CD4~+CD25~+调节性T细胞与肿瘤免疫的研究进展

CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)是一类具有免疫调节功能的T细胞亚群,可通过直接接触和细胞因子依赖等方式下调机体免疫反应,维持自身免疫耐受。近年来,Treg细胞已成为自身免疫、肿瘤免疫及移植免疫等领域的研究热点。本文就该类细胞的研究现状及其在肿瘤治疗方面的作用进行简要综述。     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在肿瘤免疫中的作用研究

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Treg）在自身免疫耐受、免疫自稳、肿瘤免疫中发挥着重要作用,它可以抑制自身抗原或者非自身抗原如肿瘤抗原引起的免疫反应.人们对Treg细胞的免疫抑制作用已进行了相关的研究和临床应用,最新研究表明其能够诱导肿瘤特异性抗原和局部的免疫反应.此综述将讨论Treg细胞的相关表面分子及其在肿瘤免疫逃逸机制、肿瘤免疫治疗中的研究进展.     

乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的分子表达研究

目的:分析乙型肝炎患者外周血Tregs水平并探讨其在HBV感染者中发病机制的作用.方法:采用流式细胞术检测不同类型乙型肝炎患者及健康对照组外周血Tregs的水平及应用荧光定量PCR技术测定其血清中HBvDNA载量.结果:①慢性乙型肝炎组(CHB)Tregs表达率较急性乙型肝炎组(AHB)有明显差异(P＜0.05),与无症状携带者组及健康对照组则有显著差异(P均＜0.01);②AHB组较健康对照组的稍低,但无统计学意义(P>0.05),且明显低于CHB组(P＜0.01);③无症状携带者组与健康对照组相比无显著差异(P＞0.05).④CHB组外周血HBVDNA载量较其他三组明显偏低(P＜0.01);AHB组与无症状携带者组、健康对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).⑤不同类型HBV感染患者外周血Tregs表达率与HBVDNA载量呈正相关.结论:①外周血Tregs表达的水平与乙肝患者病情轻重有一定关系,它在乙型肝炎持续感染中可能发挥了重要作用.②不同类型HBV感染患者外周血Tregs表达率与HBVDNA载量呈正相关.     

CD4+CD25+调节性T细胞/辅助性T细胞17在脓毒症大鼠中的作用

目的 观察CD4+ CD25+调节T细胞(Treg)/辅助性T细胞17(Th17)细胞在脓毒症大鼠炎性免疫反应中的作用.方法 110只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、脓毒症(CLP)组,采用改良的盲肠结扎穿孔术(CLP)制作大鼠脓毒症模型.采用流式细胞术检测CD14+单核细胞表面人类白细胞抗原-DR基因(HLA-DR)表达率、Treg细胞及TH17细胞比例;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素(IL)-6、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α、转化生长因子(TGF)-β、白细胞介素(IL)-17炎性因子蛋白表达.结果 与假手术组比较:(1)伴随着脓毒症病情的发展,大鼠出现明显的免疫抑制,CD14+单核细胞HLA-DR表达率＜30％,IL-10/TNF-α比值(27.41 ±7.04比6.63 ±2.60)明显增高(P＜0.01).(2)术后96 h脓毒症大鼠Treg细胞[(11.91±3.88)％比(6.57±2.60)％,P＜0.01]和Th17细胞[(5.14±0.29)％比(2.85±0.07)％,P＜0.01]表达明显增高.(3)术后96 h脓毒症组前炎性细胞因子IL-6[(42.31±15.89) ng/L比(6.32 ±3.18) ng/L,P＜0.01]、IL-10[(69.89 ±20.78) ng/L比(13.58±5.37) ng/L,P＜0.01]、TNF-α[(5.03±3.10) ng/L比(2.77±1.10) ng/L,P＜0.01]、TGF-β[(4.99±2.01) ng/L比(1.88±1.07) ng/L,P＜0.01]、IL-17[(92.77±11.64) ng/L比(7.58±2.30) ng/L,P＜0.01]表达明显增高.结论 伴随着脓毒症病情的发展,大鼠出现明显的免疫抑制;在大鼠脓毒症的发生发展中,Treg细胞介导的免疫抑制及Th17细胞介导免疫激活反应同时存在;脓毒症细胞因子微环境变化可能是导致Treg细胞/Th17细胞失衡的原因之一.     

