三氧化二砷抑制cdc2基因表达诱导K562白血病细胞G2/M周期停滞

目的检测三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)诱导慢性髓系白血病急变细胞K562周期停滞中细胞周期相关调节基因的转录、蛋白表达及其磷酸化改变,以期阐明As2O3诱导其周期停滞的分子生物学机制,为克服K562细胞的As2O3抵抗性提供实验基础。方法体外培养K562细胞,采用PI染色、流式细胞仪检测As2O3作用后细胞周期分布的改变;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测细胞周期相关调节基因mRNA表达变化;Westernblot检测相关蛋白及磷酸化改变。结果As2O3作用K562细胞24h后,G2/M期细胞比例明显增加,浓度为0、2、5、10μmol/L时G2/M期细胞比例分别为(22.6±3.4)%、(27.2±2.3)%、(43.8±4.5)%、(36.7±4.1)%;K562细胞在As2O3处理前有Sur-vivin、cdc2、chk1基因表达,As2O3处理后Survivin、chk1的表达无明显变化,但cdc2表达呈浓度依赖性下调;As2O3作用前可见Survivin、cdc2、cdc2-p、chk1等4种蛋白的表达,作用24h后,Survivin的表达条带增强,cdc2蛋白表达水平呈浓度依赖性下调,cdc2-p水平在2～5μmol/L时无明显变化,在10μmol/L时受抑明显,chk1蛋白表达水平在As2O3作用前后无明显改变。结论As2O3显著诱导K562白血病细胞G2/M周期停滞,其机制与抑制cdc2转录水平,下调活性化cdc2蛋白表达有关。不能有效抑制抗凋亡蛋白Survivin的表达可能是K562白血病细胞对As2O3诱导凋亡抵抗的一个重要机制。     

三氧化二砷治疗慢性髓细胞性白血病加速期8例

目的 观察三氧化二砷治疗慢性髓细胞性白血病加速期的临床疗效。方法 每日静滴三氧化二砷10mg，根据外周血白细胞总数及血液学反应情况调节疗程(28～42天)。结果 8例患者除1例使用中发生急变外，其余7例加速期慢性髓性白血病患者中，2例达CR，5例达PR，有效率为87％；毒副作用轻，疗效满意。结论 三氧化二砷可作为慢性髓细胞性白血病加速期治疗的有效选择之一。     

三氧化二砷诱导慢性髓细胞性白血病K562细胞株凋亡与c-myc的表达

目的：观察三氧化二砷(As2O3)诱导慢性髓细胞性白血病K562细胞株凋亡和c-myc mRNA表达的作用，并探讨其作用机制。方法：应用MTT法、苔盼蓝拒染法、DNA凝胶电泳和细胞周期凋亡检测，观察0μmol／L、0．5μmol／L、lμmol／L、2μmol／L、4μmol／L、8μmol／LAs2O3分别作用24h、48h、72h后，对K562细胞增殖及活力的影响。应用RT-PCR和免疫组织化学法检测As2O3处理后K562细胞c-myc mRNA和蛋白表达的变化。结果：As2O3诱导后K562细胞核DNA凝缩，核片段化，最后形成凋亡小体。在一定范围内，随着As2O3浓度的增加和As2O3处理时间的延长，细胞存活率明显下降；流式细胞仪检测可见As2O3诱导K562细胞凋亡，影响细胞周期，细胞阻滞于G2／M期；As2O3处理后c-myc mRNA和c-myc蛋白表达均有先上调后回落的趋势。结论：As2O3可以抑制K562细胞增殖并诱导凋亡，其作用机制可能是使细胞受阻于G2／M期而进入凋亡程序，c-myc基因参与了As2O3诱导细胞凋亡的基因调控。     

慢性髓系白血病BCR/ABL融合基因的异质性及其与临床表现的关系

慢性髓系白血病(CML)是一组异质性疾病群，其基本特征是具有Ph染色体和由此形成的BCR／ABL融合基因。不同患者可有不同结构的BCR／ABL融合基因，并可引起患者不同的临床血液学表现，作者对此作一综述。     

婴儿慢性髓系细胞白血病3例报告并文献复习

目的：了解婴儿慢性髓系细胞白血病临床特点.方法：对1989年-2004年我科收治的3例婴儿慢性髓系细胞白血病的临床表现、实验室检查进行分析并复习相关文献.结果：3例均为男婴,发病较急,表现为贫血、出血、肝脾中等程度增大.2例进行了ph1染色体及免疫分型检查.3例中有2例为婴儿慢性粒细胞白血病,且1例发生了慢粒急淋变;1例为慢性粒-单细胞白血病.结论：婴儿慢性髓系白血病罕见,临床特点与成人型显著不同.     

