集落生成,而且雄性SGCM刺激活性高于雄性SGCM,IL－3与雌性SGCM有叠加作用,贫血雄性SGCM对CFUGM和CFU－Meg的刺激活性高于正常小鼠,SGCM能促进小鼠骨髓细胞进入增殖活跃期（S／G2）。结论 颌下腺能合成与粒－单系、巨核系造血相关的造血因子。提示颌下腺与造血调控可能有关。     

IL-33转基因小鼠骨髓造血干/祖细胞向髓系细胞分化的能力增强

目的利用IL-33转基因小鼠研究IL-33对造血干/祖细胞的增殖和分化影响。方法利用流式细胞仪分析IL-33转基因小鼠及同窝野生对照小鼠的外周血、脾脏、骨髓细胞的免疫表型及造血干细胞分化不同阶段细胞的数量变化;利用体外成克隆实验和细胞周期分析研究IL-33对于造血干细胞增殖能力的影响。结果与野生型小鼠相比,IL-33转基因小鼠B细胞和T细胞在外周血中都明显降低,粒细胞在外周血和骨髓中都有明显增加;IL-33转基因小鼠的骨髓造血干细胞和多能祖细胞数量减少,共同淋系祖细胞数量减少,共同髓系祖细胞和粒单系祖细胞数量增加;IL-33转基因小鼠的造血干细胞处于S-G2-M的细胞增多;体外单克隆实验发现IL-33转基因小鼠造血干细胞形成的集落数增加。结论 IL-33转基因小鼠造血干细胞增殖能力增强,更易向髓系细胞分化。     

小鼠颌下腺组织培养上清液对造血干细胞和骨髓细胞增殖影响的实验研究

本实验采用脾集落形成法和流式细胞术等技术,研究了小鼠颌下腺组织培养上清液（ＳＧＣＭ）对造血干细胞和骨髓细胞增殖的影响。结果表明：正常雄性和雌性ＳＧＣＭ对小鼠造血干细胞增殖和分化有明显促进作用：ＳＧＣＭ能能效促进小鼠骨髓细胞（ＢＭＣ）由相对静止期（Ｇ０／Ｇ１）进行增殖活跃期（Ｓ＋Ｇ２／Ｍ）,并能提高骨髓有核细胞数。研究提示,正常小鼠颌下腺可能通过分泌造血生长因子样物质促进小鼠造血干细胞增殖和全化并加     

造血基质干细胞的研究——Ⅲ 骨皮质异位移植的造血重建

将除净骨髓细胞的骨皮质移植到同系小鼠皮下后4周,移植物髓腔内充满髓系造血组织。说明骨皮质内含有造血重建的主要诱导因素,即在异位移植造血重建过程中,骨皮质环境因素占有主导作用。骨皮质内的成骨细胞或骨母细胞不仅是骨的发生、成长及修复的主要成分,而且在特殊条件下,很可能还有支持造血恢复作用。这种作用大概是通过其自身增殖、分化形成特有的造血基质细胞或是分泌某种因子诱导宿主的造血干细胞和基质细胞定居而重建造血。     

bcl-2基因转染小鼠造血干细胞重建造血的生物学特性

目的 观察ｂｃｌ－２基因转染小鼠造血干细胞重建造血的小鼠对放化疗的抵抗作用。方法 （１）含ｂｃｌ－２ｃＤＮＡ的逆转录病毒载体质粒,经脂质体介导转染ＰＡ３１７包装细胞,通过Ｇ４１８筛选和克隆,获得高病毒滴度的细胞株（Ｄ３）;（２）用Ｄ３细胞株的病毒上清转染小鼠胚胎肝造血干细胞;（３）经致死剂量照射小全注ｂｃｌ－２转 造血干细胞重建造血;（５）采用脾集落形成和再增殖能力观察ｂｃｌ－２转因干细胞重建造血     

骨髓间充质干细胞的生物学特性及临床应用前景

骨髓间充质干细胞(BMSCs)是存在于骨髓中除了造血干细胞(HSCs)外的另一种干细胞,不仅直接参与生成造血微环境支持造血,在适宜的条件下还可发育、分化为具有支持造血功能的多种骨髓基质细胞。因其具有高度自我更新能力和多向分化潜能,是细胞替代和基因治疗理想的细胞来源。目前,临床研究的焦点集中于BMSCs对造血微环境(HME)损伤的修复,从而促进移植后造血和免疫功能的重建。     

锂对造血干细胞的调节作用

用集落方法和~3H—TdR 掺入实验检查锂对造血干细胞增殖分化的影响。结果提示,锂对造血干细胞具有直接和间接作用,间接影响是通过淋巴细胞实现的。     

小蘖胺对小鼠升白细胞作用机理的研究

本文采用小鼠体内扩散盒及脾结节法,结合骨髓有核细胞计数,探讨了小蘖胺对小鼠骨髓白细胞系造血功能的影响.该药能显著提高小鼠骨髓有核细胞数,量效关系显著,促进骨髓造血干细胞及粒系祖细胞的集落生成率.认为其作用机理与促进骨髓造血干细胞及粒系祖细胞的增殖、分化有关.     

