PRDM14在非小细胞肺癌中的表达及其与临床病理因素的关系

背景与目的锌指蛋白转录抑制因子(positive regulatory domain zinc finger protein,PRDM)是一个有关人类肿瘤形成的转录调节因子家族,在细胞分化和恶性变中发挥重要作用.PRDM14是PRDM家族的成员之一.本研究的目的是检测PRDM14在非小细胞肺癌组织中的表达情况并探讨其与非小细胞肺癌的临床病理因素的关系.方法采用免疫组织化学方法检测70例非小细胞肺癌标本和7例癌旁组织中PRDM14的表达.采用Western blot方法检测42例非小细胞肺癌组织和癌旁肺组织中PRDM14蛋白的表达.结果 7例癌旁肺组织中PKDM14弱表达,在70例非小细胞肺癌组织标本中,有8例为PRDM14阴性表达(11.43%),9例为PRDM14弱阳性表达(12.86%),36例PRDM14阳性表达(51.43%),有17例PRDM14强阳性表达(24.29%),PRDM14的表达情况与非小细胞肺癌的分化程度(P=0.046)和组织学类型(P=0.047)有关,PRDM14在高分化腺癌、鳞癌中表达最高,在中分化腺癌、鳞癌中表达次之,在低分化腺癌、鳞癌表达最低,PRDM14在隙癌中的表达高于鳞癌.Western blot结果表明PRDM14的蛋白在癌旁肺组织和肺腺癌、鳞癌组织的表达水平存在显著差异,PRDM14在非小细胞肺癌组织中的表达水平高于癌旁肺组织(P<0.001),而且与非小细胞肺癌的分化程度有关(P=0.017),在高、中分化腺癌、鳞癌中的表达高于在低分化腺癌、鳞癌中的表达.结论 PRDM14在癌旁肺组织中低表达,在非小细胞肺癌组织中高表达,其表达水平与非小细胞肺癌的分化、组织学类型有关,可能在非小细胞肺癌的发生发展中发挥作用.     

肺癌患者柯萨奇病毒和腺病毒受体的表达及其临床意义

  目的   探索柯萨奇病毒和腺病毒受体（Coxsackie and adenovirus receptor,CAR）与肺癌的关系,为使用基于腺病毒载体的基因治疗方案提供依据。   方法   运用免疫组织化学法检测112例肺癌患者肿瘤组织、癌旁组织以及正常组织中CAR的表达;通过RT-PCR和Western blot法检测32例患者CAR mRNA及CAR蛋白的表达。   结果   在正常肺组织中未见CAR表达,癌旁组织中可见少量的CAR表达。鳞状细胞癌和腺癌中CAR阳性表达比率分别为43%和70%,均较癌旁组织明显升高。同时,腺癌中CAR的表达也显著高于鳞状细胞癌,RT-PCR和Western blot法进一步证实免疫组织化学法检测结果。   结论   肺癌中CAR过表达,在腺癌中尤为明显,提示CAR可能参与了肺癌的发生发展,这可能对基因治疗肺癌的研究提供了较好的理论基础。      

肺癌细胞抑癌蛋白PTEN下调机制的研究

目的:探讨肺癌细胞中抑癌蛋白PTEN低表达的相关机制。方法:Western blot方法检测肺癌细胞和正常人肺上皮细胞BEAS-2BPTEN蛋白的表达;用放线菌酮(1μg/mL)处理人肺腺癌细胞A549和正常人肺上皮细胞BEAS-2B阻断细胞翻译后,Western blot方法检测不同时相PTEN蛋白的表达。RT-PCR检测肺癌细胞与正常肺上皮细胞PTEN mRNA水平;放线菌素D(1μg/mL)处理肺癌细胞与正常肺上皮细胞阻断新生RNA合成,RT-PCR检测不同时相PTEN mRNA的水平。结果:Western blot结果显示,肺癌细胞中PTEN蛋白表达与正常肺上皮细胞比较有不同程度的降低(0.38～1.32倍);使用放线菌酮处理A549和BEAS-2B后,24h内A549及BEAS-2B细胞PTEN蛋白表达无明显改变。RT-PCR结果显示肺癌细胞中PTEN mRNA与正常人肺上皮细胞相比明显降低(0.41～0.68倍);放线菌素D处理显示肺癌细胞PTEN mRNA降解速率比正常肺上皮细胞降解速率明显加快。结论:肺癌细胞中抑癌蛋白PTEN低表达的主要原因是其mRNA降解加速,这为进一步研究PTEN蛋白低表达的详细分子机制提供了线索。     

