P物质对脊髓星形胶质细胞活化和炎性因子IL-1β、TNF-α分泌的影响

目的探讨P物质(P substance,SP)对脊髓星形胶质细胞活化和分泌炎性因子TNF-α、IL-1β的影响.方法 体外培养脊髓星形胶质细胞,施加SP刺激后分别应用RT-PCR和Western blot测定胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)mRNA和蛋白的表达,ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)分泌的变化.结果10-7mol/L SP的作用下,星形胶质细胞GFAP mRNA和蛋白的表达在0～72 h逐渐升高,与正常对照组相比差异显著(P＜0.01);SP在10-9～10-6mol/L浓度范围内呈浓度依赖性促进星形胶质细胞分泌TNF-α、IL-1β(12 h),与对照组有显著差异(P＜0.01,P＜0.05),但IL-1β在SP 10-6mol/L作用组下降,与对照组无明显差异(P＞0.05).结论 SP刺激下脊髓星形胶质细胞明显活化,分泌炎性致痛因子TNF-α、IL-1β增多,表明周围慢性疼痛可能通过致痛递质SP介导下星形胶质细胞的活化引起脊髓中枢神经炎性痛.     

p38MAPK在体外培养脊髓星形胶质细胞P物质刺激活化中的作用

目的 观察体外培养脊髓星形胶质细胞P物质刺激活化过程中p38MAPK活性、TNF-Ot、NO水平及NOS活性的变化,探讨p38MAPK活性变化与脊髓星形胶质细胞活化的关系.方法 分离培养的SPF大鼠脊髓星形胶质细胞设正常对照组(止常组)、SP刺激组(SP组,10-7mol/L)、SB203580阻断p38MAPK组(SB组,10 umol/L)和sP刺激+SB203580阻断p38MAPK组(SP+SB组).WB法、RT-PCR法、ELISA法检测1,3,12,24 h和36 h时p38MAPK、p-p38(磷酸化p38MAPK)含量及GFAP mRNA、TNF-0、NO水平和NOS活性的变化.结果 脊髓星形胶质细胞GFAP阳性表达率大于95%.SP组脊髓星形胶质细胞总p38MAPK水平无显著变化,1 h后p-p38开始升高,3 h后GFAP mRNA水平显著增高,同时NO、NOS和TNF-a水平显著增高.用SB203580阻断p38MAPK通路后,sP+sB组较sP组p-p38、GFAP mRNA、NO、NOS、TNF-a水平显著降低.SB组总p38MAPK、p-p38、GFAP mRNA、NO、NOS、TNF-a水平无显著变化.结论 p38MAPK信号通路参与r脊髓星形胶质细胞P物质刺激活化过程,阻断p38MAPK信号通路可有效降低炎性因子水平.     

P物质对培养脊髓星形胶质细胞谷氨酸代谢的影响

目的 观察P物质（SP）对脊髓星形胶质细胞兴奋性递质谷氨酸代谢的影响。方法 采用体外培养脊髓星形胶质细胞,施加SP刺激．分别采用^3H—Glutamate掺入和RT—PCR观察脊髓星形胶质细胞对谷氨酸摄取和转运体GLT-1表达的变化。结果 脊髓星形胶质细胞在SP的刺激下^,3H—Glu的摄取逐渐下降,10^-9mol／L与正常对照组差异有统计学意义（P〈0．05）．10^-8～10^-6mol／L组与正常对照组差异有统计学意义（P〈0．01）;脊髓星形胶质细胞GLT-1的表达在10^9-10^-8mol／L SP作用组和正常组差异无统计学意义（P〉0．05）,10^-2～10^-6 mol／L SP刺激组GLT-1表达值低于正常对照（P〈0．05、P〈0．01）。结论 高浓度的SP作用下脊髓星形胶质细胞GLT-1表达和谷氨酸掺入下降,表明周围慢性疼痛可能通过致病递质SP使脊髓星形胶质细胞对谷氨酸的摄入减少,神经间隙谷氨酸堆积而导致脊髓中枢继发的神经损害。     