雷公藤多苷对IgA肾病CD4＋CD25high调节性T细胞及Th1、Th2影响

目的：探讨CD4＋CD25high调节性T细胞（Treg）及辅助性T细胞亚群（Th1、Th2）比例失衡在IgA肾病（IgAN）免疫发病机制中的作用,以及使用雷公藤多苷（tripterygium wilfordii glycoside,TW）治疗后对IgAN 的 Treg、Th1、Th2及Th1/Th2的比例影响.方法：用流式细胞分析仪检测30例IgAN患者,使用雷公藤多苷治疗前后的外周血Treg、Th1、Th2及Th1/Th2的比例.并与健康对照组进行比较,两组间比较采用t检验.结果：IgA N患者外周血Treg的比例明显高于健康人（P＜0.01）;IgAN患者外周血中,Th2细胞比例显著高于健康对照组（P＜0.01）;IgAN患者Th1/Th2比值显著低于健康对照组（P＜0.01）.使用TW （1 mg·kg-1·d-1）治疗 IgAN 3个月后,可显著降低IgAN患者外周血Treg（P＜0.01）,但治疗后Treg仍高于健康对照组（P＜0.05）;显著降低Th2细胞比例（P＜0.05）,显著升高Th1/Th2比值（P＜0.01）;且治疗后IgAN的尿蛋白明显降低（P＜0.01）,血清白蛋白升高（P＜0.05）.结论：TW可改善IgAN患者体内存在T细胞亚群表达紊乱,对IgAN治疗具有一定作用.     

外源性IL-2对小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞影响的实验研究

目的：探讨IL-2对CD4＋CD25＋调节性T细胞（Tregs）的增殖及功能的影响。方法：提取B6小鼠脾脏细胞,流式细胞仪分离CD4＋CD25＋Tregs,将新鲜分离的CD4＋CD25＋Tregs与抗CD3单克隆抗体、同种同系抗原递呈细胞（APCs）及外源性IL-2共同培养,测定其增殖活性;并检测体外扩增后的CD4＋CD25＋Tregs的免疫抑制活性及其Foxp3的表达。结果：与外源性IL-2共同培养的CD4＋CD25＋Tregs增殖程度强烈,与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;体外扩增的CD4＋CD25＋Tregs抑制CD4＋CD25-T细胞增殖活性的能力与新鲜分离的CD4＋CD25＋Tregs相似（P〉0.05）。体外扩增的CD4＋CD25＋Tregs的Foxp3表达与新鲜分离的CD4＋CD25＋Tregs亦相似（P〉0.05）。结论：外源性IL-2能够消除CD4＋CD25＋Tregs的无反应状态,且体外扩增的CD4＋CD25＋Tregs保持了其抑制活性。     

小鼠天然CD4^＋CD25^＋调节性T细胞表达α7烟碱型乙酰胆碱受体

目的探讨C57BL／6J小鼠的天然CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（CD4^＋CD25^＋Treg）是否存在α7烟碱型乙酰胆碱受体（α7nAchR）。方法使用小鼠调节性T细胞试剂盒分离小鼠脾脏CD4^＋CD25^＋Treg,流式细胞术鉴定CD4^＋CD25^＋Treg的纯度。分别采用免疫荧光染色、共聚焦显微镜、Western印迹和逆转录聚合酶链反应检测Treg表面α7nAchR蛋白／基凶表达：结果α-银环蛇毒素-FITC染色、流式检测显示Treg细胞表面结合α-银环蛇毒素-FITC;共聚焦显微镜成像观察到Treg细胞表面结合大量α-银环蛇毒索;Western印迹检测证实Treg细胞样本中检测到了清楚的α7nAchR条带,分子量大小约为55kD;RT-PCR分析发现Treg细胞样本中检测到了199bp大小的特异性α7nAchR目的基因条带。结论小鼠天然CD4^＋CD25^＋Treg细胞表达α7nAChR。     

