芦荟多糖对体外培养表皮细胞增殖活性及细胞内钙水平的影响

目的:研究芦荟多糖对体外培养人表皮细胞增殖活性及细胞内钙离子水平的影响。方法:在表皮细胞培养液中加入不同浓度芦荟多糖(25,50,100,200,400mg.L-1),应用细胞计数、四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察细胞增殖情况,采用Fura-2钙荧光指示剂测定细胞内钙离子浓度。结果:芦荟多糖作用2d后,100mg.L-1以上芦荟多糖组表皮细胞增殖明显增快(P<0.01),并呈剂量依赖性;与对照组比较,200mg.L-1和400mg.L-1芦荟多糖组表皮细胞内钙离子浓度显著性升高(P<0.05)。结论:芦荟多糖可能是通过调节细胞内钙离子浓度发挥其促进增殖作用。     

桑黄多糖P1对肝癌HepG2细胞周期和钙调蛋白信号通路的影响

目的探讨桑黄多糖P1抑制人源性肝癌Hep G2细胞增殖的作用机制。方法桑黄多糖P16.25~200 mg·L-1与Hep G2细胞作用48 h,MTT法检测细胞存活率。桑黄多糖P1 100和200 mg·L-1与Hep G2细胞作用48 h,流式细胞术检测细胞周期和凋亡;荧光分光光度法测定细胞内Ca2+浓度;实时荧光定量PCR检测细胞内钙调蛋白(Ca M)、钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca MKⅡ)、表皮生长因子(EGF)及其受体(EGFR)、K-ras和c-fos基因表达;Western蛋白质印迹法检测细胞内Ca MKⅡ和Kras蛋白表达。结果桑黄多糖P1对Hep G2细胞存活的抑制率随药物浓度的增大而显著提高,100和200 mg·L-1时抑制率高达44.0%和61.3%。桑黄多糖P1 200 mg·L-1处理48 h S期细胞百分含量明显升高,由对照组的(23.3±3.4)%升高至(37.8±2.2)%(P<0.01),而G2/M期细胞百分含量明显降低,由对照组的(15.3±1.2)%降至(3.4±1.9)%(P<0.01);细胞凋亡率无明显变化。与对照组相比,桑黄多糖P1 100和200 mg·L-1处理48 h后Ca M,Ca MKⅡ,EGF,EGFR,K-ras和c-fos mRNA水平显著下降(P<0.01);Western蛋白质印迹检测结果显示,桑黄多糖P1作用48 h后Hep G2细胞内Ca MKⅡ和K-ras蛋白水平与对照组相比显著下降(P<0.01)。桑黄多糖P1 200 mg·L-1处理细胞后,细胞内Ca2+荧光强度显著升高,0~20 min内分别由951增至1430(P<0.01),而对照组一直维持在1150左右。结论桑黄多糖P1可能通过提高细胞内Ca2+浓度以及下调Ca M,Ca MKⅡ,EGF,EGFR,K-ras和c-fos基因的表达,诱导Hep G2细胞S期阻滞,从而抑制Hep G2细胞增殖。     

枸杞多糖对氧糖剥夺再灌注损伤后大鼠海马神经元的保护作用

目的研究并探讨枸杞多糖对原代培养新生大鼠海马神经元氧糖剥夺再灌注损伤的保护作用。方法以原代培养的新生大鼠海马神经元为研究对象建立氧糖剥夺再灌注损伤模型。MTT法测定神经细胞的存活率,分光光度计检测乳酸脱羟酶(LDH)漏出率、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)含量,激光共聚焦显微镜(CLSM)测定海马神经元内Ca2+浓度和线粒体膜电位水平(MMP)。结果与氧糖剥夺再灌注损伤组比较,枸杞多糖10,20和40 mg·L-1可显著提高细胞存活率(P<0.01),降低乳酸脱氢酶漏出率(P<0.05),升高SOD和GSH-Px活性(P<0.01),降低MDA含量(P<0.05),抑制Ca2+浓度升高(P<0.05),枸杞多糖20和40 mg·L-1能显著降低线粒体膜电位水平(P<0.01)。结论枸杞多糖对海马神经元氧糖剥夺再灌注损伤具有明显保护作用。     