表皮生长因子受体转激活对氨诱导星形胶质细胞p38MAPK活化的影响

目的：探讨氨致星形胶质细胞p38MAPK活化与表皮生长因子受体（EGFR）转激活间的关系。方法以3 mmol／L氯化铵刺激原代培养的星形胶质细胞建立高血氨模型,EGFR选择性抑制剂AG1478,src选择性抑制剂PP1及基质金属蛋白酶选择性抑制剂GM6001分别于加入氯化铵前30 min加入,以检测上述信号分子在氨致星形胶质细胞p38MAPK活化中的作用。蛋白质免疫印迹检测p38MAPK的表达及活化,以蛋白质免疫共沉淀检测p38MAPK与EGFR间的相互作用。结果氨诱导的星形胶质细胞p38MAPK活化可被EGFR选择性抑制剂AG1478所阻断,亦可被src选择性抑制剂PP1所阻断,但不受基质金属蛋白酶选择性抑制剂GM6001的影响。对于EGFR－p38MAPK相互作用影响的研究也得出了类似的结果。结论氨刺激可通过EGFR转激活诱导星形胶质细胞p38MAPK的活化。     

地塞米松抑制星形胶质细胞P2Y_1受体表达及TNF-α分泌

目的观察不同浓度地塞米松对大鼠体外培养脊髓背角星形胶质细胞P2Y1受体表达及TNF-α分泌的影响。方法培养并纯化大鼠脊髓背角星形胶质细胞,地塞米松(终浓度分别为0.1、1、10μmol/L)处理24 h后,采用免疫组织化学染色观察P2Y1受体的表达,双抗夹心间接酶联免疫吸附法测定上清液中TNF-α含量。结果地塞米松(0.1、1、10μmol/L)作用24 h后,与对照组比较,脊髓背角星形胶质细胞P2Y1受体表达下调,并呈剂量依赖性(P<0.01),TNF-α分泌量亦呈剂量依赖性下降(P<0.01)。结论地塞米松能抑制体外培养大鼠脊髓背角星形胶质细胞P2Y1受体表达及TNF-α的分泌。     

Survivin和P53在反应性和肿瘤性星形胶质细胞中的表达及意义

目的 检测Survivin和P53蛋白在星形胶质细胞反应性增生与星形胶质细胞瘤中的表达,探讨二者在胶质瘤形成和发展中的作用及意义.方法 应用组织芯片和免疫组化染色技术检测正常脑组织、星形胶质细胞反应性增生、低级别(Ⅰ～Ⅱ级)和高级别(Ⅲ～Ⅳ级)星形胶质细胞瘤中Survivin和P53蛋白的表达情况.结果 正常脑组织中Survivin和P53蛋白均呈阴性表达;反应性增生组、低级别肿瘤组及高级别肿瘤组中Survivin蛋白的阳性率分别为26.7%(12/45)、53.2%(25/47)、88.1%(37/42);P53蛋白的阳性率分别为23.8%(10/41)、53.7%(22/41)、79.5%(35/44).二者阳性表达率均随着病变程度的加重而升高,Survivin和P53在各实验组间比较均差异显著(P＜0.05);且Survivin和P53表达密切相关(P＜0.01).结论 Survivin和P53在星形胶质细胞反应性增生及星形胶质细胞瘤中均呈不同程度的过度表达,且随着恶性程度的增加其表达水平增高;Survivin扩增和P53突变是胶质瘤发生的早期事件,二者的联合检测可能会为星形胶质细胞反应性增生与低级别胶质细胞瘤的鉴别诊断以及星形胶质细胞瘤的早期诊断提供一定的依据.     

阿魏酸钠抑制脂多糖引起的星形胶质细胞IL-1β的表达

目的 研究阿魏酸钠(SF)对脂多糖(LPS)引起的培养星形胶质细胞(AC)白细胞介素-1β (IL-1β)表达的抑制作用及机制.方法 将培养星形胶质细胞分为对照组、LPS组、SF(50,100,200μmol·L-1)组.细胞成熟后分组给药处理,ELISA法测定培养液中IL-1β表达,Western蛋白印迹法检测细胞IL-13、磷酸化JNK1和磷酸化C-Jun蛋白表达.结果 星形胶质细胞在LPS (10 mg·L“)刺激下IL-1β的释放量、IL-1β蛋白以及磷酸化JNK1、磷酸化C-Jun蛋白表达水平较对照组明显增高(P＜0.01).应用SF(50,100,200 μmol·L-1)预处理6h明显降低培养液中IL-1β含量,抑制星形胶质细胞IL-1β、磷酸化JNK1和磷酸化C-Jun蛋白表达水平.结论 SF可能通过下调JNK信号通路抑制星形胶质细胞IL-1β表达.     

