不同级别胶质瘤肿瘤组织中水通道蛋白4表达水平分析

目的 探讨不同级别胶质瘤组织中水通道蛋白4（AQP4）表达水平的差异.方法 取我院自2008年至2012年间胶质瘤共57例石蜡包埋的肿瘤组织及10例正常脑组织,采用免疫组化法检验其AQP4水平并行统计学检验.结果 高级别胶质瘤肿瘤组织的AQP4表达水平高于低级别胶质瘤和正常脑组织的AQP4表达水平（P＜0.05）,而低级别胶质瘤的肿瘤组织与正常脑组织之间的AQP4表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 AQP4在胶质瘤中的表达水平与肿瘤病理级别密切相关.     

胶质瘤对血脑屏障内皮细胞间连接的影响

目的：探索胶质瘤细胞对血脑屏障细胞间连接的作用及其分子机制。方法：利用内皮细胞与胶质细胞共培养建立体外血脑屏障模型，采用银染的方法探索胶质瘤细胞对其中内皮细胞间连接的作用并运用半定量RT-PCR的方法分析胶质瘤细胞作用后内皮细胞紧密连接蛋白1(ZO-1)的表达变化。结果：在胶质瘤细胞的直接作用过程中，血脑屏障细胞间连接的完整性受到明显破坏，内皮细胞ZO-1表达水平降低；在其间接作用过程中，两者变化不明显。结论：胶质瘤细胞的直接浸润可以破坏血脑屏障内皮细胞间连接，而其间接作用则不能完全破坏。胶质瘤细胞对内皮细胞ZO-1表达的影响是胶质瘤发生、发展过程中血脑屏障内皮细胞间连接变化的重要分子基础。     

脑胶质瘤中血脑屏障的超微结构特点

８例胶质瘤病例，标本分别取自同一病例的瘤体，瘤周水肿区和邻近脑组织。瘤体和瘤周水肿区血脑屏障超微结构变化无明显差异，内皮肿胀，毛细血管腔狭小，腔面有稀疏的绒毛样突起，内皮为无孔型，胞质内胞饮泡较多，内皮紧密连接增长，细胞连接间隙增宽，基膜完整，基膜完整，胶质膜缺损。     

水通道蛋白研究进展

水可以通过简单扩散缓慢通过脂质双层膜,但人们早已发现红细胞和某些上皮细胞在渗透压梯度存在时,其水通透性远超出简单扩散强度。因此提出了由膜蛋白可介导水转运的理论[1,2]。上个世纪80年代末,Agre领导的研究组在红细胞克隆了第一个水通道蛋白(aquaporin,AQP1),证明了该蛋白具有极强的水通透性[3],开创了水跨膜运转研究的新领域。到目前为止,在哺乳动物共发现有11种水通道蛋白,即AQP0-10[4-6]。通过分子生物学和动物模型生理学研究,对水通道家族成员的分子结构、生理学功能和与疾病的关系有了深入的理解。本文拟根据作者在该领域的研…     

