转化生长因子-β1对骨形态发生蛋白诱导成骨的促进作用

目的：我们通过观察转化生长因子β1（transforming growth factorβ,TCF－β1）和骨形态发生蛋白(bone morpho-genetic protein,BMP)共同修复骨缺损,达到进一步阐明BMP诱导成骨机制的目的,方法：实验采用日本大耳白兔左尺骨中段12mm骨缺损实验模型,分为实验组,对照组和空白组,缺损内分别植入BMP／TGF－β1／载体,BMP／载体,载体,通过X线,组织学及电镜对比观察三组骨缺缶修复情况,结果：实验组骨缺损无论是骨痂出现还是骨接发生时间均较对照组明显提前,空白组骨缺损形成骨不连,实验组成骨细胞和软骨细胞无论出现的时间,数量和功能活跃程度均优于对照组,电镜观察见成骨细胞,软骨细胞内线粒体丰富,内质网增多,而对照组则相对较少,软骨细胞内线粒体丰富,内质网络增多,而对照组则相对较少,结论：TGF－β1具有促进BMP诱导成骨的作用,TGF－β1通过促进间充质细胞分裂增殖为BMP提供靶细胞,促进成骨细胞及软骨细胞的分裂增殖,促进骨细胞合成产生I型胶原,促进基质钙化,碱少骨吸收等作用来促进BMP的诱导成骨。     

高生物活性复合人工骨修复骨缺损的实验研究

目的：探讨载有转化生长因子β1（TGF－β1），具有高生物活性复合人工骨修复骨缺损的价值。方法：建立SD大鼠下颌骨缺损模型。采用组织学和分子生物学Slot Blot杂交法，检测羟基磷灰石复合TGF－β1实验组，单纯羟基磷灰石对照组，无材料修复的空白对照组在骨缺损愈合过程中的组织学及Ⅰ型胶原mRNA的表达状况。结果：实验组的新骨形成及Ⅰ型胶原mRNA的表达水平最高。结论：提示栽有TGF－β1的高生物活性复合人工骨局部使用能促进骨愈合。     

同种异体骨脱钙骨基质联合BMP修复兔桡骨骨缺损的实验研究

目的：探讨异体脱钙骨基质（DBM）骨泥复合骨形态发生蛋白（BMP）修复家兔桡骨节段性骨缺损的作用。方法：日本大耳白兔54只,雌雄不限,随机分为3组,A组：空白组（缺损区不植入任何材料）,B组：对照组（缺损区植入金世植骨灵）,C组：实验组（缺损区植入DBM骨泥）。建立家兔单侧桡骨骨缺损模型,采用同种异体骨DBM骨泥复合BMP进行修复,复合骨泥中加入骨胶原作为塑形剂,术后4、8、12周观察新骨生成情况,通过形态学、X线、组织学及计算机图像分析等观察指标,并与对照组及空白组进行比较,客观评价骨泥诱导成骨及骨缺损修复能力。结果：DBM与BMP复合骨泥易根据骨缺损大小塑形,术中操作简单。术后A组骨缺损未获骨性修复,B、C组骨缺损均获得骨性愈合,且新骨面积测定显示B、C组间成骨速度无明显差异（P〉0．05）,比A组快（P〈O．01）。结论：异体DBM骨泥复合BMP具有良好的骨修复作用。     

TGF-β对胎兔颅骨成骨样细胞体外成骨作用及BMP蛋白表达影响的研究

目的 探讨TGF－β对胎兔颅骨成骨样细胞体外成骨作用及BMP蛋白表达的影响。方法 采用ALP活性测定及骨结节计数方法观察TGF－β对胎兔颅骨成骨样细胞体外的成骨作用，BMP－McAb免疫组化染色及其定量分析观察TGF－β对胎兔颅骨成骨样细胞BMP蛋白表达的影响。结果 TGF－β（3－7d) 对ALP活性有促进作用，并呈一定的时效和量效关系。TGF－β对骨结节形成低剂量时有促进作用，高剂量时有较强的抑制作用；TGF－β对成骨细胞BMP蛋白表达表现为抑制作用；二者均有显著性差异。结论 TGF－β对胎兔颅骨成骨样细胞体外成骨及BMP蛋白表达表现为双相作用。     

