水通道蛋白4在脂多糖致大鼠脑水肿的表达及与血脑脊液屏障的关系

目的观察脂多糖（LPS）致幼年大鼠感染性脑水肿后水通道蛋白4 mRNA（AQP4mRNA）的表达变化,探讨其作用机制。方法将50只幼鼠随机分为内毒素组（40只）和对照组（10只）,内毒素组又按时间点分为6、12、24及48h4个亚组,每组均为10只。于预定时间点处死动物,制备脑组织标本。用干湿重法测定不同时间点脑组织含水量,甲酰胺法测定伊文思蓝（EB）水平,RT-PCR技术检测脑组织内AQP4 mRNA的表达。结果内毒素组脑组织含水量和EB水平明显高于对照组。LPS注射后6h,脑组织AQP4 mRNA水平的表达均明显增加,12h时达高峰,各时间点与对照组比较均有显著性差异（Pa〈0.01）。结论感染性脑水肿后脑组织中AQP4 mRNA的表达增加,且与血脑脊液屏障的破坏程度呈正相关。     

AQP-4 mRNA在新生鼠缺氧缺血损伤脑组织的表达及与脑水肿的关系探讨

目的 观察水通道蛋白4mRNA（aquaporin-4，AQP-4mRNA）在新生鼠缺氧缺血损伤脑组织的表达，探讨其变化及与脑水肿发生的可能关系。方法 健康7日龄SD大鼠共240只，随机分为对照组120只和缺氧缺血性脑损伤模型组（HIBD组）120只。HIBD组经右侧颈总动脉结扎后，吸入8％O21h，建立HIBD模型。对照组仅行假手术，不予颈总动脉结扎和缺氧。两组均于HIBD模型制成后0、6、24、48h和72h分别处死动物（各时间点动物24只），进行脑含水量观察，ReahimePCR检测脑组织AQP4mRNA表达。结果 HIBD组6、24、48h和72h脑组织含水量均较对照组增加，差异有统计学意义（P〈0．05）；与对照组比较，HIBD组脑组织AQP4mRNA表达在48h内呈下降趋势，72h出现恢复，但仍低于对照组（P〈0．05）。结论 AQP4mRNA在脑组织表达下降可能与脑水肿的发生有关，我们推测AQP4可能参与了HIBD时脑水肿的调节机制。     

AQP-4 mRNA在新生鼠缺氧缺血损伤脑组织的表达及与脑水肿的关系探讨

目的观察水通道蛋白4 mRNA(aquaporin-4,AQP-4 mRNA)在新生鼠缺氧缺血损伤脑组织的表达,探讨其变化及与脑水肿发生的可能关系。方法健康7日龄SD大鼠共240只,随机分为对照组120只和缺氧缺血性脑损伤模型组(HIBD组)120只。HIBD组经右侧颈总动脉结扎后,吸入8%O21h,建立HIBD模型。对照组仅行假手术,不予颈总动脉结扎和缺氧。两组均于HIBD模型制成后0、6、24、48h和72h分别处死动物(各时间点动物24只),进行脑含水量观察,RealtimePCR检测脑组织AQP-4 mRNA表达。结果HIBD组6、24、48h和72h脑组织含水量均较对照组增加,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,HIBD组脑组织AQP-4 mRNA表达在48h内呈下降趋势,72h出现恢复,但仍低于对照组(P<0.05)。结论AQP-4 mRNA在脑组织表达下降可能与脑水肿的发生有关,我们推测AQP-4可能参与了HIBD时脑水肿的调节机制。     

