吡非尼酮对UUO大鼠肾组织中GSK3β蛋白、WNT/β-catenin通路的影响

目的探讨吡非尼酮对UUO大鼠肾间质纤维化组织中GSK3-β蛋白、Wnt/β-catenin通路的影响及其对肾间质纤维化的作用。方法将Wistar雄性大鼠72只,随机分为3组:假手术组、UUO组以0.9%Nacl2mL/d灌胃,吡非尼酮组在UUO组的基础上以吡非尼酮250mg/kg溶解在0.9%Nacl2mL/d灌胃。各组大鼠于术后第3,7,14天分别处死8只。结果在各时间点,与假手术组相比较,UUO模型组肾小管间质损伤和纤维化程度明显,GSK3-β蛋白、β-catenin明显表达增多,差异具有统计学意义(P0.05);且随着梗阻时间延长(3、7、14天),UUO模型组大鼠的GSK3-β蛋白及β-catenin的表达逐渐增加。与UUO组相比吡非尼酮组大鼠肾间质组织中GSK3-β蛋白,β-catenin表达水平显著降低(P0.05)。结论吡非尼酮能够通过下调GSK3-β蛋白的表达进而调节Wnt/β-catenin信号通路抑制β-catenin的产生延缓肾间质纤维化的发生及发展,可能为肾纤维化的临床治疗及研究提供新的作用靶点及理论依据。     

UUO模型大鼠肾间质纤维化动态进展及α-SMA、TGF-β1和VDR表达变化

目的 观察单侧输尿管梗阻(UUO)模型大鼠肾小管间质纤维化动态进展,研究该病理过程中肾脏纤维化相关蛋白表达的变化.方法 32只清洁级SD大鼠随机分为假手术组(n=16)和UUO模型组(模型组,n=16).两组大鼠分别于术后(模型组建模后)第2、5、9、14天分批(n=4)处死,留取手术侧(模型组梗阻侧)肾脏组织.分别采用HE和Masson染色、免疫组织化学染色及Western blotting等方法,评价肾小管间质纤维化损伤程度并检测肾脏组织α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)、维生素D受体(VDR)及转化生长因子β1(TGF-β1)等相关蛋白的表达.结果 肾脏组织形态学观察显示,随着输尿管梗阻时间的延长,肾小管间质纤维化程度逐步加重.免疫组织化学染色显示,模型组大鼠建模后各时间点肾间质α-SMA和FN阳性面积百分比均显著高于假手术组(P＜0.05),且随着梗阻时间的延长逐渐升高,至建模后第14天时达到高峰.Western blotting分析表明,模型组大鼠建模后各时间点α-SMA和TGF-β1相对表达量均显著高于假手术组(P＜0.05),而VDR相对表达量显著低于假手术组(P＜0.05);建模后第2天,模型组大鼠肾脏组织α-SMA相对表达量已显著增加;建模后第14天,模型组α-SMA和TGF-β1相对表达量分别增高至假手术组的12.7倍和8.8倍,而VDR相对表达量下降至假手术组的3%.结论 UUO模型大鼠建模后第14天可出现显著的肾间质纤维化;建模早期肾间质中α-SMA表达增加提示肾间质成纤维细胞的活化;VDR表达的进行性减少提示其与肾间质纤维化有关.     

氟非尼酮对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的疗效观察

目的：观察氟非尼酮对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的疗效,探讨氟非尼酮对肾间质纤维化大鼠肾 组织中I型胶原(collagen type I,Col I),III型胶原(collagen type III,Col III),α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA),结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)和血小板源性生长因子(platelet derived growth factor, PDGF)表达的影响。方法：将15只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和氟非尼酮组(n=5)。对模型组和氟非尼酮 组大鼠行左侧输尿管结扎术建立单侧输尿管梗阻模型。氟非尼酮组从造模前24 h开始以氟非尼酮[125 mg/(kg.d)]溶于 0.5%羧甲基纤维素钠(sodium carboxyl methyl cellulose,CMC-Na)中灌胃,模型组和假手术组以等体积0.5% CMC-Na灌 胃。于术后14 d处死大鼠,取梗阻侧肾组织行HE和Masson染色观察各组大鼠肾组织病理改变;用免疫组织化学检测 Col I,Col III,α-SMA,PDGF,CTGF的蛋白表达;用RT-PCR检测Col I,Col III,PDGF,CTGF mRNA表达。结果：模 型组肾间质损伤指数、胶原相对面积评分及Col I,Col III mRNA和蛋白表达均较假手术组增高(P<0.05),氟非尼酮治 疗后明显改善(P<0.05)。模型组肾组织α-SMA,PDGF,CTGF蛋白表达及PDGF,CTGF mRNA表达均较假手术组明显 增加(P<0.05),氟非尼酮治疗后表达均明显减少(P<0.05)。结论：氟非尼酮(125 mg/kg.d)能够显著改善单侧输尿管梗阻 大鼠肾间质纤维化,其作用机制与抑制肌成纤维细胞的活化及关键促纤维化因子PDGF和CTGF的表达有关。     