抑癌基因PRDM5在HPV16病毒致宫颈鳞癌发生过程中的作用研究

目的 探讨抑癌基因PRDM5表达下降是否是HPV16病毒感染导致宫颈癌发生的机制之一。方法 采用免疫组化法检测宫颈癌组织及正常宫颈组织中PRDM5蛋白及HPV16 E6/HPV18 E6蛋白的表达;HPV16 E6 shRNA质粒转染SiHa细胞后, 应用RT-PCR及 Western blot法检测PRDM5的表达。结果 HPV16/18 E6在宫颈癌组织中表达阳性率明显高于正常宫颈组织;宫颈癌组织中PRDM5蛋白表达水平较正常宫颈组织中表达水平低;将HPV16 E6 shRNA3转染SiHa细胞干扰HPV16 E6表达后, 发现SiHa细胞中PRDM5 mRNA及蛋白表达上调。结论 PRDM5可能介导HPV16病毒感染导致宫颈癌的发生发展过程。     

音猬因子、Smo基因在宫颈鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨音猬因子(Shh)、Smoothened(Smo)基因在宫颈鳞状细胞癌中的表达及意义.方法:采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Westem blot检测76例宫颈鳞状细胞癌组织和42例正常宫颈组织中Shh、Smo mRNA和蛋白的表达情况.结果:RT-PCR检测结果显示,Shh、Smo mRNA在宫颈鳞状细胞癌中相对表达量分别为0.715±0.048、0.638±0.037,在正常宫颈组织中分别为0.341±0.072、0.311±0.051(P<0.05).Western blot检测结果显示,Shh、Smo蛋白在宫颈鳞状细胞癌中的相对表达量分别为0.568±0.013、0.521±0.056,在正常宫颈组织中分别为0.281±0.047、0.252±0.064(P<0.05).宫颈鳞状细胞癌组织Shh、Smo mRNA和蛋白平均表达水平高于正常宫颈组织,差异有统计学意义(P<0.05);Shh、Smo mRNA和蛋白表达水平与宫颈鳞状细胞癌的分化程度明显相关(P<0.05),与患者年龄、FIGO分期、侵犯血管和神经、淋巴结转移、远处转移无明显相关(P>0.05).结论:宫颈鳞状细胞癌组织中Shh、Smo蛋白呈高表达,Shh、Smo蛋白的高表达可能与宫颈鳞状细胞癌的发生、发展及转移关系密切.     

肺腺癌中FAT1的表达及其与免疫细胞浸润关系的研究

背景与目的 肺癌是癌症相关死亡的主要原因。非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）是肺癌最常见的病理分型,其中又以肺腺癌占比最高。非典型性钙黏蛋白1(FAT atypical cadherin 1, FAT1)是一种受体样蛋白,在肺腺癌中存在高频率突变,其编码的蛋白在细胞黏附、细胞增殖、分化等过程中发挥着重要的作用。本研究旨在研究FAT1在肺腺癌中的表达及与免疫浸润的关系。方法 通过下载癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas,TCGA）和基因型-组织表达（Genotype-Tissue Expression, GTEx）相关数据,获得513例肺腺癌样本、397例癌旁样本的基因表达水平及相关临床信息。分析肺腺癌组织中FAT1基因m RNA表达水平以及FAT1基因的表达与肺腺癌患者的预后关系,通过通路富集分析探索FAT1基因调控的相关信号通路。利用免疫蛋白印迹检测FAT1在肺上皮细胞和不同肺癌细胞系中的表达差异,免疫组织化学染色法被用于检测FAT1在肺癌和癌旁组织中的表达。结果 14%的肺腺癌患者中存在FAT1基因突变;TC...     

