survivin基因在血液肿瘤细胞株的表达

survivin基因是近年来被发现的凋亡蛋白抑制因子家族(IAP)成员之一,其结构简单,组织分布具有明显的特征。我们研究了其在不同类型血液肿瘤细胞株中的表达,现报道如下。对象和方法1　研究对象　将巨核细胞白血病细胞株Dami、Burkitt’s淋巴瘤细胞株Raji、髓系白血病细胞株HL 6 0、组织细胞淋巴瘤细胞株U937、红白血病细胞株HEL、T细胞白血病细胞株6T CEM、慢性髓细胞白血病细胞株K5 6 2、T细胞淋巴瘤细胞株Jurkat、急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4、骨髓增生异常综合征RAEB t细胞株MUTZ 1(各细胞株均为我院保种)置于RPMI 16 4 0…     

髓系白血病原代细胞和肿瘤细胞株ATM转录水平的研究

共济失调毛细血管扩张症(ataxiatelangiectasis,AT)是一种罕见的常染色体隐性遗传病,以进行性中枢神经元变性、免疫缺陷、对放射线及其类似药敏感及患癌率高为特点。1995年Shilob确定AT为单基因遗传病,指出它是由于AT基因突变所致,并将此致病基因命名为ATM (ATmutated)。在淋巴细胞白血病中,有ATM基因普遍存在缺失的报道,同时伴随ATM蛋白表达的降低和缺失[1 5] 。在髓系白血病中,ATM的表达率未见报道,为此,我们重点研究了ATM基因在髓系白血病中的表达谱情况。对象和方法1　研究对象　2 2例白血病患者,其诊断符合FAB协作组诊断标…     

转染B7-1基因的Raji和Jurkat细胞诱导细胞因子mRNA表达的研究

为探讨B7共刺激分子在T细胞活化和分化中的作用，利用脂质体导的转基因技术将B7基因导入恶性血液病细胞系Raji和Jrkat细胞，用流式细胞术检测转基因前，后B7-1基因的表达，用RT-PCR检测T细胞表面细胞因子IL-2，IL-4和IFN-γmRNA的表达及这3种细胞因子在转基因后4，12，20及48小时的时间动态变化，结果发现，B7^ Raji细胞可诱导T细胞分泌细胞因子IL-2，IL-4和IFN-γ，B7^ Jurkat细胞可诱导IL-2和IFN-γ的分泌，而B7^-Raji细胞及B7^-Jurkat细胞均未诱导细胞因子的分泌，IL-2和IL-4在T细胞活化4小时即可检测到，IFN-γ在T细胞活化12小时可检测到，在20小时出现峰值，结论：B7-1基因的导入可有效地增强肿瘤细胞的免疫原性，激活T细胞，B7-1在T细胞活化和分化中起着更主要的作用。     

四种恶性血液病细胞系的Id4基因启动子甲基化

本研究探讨4种白血病和淋巴瘤细胞系以及非肿瘤细胞系和正常人骨髓Id4基因启动子甲基化状态及其差异。采用甲基化特异性聚合酶链反应（MS-PCR）对白血病细胞系K562和HL-60、淋巴瘤细胞系Ramous和CA46以及良性细胞系Hek937和正常人骨髓细胞进行Id4基因甲基化状态检测。结果表明：Id4基因在正常人骨髓细胞和Hek937细胞系中呈完全非甲基化状态，在4个血液肿瘤细胞系K562、HL-60、Ramous和CA46中均呈甲基化状态。结论：所检测的4种血液肿瘤细胞系中，Id4基因的甲基化状态与正常人骨髓细胞和非肿瘤细胞系完全不同，Id4基因甲基化模式的改变与造血细胞恶变的发生密切相关。     

人类珠蛋白基因转录水平的研究

人类珠蛋白各基因转录水平的研究 ,对阐明珠蛋白基因阶段特异性表达规律与机制 ,对探索药物作用机理及其它相关疾病的病理机理具有重要作用 ,特别是在地中海贫血的基础研究中应用更加广泛。     

