皮肤源祖细胞促进创面神经的修复

目的 体内实验研究皮肤源祖细胞对皮肤创面神经修复的影响.方法 分离、培养昆明鼠皮肤源祖细胞,并用CM-DiI进行标记.将30只昆明鼠随机分为细胞移植组,单纯培养基组和空白组,通过尾静脉注射观察细胞在体内的迁移,检测创面的愈合率和PGP9.5的表达.结果 皮肤源祖细胞表达Fibronectin和Nestin;伤后第1、2周,皮肤源祖细胞逐渐迁移至皮肤全层,并在皮肤毛囊处亦可见;细胞移植组的创面愈合率分别为31.08% ± 1.74%,64.20% ± 1.45%明显高于单纯培养基组和空白组(23.85% ± 1.59%,49.81% ± 2.10%;22.63% ± 1.02%,49.51% ± 1.10%);细胞移植组PGP9.5荧光密度(11.60 ± 1.67,16.60 ± 1.14)明显高于单纯培养基组和空白组(P ＜ 0.05).结论 皮肤源祖细胞参与了创面愈合,同时促进了创面处的神经再生,有利于创面神经修复,可能成为修复神经损伤的种子细胞.     

复方茶多酚软膏对放射性皮炎大鼠伤口愈合和表皮生长因子表达的影响

目的:探讨复方茶多酚软膏对大鼠放射性皮炎创面愈合及表皮生长因子(EGF)表达的影响。 方法: 通过 60Co γ射线照射建立大鼠放射性皮炎模型。照射后的大鼠随机分成两组: 对照组和实验组。实验组采用常规护理后用复方茶多酚软膏外涂辐射伤口区,每日两次;对照组与实验组治疗相同,但涂抹不含茶多酚和黄芩苷的凡士林软膏。通过放射免疫法测定伤后5、10、20、40 d时相点创面组织的EGF表达、观测创面愈合率和愈合时间,并与简单伤口组比较。 结果: ① 实验组和对照组创面组织EGF表达均弱于简单皮肤伤口组;实验组伤后10和20 d时创面组织EGF表达明显高于对照组,差异有显著性(P<0.05);实验组EGF表达高于对照组, 差异有显著性意义(P<0.05)。② 实验组在10、20 d时相点的创面愈合率明显高于对照组,差异有显著性(P<0.05),且10 d时相点差异最为显著(P<0.05);实验组愈合时间19.272.56 d明显短于对照组的愈合时间28.623.10 d,实验组和对照组的愈合时间均明显长于简单皮肤伤口组(8.322.92 d)。 结论:放射性皮炎与简单皮肤切口损失不同,创面恢复期创面组织EGF呈弱表达,愈合缓慢。复方茶多酚软膏外涂对大鼠放射性皮炎的愈合有促进作用,其机制可能与促进创面组织EGF的表达有关。     

壳多糖与外源性碱性成纤维细胞生长因子联合应用修复创面愈合的评估

目的：壳多糖具有抗菌消炎和收敛作用。碱性成纤维细胞生长因子具有促进血管生成、促进神经生长等功能，是创伤愈合和上皮形成的重要调节物。实验联合应用壳多糖和碱性成纤维细胞生长因子，观察其对创面愈合的影响。 方法：实验于2006-04/2007-01在河北省人民医院实验室及河北医科大学第四附属医院实验室完成。实验室标准均为生物安全二级(BSL-2)。①实验材料：48只雄性健康Wistar大鼠由河北医科大学实验动物中心提供，体质量200~250 g，清洁级，实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法：以切割法制备大鼠创伤模型，造成全层皮肤创面。将48只Wistar大鼠随机分为对照组、壳多糖组、生长因子组、壳多糖+生长因子组,并分别给予蒸馏水、100 g/L壳多糖、1 000 IU/mL碱性成纤维细胞生长因子、100 g/L壳多糖+1 000 IU/mL碱性成纤维细胞生长因子药液治疗，每组12只。③实验评估：以创面愈合时间和速率、新生毛细血管、炎症细胞和细胞渗出的变化以及血管内皮生长因子在创面组织中的表达来评价修复效果。 结果： 48只大鼠全部进入结果分析。①壳多糖+生长因子组创面愈合时间最快（P < 0.01）。②与其他3组比较，壳多糖+生长因子组第3天有较多毛细血管生成，第14天成纤维细胞排列整齐。③壳多糖+生长因子组血管内皮生长因子表达在术后第10天达到最高峰，至伤后第14天仍保持高水平，且明显高于其他3组（P < 0.01）。 结论：壳多糖+碱性成纤维细胞生长因子促进伤口愈合，缩短愈合过程，提高愈合质量，两者联合应用可更大限度发挥各自功效。     