沉默前B淋巴细胞白血病转录因子基因表达诱导肺癌细胞凋亡及活性氧产生

目的探讨前B淋巴细胞白血病转录因子(PBX1)基因表达对肺癌细胞凋亡、ROS含量和STAT3信号通路的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应检测肺癌及癌旁组织中PBX1基因的表达水平, 分析PBX1基因表达水平与患者临床病理特征的关系。采用Western blot法检测人肺癌A549、SPC-A1、SK-MES-1和H1299细胞株中PBX1蛋白的表达水平。应用脂质体法转染空白对照(空白组)、阴性对照(阴性组)和PBX1小干扰RNA(siPBX1组)至A549细胞, 采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡率和ROS含量, 采用Western blot检测各组细胞中PBX1、STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)、Bcl-2和survivin蛋白的表达水平。结果肺癌组织中PBX1信使RNA的表达水平(2.36±0.23)高于癌旁组织(1.02±0.15), 差异有统计学意义(P<0.05)。PBX1基因表达水平与肺癌分化程度、淋巴结转移和TNM分期均有关(均P<0.05)。PBX1蛋白在人肺癌A549、SPC-A1、SK-MES-1和H1299细胞中的表达水平分别为0.45...     

非小细胞肺癌中ASPP1、ASPP2蛋白的不同表达状态及其意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中ASPP1、ASPP2蛋白表达规律及其与p53表达状态的相关性.方法收集NSCLC术后同一病人的新鲜肺癌组织、癌旁组织、肺组织共54例用于试验研究.采用免疫组织化学Envision法检测肺癌组织、正常肺组织中ASPP1、ASPP2蛋白表达及癌组织中p53表达以确定各病例的p53表达状态;Western blot方法检测肺癌组织、癌旁组织、正常肺组织中ASPP1、ASPP2蛋白表达.结果p53阴性状态Western blot显示癌组织、癌旁组织、正常肺组织中ASPP1表达量逐渐升高(P=0.012),比较发现癌组织ASPP1蛋白表达水平显著高于肺组织( P =0.029);ASPP2表达在癌组织、癌旁组织、正常肺组织中表达无显著性差异. p53阳性状态下,免疫组织化学与 Western blot 检测结果均显示ASPP1、ASPP2蛋白在癌组织、癌旁组织、肺组织中表达比较无显著性差异.癌组织ASPP1蛋白表达在p53阴性时显著低于p53阳性;癌组织ASPP2表达在p53阴性时与p53阳性无统计学意义.癌旁组织、肺组织中ASPP1、ASPP2表达与p53表达状态无相关性.结论p53阴性状态下,NSCLC癌组织ASPP1表达降低,ASPP2表达无明显变化,ASPP1表达降低与NSCLC的发生密切相关.     

FATS在非小细胞肺癌组织中的表达及临床相关性研究

  目的  研究脆性位点相关抑癌基因(fraglie-site associated tumor suppressor, FATS)在非小细胞肺癌以及癌旁正常组织的mRNA和蛋白表达水平, 探讨FATS在非小细胞肺癌发生发展中的作用。  方法  通过实时定量PCR技术和Western blot技术分析检测天津医科大学附属肿瘤医院2003年5月至2007年10月间91例非小细胞肺癌患者FATS基因和蛋白表达水平, 并且研究其表达水平与患者临床预后的关系。  结果  实时定量PCR和Western blot结果均显示非小细胞肺癌患者肿瘤组织FATS表达量明显低于其配对的癌旁正常组织(P=0.001)。FATS基因低表达患者与高表达患者在总生存期差异有统计学意义(P=0.030)。Cox多因素分析显示FATS基因的表达是非小细胞肺癌独立的预后因素(OR=2.250;95%CI: 1.054~4.805;P=0.036)。  结论  FATS低表达与非小细胞肺癌的发生发展具有高度相关性, FATS表达作为非小细胞肺癌的独立预后因素, 有望成为新的肿瘤标记物, 为临床诊治提供新的靶点。      