端粒酶hTERT基因转录调节的研究进展

端粒酶是维持端粒长度的一种逆转录酶，对细胞增殖和癌变起重要作用。端粒的磨耗限制大多数体细胞的复制，肿瘤细胞主要通过转录上调端粒酶限制成分催化亚基端粒酶逆转录酶（hTERT）维持端粒长度。进一步认识端粒酶hTERT基因表达的调节机制，对肿瘤的诊断、防治有着重要意义。现就近几年来E-box结合蛋白、核激素、肿瘤相关病毒蛋白和RNAi抑制hTERT mRNA表达及其他因素调节端粒酶hTERT基因表达作一综述。     

人类珠蛋白基因转录水平的研究

人类珠蛋白基因转录水平的研究，对阐明珠蛋白基因阶段特异性表达规律与机制，对探索药物作用机理及其它相关疾病的病理机理具有重要作用，特别是在地中海贫血的基础研究中应用更加广泛。     

C—myc癌基因在正常人外周血淋巴细胞及肿瘤细胞株的表达

目的：探讨癌基因C-myc在正常人外周血淋巴细胞及肿瘤细胞株上的表达情况。方法：分离正常人外周血淋巴细胞,采用异硫氰酸胍一步法提取正常人外周血淋巴细胞及肿瘤细胞株RNA,利用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术,比较正常人与肿瘤细胞株C-myc mRNA表达程度。结果：HL-60细胞系C-myc RNA表达最强,GBC胃癌细胞株较正常人为高。结论：C-myc在正常与肿瘤细胞中呈现差别。     

雄黄对NB4和HL—60细胞的形态，PML mRNA及蛋白的表达影响

本研究以NB4,HL-60细胞为研究对象,采用Wright‘s染色法及荧光染色法、免疫荧光技术及RT-PCR法,探讨雄黄对NB4,HL-60细胞的形态、PML mRNA及蛋白的表达影响。结果发现：（1）经雄黄处理后,各组均出现细胞凋亡的形态学上改变。（2）雄黄处理后NB4细胞内融合蛋白降解,PML蛋白聚积于POD结构,随后降解;在HL-60细胞中PML蛋白发生相似改变。（3）雄黄处理后各组细胞PML mRNA表达均无显著影响。结论指出,在雄黄诱导下PML在蛋白水平参与诱导白血病细胞凋亡机制,雄黄能诱导NB4,HL-60细胞凋亡,抑制白血病细胞生长。     

基因fas的表达对细胞色素C诱导HL-60细胞凋亡的影响

本研究观察fas基因表达的变化对细胞色素C诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60细胞凋亡的影响，并探讨细胞色素C诱导HL-60细胞凋亡的机制。将体外培养的HL-60细胞分成6组，细胞色素C终浓度分别为0（对照组）、9．375、18．75、37．5、75、150mg／L，用流式细胞仪检测细胞色素C对HL-60细胞的凋亡作用．用RT—PCR和Westernblot检测以凋亡为主的HL-60细胞中fas的表达水平。结果表明：细胞色素C终浓度分别为0、9．375、18．75及37。5mg／L时HL-60细胞是以凋亡效应为主，fas基因的mRNA和蛋白的表达随着细胞色素C浓度的增高而增高，当细胞色素C浓度为75mg／L、150mg／L时，HL-60细胞是以坏死效应为主。结论：细胞色素C能够上调fasmRNA及其蛋白的表达，从而可以诱导HL-60细胞的凋亡。     

肿瘤相关基因fgfr3mRNA在白血病细胞中的表达及其临床意义

本研究旨在了解白血病细胞中fgfr3基因的表达水平及其和临床的关系。应用RT—PCR法检测4个白血病细胞系及96例白血病患者和14例对照者骨髓样本中fgfr3mRNA的表达，并分析了其与临床指标及染色体异常的相关性。96例白血病患者包括36例AML，29例ALL和31例CML。结果表明：fgfr3基因在K562和U937细胞中有表达，而在HL-60和SHI-1细胞中无表达。AL组和CML组fgfr3基因的阳性率（分别为46．15％和51．61％）与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。AML组和ALL组fgfr3基因的阳性率（分别为44．44％和48．28％）均高于对照水平，差异有统计学意义（p〈0．05）。fgfr3基因的阳性表达与外周血高白细胞计数（≥20×10^9／L）呈显著性正相关（P〈0．05）。ALL患者中fgfr3基因的表达与bcr／abl融合基因的异常呈显著正相关（r=0．151，P〈0．05）。而AL患者fgfr3基因的阳性表达与染色体预后分组无显著相关性。结论：AL和CML患者均存在fgfr3基因的过表达，提示fgfr3基因可能参与了AL和CML的发病。     