硒化壳聚糖促进体外培养皮肤成纤维细胞增殖

目的研究硒化壳聚糖对体外培养的皮肤成纤维细胞增殖的影响。方法用不同剂量（25、50、100、200、400mg/L）硒化壳聚糖作用于成纤维细胞,光镜下观察药物对细胞形态的影响;MTT法、3H-TdR掺入法、细胞生长动力学研究用于检测药物对细胞增殖影响,LDH漏出率检测药物对细胞增殖及损伤的影响,并以等体积细胞培养液处理为对照组。结果各药物浓度组处理细胞后,细胞形态未见明显改变,均可使细胞吸光度值增加,细胞倍增时间缩短,促进表皮细胞对3H-TdR的掺入（P〈0.05）,降低LDH漏出率（P〈0.05）。结论硒化壳聚糖对体外培养皮肤成纤维细胞增殖具有促进作用。     

山茱萸多糖对胃癌细胞增殖和凋亡的机制

目的探讨山茱萸多糖对胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法用不同剂量山茱萸多糖灌胃接种AGS细胞的裸鼠,检测裸鼠体内肿瘤体积;TUNEL法检测细胞凋亡指数;胃癌细胞AGS分为对照组、山茱萸多糖低、中、高剂量组、si-NC组、si-ELF3-AS1组、山茱萸多糖+pcDNA组、山茱萸多糖+pcDNA-ELF3-AS1组。MTT检测细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡;RT-qPCR检测lncRNA ELF3-AS1表达水平。结果山茱萸多糖处理的裸鼠体内移植瘤体积减少,细胞凋亡指数升高(P<0.05)。山茱萸多糖处理胃癌细胞AGS后,细胞增殖抑制率升高,凋亡率升高,ELF3-AS1表达水平降低,且呈剂量依赖性(P<0.05)。胃癌细胞AGS中ELF3-AS1表达水平升高(P<0.05)。抑制ELF3-AS1表达后,细胞增殖抑制率升高,凋亡率升高(P<0.05)。ELF3-AS1过表达逆转了山茱萸多糖对胃癌AGS细胞增殖和凋亡的作用。结论山茱萸多糖可能通过下调ELF3-AS1抑制胃癌AGS细胞增殖,促进AGS细胞凋亡。     

猪苓多糖对膀胱癌细胞钙离子浓度的影响

目的　观察猪苓多糖对人T2 4膀胱癌细胞内钙离子 (Ca2 )浓度的影响 ,探讨猪苓多糖抗癌机理。方法　体外培养人T2 4细胞经钙荧光指示剂 (calciumcrimson AM )负载后 ,用激光扫描共聚焦显微镜测定猪苓多糖作用前后细胞内Ca2 随时间的变化。结果　猪苓多糖低剂量 (0 .2mg·L- 1)使T2 4细胞内Ca2 降低 ,高剂量 (>1mg·L- 1)使T2 4细胞内Ca2 升高 ,最后维持在高钙水平上。猪苓多糖主要促进细胞核内Ca2 升高 ,细胞浆Ca2 无明显改变。结论　猪苓多糖可引起T2 4细胞内Ca2 水平的显著变化 ,而且这种变化主要表现在细胞核内 ,提示猪苓多糖可能有诱导细胞凋亡的作用     