一氧化氮吸入对急性高浓度氧肺损伤新生大鼠肺水通道蛋白1和5表达的影响

目的：观察一氧化氮(NO)吸入对急性高浓度氧肺损伤新生大鼠肺上皮水转运体系的影响。方法：32只新生SD大鼠，随机分为：(1)空气组(C)：予空气48 h；（2）高浓度氧组(O)：予高浓度氧持续吸入48 h，维持FiO₂＞0.95；(3)高浓度氧+NO组(ONO)：予高浓度氧持续吸入48 h，维持FiO₂＞0．95，前24 h同时予1×10-5NO吸入；（4）空气 + NO组(CN)： 予空气48 h，前24 h同时予1×10^-5NO吸入。各组分别测肺组织湿重/干重比值(Q_W/Q_D)，行肺组织病理学检查，用RT-PCR方法测定肺组织AQP1、AQP5、α₁-NKA和α-ENaC mRNA含量。结果： 高浓度氧组肺湿重/干重比值明显高于正常对照组(5.81±1.01 vs 4.33±0.94，P<0.01)；而肺组织AQP1 mRNA含量明显低于正常对照组(0.68±0.38 vs 1.81±0.76， P<0.01)，AQP5mRNA含量无明显变化。1×10^-5 NO+高浓度氧组肺组织湿重/干重比值明显高于高浓度氧组(4.89±0.68 vs 5.81±1.01， P<0.05)；而肺组织AQP1 mRNA含量明显高于高浓度氧组(1.27±0.54 vs 0.68±0.38，P<0.05)，AQP5mRNA含量无明显变化。结论：1×10^-5NO吸入24 h能减轻急性高浓度氧肺损伤新生大鼠的肺水肿，提高肺内水通道蛋白1mRNA含量，水通道蛋白5的mRNA含量无明显改变，提示1×10^-5NO的吸入可能对急性高浓度氧肺损伤新生大鼠肺内水通道蛋白1有一定的保护作用。     

RAS蛋白在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤细胞生长的影响

目的 探讨RAS蛋白在胶质瘤中的表达及其对人脑胶质瘤细胞生长的影响.方法 用免疫组化染色法检测RAS蛋白在正常脑组织及各级别胶质瘤组织中的表达水平,并采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法和流式细胞技术检测降低RAS活性后U251细胞的增殖和凋亡情况;用Western印迹法检测ERK和AKT信号通路.结果 胶质瘤组织中RAS的表达随胶质瘤恶性程度增高而增强.抑制RAS 蛋白活性后,RAS信号通路的下游分子ERK和AKT蛋白磷酸化水平降低;U251胶质瘤细胞生长受抑制,细胞生长阻滞在G1期且凋亡增加.结论 RAS蛋白在胶质瘤中高表达,抑制其活性可下调ERK和AKT 信号通路,进而调控细胞的生长.     

LPS对鼠肺微血管内皮细胞水通道蛋白-1表达及其功能的影响

目的：通过观察脂多糖（LPS）刺激对肺微血管内皮细胞水通道蛋白-1 mRNA表达和功能的影响，以探讨急性肺损伤肺水异常代谢的机制。方法： 在体外培养的大鼠肺微血管内皮细胞（RLMEC），分别使用浓度为100 μg/L、1 mg/L、10 mg/L的LPS与之孵育4 h、12 h、24 h后, 应用氚水掺入法测定RLMEC内氚水的信号强度，并用RT-PCR法测定AQP-1 mRNA的表达。结果： LPS刺激组氚水的信号强度显著低于对照组（P<0.01）；同时LPS刺激组AQP-1 mRNA的表达显著低于对照组。结论： LPS刺激RLMEC AQP-1 mRNA表达和摄水功能下降，提示AQP-1在急性肺损伤时可能与肺水代谢异常有关。     