BMP及TGF-β复合生物材料治疗股骨头坏死的组织学观察

目的 观察吸附BMP－2和TGF－β1的PLLA／CPPf多孔材料植入股骨头坏死（Femur head necrosis,FHN)现灶清除区后的组织学变化，评价其诱导成骨活性及生物降解性，以探索FHN治疗的新方法。方法 在激素诱导性兔FHN模型上行坏死病灶清除术，以该种材料充填骨腔，行大体和组织学光镜观察。结果 （1）大体观察，术后2周充填区周边出现反应带；6周周边反应带基本消失，有骨小梁长入充填区；12周骨小梁已布满充填区。（2）光镜观察，术后1周充填区周围间充质细胞大量增生，纤维肉芽组织形成，开始且持续呈网状长入充填区；2周周边有新骨产生，以后不断增加并向充填区中心延伸，材料逐渐降解，12周充填区广布相对较成熟的骨小梁。结论 PLLA／CPPf多孔隙材料是生长因子的良好吸附载体，具有较好的生物相容性和生物可降解性，适合活组织长入，吸附有BMP－2的TGF－β1的PLLA／CPPf多孔隙材料具有较强的诱导成骨能力，能有效地提高在骨坏死病理条件下股骨头的骨修复能力。     

促进骨折愈合方法的研究概况

影响骨折愈合的因素众多、生理过程极其复杂.本文就近年在促进骨折愈合方法及机制方面的研究近况作一综述.1 骨生长因子及诱导成骨1.1 诱导成骨骨折愈合是通过爬行替代还是骨诱导来完成,多年来一直存在分歧[1,2,3].Chalmers等[4]提出诱导成骨三要素:①诱导刺激物-BMP;②BMP的靶细胞-间充质类细胞;③有利于骨生长的血供环境.继Urist之后已从人及许多动物骨组织中提纯了BMP.实验表明正常骨组织中BMP主要位于骨胶原纤维、骨膜及骨髓基质中.临床应用BMP修复骨缺损先后有成功报道[5].但BMP在骨内含量极微且易降解,临床应用受到限制.针对这一问题,近年许多学者将BMP与载体结合组成其释放系统(BMP/载体)来解决之.常用的载体有钙磷陶瓷人工骨、生物玻璃、石膏、胶原及纤维蛋白凝块等.介绍BMP/磷酸三钙植入肌肉内其诱导的新骨量比单用BMP大12倍[6],表明BMP借助载体缓慢释放,不断作用于靶细胞,诱导形成更多新骨.此外BMP基因重组蛋白的研究也受到重视.有关BMP应用方式,除手术切开植入外,近有学者将BMP与成纤维细胞因子(FGF)复合物经皮注射[22],促进骨愈合.这些新的组合及给药途径,将为临床应用带来积极影响.……     

芝麻素含药血清对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖和胶原分泌的影响

目的：观察芝麻素含药血清对血管紧张素Ⅱ（ Ang Ⅱ）诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原分泌的影响,探讨其可能机制。方法应用血清药理学方法制备大鼠含药血清,采用复合酶消化和差速贴壁法原代培养心肌成纤维细胞,MTT法测定芝麻素对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖的影响, ELISA法测定Ⅰ、Ⅲ型胶原含量与转化生长因子β1（ TGF－β1）水平,比色法测定细胞总抗氧化能力（ T－AOC）及丙二醛（ MDA）含量,Western blot法测定Smad3活化水平。结果芝麻素含药血清可明显抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原分泌（ P＜0.05,P＜0.01）,降低TGF－β1含量及Smad3活化水平（P＜0.05,P＜0.01）。此外,芝麻素含药血清可明显提高成纤维细胞抗氧化能力,减少脂质过氧化产物MDA生成（ P＜0.05,P＜0.01）。对照血清对上述各项指标均无明显影响。结论芝麻素含药血清可明显抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖与胶原分泌,其机制可能与改善氧化应激状态、调节TGF－β1／Smad信号通路有关。     