红车轴草总黄酮对H_2O_2诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用

目的观察红车轴草总黄酮对H2O2诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法利用体外培养的人脐静脉血管内皮细胞ECV-304,采用H2O2诱导细胞损伤模型,观察红车轴草总黄酮对H2O2所致的血管内皮细胞损伤的保护作用。MTT法检测细胞存活率、试剂盒测定细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及细胞中丙二醛(MDA)的含量、乳酸脱氢酶(LDH)的漏出量;荧光法检测Caspase-3的活性;Hoechst33342及PI荧光染色法观察红车轴草总黄酮对H2O2诱导血管内皮细胞凋亡的影响;JC-1染色法检测红车轴草总黄酮对H2O2损伤血管内皮细胞线粒体膜电位的影响,检测各组细胞内ROS的表达水平。结果与空白对照组相比,H2O2损伤组细胞存活率降低、细胞内LDH,漏出量增加(P<0.001);抗氧化酶SOD、CAT、GSH-Px活性降低、MDA含量升高(P<0.01);Caspase-3活性升高(P<0.001)、ROS含量升高、线粒体膜电位降低;与模型组相比,红车轴草总黄酮各剂量组(12.5、25、50mg.L-1)及槲皮素组(30 mg.L-1)细胞存活率明显增加(P<0.01,P<0.05),红车轴草总黄酮各剂量组(12.5、25、50 mg.L-1)及槲皮素组(30 mg.L-1)均能明显降低LDH漏出量(P<0.01,P<0.05)、明显增强SOD、CAT及GSH-Px活力(P<0.01,P<0.05)、降低MDA、ROS含量及Caspase-3活性(P<0.05,P<0.01)、升高线粒体膜电位(P<0.01)。结论红车轴草总黄酮对H2O2诱导的内皮细胞损伤有明显的保护作用,其初步作用机制可能与抗自由基,减轻脂质过氧化、降低Caspase-3活性及稳定线粒体膜电位有关。     

硫化氢对人胚肺成纤维细胞缺氧后增殖活力及细胞凋亡的影响

目的探讨内源性及外源性硫化氢(H2S)对缺氧诱导下人胚肺成纤维细胞增殖效应及凋亡率的影响。方法以2%O2-93%N2-5%CO2体外培养人胚肺成纤维细胞24h,制备细胞缺氧模型。细胞培养分为6组:①缺氧(N2)组;②N2+600μmol.L-1NaHS组;③N2+1200μmol.L-1NaHS组;④N2+6400μmol.L-1NaHS组;⑤N2+400μmol.L-1L-半胱氨酸(Cys)组;⑥N2+200μmol.L-1S-腺苷甲硫氨酸(SAM)组。各组细胞24h缺氧培养后,采用MTT法和流式细胞术分别检测细胞增殖活力和细胞凋亡率。结果与N2组相比,600和1200μmol.L-1NaHS(H2S供体)可降低缺氧后人胚肺成纤维细胞的增殖活力(P<0.01),但对细胞凋亡率无影响(P>0.05);而6400μmol.L-1NaHS虽然不影响细胞缺氧后的增殖活力(P>0.05),但却增加其凋亡率(P<0.05);胱硫醚-β-合酶(H2S合成酶)底物Cys和激动剂SAM对缺氧后人胚肺成纤维细胞增殖活力无影响(P>0.05);但它们却使缺氧后人胚肺成纤维细胞凋亡率高于N2组(P<0.05)。结论内源性及外源性H2S可降低缺氧诱导的人胚肺成纤维细胞增殖活力、促进细胞凋亡,提示内源性H2S还可能通过肺成纤维细胞,抑制缺氧导致的肺血管结构重建发挥其保护作用。     

糖皮质激素促进β-淀粉样蛋白对海马神经元损伤的研究

目的在体外实验条件下,观察糖皮质激素是否促进β-淀粉样蛋白的神经元毒性作用。方法通过LDH释放率法检测细胞活力、TUNEL法测细胞凋亡以及LSCM测胞内Ca2 浓度的变化。结果单独的地塞米松(10-8,10-7,10-6mol.L-1)组或Aβ25-35(0.5μmol.L-1)组分别作用海马神经元后,细胞活力变化不明显(P>0.05);但与同剂量的DEX、Aβ25-35组相比,DEX Aβ25-35组的细胞活力明显降低(P<0.05),同时胞内Ca2 显著上升(P<0.05),神经元的凋亡率增加明显,细胞内出现凋亡的典型形态学特征。结论糖皮质激素可能通过促进Aβ引起海马神经元胞内Ca2 升高增加神经元毒性作用。     