姜黄素诱导HSP70及对大鼠感染性脑水肿保护作用的研究

目的：研究姜黄素预处理诱导HSP 70表达的量效和时效关系及对感染性脑水肿的保护作用。方法：①量效及时效关系的研究:SD大鼠随机分为空白对照组、二甲亚砜(DMSO)组、热休克(HS)组和姜黄素(CUR)组;再根据姜黄素的剂量(mg/kg)分为80 mg,40 mg,20 mg及10 mg组。根据观察时间分为0,2,4,6,12,16,24 h及48 h组。Western印迹分析检测脑组织HSP70。②脑水肿保护作用研究:SD大鼠随机分为生理盐水对照组(NS)、感染性脑水肿组(PB)、二甲亚砜组、热休克预处理组和姜黄素预处理组。制备感染性脑水肿模型,用干湿法测定脑含水量;原子光谱吸收法测定脑组织钠、钾含量。结果：正常情况下,脑组织有一定量HSP70的表达,DMSO,CUR 20 mg和CUR 10 mg组HSP70表达无明显增多;HS,CUR 40 mg及CUR 80 mg组HSP70明显增加,以CUR 40 mg组明显,差异有显著性(P<0.01)。HSP70在注射姜黄素后2 h开始表达,16 h达高峰,24～48 h处于稳定状态。HS组、CUR组的脑含水量和脑组织钠离子含量与PB组比较有明显降低,差异有显著性(P<0.01)。结论：姜黄素可诱导大鼠脑组织HSP70的产生,有剂量及时间依赖关系。姜黄素预处理对大鼠感染性脑水肿有保护作用。     

巨噬细胞炎症蛋白2在脂多糖致大鼠脑水肿中的表达

目的探讨巨噬细胞炎症蛋白2(MIP2)在脂多糖(LPS)致大鼠脑水肿发病过程中的表达及纳洛酮对其干预作用。方法SD大鼠84只分3组,各28只,对照组(NS组)予0.2mL生理盐水颈内动脉注射;内毒素组(LPS组)颈内动脉注射LPS200μg;纳洛酮治疗组(NAL组)颈内动脉注射LPS后10min,1、2、6、12h及处死前2h腹腔注射纳洛酮1mg/kg。于不同时间点测定脑组织匀浆MIP2含量。干湿法测定脑组织含水量,甲酰胺法测定伊文思兰(EB)含量。结果LPS组脑组织含水量、EB含量显著高于NS组(P<0.01)。NAL组脑组织含水量和EB含量显著低于LPS组(P<0.01),但仍较NS组明显升高(P<0.01)。LPS组脑组织含水量与EB含量呈正相关(r=0.743P<0.01)。LPS组MIP2显著高于NS组(P<0.01)。NAL组MIP2显著低于LPS组(P<0.01)。结论MIP2参与脑水肿的发生发展,纳洛酮可抑制MIP2的生成,减轻脑水肿。     

核因子-КB活性在大鼠脑水肿的变化及热休克反应对其影响的研究

目的 研究核因子-КB(NF-КB)在百日咳菌液致大鼠感染性脑水肿模型中的活性变化及热休克反应对其影响。方法 动物随机分为：①正常对照组(NS)，②感染性脑水肿组(PB)，③热体克处理组(HS PB)。取左大脑半球全层脑组织分别测定脑组织含水量，干脑组织钠、钾离子含量；采用电泳迁移率改变法检测各组神经细胞核内NF-КB DNA-蛋白结合物活性的变化北做密度扫描定量分析。结果 HS PB各组脑组织含水量明显低于PB组(P<0.01)，HS PB各组Na^ 含量明显低于PB组(P<0.01或P<0.05)，K^ 含量除24h之外，均明显高于PB组(P<0.01)。与正常对照组比较，2h感染性脑水肿组NF-КB活性开始增加，井逐渐增高，以24h为最明显。热休克处理组各时相NF-КB活性均有不同程度减低。结论 大鼠感染性脑水肿时NF-КB活性增加，热休克反应对太鼠感染性脑水肿的保护作用可能与抑制NF一赶I的活性有关：     