脱细胞松质骨/骨形态发生蛋白-2/胶原海绵重建兔上颌窦外侧骨壁伴黏膜缺损实验研究

目的利用胶原海绵及复合骨形态发生蛋白-2（BMP-2）的脱细胞松质骨,原位修复兔上颌窦外侧骨壁伴黏膜缺损,观察BMP-2原位诱导成骨及上颌窦外侧骨壁、黏膜修复状况。方法制备复合BMP-2的片状脱细胞松质骨,单侧以生物蛋白胶固定薄层胶原海绵作为修复材料,未加BMP-2材料用做对照。手术去除兔上颌窦外侧骨壁及附着黏膜,胶原海绵侧面向窦腔,原位修复缺损,术后3个月进行大体标本及病理切片观察,了解其修复效果及成骨情况。结果兔术后健康状况良好,术后3个月大体观察兔上颌窦外侧壁缺损修复良好,窦腔内侧面有新生黏膜覆盖。病理学检查发现实验组脱细胞松质骨内有新骨形成,对照组仅有纤维结缔组织长人。结论BMP-2具有诱导成骨能力,胶原海绵可用作黏膜再生支架,脱细胞松质骨／BMP-2／胶原海绵,可用于修复上颌窦局部骨壁伴黏膜缺损。     

骨形态发生蛋白12,13对促进髌腱愈合的体外细胞培养研究

骨型态发生蛋白(bone morphogenetic protein，BMP)是转移生长因子(TGF)-β家族中的成员之一，在胚胎形成和组织修复过程中对骨和软骨的形成起诱导作用^[1,2]。BMP12和BMP13在肌腱损伤修复过程中所起的作用机制尚未有研究。本实验应用人髌腱分离培养的成纤维细胞进行体外相关实验，评估BMP12和BMP13可能促进肌腱损伤愈合的作用。     

TGF—β诱导骺板肥大区软骨细胞向成骨样细胞分化

目的 通过研究转化生长因子－β（TGF－β）对骺板软骨细胞分化的作用,揭示TGF－β软骨内成骨的作用机制。方法 采用鸡胚股骨无血清培养、酶组化检测碱性磷酸酶（ALP）、免疫组化检测Ⅰ型胶原、纤维粘连蛋白（FN）等方法,观察TGF－β在不同作用时间和剂量时对骺板肥大区软骨细胞分化的作用。结果 TGF－β可使肥大区软骨细胞表达Ⅰ型胶原和FN,使ALP表达增加,并存在着量效和时效关系。结论 TGF－β可以诱导鸡胚股骨骺板肥大区软骨细胞向成骨样细胞分化,与TGF－β的作用剂量和时间密切相关。     

新型重组异种骨移植与其同带血循骨膜联合移植治疗兔骨缺损

目的：探讨新型重组异种骨－复合rhBMP2的异种骨（rhBMP2/BCB)移值及其与带血循骨膜联合移植,修复节段性骨缺损的效果,方法：将基因重组人BMP2（rhBMP2)与去抗原牛松质骨载体（BCB）复合,制成rhBMP2／BCB,并采用桡骨干1.5cm缺损动物模型,通过线,生物力学,骨密度,组织学等检测手段,对单纯rhBMP／2BCB移植方法及其与带血循骨膜联合移植方法进行对比研究,结果：（1）单纯rhBNP2/BCB移植,可在16wk使节段性骨缺损基本修复,其机制与过程与重组合异种相似;（2）rhBMP2／BCB与带血循骨联合移植,双用8wk即可修复骨损损,其修复机制与骨膜联合移植,仅用8wk即可修复骨缺损,其修复机制与骨折修复相仿,包括膜内成骨和软骨成骨两种机制,结论：上述二种方法均可有效地修复节段性骨缺损,但以rhBMP2／BCB与带血循骨膜联合移植较为理想,该方法同时具有良好的骨生成,骨传导和骨诱导作用。     

重组人BMP—2、bFGF与HA复合材料修复骨缺损的实验研究

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)与骨形态发生蛋白（BMP）复合对节段性骨缺损的修复作用，以及在骨修复过程中bFGF和BMP之间的相互作用。方法：用羟基磷灰石（HA）作为载体，将一定量的BMP和／或bFGF与之复合，形成HA／MBP/bFGF,HA/BMP复合物，分别修复1．0cm兔桡骨节段性缺损，术后2、4、8、12周取材，进行放射学，组织学及新骨形成的定量分析。结果：新骨能长入植入材料孔道和覆盖植入材料，修复骨缺损，第2、4、8，12周时，植入HA／BMP／bFGF复合材料侧新骨形成量均多于HA／BMP侧。结论：BMP/bFGF复合后骨修复作用优于单一的BMP，在骨缺损修复过程中BMP和bFGF有良好的协同作用。     

小鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化过程中α－玉米赤霉醇对 PⅠNP 和 BMP －2表达的影响