罗格列酮对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的作用

目的 探讨罗格列酮（RSG）对单侧输尿管梗阻大鼠（UUO）肾间质纤维化的作用。方法 将24只大鼠随机分为假手术组、模型组、治疗组。对治疗组、模型组行单侧输尿管结扎术建立输尿管梗阻的动物模型。术后14天处死各组大鼠，取梗阻侧肾组织做HE和Masson染色及用免疫组化方法检测结缔组织生长因子（CT-GF）和α-平滑肌肌动蛋白（d—SMA）在肾组织的表达水平。结果罗格列酮可显著下调CTGF和α—SMA的表达，改善了肾脏病理改变。结论 罗格列酮对UUO所致的肾间质纤维化的形成有抑制作用。     

CTGF反义寡核苷酸对大鼠肾间质纤维化的影响

[摘要] 目的 研究结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠肾间质纤维化的影响,探讨CTGF ASODN应用于临床的可能。方法 32只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为假手术组(sham-operation group,SOR)、单侧输尿管梗阻组(unilateral ureteral obstruction group,UUO)、CTGF错义寡核苷酸(missense oligodeoxynucleotide,MSODN)对照组和CTGF ASODN治疗组。第15 d收获大鼠。碱水解法测定肾组织胶原含量;Masson染色观测肾皮质胶原染色情况;免疫组化检测α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、纤连蛋白（fibronectin,FN）、转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）在肾皮质中的蛋白表达。RT-PCR检测肾皮质中α-SMA的mRNA表达水平。结果 肾皮质胶原检测CTGF ASODN组与UUO组、CTGF MSODN组比较,减少胶原含量,p均﹤0.01; Masson染色：CTGF ASODN组较UUO组、CTGF MSODN组胶原染色面积减少; 免疫组化：CTGF ASODN与UUO组、CTGF MSODN组比较,肾皮质α-SMA, FN ,TGF-β1的阳性表达面积、阳性染色强度均下降,p均﹤0.05; RT-PCR：CTGF ASODN组抑制α-SMA的mRNA表达水平,与UUO组、CTGF MSODN组比较,p均﹤0.05。结论 CTGF ASODN有效缓解UUO大鼠肾间质纤维化。     

维甲酸对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的作用

目的 探讨维甲酸（at-RA）对单侧输尿管梗阻大鼠（UUO）肾间质纤维化的影响.方法将26只大鼠随机分为假手术组、模型组、给药组,结扎单侧输尿管造成梗阻性肾病模型.术后9天处死大鼠,取梗阻侧肾做组织学检查,HE染色,用免疫组化方法检测肾组织中结缔组织生长因子（CTGF）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）.结果维甲酸显著减轻肾小管间质损害,治疗组肾间质炎细胞浸润和肾间质CTGF、α-SMA表达显著低于对照组.结论维甲酸减轻UUO模型大鼠肾小管间质损害和炎细胞浸润,降低CTGF表达,抑制α-SMA表达,从而减轻肾间质纤维化.     

苦参碱对肾小管间质CTGF和α-SMA影响的实验研究

目的观察苦参碱对UUO大鼠模型肾小管间质CTGF和α-SMA表达水平的影响,初步探讨其对小管间质纤维化的作用机制.方法实验采用UUO肾间质纤维化模型作为研究模型,分为正常组、假UUO组、手术组（UUO组）、福辛普利治疗组（F组）、苦参碱大剂量治疗组（苦大组）和苦参碱小剂量治疗组（苦小组）.运用免疫组化技术半定量分析实验第7,14天各组的CTGF和α-SMA表达水平.结果 UUO组和治疗组的CTGF和α-SMA的表达水平在UUO模型建立后的第7,14天均显著高于正常组和假UUO组（ P ＜0.05）,但3个治疗组的表达水平明显低于UUO组（ P ＜0.05）;CTGF和α-SMA在苦大组与F组间无统计学差异（ P ＞0.05）.结论苦参碱可以降低肾小管间质CTGF和α-SMA的表达水平,延缓肾小管间质纤维化的进程.     