P38信号通路在星形胶质细胞氧糖剥夺/复氧后水通道蛋白4表达及细胞水肿形成中的作用

目的探讨P38信号通路在星形胶质细胞氧糖剥夺,复氧后水通道蛋白4表达及细胞水肿形成中发挥的作用。方法原代培养的星形胶质细胞分为正常组,模型组和P38抑制剂组。模型组:细胞接受5 h氧糖剥夺/复氧处理;P38抑制剂组:细胞在5 h氧糖剥夺后的复氧过程中加入P38抑制剂(SB203580,10μmol/L)处理。在5 h氧糖剥夺/复氧后的不同时间点,用RT-PCR及Westem blotting法测定P38、磷酸化P38及水通道蛋白4(AQP4)的表达变化,光镜观察细胞形态变化,乳酸脱氢酶测定反应细胞损伤程度。结果与正常组相比,星形胶质细胞在5 h氧糖剥夺/复氧后,其磷酸化P38的水平明显上升,并在复氧lh时达到峰值(P<0.01),AQP4 mRNA和蛋白的表达也明显升高(P<0.01),同时细胞水肿在氧糖剥夺/复氧后2 h时达到高峰,LDH漏出率也明显升高(P<0.01)。与模型组相比,加入P38抑制剂可明显降低5 h氧糖剥夺/复氧后P38磷酸化的水平(P<0.01),以及复氧后各时间点AQP4增高的水平(P<0.01),并可明显缓解氧糖剥夺/复氧后细胞水肿及LDH上升的程度(P<0.01)。结论 P38信号通路的激活参与了星形胶质细胞5 h氧糖剥夺/复氧后AQP4上调及细胞水肿形成,抑制p38的激活可降低AQP4表达的上调,减轻细胞水肿。     

p38丝裂素活化蛋白激酶信号转录对IL-1β诱导肾小管细胞转分化的影响

目的　探讨 p38MAPK信号转导途径对IL 1β诱导肾小管上皮细胞转分化的影响及其导致的功能改变。方法　以培养的人近端肾小管上皮细胞 (HK 2 )为研究对象 ,给予IL 1β(10ng/ml)刺激 2 4h ,在阻断实验中加入SB2 0 35 80阻断 p38通路。采用蛋白印记杂交法检测 p38MAPK的磷酸化程度 ;细胞表型特征检测包括细胞形态变化、标志蛋白 (角蛋白、α SMA)的表达及分布、细胞增殖、黏附和移行能力。结果　 (1)IL 1β刺激 6～ 4 8h可使α SMA表达上调 ,刺激 2 4h可使角蛋白表达减弱、α SMA分布紊乱 ,但细胞形态变化不明显 ;(2 )IL 1β在 5min时可使p38激活达高峰 ,较基础水平升高 2～ 3倍 (P <0 0 5 ) ;至 12 0min时 p38则呈持续激活状态 ;(3)p38阻断剂 (SB2 0 35 80 )对HK 2细胞α SMA的基础表达有抑制作用 ,抑制率 37 13% (P <0 0 1) ;同时可明显抑制IL 1β刺激的α SMA表达 ,抑制率 4 7 0 7% (P <0 0 0 1) ;(4)IL 1β及 p38阻断剂并不影响HK 2细胞之间的黏附能力 ,但IL 1β可使细胞的移行能力增强 (P <0 0 1) ,而 p38阻断剂可明显抑制其移行能力。IL 1β并不影响HK 2细胞增殖。结论　IL 1β可以激活肾小管上皮细胞p38/MAPK ,并可使其发生表型转化 ,这一作用部分通过 p38信号通路所介导。     