目的：探讨小鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化过程中α－玉米赤霉醇（α－ZAL ）对Ⅰ型前胶原 N 端前肽（PⅠNP）和骨形态发生蛋白－2（BMP －2）表达的影响。方法采用全骨髓培养差速贴壁法体外分离培养小鼠骨髓间充质干细胞，取第3代细胞分为空白诱导组、阳性诱导组及高、中、低浓度α－ZAL 诱导组。空白诱导组仅加入成骨条件培养基，阳性诱导组加入等量成骨条件培养基及雌二醇，高、中、低浓度α－ZAL 诱导组分别加入成骨条件培养基及梯度浓度（10－5、10－6、10－7 mol ／L）的α－ZAL。采用 ELISΑ法测定 PⅠNP 和 BMP －2的表达量。结果小鼠骨髓间充质干细胞原代培养呈长梭形，有接触抑制现象，诱导后细胞呈三角形、多角形、不规则形状，细胞生长密集时可重叠生长。与空白诱导组比较，各组 PⅠNP 表达量均明显升高（P ＜0．01），阳性诱导组及低、中浓度α－ZAL 诱导组 BMP －2表达量均明显升高（P ＜0．01），高浓度α－ZAL 诱导组 BMP －2表达量明显下降（P ＜0．01）。与阳性诱导组比较，低浓度α－ZAL 诱导组 PⅠNP 表达量明显升高（P ＜0．01），而中、高浓度α－ZAL诱导组 PⅠNP 表达量明显下降（P ＜0．01），低、中浓度α－ZAL 诱导组 BMP －2表达量均明显升高（P ＜0．01），高浓度α－ZAL 诱导组 BMP －2表达量明显下降（P ＜0．01）。结论α－ZAL 呈剂量相关性促进体外培养的小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化，低浓度（10－7 mol ／L）α－ZAL 可显著促进骨髓间充质干细胞骨向分化过程中 PⅠNP 和BMP －2的表达，随着剂量的升高，促进作用下降。     

小鼠卵黄囊间质干细胞的分离纯化及多向分化潜能的研究

目的：分离、纯化小鼠卵黄素间质干细胞，并观察其定向分化成骨、成软骨及成脂的潜能。方法：分离、纯化孕8.5d的小鼠卵黄囊间质干细胞，传代4次后进行成骨、成软骨及成脂诱导。观察细胞形态，检测AKP，Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ型胶原及BMP－1和BMP－2的表达，并进行组化染色，检测成骨、成软骨及成脂情况。结果：体外可获得纯化的卵黄囊间质干细胞，大小形态均一，呈梭形。成骨诱导后细胞向星形转化，AKP、Ⅰ型胶原、BMP－2及Von Kossa′s染色阳性，Ⅲ型胶原阴性。成软骨诱导后，细胞向多角形和圆形转化，AKP、Ⅱ型胶原、BMP－1及Alcian blue染色阳性，Ⅰ型胶原阴性。成脂诱导后细胞肥大，油红O染色阳性。结论：体外纯化的卵黄囊间质干细胞可诱导成骨、成软骨及成脂，具有多向分化潜能。     

促进骨折愈合方法的研究概况

影响骨折愈合的因素众多、生理过程极其复杂。本文就近年在促进骨折愈合方法及机制方面的研究近况作一综述。1　骨生长因子及诱导成骨1.1　诱导成骨　骨折愈合是通过爬行替代还是骨诱导来完成 ,多年来一直存在分歧 [1 ,2 ,3 ] 。 Chalmers等 [4] 提出诱导成骨三要素 :1诱导刺激物 - - BMP;2 BMP的靶细胞 - -间充质类细胞 ;3有利于骨生长的血供环境。继 Urist之后已从人及许多动物骨组织中提纯了 BMP。实验表明正常骨组织中 BMP主要位于骨胶原纤维、骨膜及骨髓基质中。临床应用 BMP修复骨缺损先后有成功报道 [5] 。但 BMP在骨内含量…     

骨形态发生蛋白复合物的成骨及修复作用

骨形态发生蛋白（bone morphogenetic protein，BMP）是一种具有诱导成骨（osteoinduction）能力的酸性蛋白质。现已发现多种BMP，各种BMP有同源性序列，多属转化生长因子-β（TGF-β）。超家族BMP主要分布于骨基质的胶原纤维、骨髓基质中的间充质细胞、骨膜细胞、牙原基及骨、软骨肉瘤细胞。BMP能诱导未分化间充质细胞向骨、软骨细胞分化，从而促进成骨。实验证实，BMP在动物体内、外均能诱导骨的生成。     