六味地黄汤对慢性肾衰大鼠肾组织中HIF-1α、CTGF表达的影响

目的 探讨HIF-1α、CTGF在慢性肾衰大鼠肾组织中的表达及作用,观察六味地黄汤对其表达的影响.方法 用5/6肾切除法制作慢性肾衰模型,分假手术组、模型组和六味地黄汤组.造模后12周,检测各组肾功能指标;HE染色观察肾组织病理变化,Masson染色观察肾组织胶原的沉积;免疫组化法和RT-PCR法分别检测HIF-1α、CTGF在肾组织中的蛋白水平和基因表达.结果 与假手术组比较,模型组肾组织中HIF-1α、CTGF蛋白水平和基因表达均明显升高(P＜0.01).与模型组比较,六味地黄汤组肾组织中HIF-1α、CTGF蛋白水平和基因表达均明显降低(P＜0.01).结论 HIF-1α上调CTGF的表达促进肾间质纤维化,六味地黄汤可下调HIF-1α的表达,从而抑制肾间质纤维化.     

UUO模型大鼠肾间质纤维化动态进展及α-SMA、TGF-β1和VDR表达变化

目的 观察单侧输尿管梗阻（UUO）模型大鼠肾小管间质纤维化动态进展,研究该病理过程中肾脏纤维化相关蛋白表达的变化.方法 32只清洁级SD大鼠随机分为假手术组（n=16）和UUO模型组（模型组,n=16）.两组大鼠分别于术后（模型组建模后）第2、5、9、14天分批（n=4）处死,留取手术侧（模型组梗阻侧）肾脏组织.分别采用HE和Masson染色、免疫组织化学染色及Western blotting等方法,评价肾小管间质纤维化损伤程度并检测肾脏组织α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、纤维连接蛋白（FN）、维生素D受体（VDR）及转化生长因子β1（TGF-β1）等相关蛋白的表达.结果 肾脏组织形态学观察显示,随着输尿管梗阻时间的延长,肾小管间质纤维化程度逐步加重.免疫组织化学染色显示,模型组大鼠建模后各时间点肾间质α-SMA和FN阳性面积百分比均显著高于假手术组（P＜0.05）,且随着梗阻时间的延长逐渐升高,至建模后第14天时达到高峰.Western blotting分析表明,模型组大鼠建模后各时间点α-SMA和TGF-β1相对表达量均显著高于假手术组（P＜0.05）,而VDR相对表达量显著低于假手术组（P＜0.05）;建模后第2天,模型组大鼠肾脏组织α-SMA相对表达量已显著增加;建模后第14天,模型组α-SMA和TGF-β1相对表达量分别增高至假手术组的12.7倍和8.8倍,而VDR相对表达量下降至假手术组的3%.结论 UUO模型大鼠建模后第14天可出现显著的肾间质纤维化;建模早期肾间质中α-SMA表达增加提示肾间质成纤维细胞的活化;VDR表达的进行性减少提示其与肾间质纤维化有关.     

吡非尼酮对大鼠肾间质纤维化的防治作用研究

目的研究吡非尼酮（PFD）对大鼠肾间质纤维化的作用及其作用机制,为临床使用吡非尼酮提供理论依据。方法24 只标准雄性SD 大鼠,随机分为3 组：正常组（NC 组）、模型组（M 组）及吡非尼酮治疗组（S组）。M组及S 组行左侧输尿管结扎术,复制肾间质纤维化模型。S 组予吡非尼酮250 mg/（kg·d）灌胃,NC 组及M 组大鼠予等量1%羧甲基纤维素钠溶液灌胃。分别于手术后第1、3、5、7 天处死各组大鼠各2 只,取梗阻侧肾脏。HE 染色观察各组肾组织病理变化,实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测结缔组织生长因子（CTGF）mRNA 表达水平,Western blot 检测转化生长因子-β（TGF-β）及α- 平滑肌激动蛋白（α-SMA）的蛋白表达水平。结果NC 组未显示肾纤维化,M 组显示大鼠肾间质纤维化及炎症细胞浸润。NC 组TGF-β、α-SMA 蛋白表达均较低,M 组TGF-β、α-SMA 蛋白及CTGF mRNA 表达较NC 组均升高,差异有统计学意义（p <0.05）,且随着梗阻时间延长,各物质表达量增高,但第7 天M 组及S 组上述物质表达量较第5 天减少,且M 组与S 组之间表达差异无统计学意义（p >0.05）;S 组上述物质各时间点表达则较M 组均减少,差异有统计学意义（p <0.05）。结论吡非尼酮可能通过抑制大鼠肾组织TGF-β和CTGF 的表达进而减少成纤维细胞转化为肌成纤维细胞,减少细胞外基质（ECM）的沉积,发挥抗肾纤维化作用。