不同药物对慢性髓系白血病细胞增殖的影响

目的 探讨氟马替尼、地西他滨、三氧化二砷以及维奈托克对人慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia, CML)K562细胞系增殖的影响,为CML新的治疗方案提供实验室依据。方法 利用不同浓度的氟马替尼、地西他滨、三氧化二砷、维奈托克分别单独及两药联合作用于K562细胞,采用CCK-8法测定细胞增殖活力,采用Compusyn软件计算两药联合作用的联合指数。结果 不同浓度的氟马替尼、三氧化二砷、地西他滨及维奈托克单药均可抑制K562细胞增殖,差异均有统计学意义(P＜0.01);氟马替尼、地西他滨、三氧化二砷分别两药联合可增强对K562细胞的抑制作用(P＜0.01),但分别与维奈托克联合后对K562细胞的抑制无明显增强(P＞0.05)。结论 氟马替尼、三氧化二砷、地西他滨、维奈托克单药均能抑制K562细胞的增殖,氟马替尼、地西他滨、三氧化二砷分别两药联合均有协同作用;而这3种药物分别与维奈托克联合无明显协同作用。     

三氧化二砷联合TA方案治疗难治性急性髓系白血病30例疗效分析

目的观察三氧化二砷（As2O3）联合TA方案治疗急性难治性髓系白血病的疗效和不良反应。方法30例难治性急性髓系白血病患者均给予As2O3＋TA方案化疗（As2O3 10mg d1-10,THP 20mg／m^2 d1-3,Ara-C0．2 d1-7）。结果30例患者中,完全缓解（CR）18例（60．0％）,部分缓解（PR）6例（20．0％）,未缓解（NR）6例（20．0％）,总有效率80％。结论As2O3联合TA方案治疗难治性白血病疗效好,不良反应轻。     

三尖杉酯碱诱导慢性髓系白血病K-562细胞凋亡的实验研究

目的阐明三尖杉酯碱（HT）作用于K562细胞的机制。方法应用细胞形态、DNA凝胶电泳和流式细胞仪等检测,观察HT对K562细胞株的作用方式,进一步用RT-PCR方法研究bcr/abl基因在转录水平的改变。结果0.01～100.00μg/ml浓度HT可诱导K562细胞凋亡,并呈时间和剂量依赖性。随着药物作用时间的延长,bcr/abl基因的转录下调。结论低浓度HT就可通过抑制bcr/abl基因的表达,诱导K562细胞凋亡。     

bcl-2基因在急性髓系白血病细胞中的表达及意义

采用链霉亲和素过氧化酶免疫组织化学方法 (S -P法 )检测 30例初发成人急性髓系白血病(AML)患者的骨髓细胞bcl - 2蛋白表达 .结果 :( 1)AML患者骨髓细胞中bcl - 2蛋白阳性表达率为( 55 12± 2 3 78) % ( 19%～ 93% ) ,显著高于正常对照 (P <0 0 1) . ( 2 )AML按FAB分型各亚型间比较 :bcl- 2蛋白表达在M1,M2 型阳性率较高 ( 60 58± 19 0 5) % ;M3 型则较低 ( 2 1 50± 6 2 2 ) % ;M4 ,M5型最高( 69 64± 14 96) % . ( 3)经标准诱导治疗后 ,完全缓解 (CR)组的bcl- 2蛋白表达显著低于未缓解 (NR)组 (P <0 0 5) .提示 :bcl- 2蛋白在AML细胞中呈高表达 ,并为白血病化疗耐药的预后指标之一 .     