感染性脑水肿大鼠脑皮质细胞凋亡研究

目的　检测感染性脑水肿大鼠脑皮质一氧化氮 (NO)及皮质神经细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl 2表达 ,探讨皮质细胞凋亡的可能机制。方法　观察大鼠感染性脑水肿组与假手术组 2 4h脑含水量、钠、钾含量、脑组织HE染色、脑皮质匀浆NO-2 /NO-3 含量及脑皮质Bax、Bcl 2免疫组织化学阳性率。结果　感染性脑水肿组大鼠的脑组织钠含量与含水量较假手术组大鼠高 ,而钾含量较假手术组低。感染性脑水肿大鼠脑皮质匀浆NO生成 [(82 .4± 15 .9)nmol/ g]较假手术组大鼠 [(5 5 .6 8± 16 .30 )nmol/ g]明显增多 (t=6 .16 6　P <0 .0 1) ,其皮质神经细胞Bax表达 [(6 5 .8± 10 .7) % ]较假手术组 [(34.5± 12 .0 ) % ]显著增多 (t=5 .337　P <0 .0 1) ,而Bcl 2表达 [(2 1.3± 6 .1) % ]较假手术组 [(5 8.3± 18.7) % ]明显减少 (t=7.4 36　P <0 .0 0 1)。感染性脑水肿大鼠脑皮质中NO数量与Bax阳性数呈正相关 (r =0 .5 87　P <0 .0 1)。结论　感染性脑水肿大鼠脑皮质在感染后 2 4h有凋亡发生 ,其皮质中NO分泌增多可能是导致脑皮质细胞凋亡原因之一     

肺炎链球菌溶血素致幼鼠感染性脑损伤动物模型的建立

目的 探讨经颈内动脉注射肺炎链球菌溶血素(PLY)建立感染性脑损伤动物模型的方法和可行性.方法 采用颈内动脉注射PLY制作幼年大鼠感染性脑损伤动物模型.选取健康普通级1月龄SD大鼠160只,体质量100～120 g,雌雄不限,随机分为PLY组和对照组,其中PLY组(实验组)80只,颈内动脉注射PLY 0.2 mL(7 μg);对照组80只,颈内动脉注射等体积9g·L-1盐水.根据不同观察时间点(注射后6 h、12 h、24 h及48 h),将PLY组SD大鼠分为4个亚组,每个亚组中分别有10只注射伊文思蓝(EB),测定不同时间点脑组织EB水平;注射EB组经右颈外静脉近心端注入20 g·L-1 EB(2 mL·kg-1),推注时间1～2 min.各组处理后,待观察至相应时间点,将大鼠麻醉行心脏灌注后断头取脑,用于制作脑组织标本,以备观察.采用干湿质量法检测其脑组织含水量(BWC),甲酰胺法测定其脑组织EB水平,利用免疫组织化学法检测其脑组织神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达.结果 与对照组相比,HE染色光镜下观察,PLY组脑组织可见血管扩张、血管周围间隙增宽、炎细胞浸润、神经元空泡变性、星形胶质细胞体积增大肿胀、细胞核固缩等改变.各时间点PLY组BWC、EB水平、NSE及GFAP表达量均明显高于对照组,差异均有统计学意义(Pa＜0.01).结论 经幼鼠颈内动脉注射PLY可以成功建立幼鼠感染性脑损伤模型.     

水通道蛋白4表达减少与新生大鼠缺氧缺血脑水肿的关系

目的：目前,有关水在细胞内外或跨过血脑屏障的转运机制尚不清楚。水通道蛋白4(AQP4)是水通道蛋白家族中在脑表达最丰富的一个亚型,该文旨在探讨新生大鼠脑缺氧缺血后AQP4表达的改变及其与磁共振(MR)显示的脑水肿的关系。方法：7日龄新生大鼠24只,在缺氧前,缺氧后0h,1h和24h行MR扫描获得T2加权成像和表面弥散系数(ADC),应用免疫组化染色观察脑内AQP4表达和血脑屏障通透性的改变,并用蛋白质印迹行AQP4半定量分析。结果：缺氧后0h,整个缺血半球ADC值明显下降,缺氧后1h时ADC部分恢复,缺氧后24h时ADC改变与1h时类似。缺氧后缺血半球T2值增高,其动态变化类似ADC变化。缺氧后0h时可见IgG渗出脑血管外,随着缺氧后时间延长,IgG渗出逐渐加重。缺氧后缺血半球AQP4免疫染色减弱,其变化在缺氧后各时间点与ADC和T2改变相对应。蛋白质印迹分析显示仅缺氧后24h时AQP4减少。结论：新生大鼠脑缺氧缺血后AQP4表达减少,其减少可能参与了急性缺氧缺血性脑水肿的形成。缺氧后AQP4表达的快速减少可能与AQP4蛋白质构像改变或分布异位有关。     