神经病理性疼痛大鼠脊髓背角小胶质细胞P2X4受体的表达及意义

目的 探讨神经病理性疼痛大鼠脊髓背角小胶质细胞离子型嘌呤受体(ionotropic purinoceptor,P2X)P2X4的表达及其意义.方法 雌性SD大鼠20只,随机分为坐骨神经保留性损伤(SNI)组和对照组.SNI组大鼠于左后肢制备SNI模型,对照组大鼠仅暴露坐骨神经后立即缝合手术切口.术后观测机械疼痛阈值的变化,于术后第7天断头处死大鼠,截取L4～6段脊髓,分离左右侧脊髓.采用免疫组化法检测脊髓背角P2X4受体及蛋白激酶p38MAPK的表达.结果 与对照组相比,SNI模型组大鼠机械刺激50%缩爪阈值显著降低(P＜0.01).SNI模型组大鼠手术侧脊髓背角活化的小胶质细胞表面P2X4受体的表达水平(456.86±32.21)较非手术侧(106.27±12.16)明显增高(P＜0.01),同时SNI模型组大鼠手术侧脊髓背角p38MAPK表达水平(399.95±32.42)较非手术侧(123.63±15.47)明显增高(P＜0.01).结论 神经病理性疼痛大鼠模型脊髓背角活化小胶质细胞P2X4受体表达增加,可能通过激活p38MAPK促进了疼痛的发生.     

UUO大鼠肾小管间质P38MAPK的表达研究

目的 探讨单侧输尿管梗阻大鼠肾小管间质P38MAPK、磷酸化P38MAPK的表达变化,从而阐明P38MAPK在肾小管间质纤维化发生中的作用.方法 将30只雌性SD大鼠随机分为假手术组及模型组,模型组行UUO术.术后第5、10、15天分别处死两组中的5只大鼠,取左肾行HE和Masson染色,并用免疫组化方法检测肾小管间质中TGF-β1、P38MAPK、P-P38MAPK的表达.结果 模型组第5天组肾小管间质增宽,小管间质细胞增多,梗阻后第10天病变明显,第15天可见弥漫的肾小管基底膜增厚皱缩,纤维化明显（P＜0.01）.免疫组化结果显示：假手术组大鼠肾小管间质中仅有少量TGF-β1、P38MAPK和P-p38MAPK表达.模型组大鼠梗阻侧肾小管间质中TGF-β1、P38MAPK和P-P38MAPK表达明显增加（P＜0.01）,随时间进展,表达更加明显.结论 实验大鼠梗阻侧肾小管间质中TGF-β1、P38MAPK和P-P38MAPK表达上调,P38MAPK信号通路可能参与UUO大鼠肾小管间质纤维化过程.     

P38通路对帕金森病小鼠模型黑质环氧合酶-2、半胱氨酸蛋白酶-3表达的影响

目的 研究P38MAPK通路在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6四氢吡啶(MPTP)所致亚急性帕金森病(PD)小鼠模型中对黑质环氧合酶-2(COX-2)、半胱氨酸蛋向酶-3(caspase-3)表达调控作用.方法 采用MPTP制备PD小鼠模型,观察行为学、免疫组化和免疫蛋白印记法观察小鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH)、COX-2、caspase-3和磷酸化P38MAPK(P-P38MAPK)的变化,及给予P38MAPK抑制剂SB203580后对上述变化的影响.结果 模型7 d组小鼠出现典型的PD样症状,黑质区TH阳性神经元和蛋白水平分别下降约65%和75%(P<0.01);模型3 d组小鼠黑质区COX-2、P-P38MAPK、caspase-3阳性细胞数及蛋白水平显著增加.TH阳性神经元明显丢失;经P38MAPK抑制剂SB203580处理后,上述变化均显著减轻(P<0.01).结论 在MPTP所致亚急性小鼠PD模型中,P38MAPK通路对黑质区炎症与凋亡可能有重要调控作用,SB203580对PD小鼠具有一定神经保护作用.