调节性CD4~+CD25~+T细胞的分离纯化及免疫功能研究

目的 制备调节性CD~+ CD25~+T细胞(Treg)分析其免疫功能,诱导局部免疫耐受防治同种异体复合组织移植(CTA)排斥反应.方法 采用免疫磁珠法(MACS)从雄性大鼠脾脏细胞分离CD4~+CD25~+Treg(1×10~6),2%锥虫蓝染色检测活性、流式细胞术分析其纯度,在5 mg/L抗CD3的刺激下观察其反应性、增殖及其与200 U/ml细胞介素(IL)-2的关系.结果 从8只雄性大鼠脾脏分选出的CD4~+CD25~+Treg活性平均为(97.90±0.36)%及纯度为(96.05±0.41)%,CD3刺激呈低反应,按比例培养抑制率为89%,IL-2可使CD4~+CD25~-抑制逆转.结论 MACS能快速分选出较高纯度的CD4~+CD25~+Treg,并且活性良好在体外具有免疫无能及免疫抑制作用,能满足动物CTA排斥反应研究的需要.     

胰十二指肠切除术对胰头癌患者CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的影响及临床意义

目的研究胰头癌患者外周血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Treg）比例及其在手术前、后的变化趋势。方法采用流式细胞仪检测胰头癌患者及正常对照组外周血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的数量,同时监测CD4^＋/CD8^＋比值,并进行手术前、后的比较。结果胰头癌患者术前外周血中CD4^＋CD25^＋和CD4＋CD25highTreg所占比例较正常对照组高（P〈0.05）,术后则出现不同程度下降,以术后第3天下降最明显（P〈0.01,P〈0.05）;胰头癌患者术后CA19-9水平低于术前,以术后第14天下降明显（P〈0.05）。CD4＋CD25highTreg与CA19-9的变化趋势大致相同。胰头癌患者术前CD4^＋/CD8^＋比值比正常对照组低（P〈0.05）,手术后进一步降低,于手术后第7天达最低（P〈0.05）。结论胰十二指肠切除术可能有助于机体抗肿瘤免疫的恢复,胰头癌患者围手术期可作为免疫干预的重要窗口期,CD4^＋CD25^＋调节性T细胞可作为免疫干预的靶点。     

CD4＋CD25＋调节性T细胞与Foxp3表达在白癜风发病中的作用

目的：研究CD4＋CD25＋调节性T细胞（CD4＋CD25＋Treg细胞）与Foxp3基因表达与白癜风发病的关系及可能机制。方法：以确诊为进展期白癜风且治疗显效的24例患者为研究对象,患者确诊符合白癜风诊断及疗效标准。以16例健康志愿者作为对照。应用流式细胞术检测正常对照、白癜风患者治疗前后各自外周血中CD4＋CD25＋调节性T细胞的比例。采用密度梯度离心法从治疗前后的外周血中提取单个核细胞,以逆转录聚合酶链扩增方法检测其中Foxp3 mRNA的表达水平。结果：进展期且治疗显效的24例白癜风患者外周血中CD4＋CD25＋调节性T细胞的比例以及CD4＋CD25＋调节性T细胞在总CD4＋T细胞中所占比例明显均低于正常对照组（P〈0．05）。治疗后显效的进展期白癜风患者CD4＋CD25＋调节性T细胞的比例与治疗前相比明显升高（P〈0．05）,CD4＋CD25＋调节性T细胞中Foxp3 mRNA的表达水平比治疗也前明显增加（P〈0．05）。结论：进展期白癜风患者体内存在CD4＋CD25＋调节性T细胞的异常,CD4＋CD25＋Treg细胞的数量的减少和Foxp3表达的降低所造成的CD4＋CD25＋Treg细胞免疫抑制功能爱损可能是白癜风发病的一个因素。     