受磷蛋白磷酸化位点Ser16在心肌缺氧预适应中的作用

目的探讨由蛋白激酶A(PKA)介导的受磷蛋白磷酸化位点16-丝氨酸(PLB-Ser16)在缺氧预适应中对心肌细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的调控作用。方法体外培养的乳鼠心肌细胞随机分成四组:正常培养(C)组,缺氧-复氧损伤(H-R)组、缺氧预适应(HP)组和H-89干预(H-89)组。检测各组细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)、[Ca2+]i和细胞凋亡率。用免疫印迹法和放射自显影法测定PLB的蛋白表达和磷酸化水平。结果 H-R组的LDH值、[Ca2+]i及细胞凋亡指数均显著高于C组和HP组(P<0.05);H-R组PLB的蛋白表达和磷酸化水平较C组均降低(P<0.05),HP组较C组增加(P<0.05);H-89组的LDH值、胞内钙荧光强度值及细胞凋亡指数均较HP组明显升高(P<0.05),而PLB的蛋白表达和磷酸化水平显著下调(P<0.05)。结论缺氧预适应对心肌细胞缺氧-复氧损伤的保护作用可能与PLB磷酸化水平上调有关;PKA抑制剂H-89可降低这种心肌保护作用。     

牛耳枫生物碱F21对HepG-2细胞的抑制作用及机制

目的探讨牛耳枫生物碱F21对HepG-2增殖的影响及抗肿瘤作用机制。方法 F21 6.25～100 mg.L-1作用24,48和72 h,MTT法检测细胞抑制率并计算IC50。F21 10～100 mg.L-1作用48 h,瑞姬氏染色光学显微镜下观察细胞形态,琼脂糖凝胶电泳观察DNA的梯形条带,流式细胞仪检测细胞凋亡。F2110,30 mg.L-1+Z-VAD-FMK(胱天蛋白酶抑制剂)20μmol·L-1作用48 h,MTT法检测抑制率。结果 F21可明显抑制HepG-2细胞增殖,其于24,48和72 h的IC50值分别为5.3±0.1,1.3±0.1和(0.13±0.1)mg.L-1,且具有量效(F=232.39,P<0.05)和时效(F=65.59,P<0.05)关系。F21 10～30 mg.L-1可使HepG-2细胞体积增大、胞质内细胞核周围出现大量空泡、细胞膜完整、细胞核破碎甚至细胞形态消失。琼脂糖凝胶电泳未观察到典型的凋亡细胞DNA梯形条带。流式细胞术分析显示,与正常对照组比较,F21 10,30和100 mg.L-1处理HepG-2细胞48 h后,晚期凋亡率分别(17.34±0.01)%,(25.45±0.01)%和(43.67±0.03)%(P<0.05)。Z-VAD-FMK可明显抑制星形孢菌素诱导的细胞死亡。F21 10和30 mg.L-1组的增殖抑制率分别为(18.42±0.09)%和(42.77±0.01)%,而F21 10,30 mg.L-1+Z-VAD-FMK组的增殖抑制率分别为(16.46±0.01)%和(44.01±0.01)%,与相应的F21组相比无统计学差异。结论 F21在体外对HepG-2细胞具有显著的抑制作用,其作用机制并非通过激活胱天蛋白酶途径而诱导肿瘤细胞的凋亡。     

氟哌啶醇季铵盐衍生物对血管平滑肌细胞钙离子的影响

目的　研究氟哌啶醇季铵盐衍生物 (F2 )对大鼠胸主动脉平滑肌细胞内钙离子荧光强度的影响。方法　用Ca2 +荧光染料Fluo 3 AM负载细胞 ,在激光扫描共聚焦显微镜上测定细胞内游离钙的变化。结果　在含氯化钙 (1 2 6mmol·L-1)的细胞外液中 ,30mmol·L-1KCl使细胞内钙荧光强度迅速增强 ,4种浓度F2 (0 1、1、10、10 0 μmol·L-1)作用 3min时 ,使KCl诱导细胞内钙荧光强度分别降至 6 4%± 9% ,(n=16 ,P <0 0 5 )、16 %± 5 % ,(n =2 0 ,P <0 0 1)、0 6 %±0 8% ,(n =2 0 ,P <0 0 1)、0 1%± 0 3 % ,(n =15 ,P <0 0 1) ,呈量效依赖关系。结论　F2 通过阻断细胞膜电压依赖性钙通道降低平滑肌细胞内钙浓度     