Forskolin对人WISH细胞水通道蛋白 8 表达及分布的影响

 目的 探究调控人羊膜上皮细胞水通道蛋白8（AQP8）表达的信号转导通路 。方法 以腺苷酸环化酶激动剂 Forskolin 处理体外培养的人羊膜上皮细胞株 WISH 细胞，将 WISH 细胞随机分为不同浓度 Forskolin 作用 24 h 组和单一浓度 Forskolin 作用不同时间组。前者培养基中分别加入 Forskolin 0（对照组）、5、10、20、40、100、200 μmol/L，培养 24 h；后者培养基中加入 Forskolin 100 μmol/L 后分别培养 4、8、16、24、48 h。采用蛋白质印迹技术检测各组细胞 AQP8 蛋白表达水平；RT-PCR 技术检测 Forskolin 处理不同时间组细胞 AQP8 mRNA 表达水平；免疫荧光细胞化学方法检测 Forskolin 100 μmol/L 作用 24 h 组细胞 AQP8 蛋白的分布。结果 对照组 WISH 细胞 AQP8 蛋白表达水平为 0.027 ± 0.003，AQP8 mRNA 表达水平为 0.026 ± 0.003。不同浓度 Forskolin 处理组中，除了 5 μmol/L 组外，其余各组 AQP8 蛋白表达水平均高于对照组（P < 0.05），高峰值出现在 100 μmol/L 组（0.157 ± 0.006）。Forskolin 处理不同时间的各组 WISH 细胞，其 AQP8 mRNA 和蛋白的表达水平均高于对照组（P < 0.05），AQP8 mRNA 表达水平在 16 h 组达峰值（0.087 ± 0.007），AQP8 蛋白表达水平在 24 h 组达峰值（0.158 ± 0.007）。免疫荧光细胞化学染色显示，Forskolin 100 μmol/L 作用 24 h 组细胞膜上的黄绿色免疫荧光信号较对照组明显增强。结论 Forskolin 可上调 WISH 细胞 AQP8 mRNA 及蛋白表达水平，使细胞膜上 AQP8 蛋白的分布增加，提示细胞内 cAMP-蛋白激酶 A 信号转导途径的激活在人羊膜上皮细胞 AQP8 表达的调控中发挥重要作用。     

缺氧缺血新生大鼠脑组织水通道蛋白4的表达变化

目的研究缺氧缺血性脑损伤(HIBD)病理过程中水通道蛋白4(aquaporin-4,AQP-4)的作用及其意义。方法120只7日龄新生Wistar大鼠按照完全随机化方法分为4部分,每部分(n=30)再分为对照组、HIBD后6h、24h、3d、5d和7d共6组,每组5只。分别测定脑组织含水量;原位杂交和免疫组化检测AQP-4表达;检测脑组织病理变化。结果HIBD组6h、24h、3d的脑组织含水量较对照组显著增加(P<0.05);且各组脑组织含水量随时间延长而增加,组间差异有统计学意义(P<0.05);HIBD5d、7d组脑组织含水量与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。对照组AQP-4 mRNA和AQP-4蛋白少量表达(吸光度A值为0.29±0.07和0.06±0.01)。与对照组相比,HIBD后6~24h,AQP-4 mRNA和AQP-4蛋白表达显著增加。AQP-4 mRNA的A值由0.42±0.04上升到0.80±0.02(P<0.05);AQP-4蛋白A值由0.14±0.03上升到0.23±0.05(P<0.05),同时光镜下可见脑组织轻度水肿;3d时AQP-4 mRNA和蛋白表达达高峰,AQP-4 mRNA的A值为0.91±0.08,AQP-4蛋白A值为0.41±0.04,此时脑组织严重水肿,神经元、胶质细胞和内皮细胞明显肿胀;第5~7天AQP-4的表达已下降(尤其mRNA明显),但仍显著高于对照组(P<0.05),此时脑水肿已减轻。在整个HIBD脑水肿形成的过程中,AQP-4 mRNA和蛋白的表达呈正相关(rs>0.82,Ps<0.05)。结论AQP-4参与了HIBD的发生发展过程,AQP-4在HIBD脑水肿的形成过程中可能起重要作用。     