肾移植患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的变化及临床意义

目的观察肾移植患者外周血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞水平的变化，探讨其在诊断移植肾急性排斥反应中的作用。方法采用流式细胞仪检测26例肾移植患者及30例正常对照组外周血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞水平。结果①慢性肾衰竭患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞水平与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。②非排斥组移植后1、2、4、8周CD4^＋CD25^＋调节性T细胞水平明显高于移植前（P〈0．01）。③急性排斥组排斥反应主要发生在术后第7～21d，其CD4^＋CD25^＋调节性T细胞水平明显低于同期的非排斥组（P〈0．01）。结论CD4^＋CD25^＋调节性T细胞水平的测定可以作为肾移植患者移植后急性排斥反应诊断和预测预后的重要指标。     

CD4^＋CD25^＋Treg细胞在移植免疫耐受的研究进展

CD4+CD25+Treg细胞是一类特殊的调节性T细胞,它具有免疫无能性和免疫抑制性两大功能特性,能通过多种机制诱导和维持免疫耐受,经过免疫磁珠分选后,能够在体外大量扩增,在器官移植领域有潜在的应用价值.     

原发性肝癌患者微环境中CD8+CD28-调节性T细胞表达变化及意义

目的：探讨原发性肝癌患者微环境中CD8+CD28-调节性T细胞(CD8+CD28-Treg)的表达变化及其意义。 方法：采用流式细胞检测技术对60例原发性肝癌患者及其50例健康患者的外周血中CD8+CD28-Treg进行检测,对于顺利手术切除的46例患者的肝癌组织及癌旁组织进行CD8+CD28-Treg的检测,再选取30例肝癌石蜡标本,检测其肝癌组织和癌旁组织中的CD8+CD28-Treg的表达。 结果：通过对肝癌组与健康对照组检测结果比较发现：CD8+CD28-Treg在原发性肝癌患者的外周血中测定值明显高于健康对照组[（15.55±3.14）% vs.（10.12±3.16）%],肝癌组织的CD8+CD28-Treg表达较癌周组织中的CD8+CD28-Treg表达增高[（19.34±3.12）% vs.（13.59±2.47）%],石蜡标本中肝癌组织CD8+CD28-Treg表达高于癌旁组织中CD8+CD28-Treg的表达[（13.58±2.46）% vs. （9.47±3.04）%],差异均有统计学意义（均P<0.05）。 结论：CD8+CD28-调节性T细胞在原发性肝癌患者的微环境中表达明显增加,其可能在机体对原发性肝癌的免疫应答中有重要的意义。     

动脉粥样硬化患者外周血CD4 T 细胞及CD4+CD25highCD127- 调节性T 细胞的变化

目的：探讨动脉粥样硬化（AS）患者外周血CD4 T细胞及调节性T细胞（CD4+CD25highCD127- Treg）比例及功能的变化。 方法：选择AS患者（AS组）及健康体检者（健康对照组）各40例,抽取外周静脉血,用流式细胞术测定CD4 T细胞、CD8 T细胞、IFN-γ+ CD4 T细胞、IFN-α+ CD4 T细胞和CD4+CD25highCD127- Treg细胞比例,以及各自的CD4+CD25highCD127- Treg细胞与CD4 T细胞共培养后,CD4 T细胞增殖能力以及CD4 T细胞分泌炎症因子能力的变化。 结果：与健康对照组比较,AS组外周血CD4 T细胞比例及CD4 T/CD8 T比值明显升高、IFN-γ+ CD4 T及IFN-α+ CD4 T细胞比例明显升高（均P<0.05）,而CD8 T细胞比例与CD4+CD25highCD127- Treg细胞比例差异无统计学意义（均P>0.05）。健康对照组CD4 T细胞的增殖能力、IFN-γ及IFN-α分泌能力在与CD4+CD25highCD127- Treg细胞共培养后较其单独培养均明显降低（均P<0.05）,而AS组CD4 T细胞的以上指标在与CD4+CD25highCD127- Treg细胞共培与单独培养间差异均无统计学意义（均P>0.05）。 结论：AS患者外周血CD4+CD25highCD127- Treg细胞功能的丧失,导致外周血CD4 T细胞比例升高、分泌炎症因子能力增强,从而引发AS的炎症状态。     