缺血后处理对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的影响

目的探讨缺血后处理(IPostc)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)可能的神经保护作用及其机制。方法以7日龄SD大鼠为研究对象,随机分为假手术组、HIBD组、IPostcⅠ组(15 s再灌注/15 s夹闭×3个循环)及IPostcⅡ组(30 s再灌注/10 s夹闭×3个循环),每组根据缺氧缺血后时间分为0、6、12、24 h及48 h 5个亚组,每个亚组15只。应用右侧颈总动脉夹闭联合低氧(8%O2+92%N2)建立HIBD模型,监测脑组织形态学变化,比较超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、脑组织含水量及水通道蛋白4(AQP4)mRNA相对表达量随时间的变化规律。结果经缺氧缺血处理的大鼠均出现典型的神经行为学异常、形态学和生化指标的变化。IPostcⅠ组SOD活性显著改善,MDA含量降低,脑组织含水量及AQP4 mRNA相对表达量降低,在6 h以后作用显著,差异有统计学意义(P<0.05)。而IPostcⅡ组无明显改善作用。结论缺血后处理对新生大鼠HIBD具有一定的神经保护作用,其机制与减轻氧化应激损伤及脑水肿有关。     

自由基在幼年鼠内毒素性脑水肿发病机理中的作用及地塞米松、IVIG对其影响的研究

目的　探讨总巯基 (TSH)、非蛋白巯基 (NPSH)及丙二醛 (MDA)等自由基在幼年鼠内毒素性脑水肿发病机理中的作用以及地塞米松 (DEX)、IVIG对其干预作用。方法　Wistar鼠 1 2 0只 ,对照组 :2 4只 ,1mg/kg生理盐水腹腔注射 ;单纯内毒素 (LPS)组 :36只 ,1 0mg/kgLPS腹腔注射 ;地塞米松治疗组 (DEX组 ) :36只 ,LPS 1 0mg/kg腹腔注射后 ,立即从尾静脉给予DEX 1 0mg/kg;免疫球蛋白治疗组 (IVIG组 ) :共 2 4只 ,LPS 1 0mg/kg腹腔注射后 ,立即从尾静脉给予IVIG 40 0mg/kg。于不同时间用常规生化方法测定脑组织匀浆中MDA、TSH、NPSH和伊文思蓝 (EB)含量。用干湿法测定脑组织含水量。结果　LPS组脑含水量、EB含量及MDA含量均明显高于对照组 ,而TSH和NPSH含量明显低于对照组 (P <0 0 5或P <0 0 1 ) ;DEX组和IVIG组脑含水量、EB含量及MDA含量与LPS组相比则有明显降低 ,以 6h更明显 (P <0 0 5或P <0 0 1 ) ,而TSH和NPSH含量分别在各时间点上比LPS组明显增高 ,但IVIG对NPSH含量影响与LPS组相比差异无显著性 (P >0 0 5)。结论　自由基参与了幼年鼠内毒素性脑水肿的发生发展 ,初步证实地塞米松和静注免疫球蛋白通过影响自由基 ,具有治疗幼年鼠内毒素性脑水肿的作用     