缺氧缺血新生大鼠脑组织水通道蛋白4的表达变化

目的 研究缺氧缺血性脑损伤(HIBD)病理过程中水通道蛋白4(aquaporin-4,AQP-4)的作用及其意义.方法 120只7日龄新生Wistar大鼠按照完全随机化方法分为4部分,每部分(n=30)再分为对照组、HIBD后6 h、24 h、3 d、5 d和7 d共6组,每组5只.分别测定脑组织含水量;原位杂交和免疫组化检测AQP-4表达;检测脑组织病理变化.结果 HIBD组6 h,24 h,3 d的脑组织含水量较对照组显著增加(P＜0.05);且各组脑组织含水量随时间延长而增加,组间差异有统计学意义(P＜0.05);HIBD 5 d,7 d组脑组织含水量与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).对照组AQP-4 mRNA和AQP-4蛋白少量表达(吸光度A值为0.29±0.07和0.06±0.01).与对照组相比,HIBD后6～24 h,AQP-4 mRNA和AQP-4蛋白表达显著增加.AQP-4 mRNA的A值由0.42±0.04上升到0.80±0.02(P＜0.05);AQP-4蛋白A值由0.14±0.03上升到0.23±0.05(P＜0.05),同时光镜下可见脑组织轻度水肿;3 d时AQP-4 mRNA和蛋白表达达高峰,AQP-4 mRNA的A值为0.91±0.08,AQP-4蛋白A值为0.41±0.04,此时脑组织严重水肿,神经元、胶质细胞和内皮细胞明显肿胀;第5～7天AQP-4的表达已下降(尤其mRNA明显),但仍显著高于对照组(P＜0.05),此时脑水肿已减轻.在整个HIBD脑水肿形成的过程中,AQP-4 mRNA和蛋白的表达呈正相关(rs＞0.82,Ps＜0.05).结论 AQP-4参与了HIBD的发生发展过程,AQP-4在HIBD脑水肿的形成过程中可能起重要作用.     

水通道蛋白在鼠肺发育过程中的变化及意义

目的： 探讨水通道蛋白（AQPs）mRNA及蛋白表达在鼠肺发育过程中的变化及意义。方法: 以胎鼠、新生鼠、幼鼠和成年大鼠为研究对象,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫组织化学（SABC）方法分别检测几种主要水通道AQP1、AQP3、AQP4和AQP5 mRNA及蛋白在肺脏的表达和分布;同时测定肺发育过程中一些相关指标,进行对比分析。结果: 大鼠肺发育连续不断,从胎鼠至新生鼠期增长最快,以后增速减慢,为一个动态的过程。肺AQPs mRNA在胎鼠时均开始微量转录,仅出现AQP1蛋白表达,出生后AQPs mRNA及蛋白均快速增加,呈增量表达至成年期。相关性分析显示,AQPs变化与肺发育指标变化存在显著正相关（P<0.05）。结论: AQPs可能参与了大鼠肺发育的诸多重要生理过程。     

Age-dependent decline of blood-brain barrier P-glycoprotein expression in the canine brain

The efflux transporter P-glycoprotein serves as a major molecular gatekeeper at the blood-brain barrier. It has been suggested that a reduction of P-glycoprotein activity with aging might enhance exposure of brain tissue to exogenous and endogenous compounds thereby contributing to the development of neurodegenerative diseases.Brain tissue from owner-kept dogs renders an excellent tool to study the impact of aging on the background of variable environmental and genetic influencing factors. Therefore, we determined expression rates of P-glycoprotein in canine post-mortem tissue from 23 non-laboratory dogs. P-glycoprotein expression in the parahippocampal cortex exhibited a negative correlation with age. Analysis of the area labeled for P-glycoprotein in dogs aged >100 months revealed a 72% drop in P-glycoprotein expression as compared to young adults aged 23-36 months. Respective data from the dentate hilus and dentate gyrus indicated an earlier drop with a reduction by 77 and 80% in dogs aged 37-99 months in comparison with younger individuals. In contrast to the decline observed with aging in dogs without plaques, P-glycoprotein expression rates rather tended to increase with further aging in dogs with plaque formation.In conclusion, the thorough analysis of P-glycoprotein expression rates in non-laboratory dogs revealed a significant decline with aging. The data strongly support the concept that age-dependent changes might predispose to neurodegenerative diseases. In the early pathogenesis of Alzheimer's disease which is modelled by diffuse plaques in the canine brain, an up-regulation of P-glycoprotein might act as a compensatory mechanism to enhance Abeta efflux from the brain. Future studies are necessary to further evaluate the correlation between Abeta deposits and P-glycoprotein expression in different phases of the disease.     