转染外源CC10对肺腺癌细胞系A549的CyclinD1蛋白及mRNA的影响(英文)

目的研究转染外源性CC10基因对肺腺癌A549细胞株的细胞周期及周期蛋白CyclinD1蛋白和mRNA表达影响。方法用脂质体法分别将外源性抑癌基因CC10转染到人肺腺癌细胞株A549中,8h、16h、24h、36h、48h后,分别用Western blot法检测转染CC10基因的A549细胞CC10蛋白表达,用流式细胞仪观察细胞周期的变化,用免疫细胞化学及RT-PCR检测转染CC10基因对周期蛋白CyclinD1蛋白、mRNA的影响。结果转染外源CC10基因对A549细胞生长具有抑制作用,细胞生长阻止于G0／G1,细胞周期S期+G2／M期比例下降。转染外源 CC10基因的A549细胞CC10蛋白表达增高,而CyclinD1的蛋白及mRNA表达明显降低。结论转染外源CC10基因对肺癌细胞G0／G1周期的抑制作用可能与CyclinD1基因表达下调有关。     

肺癌中ING1基因变化及其表达水平的研究

目的：检测肺癌中抑癌基因ING1微卫星杂合性缺失（LOH）及其主要蛋白产物p33^ING1b的表达情况，以探讨ING1基因改变-9肺癌发生发展的关系。方法：采用银染PCR—SSCP法检测肺癌组织ING1基因微卫星LOH发生的频率；应用组织芯片技术和免疫组化方法，检测肺癌p33^ING1b蛋白表达水平。结果：70例肺癌组织ING1基因4个微卫星位点的总杂合性缺失率为55．7％（39／70），并且越靠近ING1基因位点，发生率越高，但与临床病理参数无关。217例肺癌p33^ING1b蛋白的LOH发生率为47．0％（102／217），鳞状细胞癌高于腺癌、腺鳞癌和细支气管肺泡癌（P〈0．05），其余类型间差异无显著性（P〉0．05）；p33^ING1b的表达与其他临床病理参数不相关（P〉0．05），但与LOH发生频率相关（P〈0．05）。结论：p33^ING1b蛋白在肺癌组织中存在高频率的低表达或失表达，并且ING1基因的微卫星LOH发生频率也很高。推测LOH是该基因异常表达的重要原因，其结果可能导致该基因的下调和（或）蛋白质功能的失活，从而丧失其对细胞的生长抑制作用，促进了肿瘤的发生。     

TSG101在肺癌组织和细胞系中的表达及意义

背景和目的在小鼠NIH3T3成纤维细胞中通过随机纯合子敲除法证实,破坏肿瘤易感基因TSG101(Tumor Susceptibility Gene101)导致裸鼠的自发性肺转移性肿瘤,从而TSG101作为侯选的肿瘤抑制基因被认识。随后,越来越多的研究证实TSG101并非是严格意义上的肿瘤抑制基因,在原发乳腺癌并没有检测到基因内部的序列的丢失或异常,相反发现存在异常的TSG101选择性剪接体。本研究目的旨在研究肺癌细胞系和组织中TSG101的表达情况,分析TSG101及异常的TSG101选择性剪接体在肺癌的发生发展过程中可能所起的作用。方法采用免疫组织化学方法(SP法)检测79例肺鳞癌和肺腺癌组织及相应癌旁正常肺组织中TSG101的表达情况。采用RT-PCR实验分析,检测出在7种肺癌细胞系中野生型和异常剪接转录产物表达情况。采用WesternBlot方法检测肺癌细胞系中蛋白质表达情况。结果TSG101在肺鳞癌和肺腺癌中的蛋白水平显著低于其在相应正常肺组织中的表达。七种细胞系中普遍存在由于异常的选择性剪接而缩短的TSG101转录产物,和野生性转录产物同时表达。通过统计学分析发现在小细胞肺癌细胞系中存在更多的异常的转录产物。通过WesternBlot分析同样发现小细胞肺癌细胞系同样与其他非小细胞肺癌细胞系在蛋白水平上存在差异。结论尽管在非小细胞肺癌中作为侯选的肿瘤抑制因子,但是普遍存在的TSG101异常转录产物也许和肺癌的类型相关,可作为肺癌恶性进展的生物学标志。     