地塞米松作用下细胞间黏附分子-1在脂多糖致脑水肿大鼠脑组织中表达的变化

目的探讨脂多糖（LPS）致大鼠脑水肿发生过程中,地塞米松作用下细胞间黏附分子-1（ICAM-1）蛋白表达水平。方法将实验大鼠随机分为9g/L盐水组（NS组）、LPS组、地塞米松组（DXM组）。各组按观察时间分为4、6、12、24及48h组。LPS诱导大鼠脑水肿发生。免疫组织化学染色法测定脑组织ICAM-1表达,并测定脑组织伊文思蓝（EB）水平。结果LPS和DXM组脑组织含水量和EB水平均较NS组明显增高（Pa〈0.05）;LPS组各时间点ICAM-1蛋白表达量均高于NS和DXM组（Pa〈0.01,0.05）;DXM组4、6、12、24hICAM-1蛋白表达量均较NS组增高（Pa〈0.05）,48h时二组无显著差异（Pa〉0.05）。LPS组脑组织含水量和EB水平、ICAM-1蛋白表达量和脑组织含水量、ICAM-1蛋白表达量和EB水平均呈显著正相关（r=0.537,0.467,0.549Pa〈0.05）。结论ICAM-1参与LPS诱导的脑水肿的发生、发展过程。早期应用糖皮质激素可抑制炎性细胞因子的生成,减轻炎性反应与组织损伤。     

新生猪缺氧缺血脑水肿早期MRI及水通道蛋白4的变化

目的 探讨新生猪急性缺氧缺血脑水肿早期MRI的改变、相应脑组织水通道蛋白4(AQ,P4)的表达及二者的关系.方法 选择生后3 d的健康新生猪14只,随机分成实验组和对照组(假手术组),在缺氧缺血后0、1.5、3、4.5和6 h进行MRI扫描,获得明显脑水肿区域的表观扩散系数(ADC)、磁共振扩散加权成像(DWI),应用免疫组织化学方法 观察缺氧缺血后6 h脑组织AQP4的表达.结果 实验组在缺氧缺血后1.5 h时,脑DWI图像上开始出现高信号区,局部ADC值下降,主要分布于大脑皮层、基底神经节及脑室旁区,在3 h和6 h的DWI图像上,高信号区更加明显且范围扩大,ADC值明显下降,6 h后脑室旁的AQP4表达明显增多,相对比表达强度(吸光度值)为(15.0±4.0)%.明显高于对照组(5.1±2.9)%,差异有显著性(t=3.09,P＜0.01),并与该区域的ADC值呈显著负相关(r=0.876,P＜0.01),与rs-DWI(DWI高信号区面积与同层脑总面积比值)呈显著正相关(r=0.846,P＜0.01o结论 ADC、DWI能够早期诊断缺氧缺血性脑水肿,AQP4在急性缺氧缺血脑水肿的发生机制中起重要的作用,ADC、DWI可间接反映AQP4的表达水平.     

褪黑素对肺炎链球菌溶血素致大鼠脑损伤细胞凋亡的影响

目的 探讨褪黑素(MT)对肺炎链球菌溶血素(PLY)致脑损伤细胞凋亡的影响.方法 幼鼠84只随机分成3组:9 g·L-1盐水组(NS组)28只,颈内动脉注射9 g·L-1盐水;PLY组28只,颈内动脉注射0.2 mL(7 μg)PLY; MT组28只,腹腔注射(1 g·L-1)MT 10 ng·kg-1,15 min后颈内动脉注射0.2 mL(7μg)PLY.每组按照注射后不同的时间点(24 h、48 h)分为2个亚组.预定时间点处死动物,制备脑组织标本.干湿质量法测定其脑组织含水量( BWC),甲酰胺法测定伊文思兰(EB)水平,免疫组织化学技术测定凋亡诱导因子(AIF)表达,原位末端标记法检测细胞凋亡.结果　HE染色光镜下可见PLY组血管间隙增宽,大脑皮质炎性细胞浸润,胶质细胞和神经无细胞有不同程度肿胀、空泡变性.NS组无上述病理变化.MT组大鼠脑组织改变较PLY组轻.PLY组各时间点脑组织BWC水平、EB水平、AIF水平明显增加,24h高于48 h,差异有统计学意义.PLY组各时间点凋亡细胞数明显增加,48 h高于24h,差异有统计学意义.各时间点PLY组与对照组比较均有统计学差异.予以MT干扰后各时间点脑组织各指标以及凋亡细胞数均降低,与PLY组比较,差异有统计学意义.结论　MT能够降低AIF表达,减少神经细胞凋亡,保护脑组织.     