糖尿病大鼠皮肤伤口愈合过程中结缔组织生长因子的表达*★

背景：结缔组织生长因子表达在糖尿病伤口愈合过程中的变化及意义少见报道。 目的：观察链脲佐菌素诱导的糖尿病模型大鼠复合创伤修复过程中结缔组织生长因子表达的变化及意义。 方法：将Wistar大鼠随机分成正常对照组和模型组，3周后将各组动物复合背部1.3 cm2全厚皮切除形成伤口。 结果与结论：链脲佐菌素诱发的糖尿病模型大鼠伤口愈合明显延迟，创伤后第4，8，12 和16天创面愈合率明显低于正常对照组(P < 0.01)。术后第8天，糖尿病组大鼠肉芽组织成熟度和新生血管形成指标得分均低于正常对照组(P < 0.01)。正常对照组的结缔组织生长因子蛋白表达呈时间递增趋势，而糖尿病组的结缔组织生长因子表达在整个创面愈合过程的后期(第12天后)均明显低于正常对照组(P < 0.01)。结果提示，糖尿病大鼠皮肤伤口愈合后期创面组织结缔组织生长因子表达相对正常对照组减少可能是导致创面愈合迟缓的重要原因之一。     

腺肌病小鼠子宫神经支配与神经生长因子、炎症及血管生成的关系

背景：子宫腺肌病是妇科常见病,常表现为周期反复的、剧烈的盆腔痛。神经可塑性变化是子宫内膜异位症疼痛的重要影响因素之一,但对子宫腺肌病而言却知之甚少。方法：140d龄腺肌病小鼠与同龄对照小鼠各20只,取全子宫。首先应用免疫组织化学方法检测子宫蛋白基因产物9.5（PGP9.5）、P物质（SP）的表达,以显示全部神经纤维与感觉神经纤维;检测补体31（CD31）的表达,以显示血管并计算内膜及肌层组织中的微血管密度（MVD）。其次应用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测子宫中神经生长因子（NGF）、高亲和力的酪氨酸激酶受体（trkA）、p75神经营养因子受体（p75NTR）、缓激肽受体1(BKR-1)和2(BKR-2)、P物质受体（神经激肽1受体,NK1-R）的基因表达。最后,应用免疫印迹的方法检测NGF-β的蛋白表达。结果：腺肌病小鼠子宫内膜及肌层PGP9.5阳性的神经纤维及子宫内膜层 SP阳性的神经纤维明显多于对照组（分别P<0.01、P<0.05、P<0.01）。但各组SP/PGP9.5阳性神经纤维没有差异。腺肌病小鼠子宫肌层MVD明显高于无腺肌病小鼠（P<0.01）。腺肌病小鼠子宫NGF及其受体trkA、p75NTF,BKR-1和NK1-R的mRNA表达均高于对照组(BKR-1,P<0.05;其余,P<0.01)。腺肌病小鼠子宫NGF-β的蛋白表达高于对照组（P<0.01)。结论：腺肌病小鼠子宫神经植入增多可能是引起腺疾病疼痛的重要因素之一。NGF,炎症及血管生成可能与腺肌病子宫神经植入的改变有关。     

基因枪转人碱性成纤维细胞生长因子基因促进深Ⅱ度烧伤创面的愈合

背景: 大量的体内和体外实验已证实,碱性成纤维细胞生长因子对不同组织和细胞具有广泛作用,可加快创面愈合进程。 目的：观察基因枪转人碱性成纤维细胞生长因子基因促进深Ⅱ度烧伤创面愈合的效果和可行性。 设计、时间及地点：完全随机设计,观察实验,于2007-12/2008-10在解放军第二军医大学长海医院全军烧伤中心实验室完成。 材料： SD清洁级大鼠,体质量200~250 g,雌雄不拘。 方法：将天然人碱性成纤维细胞生长因子基因重组优化,以pCI-neo为载体构建重组人碱性成纤维细胞生长因子基因高效真核表达载体pCI-neo-bFGF,并转染人胚肾细胞293T细胞,转染后以dot blot 和western blot检测碱性成纤维细胞生长因子的表达。利用基因枪技术对SD大鼠深Ⅱ度烧伤创面模型进行转基因,以转染pCI-neo-bFGF为实验组,以转染空载体pCI-neo为对照组。 主要观察指标：记录创面愈合时间,在转基因后24 h,48 h,96 h,7 d,10 d和14 d测定创面组织羟脯氨酸和胶原酶Ⅰ水平,评价创面愈合情况。 结果：重组构建的pCI-neo-bFGF经转染人胚肾细胞293T细胞,dot blot和western blot检测结果显示,构建的pCI-neo-bFGF表达载体可表达人碱性成纤维细胞生长因子,荧光显微镜下合成基因的表达水平明显高于天然基因表达;基因枪转基因实验结果显示,实验组创面愈合时间为(13.00±1.31) d,对照组为(14.75±1.28) d,两组相比较差异有显著性意义(P < 0.05);两组羟脯氨酸及胶原酶Ⅰ水平均于基因枪转染后48 h即伤后第5天达到高峰,随后逐渐下降至一定水平后维持,实验组各时间点羟脯氨酸水平均高于对照组(P < 0.05,P < 0.01);实验组转基因后48 h和96 h胶原酶Ⅰ水平明显高于对照组(P < 0.01)。 结论：基因枪转人碱性成纤维细胞生长因子基因可以缩短创面愈合时间,增加创面愈合期间组织羟脯氨酸和胶原酶Ⅰ水平,加快深Ⅱ度烧伤创面愈合进程。     