Alteration of expression or phosphorylation status of tob, a novel tumor suppressor gene product, is an early event in lung cancer

Tob is a member of the Tob/BTG family, a novel class of anti-proliferative proteins. To investigate the involvement of tob as a tumor suppressor gene in human lung cancer, we analyzed the expression of tob mRNA and protein in lung cancer tissue and adjacent normal lung tissue. Immunohistochemical analysis using anti-Tob antibody showed decreased expression of Tob in 72% (31/43) of lung cancer tissues. Furthermore, 95% (19/20) of squamous cell carcinoma patients showed an apparent decrease in Tob in cancer tissues, associated with smoking status. The phosphorylated form of Tob, an inactive form of Tob, was detected in 76% (16/21) of cancer tissues of adenocarcinoma patients, but not in normal alveolar epithelial cells. Either a decrease in Tob expression or an accumulation of phosphorylated Tob was observed from early clinical stages, even in bronchial dysplasia, a premalignant lesion of squamous cell carcinoma. The above findings suggest that the disruption of anti-proliferative Tob plays a distinct part in the early stage of lung carcinogenesis.     

肺癌细胞与血液细胞ERCC1基因的表达及其临床意义

目的 探讨铂类药物相关的切除修复交叉互补基因1（ERCC1） mRNA在不同病理组织学类型肺癌细胞及其对应患者血液细胞中的表达水平和临床意义。方法 收集105例肺癌标本石蜡组织及其对应的血液样本,其中腺癌73例,鳞状细胞癌22例,小细胞癌10例,利用实时荧光定量PCR技术检测肺癌石蜡组织和对应血液样本中ERCC1 mRNA的表达水平,分析其在肺癌不同病理组织学类型中的表达差异。结果105例肺癌石蜡组织中ERCC1 mRNA表达为4.579±1.926,对应的血样中为8.324±1.280,差异有统计学意义（P＜0.05）。ERCC1 mRNA在鳞状细胞癌、腺癌、小细胞癌中的表达分别为4.366±1.822、4.724±1.434和4.366±1.822,差异无统计学意义;在对应的血液细胞中表达分别为8.146±1.501、8.336±1.928和8.664±1.848,差异亦无统计学意义。3种病理组织学类型肺癌细胞ERCC1 mRNA表达水平与对应血液细胞相比,差异均有统计学意义（P＜0.05）。肺癌细胞和血液细胞中ERCC1 mRNA表达水平无相关性（r=0.329,P＞0.05）。结论 根据肺癌病理组织学类型选择铂类化疗并无指导意义,需要进一步进行ERCC1 mRNA的个体化检测,目前尚不能用血液细胞代替肿瘤组织细胞检测ERCC1 mRNA表达水平以评价铂类药物的疗效及毒副反应。     

Thymidine phosphorylase levels and dihydropyrimidine dehydrogenase levels in non-small cell lung cancer tissues

Thymidine phosphorylase (TP) and dihydropyrimidine dehydrogenase (DPD) are the major catabolic enzymes of 5-FU. In this study, we analyzed the concentration of TP and DPD in non-small cell lung cancer tissue by enzyme-linked immunosorbent assay. We measured the TP and DPD levels in 25 adenocarcinoma tissues and 25 squamous cell carcinoma tissues. The mean TP concentration in non-small cell lung cancer tissue was statistically higher than that of normal lung tissue as was the mean DPD concentration. The ratio of the TP level to DPD level in tumor tissue was higher in squamous cell carcinoma than in adenocarcinoma. No significant difference could be detected between the TP level, DPD level, or TP/DPD level and the tumor size or lymph node metastasis. In conclusion, chemotherapy with 5-FU may be more effective in squamous cell lung cancer patients than lung adenocarcinoma patients from the result of the ratio of TP to DPD.     