姜黄素预处理对大鼠感染性脑水肿的保护作用及其机制研究

目的　观察姜黄素预处理对大鼠感染性脑水肿的保护作用 ,并从预处理后的脑组织氧自由基、细胞因子含量及HSP70表达三方面探讨其可能的作用机制。方法　SD大鼠随机分为 5组 :(1)正常对照组 (NS组 ,n =9) ;(2 )感染性脑水肿组 (PB组 ,n =12 ) ;(3)溶剂对照组 (DMSO组 ,n =9) ;(4)热休克预处理组 (HS组 ,n =9) ;(5 )姜黄素预处理组 (CUR组 ,n =13)。制备感染性脑水肿模型。用干湿法测定脑含水量 ;原子光谱吸收法测定脑组织钠、钾含量 ;比色法测定脑组织匀浆上清MDA、SOD含量 ;ELISA测定TNF α、IL 1β含量及Western印迹方法研究HSP70的表达。 结果　脑含水量、脑组织钠离子含量、脑组织匀浆上清MDA含量及TNF α、IL 1β含量 :PB组比NS组增高 (P<0 0 1) ,HS组、CUR组低于PB组 (P <0 0 1或P <0 0 5 )。SOD含量PB组低于NS组 (P <0 0 5 ) ,HS组、CUR组高于PB组 (P <0 0 5 )。Western印迹分析经图像处理仪扫描显示CUR组、HS组、PB组高于NS组及DMSO组 ,其中以CUR组最高 (P <0 0 1)。结论　姜黄素预处理对大鼠感染性脑水肿具有保护作用 ,姜黄素的保护作用可能与抗脂质过氧化、抑制细胞因子的过度产生、诱导或加强HSP70的表达这三方面均有关。     

Temporal and regional evolution of aquaporin-4 expression and magnetic resonance imaging in a rat pup model of neonatal stroke

Edema formation can be observed using magnetic resonance imaging (MRI) in patients with stroke. Recent studies have shown that aquaporin-4 (AQP4), a water channel, is induced early after stroke and potentially participates in the development of brain edema. We studied whether induction of AQP4 correlated with edema formation in a rat pup filament stroke model using high field (11.7-Tesla) MRI followed by immunohistochemical investigation of AQP4 protein expression. At 24 h, we observed increased T2 values and decreased apparent diffusion coefficients (ADC) within injured cortical and striatal regions that reflected the edema formation. Coincident with these MR changes were significant increases in AQP4 expression on astrocytic end-feet in the border regions of injured tissues. Striatal imaging findings were still present at 72 h with a slow normalization of AQP4 expression in the border regions. At 28 d, AQP4 expression normalized in the border while in this region ADC values increased. We show that induction of AQP4 is increased during the period of active edema formation in the border region without regional correlation with edema. Finally, induction of AQP4 on astrocyte end-feet could participate in tissue preservation after ischemia in the immature rat brain.     

细胞间黏附分子-1在脂多糖致大鼠脑水肿中的表达

目的　探讨脂多糖 (LPS)致大鼠脑水肿发生过程中细胞间黏附分子 1(ICAM 1)的表达与变化。方法　健康SD大鼠 10 5只 ,随机分为空白对照组 (A组 ,n =5 ) ,生理盐水组 (NS组 ,n =5 0 ) ,脂多糖组 (LPS组 ,n =5 0 )。LPS诱导大鼠脑水肿发生 ,制备脑组织冰冻切片 ,免疫组织化学染色方法测定ICAM 1的表达情况 ,图像分析仪测定ICAM 1阳性细胞单位面积的光密度值 (A值 )。结果　各时间点LPS组脑组织含水量、伊文思蓝 (EB)含量、ICAM 1表达情况及表达量均高于A组和NS组 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。ICAM 1表达量和脑组织含水量、ICAM 1表达量和EB含量均呈正相关 (r =0 .5 37,0 .4 6 7,0 .5 4 9　P均 <0 .0 5 )。结论　LPS可诱导脑水肿发生 ,脑血管内皮细胞表面ICAM 1表达增强 ,促进血脑脊液屏障通透性的破坏和脑组织含水量增加 ,介导炎症反应过程