Abstract：

Objective To investigate the effect of p38 mitogen-activated protein kinase (p38MAPK) on the expression of COX-2 and caspase-3 in the substania nigra (SN) of mice with MPTP-induced Parkinson disease (PD). Methods C57BL/CN mice were treated with MPTP to prepare a subacute PD model, and their behavioral changes following the treatment were observed. Immunohistochemistry and Western blotting were performed to detect the expression of tyrosine hydroxylase (TH), COX-2 and phosphorylation of P38MAPK in the SN and their changes following treatment with SB203580, a specific inhibitor of P38MAPK. Results The 7-day model group showed typical symptoms of PD with decrements of TH-positive neurons and TH protein level in the SN of the midbrain by about 65% and 75%, respectively (P<0.01). In the 3-day model group, the COX-2-, caspase-3- and phosphorylated P38MAPK-immunoreactive cells and their protein levels in the SN increased markedly with obvious loss of TH-positive neurons. Administration of SB203580 obviously lessened the above changes (P<0.0l). Conclusion P38MAPK regulates the inflammation and apoptosis in the SN of the mouse model of subacute PD, and SB203580 may provide some neuroprotective effect.     

扶正解毒含药血清对染镍细胞表达P38MAPK的影响

目的 探讨扶正解毒含药血清对染镍人支气管上皮细胞(16HBE)表达P38丝裂原活化蛋白激酶的影响,阐述镍化合物致癌的分子机制.方法 用生理盐水,硫化镍(NiS),NiS+扶正解毒含药血清(低、中、高)剂量来处理16HBE后,用Western-blot法观察磷酸化P38MAPK的表达,处理细胞后提取蛋白,电泳、转膜、封闭、杂交、显影、洗脱.结果 硫化镍能明显激活16HBE磷酸化P38MAPK的表达,硫化镍浓度越高,磷酸化P38MAPK的表达值越大,且存在剂量-效应关系,扶正解毒含药血清能明显抑制磷酸化P38MAPK的表达,尤以中、高剂量扶正解毒含药血清为甚,NiS+扶正解毒含药血清(中、高)剂量组与NiS比较抑制了磷酸化P38MAPK的表达(P<0.01).结论 硫化镍能明显激活磷酸化P38MAPK的表达,这可能是镍致癌的分子机制之一; 扶正解毒含药血清能明显抑制16HBE磷酸化P38MAPK的表达,对于镍化合物诱发肿瘤的预防及治疗具有重要的意义.     

黄芪甲苷对镉致大鼠睾丸支持细胞相关蛋白表达及p38MAPK磷酸化的拮抗作用

目的：探讨镉对培养大鼠睾丸支持细胞相关蛋白表达、p38M A PK磷酸化及超微结构的影响和黄芪甲苷的保护效应。方法对照组、镉（50 mol/L ）处理组、镉（50 mol/L ）加黄芪甲苷（10 mg/L ）组的培养支持细胞用于超微结构观察、波形蛋白、E-钙粘连蛋白/-环连蛋白免疫组织化学及磷酸化p38M A PK检测。结果镉处理组支持细胞线粒体内室肿胀,脂滴堆积,内质网扩张和（或）空泡化,髓样结构形成,少许支持细胞出现凋亡,镉加黄芪甲苷组支持细胞超微结构改变较镉处理组轻;免疫组织化学显示镉处理组波形蛋白、E-钙粘连蛋白及-环连蛋白阳性产物较对照组明显减弱（P＜0．05）,镉加黄芪甲苷组阳性产物虽较对照组减少但明显高于镉处理组（P＜0．05）;镉处理组支持细胞内磷酸化P38MAPK阳性产物表达量较对照组明显增强,且有向细胞核移位趋势,镉加黄芪甲苷组阳性产物表达量明显少于镉处理组（P＜0．05）。结论镉致大鼠睾丸支持细胞超微结构损伤、细胞骨架蛋白及粘连蛋白破坏并增强 P38MAPK磷酸化;黄芪甲苷可拮抗镉的毒性,其保护效应可能与减少 P38MAPK的磷酸化等有关。     