吗啡抑制人外周血TNF-α和IL-6的表达的研究

目的：研究吗啡对人外周血中肿瘤坏死因子－α（TNF-α）和白细胞介素－6（IL－6）含量的影响，探讨其对免疫炎症反应的可能机制。方法：全血收集在试管内，分装在EP管中，每管取100μl全血。实验分为吗啡200mg.L^-1组（A1组）、吗啡2mg.L^-1组（A2组）、吗啡200mg.L^-1＋脂多糖（LPS）（B1组）、吗啡2mg.L^-1组＋LPS（B2组）、对照组（C1组）和LPS组（C2组）共6组（n=7）。各组加入上述试剂，用PBS补齐体积后，在37℃下孵育6h。用ELISA检测血清中TNF－α和IL－6含量。结果：单独药物组（A1和A2组）TNF－α的浓度分别为240和251ng.L^-1与空白对照组（C1组，TNF－α的浓度为279ng.L^-1）比较，无显的统计学意义（P＞0．05）；IL－6的浓度分别为444、490和561ng.L^-1，亦无统计学意义（P＞0．05），激活组（B1和B2组）和LPS组（C2组）分别为490、534和1226ng.L^-1（TNF－α）；1177、1310和1563ng.L^-1（IL－6）。且B1组低于B2组。结论：吗啡对静息状态下TNF－α的表达无影响，但可抑制LPS诱导的TNF－α表达，且高剂量的吗啡对LPS诱导的TNF－α的抑制作用大于低剂量吗啡的作用。     

牛磺酸抗脂质过氧化作用与调节Ca~（2＋）作用

在培养心肌细胞缺氧－再给氧模型上，发现牛磺酸（２０ｍｍｏｌ·Ｌ－１，终浓度）能显著降低细胞内脂质过氧化物（ＬＰＯ）荧光强度；剂量依赖性地提高心肌细胞超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性；以荧光比率法（荧光探针为Ｉｎｄｏ－１－ＡＭ）在粘附式细胞仪（ＡＣＡＳ５７０）上测定细胞内游离Ｃａ２＋荧光比率，结果显示缺氧及再给氧后细胞内Ｃａ２＋荧光比率明显升高，２０ｍｍｏｌ·Ｌ－１牛磺酸能显著减少Ｃａ２＋荧光比率；分别以２０ｍｍｏｌ·Ｌ－１、０．４ｍｍｏｌ·Ｌ－１Ｃａ２＋及０．１ｍｍｏｌ·Ｌ－１维拉帕米处理细胞，牛磺酸能降低高Ｃａ２＋引起的细胞搏动加快；而提高低Ｃａ２＋及维拉帕米处理后的细胞搏动。提示牛磺酸对培养心肌细胞再给氧损伤有保护作用，其机理与其提高心肌细胞ＳＯＤ活性、降低细胞内游离Ｃａ２＋浓度及对细胞Ｃａ２＋双向调节作用有关。     

熊果酸抑制P-糖蛋白外排功能

目的研究女贞子中的熊果酸对P-糖蛋白（P-gp）功能的影响。方法用环孢素A作为P-糖蛋白功能抑制的阳性对照,用流式细胞术分析熊果酸对P-糖蛋白底物——罗丹明123在Caco-2细胞中外排的影响。结果当熊果酸浓度在0.01μmol.L-1时,实验组细胞内荧光与阴性对照组间无显著性差异（P〉0.05）;当熊果酸浓度在0.1～1μmol.L-1时,实验组细胞内荧光强度显著强于阴性对照组（P〈0.05）,并随熊果酸浓度的增高而增强;当熊果酸浓度为10μmol.L-1时,实验组细胞内荧光强度却表现为减弱,并且显著弱于阴性对照组（P〈0.05）,其原因有待后续实验探讨。结论在低浓度时（0.01μmol.L-1）,熊果酸对P-gp的功能没有影响;当熊果酸浓度在0.1～1μmol.L-1时,熊果酸对P-gp的功能有抑制作用。     