Isolation and cultivation of porcine brain capillary endothelial cells as an in vitro model of the blood-brain barrier

Summary Capillary endothelial cells were isolated from the brains of Yucatan miniature swine and were cultivated to serve as an in vitro model for blood-brain barrier studies. The procedure included mechanical and enzymatic digestion of the brain tissue followed by separation of the capillary cells, based on size and density, from contaminating cell types. The purity of the cultures was further enhanced by manipulating the growth medium composition. The cells possess typical capillary endothelial cell morphology, the Factor VIII related antigen, and the ability to accumulate acetylated low-density lipoprotein. Cells from passages 4–6 were grown on polycarbonate membranes suspended between two chambers of media: analogous to the capillary lumen and the interstitium of the brain. A barrier was established within 4 days, as demonstrated by a resistance to the passage of albumin and an electrical current.     

壮通饮对缺氧/复氧诱导的HUVEC/U251细胞屏障损伤的影响

目的:观察壮通饮(ZTY)对缺氧/复氧诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)和人星形细胞瘤U251细胞损伤模型的作用,探讨壮药保护血脑屏障的相关机制.方法:将8只SD大鼠随机分为4组:空白组(蒸馏水)及低、中、高剂量(3.74、7.48和14.96 g/kg)ZTY含药血清组,每天1次,连续7 d灌胃饲养,获取含药血...     

Nestin在CDA-2诱导人胶质瘤细胞分化中的变化

目的： 研究nestin（巢蛋白）在人尿萃取物细胞分化剂CDA-2（又名尿多酸肽）诱导SWO-38人胶质瘤细胞分化中表达的变化及其意义。方法: 采用光镜观察和鉴定CDA-2对SWO-38细胞的分化作用;RT-PCR、细胞免疫荧光、Western blotting分析CDA-2诱导前后SWO-38细胞nestin表达的变化。 结果: 光镜观察发现经CDA-2诱导后SWO-38细胞胞体变大、核浆比减小、突起增多,表现出向成熟的星形细胞分化的现象;Nestin表达在细胞浆,呈丝状着色;Nestin在CDA-2诱导SWO-38细胞分化中表达下调。结论: Nestin在CDA-2诱导SWO-38细胞分化中表达下调,进一步验证nestin与细胞分化的关系,nestin有可能成为胶质瘤诱导分化治疗领域新的标志物。     

大鼠脑缺血/再灌注损伤后梗死灶周围水通道蛋白4与血脑屏障通透性的动态变化

目的： 研究大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤对梗死灶周围脑组织水通道蛋白4（AQP4）的表达及血脑屏障通透性的影响。〖HJ1.7mm〗方法: 健康雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为脑缺血/再灌注6 h、24 h、48 h、7 d组及相应时点的假手术组，每组各6只。采用线栓法阻塞大脑中动脉（MCAo）建立局灶性脑缺血/再灌注模型，于相应时点进行神经症状评分后断头取脑，采用免疫组织化学方法检测大鼠脑缺血/再灌注后不同时点梗死灶周围AQP4的表达及IgG的渗出以评价血脑屏障通透性的改变。结果: (1)大鼠脑缺血/再灌注损伤后神经功能缺失症状较假手术组明显（P<0.01），6-48 h呈逐渐加重趋势，72 h后有所缓解，7 d恢复正常；(2)大鼠脑缺血/再灌注6 h时AQP4表达增加不明显，至再灌注24 h后表达明显增加（P<0.05），7 d仍处于表达高峰；(3)再灌注6 h时IgG渗出不明显，再灌注24 h后开始增加（P<0.05），于再灌注48 h IgG渗出达高峰后开始下降; (4)大鼠脑缺血/再灌注损伤后血脑屏障通透性的增强与AQP4表达的增加呈显著相关(P<0.01)。结论: 大鼠脑缺血/再灌注损伤后AQP4表达增加与血脑屏障通透性增强密切相关，两者是脑缺血/再灌注损伤后脑水肿发生的重要因素。     