β-连环素在白血病细胞株的异常定位研究

β-连环素是Wnt信号通路关键的信号传递子，其在细胞的异常定位引起下游靶基因的转录是多种实体肿瘤发生的原因之一。由于造血细胞缺少典型的黏着连接（adherens junction，AJ），因此对β-连环素在血液肿瘤的表达及定位并无较多的研究。本研究探讨4种常见的白血病细胞株（Daudi，Jurkat，K562和Thp-1）中β-连环素蛋白的定位及β-连环素基因mRNA的表达水平，了解血液肿瘤中是否有β-连环素蛋白的定位异常，以期发现白血病新的发生机制，为寻找新的特异治疗靶点提供线索。用免疫细胞化学法检测β-连环素在白血病细胞系中的定位，用实时定量RT-PCR法测定β-连环素mRNA表达水平。结果表明：4种白血病细胞株有两种（Jurkat、Thp-1）存在β-连环素的异常定位，且β-连环素mRNA表达增高，但在Jurkat和Thp-1细胞中的β-连环素mRNA低于Daudi和K562细胞。这4种白血病细胞株中β-连环素基因的mRNA表达水平与其异常定位无相关性。结论：β-连环素定位异常可能参与部分血液肿瘤的发生，引起β-连环素定位异常的机制并不是发生在转录水平。     

HL-60细胞IRP2 mRNA、TfR mRNA、Fn mRNA的表达关系研究

为了探讨白血病细胞铁代谢及其调节机制，以及铁调节蛋白2（IRP2）在HL-60细胞铁代谢中的作用，将FeCl3或去铁胺（desferrioxamine，DFO）加入含有10％胎牛血清的RPMl1640培养液中，使HL-60细胞处于缺铁或富铁的不同状态下进行培养。分别于细胞培养后第12、24和48小时收集细胞，提取总RNA，采用RT-PCR半定量法测定IRP，mRNA、铁蛋白（Fn）mRNA和转铁蛋白受体（TfR）mRNA等指标的相对表达量。结果表明：①各实验组之间IRP2 mRNA的表达量变化不大，组间差异无统计学意义（F组间=1．199，P〉0．05）；而细胞培养时间对IRP2 mRNA的表达有影响，组内差异有统计学意义（F组内=43．418，P〈0．01），表现为随时间的延长，IRP2 mRNA的表达降低。②各实验组之间TfR mRNA的表达差异有统计学意义（F组内=7．184，F组间=113．926，P〈0.01）。在加入DFO的两个实验组中，TfR mRNA的表达升高。在加铁的两个实验组中，与对照组相比较，于12小时时TfR mRNA的表达量上升，24小时时达到高峰，之后迅速下降。③在加铁的两个实验组中，Fn mRNA的表达量较高，大约是对照组的2倍，它们与对照组比较，差异具有统计学意义（P〈0．05）；而在加入DFO的两个实验组中Fn mRNA的表达与对照组相比较，无明显的差异（P〉0．05）。④IRP，mRNA与TfR mRNA及Fn mRNA的表达均不相关（r=-0．005，r=0．074，P〉0．05）。结论：①IRP2在转录水平上可能是通过自身不同片段的量的变化，而在转录后水平上是以氧化修饰的方式通过自身降解，对HL-60细胞的铁代谢进行调节。②Fn mRNA和TfR mRNA不同程度地参与了对HL-60细胞内铁的调控过程。     

人成纤维样基质细胞系对HL-60细胞增殖和VEGF表达的影响

为了观察正常人骨髓成纤雏样细胞系(HFCL)对白血病细胞系HL-60细胞增殖和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响，用免疫组织化学对HFCL细胞进行组织学鉴定；建立HL-60细胞和HFCL细胞共培养体系，台盼蓝柜柒法测定生长曲线；既染色和瑞-姬姆萨染色后进行分裂指数(MI)测定；流式细胞术检测细胞周期的变化；Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)表达；ELISA双抗体夹心法检测HL-60细胞表达VEGF水平。结果发现。与HFCL细胞共培养后HL—60细胞生长受抑，且与HFCL细胞直接接触组的抑制作用大于用跨室共培养组，其分裂指数表现为单独HL-60细胞组大于用跨室共培养组，更大于与HFCL细胞直接接触组。同时发现HL-60细胞与HFCL细胞共培养后G1期细胞增多，S期细胞减少，且PCNA表达下调，以直接接触组为甚。HL-60细胞与HFCL细胞共培养后，培养上清的VEGF水平减低，直接接触组和跨室共培养组下降程度一样，而与HL-60细胞共培养，HFCL细胞增殖无明显变化。结论：正常人骨髓成纤维样细胞能抑制白血病细胞系HL-60的增殖，抑制细胞周期，降低VEGF因子的表达。     