肝癌患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞的变化及其意义

目的 探讨应用流式细胞术检测肝癌患者外周血中CD4~+CD25~+调节性T细胞的变化及意义.方法 应用三色免疫荧光流式细胞仪测定37例肝癌患者及30例肝硬化患者外周血T细胞亚群CD4~+CD25~+/CD~+比值.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测外周血中转化生长因子β1(TGF-B1)的表达水平.结果 肝癌患者外周血CD4~+CD25~+/CD4~+比值较肝硬化患者显著增高,两者比较差异有统计学意义(P<0.05);肝癌患者外周血中CD4~+CD25~+T细胞水平与肝癌原发肿瘤的大小、TGF-βl呈正相关(P<0.05).结论 肝癌患者外周血中CD4~+CD25~+调节性T细胞增多,对肝癌患者具有免疫抑制作用.     

不明原因复发性流产机制中Th17细胞和CD4~+CD25~+调节性T细胞的研究进展

复发性自然流产(RSA)发病原因有多种,约有一半以上的患者发病原因不明,称之为不明原因复发性流产(URSA)。URSA与母胎免疫耐受失衡有着密切的关系。辅助性T细胞17(Th17细胞)和CD4~+CD25~+调节性T细胞(Treg细胞)是近年来新发现的免疫调节细胞。Th17细胞有很强的促炎性作用,可引起多种自身免疫性疾病。Treg细胞则有很强的免疫抑制作用,通过维持自身免疫耐受和控制自身激活的CD4~+T细胞的增殖而抑制免疫疾病的发展。在正常情况下,Th17细胞与Treg细胞的相互作用使机体效应和抑制处于一种微妙而复杂的状态。维持孕妇机体Th17/Treg平衡,对成功妊娠的维持起着重要作用。目前越来越多的研究显示,造成URSA的主要原因是由于免疫耐受遭到破坏,但其具体机制需进一步研究和探讨。本文对Th17细胞和Treg细胞在URSA流产机制中的研究进展进行综述。     

胃癌患者手术前后CD4+CD25+调节性T细胞的变化

目的 研究胃癌患者手术前、后调节性T细胞(Treg)及FoxP3表达的变化.方法 采用流式细胞术检测20例胃癌患者术前及其中15例接受了手术者术后1周(简称术后)以及15例因胃部不适接受胃镜检查的自愿者(正常对照组)外周血中Treg数量的变化,用RT-PCR法检测Treg的特异性分子标志物FoxP3的转录水平,同时用免疫组织化学法检测胃癌组织中FoxP3蛋白的表达情况.结果 胃癌患者术前外周血中CD4+T细胞中的CD4+ CD25+比例明显高于正常对照组[(19.39±5.58)%比(9.91±3.23)%,P＜0.01],而术后CD4+ CD25+比例较术前明显下降[(13.50±5.93)%比(19.39±5.58)%,P＜0.05].胃癌患者术前外周血中FoxP3转录水平明显高于正常对照组(0.86±0.03比0.64±0.02,P＜0.01),而术后较术前明显下降(0.73±0.04比0.86±0.03,P＜0.05),提示FoxP3转录水平与Treg变化一致.胃癌患者外周血中CD4+T细胞在单个核细胞中的比例与正常对照组相比明显下降(P＜0.01),而手术前、后变化不明显.20例胃癌患者中13例胃癌癌细胞的细胞浆中有不同程度的FoxP3蛋白表达(强阳性2例,中阳性6例,弱阳性5例),7例胃癌患者的胃癌细胞中不表达.结论 Treg可能通过免疫抑制作用在胃癌的发生、发展中发挥作用,肿瘤组织本身可能是引起Treg变化的重要始动因素.     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在维持小鼠肝脏移植自发性免疫耐受状态中的作用