Opening of the blood-brain barrier by acute elevation of intracarotid pressure

A method for local opening of the blood-brain barrier in the territory of one internal carotid artery in the rat is described. A local hypertensive insult is induced by rapid infusion of blood into the internal carotid via the external carotid. The hemodynamic changes caused by the infusion, in particular relation to the threshold and extent of barrier opening, are analyzed. This mode of hypertensive barrier opening may be advantageous to those in which the insult is induced systemically, especially when studying the cerebrovascular effects of neurotransmitter catecholamines, since all the latter methods interfere with adrenergic mechanisms. Further, unilateral intracarotid infusion may allow the territory of the contralateral middle cerebral artery to be used as internal control.     

A quantitative immunocytochemical analysis of total surface area of blood-brain barrier in developing rat brain

A mouse monoclonal antibody which specifically reacts with putative blood-brain barrier (BBB) competent endothelial cells of rat cerebral capillaries was used to identify barrier competent cells in the central nervous system (CNS). The development of the cerebral capillaries and the BBB was examined and quantified, from day 6 to day 40 postpartum, using immunocytochemical and unbiased stereological techniques.There was a progressive increase in capillary formation postnatally, with collateral branching observed with progressive age. BBB development was confined to individual endothelial cells located at the periphery of the cortex until day 10 postpartum. Antibody binding progressively increased postnatally, contributing 30% of the total capillary surface area by day 20. There was a rapid elevation of reactivity from day 20 to day 40, with a mean of 83% by day 40.The BBB constitutes minimal amounts of brain vascular capillaries before day 10 of life in the rat. There is a slower increase in BBB than in total capillaries between days 10 and 20. There is a reversal of this trend between days 20 and 40.     

米非司酮对人羊膜上皮细胞水通道蛋白8表达的影响

目的观察米非司酮对人羊膜上皮细胞水通道蛋白8（AQP8）表达的影响,探讨药物调控羊膜上皮细胞AQP8表达的可行性。方法将体外培养的人羊膜上皮WISH细胞分为不同浓度米非司酮作用48h组和单一浓度米非司酮作用不同时间组,前者培养基中分别加入终浓度为0．1、1、5、10、15μmol／L的米非司酮,培养48h;后者培养基中加入终浓度为10μmol／L的米非司酮,分别培养6、12、24、36、48h,同时2组均设加入含0．01％二甲基亚砜（DMSO）完全培养液的对照组。采用免疫荧光细胞化学方法检测10μmol／L米非司酮作用48h后细胞AQP8蛋白的分布;RT-PCR和蛋白质印迹技术分别检测不同浓度米非司酮作用组和米非司酮作用不同时间组各组细胞AQP8mRNA和蛋白的表达水平。结果免疫荧光细胞化学检测显示,米非司酮作用后WISH细胞细胞质内及细胞膜上AQP8蛋白黄绿色荧光信号较对照组均明显减弱。在不同浓度米非司酮作用组中,除0．1μmol／L组外,其余各组细胞的AQP8mRNA和蛋白表达水平分别与对照组相比均明显减弱（均p〈0．01）,而0．1、1、5、10μmol／L组细胞的AQP8mRNA表达水平和1、5、10μmol／L组细胞的AQP8蛋白表达水平分别与15pmol／L组比较,差异均有统计学意义（均P〈0．05）。在米非司酮作用不同时间组中,除6h组外,其余各组细胞的AQP8mRNA和蛋白表达水平分别与对照组相比均明显减弱（均P〈0．01）,而6、12、24、36h组细胞的AQP8mRNA和蛋白表达水平分别与48h组比较,差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论米非司酮对人羊膜上皮细胞AQP8mRNA和蛋白的表达具有抑制作用。