bcl-2在HL-60细胞分化和凋亡过程中的表达

细胞凋亡抑制基因bcl-2在髓系造血细胞中的表达与细胞分化程度有关。本研究证实全反式维甲酸(ATRA)可诱导HL-60细胞凋亡。流式细胞仪分析表明,在HL-60细胞分化凋亡过程中bcl-2表达逐渐下降,凋亡细胞bcl-2表达水平较低,而未凋亡细胞bcl-2仍维持在高水平。上述结果提示:经ATRA诱导分化成熟的HL-60细胞与正常粒细胞相似,最终走向凋亡;bcl-2表达降低可能对终末分化细胞凋亡有易化作用;未凋亡细胞bcl-2高表达可能是肿瘤细胞耐药和白血病复发的重要因素。     

VEGF及其受体在恶性血液细胞系HL-60及Raji的表达

为了探讨血管内皮生长因子(VEGF)在恶性血液病中的作用，以恶性血液细胞系HL-60和Raji为实验对象，应用RT-PCR及ELISA法检测肿瘤细胞。VEGF基因的表达，并采用免疫组织化学染色法测定细胞表面VEGF受体Fit-1的表达。结果显示：髓性白血病细胞系HL-60和淋巴瘤细胞系Raji中均存在VEGF—mRNA的表迭。在培养48小时后，HL-60细胞和Raji细胞的培养上清液中VEGF含量明显高于正常人外周血单个核细胞。VEGE-R(Flt-1)在两种肿瘤细胞的胞膜上均有表达，而正常人外周血单个核细胞上无表迭。这一结果表明，白血病和淋巴瘤细胞具有产生VEGF的能力，并可将VEGF分泌到细胞外基质微环境中。VEGF可作用于白血病和淋巴瘤细胞本身，在恶性血液肿瘤细胞中存有VEGF的自分泌途径，而VEGF的自分泌成为血液肿瘤细胞高侵袭性生物学特性的基础。结论：抑制VEGF的分泌将有助于阻断其与内皮细胞间的互动环，降低其增殖、抗凋亡和侵袭性能．对提高肿瘤细胞对化疗的敏感性也将十分有意义。     

雷帕霉素对急性髓系白血病细胞系HL-60和HL-60/VCR生长的抑制作用

为了探讨mTOR抑制剂雷帕霉素对急性髓系白血病（acute myeloid leukemia;AML）细胞的增殖和药物敏感性的影响。以AML细胞株HL-60和多药耐药HL-60/VCR细胞系为研究对象,采用MTT法测定生长曲线和流式细胞术检测细胞周期;Western blot检测P糖蛋白（P-glycoprotein,Pgp）的表达。结果显示：与空白对照组细胞比较,雷帕霉素能抑制HL-60和HL-60/VCR细胞生长增殖（p〈0.05）,且随着浓度升高,增殖抑制率逐渐增高,24-72小时的细胞增殖抑制率随着时间的延长而有所增高（p〈0.05）,同时可阻滞细胞从G1期到S期的细胞周期转换。雷帕霉素抑制HL-60/VCR细胞的Pgp蛋白的表达。与柔红霉素单独应用相比,雷帕霉素50nmol/L、100nmol/L与柔红霉素联合应用使HL-60和HL-60/VCR细胞增殖抑制率明显增高（p〈0.05）,尤其是当先加雷帕霉素,而24小时后再加柔红霉素时。结论：mTOR抑制剂雷帕霉素对HL-60和多药耐药的HL-60/VCR细胞的生长均有抑制作用,除伴G0/G1期阻滞外,还增加细胞对柔红霉素的敏感性,这为临床难治性AML治疗提供新的治疗手段。