黄芩苷对哮喘大鼠 p38 MAPK 信号通路影响初探

目的：初步探讨黄芩苷防治支气管哮喘的作用机理。方法用卵蛋白致敏大鼠制备支气管哮喘动物模型,经黄芩苷干预治疗,运用免疫组化法及 Western Blot 法检测各组大鼠肺组织匀浆中 p38 MAPK 磷酸化蛋白表达量。结果两种检测方法均显示,p38 MAPK 磷酸化蛋白水平在模型组中有明显的增加,地塞米松组、黄芩苷高剂量组和低剂量组的 p38 MAPK 磷酸化蛋白水平均低于模型组（P ＜0．05）。结论黄芩苷能有效治疗哮喘的作用与抑制哮喘大鼠 p38 MAPK 信号通路的表达密切相关。     

P38MAPK信号:治疗溃疡性结肠炎的又一新策略

近年来,P38MAPK信号通路调控细胞凋亡的作用日益受到人们的关注,文献整理中发现其调控细胞凋亡的六个途径和溃疡性结肠炎的发病呈密切相关性,提示调控P38MAPK信号信号通路可能是治疗溃疡性结肠炎的有效的新的策略之一。     

P38信号转导通路与疾病谱的研究进展

P38MAPK信号转导通路属于MAPK信号通路之一,是真核细胞将细胞外刺激信号转导到细胞内并引起一系列反应(包括炎症反应、细胞生长分化和凋亡及肿瘤发生等)的一条重要信号通路。本文着重介绍该信号传导通路的生物学机制及在炎症、心血管疾病、糖尿病相关疾病、肿瘤等中的相关生物学效应,并探讨可能存在的一些问题及发展趋势。     

P38MAPK／COX2信号转导通路在大鼠肾脏缺血预处理第二窗保护效应的实验研究

目的 探讨P38MAPK与COX2在肾脏缺血预处理第二窗口的保护效应以及两者的信号转导关系,旨在阐明肾脏缺血预处理第二窗口保护的可能机制. 方法 雄性Wistar大鼠60只,随机分为5组,每组12只大鼠,分别为:假手术组(sham组),缺血再灌注组(IR组),缺血预处理+缺血再灌注组(IPC组),SB203580药物干预组(SB203580组),NS398药物干预组(NS398组),在再灌注后24 h和48 h两个时间点取材,用苦味酸法测定血清肌酐反映肾功能变化情况;用Western blot法检测肾组织P38MAPK与COX2蛋白的表达,进行半定量分析. 结果 血肌酐在IPC组较IR组低(P＜0.05),尤其在IPC后48 h明显(P＜0.01);P38MAPK与COX2在sham组、IR组、IPC组均有表达,尤在IPC组表达明显(P＜0.01);SB203580组无P38MAPK蛋白的表达,COX2的表达较IPC组低(P＜0.05);在NS398组无COX2蛋白表达,P38MAPK蛋白表达与IPC组相比差异不明显(P＞0.05). 结论 P38MAPK作为COX2的上游物质参与了肾脏缺血预处理的第二窗口保护效应.     

p38MAPK信号通路在甘草酸二铵减轻兔心肌缺血再灌注损伤中的作用

目的观察p38MAPK信号通路在甘草酸二铵对兔心肌缺血再灌注损伤中的作用。方法30只新西兰大白兔随机分为3组,每组10只;假手术组(Ⅰ组)。缺血再灌注组(Ⅱ组)、甘草酸二铵处理组(Ⅲ组)。Ⅰ组行冠脉套线不阻断,Ⅱ、Ⅲ组均行后冠状动脉前降支阻断40min,再灌注120min。其中Ⅲ组在阻断前用甘草酸二铵2.5mg/kg静脉泵注。三组在阻断冠脉前20min(T0),阻断后20min(T1)、40min(T2)、再灌注后1h(T3)、2h(T4)取颈内动脉血测定血浆TNF-2、IL-6,IL-8细胞因子含量,再灌注结束后免疫印记法测心肌p38MAPK水平,再灌注结束后观察心肌细胞超微结构,同时用伊文思蓝和TIC染色法测心肌梗死面积。结果与Ⅱ组比较Ⅲ组p38MAPK表达降低(P<0.05),细胞炎性因子含量减少(P<0.05)。心肌细胞超微损伤减轻(P<0.05),心肌梗死面积减少(P<0.05)。结论甘草酸二铵通用下调心肌P38MAPK表达,减少炎性因子生成,抑制过度的炎性反应,改善心肌细胞超微结构,从而减轻心肌缺血再灌注损伤。