阿来替尼抑制神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞糖酵解

目的观察阿来替尼对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞糖酵解的作用。方法培养SH-SY5Y细胞分为对照组及1.25、2.5、5、10和20μmol·L^-1阿来替尼组,MTT法检测细胞增殖活性变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,检测ALK表达正常和敲低的SH-SY5Y细胞乳酸产量变化;检测5μmol·L^-1阿来替尼对SH-SY5Y细胞糖酵解活性改变;Western blot法检测乳酸脱氢酶A(LDH-A)的表达。结果与对照组比较,1.25、2.5、5、10、20μmol·L^-1阿来替尼组SH-SY5Y细胞增殖率显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著增加(P <0.05);细胞内乳酸含量显著降低(P <0.05),且不依赖于ALK表达。5μmol·L^-1阿来替尼组SH-SY5Y细胞基础糖酵解活性值及最大糖酵解活性值相较于对照组显著下调(P <0.05)。与对照组相比,1.25、2.5、5和10μmol·L^-1阿来替尼组SH-SY5Y细胞LDH-A表达均显著下调(P <0.05)。结论阿来替尼抑制SH-SY5Y细胞增殖、诱导其凋亡,其机制可能与降低SH-SY5Y细胞糖酵解活性,抑制LDH-A表达有关。     

榄香烯抑制表皮生长因子诱导的晶状体上皮细胞增殖的信号转导机制

目的：研究榄香烯（elenene，Ele）抑制重组人表皮生长因子（recombinant human epidermal growth factor，rhEGF）诱导的晶状体上皮细胞（lens epithelium cell，LEC）增殖时对细胞内钙（Ca^2＋）、环磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate，cAMP）、环磷酸鸟苷（cyclic guanosine monophosphate，cGMP）的影响，探讨其抑制增殖的细胞信号转导机制。方法：采用rhEGF诱导LEC增殖后，用荧光分光光度法检测LEC内钙离子浓度（[Ca^2＋]i）、放射免疫分析法检测LEC内cAMP和cGMP含量，探讨Ele的影响。结果：（1）Ele组LEC内[Ca^2＋]i；比增殖组显著增高（P〈0．01）；（2）增殖组LEC内cAMP浓度比对照组明显下降、cGMP浓度比对照组明显升高（P〈0．01）；（3）Ele组LEC内cAMP浓度比增殖组显著升高、cGMP浓度比增殖组显著降低（P〈0．01）。结论：Ele抑制LEC增殖的作用是通过细胞内[Ca^2＋]i、cAMP和cGMP信号系统及多条信号转导途径的相互作用实现的，这可能是Ele抑制LEC增殖、防治后发性白内障的细胞和分子生物学机制。     

尾加压素Ⅱ对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的研究体内新发现的缩血管活性肽尾加压素Ⅱ（ｕｒｏｔｅｎｓｉｎ Ⅱ, Ｕ Ⅱ）对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖作用的影响以及ＵⅡ作用的细胞内信号转导机制。方法在培养的大鼠主动脉平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）上,采用［３Ｈ］－胸腺嘧啶（［３Ｈ］－ＴｄＲ）参入法,观察 ＵⅡ对细胞 ＤＮＡ合成的刺激作用;加入不同的细胞内信号转导阻断剂,观察对ＵⅡ效应的影响。结果 Ｉ× １０－９～ １× １０－７ ｍｏｌ·Ｌ－１ ＵⅡ以浓度依赖方式促进 ＡＳＭＣ［３Ｈ］－ＴｄＲ参入增加, １× １０－９、１× １０－８和 １×１０－７ｍｏｌ·Ｌ－１ＵⅡ组［３Ｈ］－ＴｄＲ参入量分别较对照组增加２２％（Ｐ＜０．０５）,５７％（Ｐ＜０,０１）和６５％（Ｐ＜０．０１）。ＵⅡ的效应能被钙通道阻断剂尼卡地平、ＰＫＣ阻断剂Ｈ７、钙调素激酶（ＣａＭ－ＰＫ）阻断剂 Ｗ７和 ＭＡＰＫ阻断剂 ＰＤ９８０５９所阻断,抑制率分别为５５％（Ｐ＜０．０１）,２７％（Ｐ＜０．０１）,１８％（Ｐ＜０．０５）和１６％（Ｐ＜０．０５）。结论 ＵⅡ是一种新发现的强烈的促ＡＳＭＣ增生的内源性丝裂原,其促丝裂效应可能通过Ｃａ２＋、ＰＫＣ、ＣａＭ－ＰＫ和ＭＡＰＫ来介导。     