慢性粒细胞白血病患者血清乳酸脱氢酶的变化

目的 探讨慢性粒细胞白血病（CML）患者血清乳酸脱氢酶（LDH）的变化及LDH与其他预后因素关系。方法 检测68例CML患者血清LDH及其同工酶,分析LDH与患者临床特征、外周血、骨髓细胞学和bcr-abl基因表达（P210）的关系。结果 CML患者的血清LDH及其同工酶均有不同程度的升高,并与血白细胞,P210、骨髓增生程度、脾肿大有关,但与血红蛋白、血小板、肝肿大、年龄和性别无关。结论 检测血清LDH有助于CML的诊断和预后评估。     

不典型慢性粒细胞白血病血液学特征分析

目的：探讨不典型慢性粒细胞白血病的诊断．方法：对比分析12例不典型慢性粒细胞白血病和23例典型慢性粒细胞白血病的临床表现和血液细胞学特征．结果：不典型慢性粒细胞白血病发病年龄较大，多数患者元贫血，血小板轻度增高，脾大不明显，外周血中性粒细胞碱性磷酸酶积分稍减低或正常，Ph染色体阴性，PCR检测阴性．结论：不典型慢性粒细胞白血病诊断必须结合临床动态观察，若随病程延长，病情加重，其他治疗无效者，应考虑本病．     

三氧化二砷治疗急性早幼粒细胞白血病的概况

急性早幼粒细胞白血病是急性非淋巴细胞白血病的一种特殊亚型 ,病情严重 ,常伴致死性出血。 80年代中期我国学者相继应用全反式维甲酸及三氧化二砷治疗该病后 ,完全缓解率大大提高 ,病死率减少。笔者就目前治疗概况作一介绍。     

三氧化二砷联合苦参碱抑制K562细胞增殖及机制研究

目的 探讨三氧化二砷联合苦参碱对慢性髓系白血病细胞株K562增殖的影响及可能机制。方法 用不同浓度的三氧化二砷单药（0.75、1.5、3、6、8μmol/L）,苦参碱单药（0.5、0.75、1.0、1.25、1.5g/L）及三氧化二砷（3μmol/L）+苦参碱（0.75g/L）两药联合分别作用于K562细胞,CCK-8法测定细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞周期,免疫印迹法（Westernblot法）检测cyclinD1、CDK4、p21蛋白表达的变化。结果 不同浓度苦参碱及三氧化二砷均可抑制K562细胞增殖,且随作用时间延长和浓度增加而明显（P<0.05）,两药联合应用后抑制作用更显著（P<0.05）;与对照组比较,苦参碱阻滞K562细胞于G₁期,三氧化二砷阻滞K562细胞于G₂期,苦参碱可增强三氧化二砷对K562细胞周期的阻滞作用;与单药组及对照组相比,两药联合后K562细胞p21蛋白表达水平上调（P<0.05）,cyclinD1、CDK4蛋白表达水平明显下降（P<0.05）。结论 苦参碱可增强三氧化二砷对K562细胞的增殖抑制作用,阻滞细胞于G₂期,其机制可能与p21蛋白表达增加及cyclinD1、CDK4蛋白表达减少相关。     

CSF延长慢性粒细胞白血病病理克隆体外培养存活期限作用的研究

为观察集落刺激因子（ＣＳＦ）对慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）病理克隆增殖的影响，采用单抗 免疫磁珠二步分离法，从ＣＭＬ患者骨髓标本分离出带有恶性克隆标记的ＣＤ３４＋ＨＬＡ ＤＲ＋细胞，并在体外观察干细胞因子（ＳＣＦ）、白细胞介素 ３（ＩＬ ３）和促红细胞生成素（Ｅｐｏ）联合应用对细胞增殖的影响。结果：ＣＳＦ存在体系与无ＣＳＦ体系相比ＣＭＬ病理克隆消失延迟１４ｄ（Ｐ＜０．０５）。结果提示：ＣＳＦ具有延长ＣＭＬ病理细胞在体外培养存活期限的作用。     

三氧化二砷诱导喉癌Hep-2细胞凋亡的初步研究

目的　研究三氧化二砷 (As2 O3 )对人喉癌Hep - 2细胞的生物学效应及其作用机制。 方法　Hep - 2细胞经不同浓度的As2 O3 处理 4 8h ,通过MTT法计算细胞生长抑制率 ,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果　As2 O3在 2、1、0 .5、0 .2 5 μmol/L的浓度范围作用Hep - 2细胞 4 8h ,细胞生长抑制率分别为 82 %、6 5 %、33%、15 % ,IC50 为0 .85± 0 .2 5 μmol/L ;细胞凋亡率分别为 2 1.7%、19%、5 .2 %、4 .6 %。 结论　As2 O3 对人喉癌Hep - 2细胞的抑制作用呈剂量依赖性 ,细胞生长抑制率与细胞凋亡率呈正的直线相关关系 (P <0 .0 5 )。     