造血干细胞的发生和迁移

造血干细胞是造血系统细胞的鼻祖 ,它具有向各种髓细胞和淋巴细胞发育的潜能 ,也具有一定的自我更新能力。胚胎第 3周 ,血岛中央细胞分化为造血干细胞 ,然后经血流迁移入肝和脾 ,并开始造血 ,最后造血干细胞定居在红骨髓内造血 ,可产生红细胞、粒细胞、单核细胞和血小板 ,并可通过移植重建受损害的造血和免疫系统。1　造血干细胞的发生根据细胞发育的连续性 ,多能的造血干细胞只是干细胞池的一个发育阶段 ,它来自全能干细胞 ,又通过增殖分化逐渐减弱其自我更新和分化潜能 ,最终失去干细胞特征 ,成为没有自我更新能力和发育方向限定的造血祖…     

造血干细胞的血管分化及其在肢体缺血性疾病中的治疗作用

造血干细胞是最早发现、研究最深入的组织干细胞,造血干细胞移植已成功治疗了多种血液及免疫性疾病.很早以前,有人推测造血干细胞和血管干细胞来自共同的干细胞-血液血管母细胞.近年研究显示,造血干细胞具有分化血管内皮细胞的能力.动物实验显示,缺血部位造血干细胞移植可以促进血管新生,改善肢体缺血.临床小规模试验研究表明,应用骨髓和外周血造血干细胞移植可以显著促进缺血下肢的血管重建.本文简要介绍骨髓、外周血、脐血造血干细胞的血管分化功能及其在肢体缺血性疾病中的治疗作用.     

用胚胎干细胞诱导的造血干/祖细胞重建小鼠造血功能研究

目的 胚胎干细胞体外诱导分化出现CD34^ 造血干/祖细胞，然后将其注射入致死量照射小鼠体内，以研究其重建造血功能。方法 胚胎干细胞自由分化形成胚胎体后，加入造血刺激因子混合液以诱导产生CD34^ 造血干／祖细胞，将这些造血干／祖细胞注射入经致死剂量照射的小鼠，观察小鼠存活率的改变，并取存活2个月的小鼠骨髓和脾脏，PCR检测嵌合体形成。结果 体外分化第13日CD34^ 造血干／祖细胞比例可高达17．36％，将这些细胞注射入致死量照射小鼠后，可提高存活率达86．67％，存活小鼠的骨髓和脾脏均检测到供体来源的细胞。结论 胚胎干细胞体外分化获得CD34^ 造血干/祖细胞，且后者具有其相应的正常生物学功能。     

造血干细胞的研究进展

造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)从胚胎卵黄囊全能间叶细胞分化而来,是一小群不均一的最原始的造血前体细胞,具有高度的自我复制和多向分化潜能。可存在于造血组织和血液中。能保持数量和质量不变,在造血细胞发育谱系中,兼有髓系和淋巴系多向分化的潜能,移植后可在重建造血的同时重建免疫,故也称为多能干细胞。造血干细胞是干细胞中研究最早、最多、最深入的一种。近年来在造血干细胞的多个研究领域均取得了重要进展,特别是在基因治疗和造血干细胞的可塑性等方面。本文就造血干细胞的免疫表型、生物学特性及临床应用等进行综述。     

外周血造血干细胞的某些特性研究

本文就外周血造血干细胞的某些性能作了观察,结果表明:外周血CFU-S的辐射敏感性较低,较能耐受辐射损伤,但GM-CFUc的辐射敏感性与骨髓GM-CFUc相比则相对较高;外周血CFU—S的自杀率数据提示它处于较活跃的增殖状态;外周血CFU—S群体中7～9天亚群和11天后亚群的相对数量与骨髓比较无显著差异,但两个亚群的自我更新能力均较骨髓的为弱。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂在造血干细胞体外扩增中的作用

造血干细胞的自我更新和分化受到高度协调的表观遗传调控,其中组蛋白乙酰化修饰可以激活或沉默基因的转录。组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACIs)可以抑制造血干细胞中组蛋白去乙酰化酶的活性,增加组蛋白乙酰化水平。多种HDACIs,如曲古他汀A、丙戊酸钠等,被用于在体外无血清培养中与细胞因子组合联合处理造血干细胞,尤其是脐血造血干细胞,促进与干细胞自我更新相关的多能基因的转录表达,抑制分化相关基因的表达,从而促进造血干细胞扩增,抑制分化,获得数量更多的长期重建细胞。小分子HDACIs体外扩增脐血造血干细胞有望改变脐血干细胞数量不足、造血及免疫重建延迟的缺陷。大规模高通量筛选出扩增作用强的HDACIs、选择不同通路表观修饰剂协同作用、筛选高选择性HDACIs是进一步研究方向。