Antiangiogenic effect of berberineα-hydroxy-δ-decanoylethyl sulfonate on Lewis lung carcinoma

OBJECTIVE To investigate the antiangiogenic and antitumor effects of berberineα-hydroxy-δ-decanoylethyl sulfonate(HB)in vitro and in vivo.METHODS MTT assay was employed to determine the proliferation of tumor cells.Western blot analysis was used to detect the expression of VEGF and MMP-9.Transwell co-culture was used to determine the cell migration at the conditioned medium of Lewis lung carcinoma cells exposed to HB for 24 h.The C57BL/6 mice bearing Lewis lung carcinomas were treated with vehicle,different doses of HB(60,90 and 120mg·kg-1,ig)for 20 d,or cyclophosphamide(50mg·kg-1,ig)at d 1,d 8 and d 15.Afterwards,the xenografted tumors were exercised and weighed,and the lung metastasis was determined by HE stainingof the lung tissues.Tumor angiogenesis was determined by CD34 staining and microvessel density(MVD)by immunohistochemistry.RESULTSHB inhibited the growth of Lewis lung carcinoma cells in a time-dependent manner with IC50 value of 8.87,2.26 and 0.98mg·L-1,respectively when the cells were treated with HB for 24,48 and 72h.Cell migration induced by the conditioned medium of Lewis lung carcinoma cells treated with 2.5,5 and 10mg·L-1 HB was reduced by 37%,54% and 63%respectively(P<0.01).HB suppressed the expression of angiogenesis factors in a concentration-dependent manner.HB was effective in inhibition of MMP-9 expression at 5,10 and 20mg·L-1(P<0.05),whereas HB 20mg·L-1 was minimal effective concentration in inhibition of VEGF expression(P<0.01).On C57BL/6 mice bearing Lewis lung carcinomas,HB significantly reduced the tumor burden and MVD in tumor mass as well as inhibited lung metastasis at doses of 90 and 120mg·kg-1.CONCLUSION HB produces reliable antiangiogenic effect,inhibits the growth and metastasis of Lewis lung carcinoma.These effects may be attributed to its ability of suppressing the expression of VEGF and MMP-9,and reducing MVD.     

骨碎补总黄酮对大鼠牙髓干细胞增殖和细胞周期的影响

摘要 目的 探讨骨碎补总黄酮对大鼠牙髓干细胞（DPSCs）增殖和细胞周期的影响。方法采用组织块消化法获得大鼠牙髓细胞，克隆化分离培养大鼠DPSCs并进行鉴定。以含0.01，0.05和0.10 g·L－1骨碎补总黄酮的培养基分别培养大鼠DPSCs，采用噻唑蓝（MTT）比色法检测各组细胞的增殖情况，流式细胞术检测各组细胞周期的变化。结果经单克隆化分离培养得到的DPSCs细胞CD44、CD29和Stro 1均呈阳性表达。骨碎补总黄酮组DPSCs增殖速度较对照组加快（P＜0.05），且随骨碎补总黄酮浓度的增加而升高。流式细胞术分析表明S期细胞比例明显多于对照组（P＜0.05），G0/G1期细胞明显减少（P＜0.05），且表现出剂量依赖性。 结论骨碎补总黄酮对大鼠DPSCs增殖具有促进作用，这一作用可能是通过促进DPSCs从G0/G1进入S期来实现。