丹参抑制瘢痕形成的机制研究

目的 探讨丹参抑制瘢痕形成的作用机制。方法 将不同浓度及不同作用时间的丹参加入体外培养的人成纤维细胞,测细胞抑制率、成纤维细胞自分泌转化生长因子－β1（TGF－β1）及胶原。结果 丹参可抑制成纤维细胞增殖,随浓度增大及作用时间的延长,抑制率增加;而且,丹参可抑制成纤维细胞自分泌TGF－β1及减少胶原的合成（P＜0．05）,且二者成正相关关系。结论 丹参抑制成纤维细胞的增殖及TGF－β1的自分泌,减少胶原的合成。     

家兔骨生长诱导修复腭裂缺损的实验研究

目的 研究评价牛骨形成蛋白（ｂＢＭＰ）－白蛋白－成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）复合材料修复腭裂骨缺损的可行性。方法 建立家兔腭骨缺损模型，将固化的ｂＦＧＦ复合材料植入骨缺损区，通过其骨诱导作用，诱导新骨生成，修复骨缺损。经Ｘ线、组织学观察和钙含量测定。结果 ｂＢＭＰ－白蛋白－ｂＦＧＦ有很强的骨诱导作用，可以诱导骨形成、实验组与对照组Ｘ线骨修复分数评估分别为１２分，０分，组织学检查实验组骨修复完成，     

骨形态发生蛋白3基因转染成纤维细胞诱导成骨的实验研究

目的 通过基因转染方法，使成纤维细胞NIH－3T3细胞具有合成及分泌骨形态发生蛋白（BMP）、体内诱导新骨生成的能力。方法 定向克隆法将BMP3基因构建于PcDNA3表达载体，脂质体介导法转染NIH－3T3细胞，G418筛选获得稳定转化体，Northern印迹法检测转染细胞有无BMP3基因表达，免疫组织化学检测转染细胞内的BMP3蛋白合成，钙钴法染色不同时相的转染细胞碱性磷酸酶并作图像分析。将转染细胞注入裸鼠肌袋，观察注射后第4周诱导新骨生成情况。结果 转染细胞体外培养6周Northern印迹法检测到有明显的BMP3基因表达，免疫组织化学染色见转染细胞培养筛选5－8周后细胞浆内有染成黄色的BMP3蛋白质颗粒出现，图像分析蛋白质生成在转染后第6周达高峰。钙钴法碱性磷酸酶染色及图像分析示转染细胞内碱性磷酸酶明显高于同期对照组，两组间有显著性差异（P＜0．01）。被转染NIH－3T3细胞裸鼠肌袋诱导成骨实验见注射后4周注射部位有大量软骨细胞出现，并伴有骨小梁生成。结论 通过基因转染方法可以使NIH－3T3细胞具有合成及分泌内源性BMP的能力，合成及分泌的BMP具有良好的生物活性，肌袋实验具有诱导成骨作用。但是，由于基因治疗的某些不可控性因素，其安全性仍有待于进一步研究。     

β-磷酸三钙-脱细胞软骨支架复合兔BMSCs修复膝关节软骨缺损的实验研究

目的观察纳米磷酸三钙人工骨(β-TCP)、转化生长因子-β(TGF-β)、胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)、脱细胞耳软骨(DC)复合软骨细胞修复关节软骨缺损的效果。方法获取新西兰大白兔骨髓间充质干细胞(BMSCs),培养并体外诱导成软骨细胞,取异体兔耳软骨进行脱细胞处理,与β-TCP形成复合支架作为载体接种软骨细胞,加入TGF-β和IGF-I修复膝关节软骨缺损。实验动物(n=18)分为3组,实验组(n=8)复合支架加入TGF-β和IGF-I,对照组(n=6)仅以复合支架修复缺损,空白组(n=4)不加入任何修复材料。结果 BMSCs在体外生长稳定,增殖能力强,可被诱导为软骨细胞。软骨支架脱细胞完整,软骨陷窝排列有序,复合物植入缺损后第20周,实验组缺损内充填白色半透明新生软骨组织,色泽与正常软骨相似,与周围正常软骨连接良好。结论β-TCP-DC复合支架有较多的孔隙结构,降解速度快,组织相容性及细胞黏附性好,是组织工程修复关节软骨理想的种子细胞载体。