抗慢性粒细胞性白血病bcr/abl mRNA真核表达载体的构建

目的：构建一个含M1RNA、具有特异性抗慢性粒细胞性白血病（CML）细胞融合基因bcr/ablmRNA的真核表达载体，以用于CML的分子靶向治疗。方法：以pTK117为模板，通过PCR方法合成一个带有导引序列（GS）的M1RNA，再将PCR产物克隆到真核表达载体pNAV-1上，得到重组质粒pAVGS4，转化大肠埃希菌JM109，以碱裂解法小量抽提，酶切电泳鉴定，并测序鉴定。结果：以EcoRI和SalI酶切、1％的琼脂糖凝胶电泳显示在500和6500bp附近各有一条明亮的条带。应用PCR方法测序的结果与模板序列一致。结论：构建的pNAV-1经酶切和测序鉴定，与目标序列一致，含有核酶、具有抗bcr/abl mRNA的真核表达载体构建成功，预期可用于CML细胞株和原代细胞的实验研究。     

慢性髓性白血病急性变时染色体变化的研究

目的：探讨慢性髓性白血病（ＣＭＬ）急性变时染色体的变化及与预后的关系。方法：取２０例（ＣＭＬ病人急性变前、后外周血或骨髓液、处理后制片,Ｇｉｅｍｓａ染色,Ｇ显带或Ｒ显带,在显微镜下摄影后配对、分析。结果急性变前ｐｈ染色体阳性１８例,阴性２例。急性变后１９例附加出现了新的染色体异常。染色体数目异常超二倍体占１５／２０。附加出现的异常染色体中,＋８、＋１９、＋２２ｑ－及Ｉ（１７ｑ）中的我个或多个异常蝇     

As2O3对卵巢癌耐顺铂细胞珠的诱导凋亡作用

目的研究三氧化二砷(As2O3)对卵巢癌耐顺铂细胞株COC1/DDP的作用,探讨As2O3抑制肿瘤细胞生长的作用机制。方法①用MTT法检测不同浓度、不同作用时间的As2O3对COC1/DDP的生长抑制率。②用Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞术检测As2O3作用于COC1/DDP发生的细胞凋亡。③用cDNA基因芯片筛查与As2O3诱导凋亡发生相关的基因,并用实时定量PCR技术验证结果。结果①As2O3对COC1/DDP有生长抑制作用,其生长抑制作用随着药物浓度的升高和作用时间的延长逐渐增强。②As2O3对COC1/DDP有凋亡诱导作用,随时间延长和剂量加大,凋亡发生率增加(P<0.05)。2.0μmol/LAs2O3作用24 h开始出现凋亡细胞,72 h达高峰,96 h细胞出现坏死。③COC1/DDP细胞在As2O3作用前后上调基因15个,下调基因10个,其中凋亡相关基因Bax、p53、c-Myc的上调,以及耐药基因LRP的下调与As2O3诱导COC1/DDP发生凋亡有关。基因芯片的结果与实时定量PCR验证结果相符合。结论As2O3对卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP有生长抑制作用,发生机制与As2O3诱导细胞凋亡发生有关。促凋亡基因和耐药相关基因参与As2O3诱导卵巢癌耐药细胞株凋亡的作用。     

As2O3诱导NB4细胞凋亡的周期选择性与活性氧水平相关

目的 研究三氧化二砷（As2O3)诱导NB4细胞凋亡的周期性选择与细胞 活性氧（reactive oxygen species,ROS)水平的关系。方法 以碘化丙啶（PI）标记DNA,流式细胞仪检测As2O3单独或联用二甲萘醌（DMNQ）作用后细胞周期的变化,以7－氨基放线菌素D（7AAD）标记DNA,双氢罗丹明123（DHR）或双氢－乙酰乙酸二氯荧光黄（DCFH－DA）捕获ROS,流式细胞仪双参数法检测细胞周期不同阶段ROS水平。结果 2μmol/L As2O3可选择性诱导NB4 G2／M期细胞凋亡,DMNQ可增强这一效应;G2／M期细胞ROS水平明显高于G1、S期。结论 As2O3诱导NB4 G2／M期细胞凋亡与G2／M期ROS水平较高相关。As2O3诱导NB4细胞凋亡的周期选择性与细胞ROS水平有关。