THE STUDY ON RELATIONSHIP BETWEEN CIGARETTE SMOKING AND THE p53 PROTEIN AND P21 PROTEIN EXPRESSION IN NON-SMALL LUNG CANCER

This paper discusses the relationship betweencigarette smoking and the p53 protein and P21 proteinexpression by the immunohistochemical analysis in 93cases with lung cancer in which squamous cell carcinomaaccounted for 45 cases, adenocarcinoma 48 cases. Theresults showed that positive proportion of p53 proteinexpression was 74.20% (28 of 37 squamous cell carcinoma,21 of 30 adenocarcinomas) in cigarette smoking groupwith lung cancers, and 38.46% (3 of 8 squamous cellcarcinoma, 7 of 18 adenocarcinomas) in nonsmokinggroup with lung cancers. The difference was statisticallysignificant. Odds ratio was 4.14 and confidence limitsfor OR was 1.42-12.52. A dose-related presents in thep53 protein expression for the smoking amount andsmoking years. The positive proportion of P21 proteinexpression was 79.31% (21 of 28 squamous cell carcinoma,25 of 30 adenocarcinomas) in cigarette smoking groupwith lung cancers, and 82.75%(10 of 11 squamous,14 of18 adenocarcinomas) in nonsmoking group with lungcancers, the difference     

Nanog在多种癌组织中的表达及临床意义

  目的   分析Nanog在非小细胞肺癌（NSCLC）、胃腺癌、食管鳞状细胞癌中的表达特点及规律,探讨Nanog的表达在肿瘤发生、发展中的意义及其与肿瘤干细胞的关系。   方法   采用实时荧光定量PCR法分别检测78例NSCLC及其中10例肺癌患者的癌旁组织、39例胃腺癌及其中10例胃腺癌患者的癌旁组织和35例食管鳞癌及其中10例食管鳞癌患者的癌旁组织中Nanog的相对表达情况。   结果   NSCLC、胃腺癌和食管鳞癌组织中Nanog相对表达量明显高于对应的癌旁组织,且肺癌和胃腺癌与其对应的癌旁组织之间差异具有统计学意义（P < 0.05）。肺癌中Nanog的相对表达量与患者的临床分期和肿瘤组织学类型有关（P < 0.05）;胃腺癌组织中,Nanog的相对表达量与胃腺癌的临床分期、性别有关（P < 0.05）;食管鳞癌组织中,Nanog的相对表达量与淋巴结转移、临床分期有关（P < 0.05）。   结论   在肿瘤进展过程中,Nanog的表达与肿瘤的临床分期和淋巴结转移有关,提示Nanog的表达在腺癌的发生、发展中可能具有一定意义。      

Immunohistological characterization of human monoclonal antibody against lung cancer

Using immunoperoxidase staining method, a human monoclonal antibody (MAb), termed HB4C5, which was generated by fusion of NAT-30 cells with regional lymph node lymphocytes from a lung cancer patient, was examined for tumor specificity. The determinant recognized by HB4C5 MAb was well preserved in usual formalin-fixed paraffin-embedded tissue sections. Experiments with four major histological types of the lung cancer showed that HB4C5 MAb reacted with adenocarcinoma (19/27), squamous cell carcinoma (2/15), and large cell carcinoma (4/6), but not with small cell carcinoma (0/7). The immunoreaction was seen in the cytoplasm. In addition, this MAb also reacted with some gastric and colon adenocarcinomas. Further study on normal lung and nonpulmonary tissues revealed that HB4C5 MAb bound only type II pneumocytes and proximal tubules of normal kidney.