目的 探讨CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在维持小鼠肝脏移植免疫耐受状态中的作用。方法 进行小鼠原位肝脏移植,诱导出移植免疫耐受后,向受体注射抗CD25抗体（PC61）以去除CD4^＋CD25^＋T细胞,检测受体内CD4^＋CD25^＋T细胞数量及叉状头／翅膀状螺旋转录因子（Foxp3）的表达以确定CD4^＋CD25^＋T细胞完全被清除,同时观察受体生存时间。结果与同种同系小鼠肝脏移植结果相似,同种异系肝脏移植小鼠的生存时间亦均超过70d。移植免疫耐受诱导后,PC61不同注射方案均能完全去除受体小鼠肝脏、脾脏及血液中的CD4^＋CD25^＋T细胞,且移植肝脏中Foxp3mRNA的表达也明显降低,表明完全去除了CD4^＋CD25。调节性T细胞,但肝脏移植动物生存时间并未受到影响。结论CD4^＋CD25^＋调节性T细胞对于小鼠肝脏移植自发性免疫耐受的维持并非必需。     

肾移植受者外周血辅助性T淋巴细胞17、调节性T细胞表达及其平衡关系的研究

目的 探讨肾移植慢性排斥反应(CR)患者外周血辅助性T淋巴细胞(T helper,Th)17、调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)、Th17/Treg变化及意义.方法 采用流式细胞术检测24例肾移植CR患者(CR组)和22名健康志愿者(正常对照组)外周血中的Th 17占CD4+T淋巴细胞的比例...     

前列腺癌患者外周血中CD4^＋CD25^high调节性T细胞及调节因子TGF-β1和COX-2的表达

目的：通过检测前列腺癌患者以及健康志愿者外周血中CD4＋CD25high调节性T细胞、TGF-β1及COX-2的表达,初步探讨CD4＋CD25high调节性T细胞在前列腺癌发病机制中的作用及其与TGF-β1和COX-2的相关性。方法：应用流式细胞术检测30例前列腺癌患者治疗前后（其中前列腺癌局限组11例,非局限组19例）及20例健康志愿者外周血单个核细胞（PBMC）中CD4＋CD25high调节性T细胞占CD4＋T细胞的比例;应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测其外周血清中TGF-β1和COX-2的表达。对前列腺癌患者上述指标进行术前术后对比分析,另对CD4＋CD25high调节性T细胞与TGF-β1及COX-2的相关性进行分析;并探讨上述指标在前列腺癌患者局限组和非局限组间是否存在差异性。结果：流式细胞术检测显示,前列腺癌患者治疗前PBMC中CD4＋CD25high调节性T细胞占CD4＋T细胞的比例为（18.32±7.49）%,高于健康志愿者对照组（7.77±1.86）%（P〈0.05）。前列腺癌患者治疗后其比值为（17.34±5.87）%,较治疗前稍减低,但两者相比无显著差异（P〉0.05）。ELISA检测外周血清中TGF-β1和COX-2显示,前列腺癌组分别为（215.97±55.16）ng/ml和（6.88±5.14）ng/ml,对照组分别为（149.75±47.11）ng/ml和（5.65±2.69）ng/ml;前列腺癌患者外周血清中TGF-β1的表达水平高于健康志愿者对照组（P〈0.05）,COX-2的表达水平与对照组无显著差异（P〉0.05）。通过多重线性回归分析表明,前列腺癌患者PBMC中CD4＋CD25high调节性T细胞的表达与血清中TGF-β1和COX-2的表达无显著相关。前列腺癌局限组和非局限组外周血中CD4＋CD25high调节性T细胞、TGF-β1及COX-2的表达均无显著性差异（P〉0.05）。结论：前列腺癌患者PBMC中CD4＋CD25high调节性T细胞可能参与前列腺癌的发生,其增殖机制与血清中TGF-β1和COX-2的表达无关,可能与肿瘤本身及肿瘤局部微环境相关。