重组人血小板源性生长因子与胰岛素联合局部应用对老龄糖尿病大鼠烧伤创面的作用★

目的：文献报导单一局部应用重组人血小板源性生长因子或胰岛素对糖尿病创面的愈合具有促进作用。拟验证局部联合应用重组人血小板源性生长因子和胰岛素对老龄糖尿病大鼠烧伤创面愈合的作用。 方法：实验于2006-10/2007-05在甘肃省中医学院SPF级动物实验室完成。①实验材料及分组：SPF级健康Wistar老龄大鼠88只，年龄1年以上，雌雄不限,体质量300~350 g。随机分为烫伤对照组20只，糖尿病烫伤对照组20只，糖尿病重组人血小板源性生长因子对照组16只，糖尿病胰岛素对照组16只，糖尿病重组人血小板源性生长因子、胰岛素治疗组16只。实验用鱼精蛋白锌胰岛素为上海第一生化药业有限公司产品；重组人血小板源性生长因子凝胶剂为北京金赛狮生物制药技术开发有限公司产品。②实验过程：除烫伤对照组外，其他组大鼠通过高脂、高蛋白、高糖饲养后腹腔注射链尿佐菌素，建立老龄Ⅱ型糖尿病动物模型，并以高脂、高蛋白、高糖饲养。8周后各组给予深Ⅱ度烫伤。③实验评估：于伤后第1，3，7，14，21天时相点测量创面面积，计算创面愈合率；观察组织形态学、检测创面羟脯氨酸含量；采用免疫组织化学检测血管内皮细胞生长因子、CD34的表达；计算微血管密度。实验过程对动物的处理符合动物伦理学标准。 结果：与糖尿病烫伤对照组、糖尿病重组人血小板源性生长因子对照组、糖尿病胰岛素对照组相比，糖尿病重组人血小板源性生长因子、胰岛素治疗组老龄大鼠创面愈合率加快（P < 0.05），创面上皮化加速，羟脯氨酸含量增加（P < 0.05），血管内皮细胞生长因子、CD34阳性表达，微血管密度值增加（P < 0.05）。 结论： 局部联合应用重组人血小板源性生长因子和胰岛素可通过协同作用促创面胶原的合成，增加创面的血管形成，加速老龄性糖尿病大鼠创面愈合 。     

钾通道Kv1.2与致痫大鼠发病相关性的研究

目的通过检测戊四唑(PTZ)致痫大鼠钾通道Kv1.2蛋白表达,探讨钾通道Kv1.2与癫痫发病的相关性。方法 40只SD大鼠分成实验组30只和正常对照组10只。实验组30只大鼠通过腹腔注射PTZ建立全身强直阵挛发作大鼠癫痫模型,取成功致痫鼠24只均分成3组,分别于致痫后3个时间段(1h、24h、48h)取脑组织。用免疫组化法和Western blot法检测大鼠钾通道Kv1.2蛋白。结果实验组大鼠海马区钾通道Kv1.2蛋白表达水平在致痫后3个时间段(1h、24h、48h)均明显低于对照组(P0.05)。实验组大鼠海马区钾通道Kv1.2蛋白表达水平在致痫后3个时间段(1h、24h、48h)之间无显著性差异(P0.05)。结论大鼠海马区钾通道Kv1.2表达的减少与全身强直阵挛发作大鼠癫痫发病密切相关。     

电压门控钾通道Kv1.1在戊四唑致痫大鼠中的表达

目的通过检测戊四唑(PTZ)致痫大鼠钾通道Kv1.1蛋白表达,探讨钾通道Kv1.1与癫痫发病的相关性。方法40只SD大鼠分成实验组30只和正常对照组10只。实验组30只大鼠通过腹腔注射PTZ建立全身强直-阵挛发作大鼠癫痫模型,取成功致痫鼠24只均分成3组,分别于致痫后3个时间段(1h、24h、48h)取脑组织。用免疫组化法和Westernblot法检测大鼠钾通道Kv1.1蛋白。结果实验组大鼠海马区钾通道Kv1.1蛋白表达水平在致痫后3个时间段(1h、24h、48h)均明显低于对照组(P0.05),但3个时间段之间钾通道Kv1.1蛋白表达水平差异无统计学意义(P0.05)。结论大鼠海马区钾通道Kv1.1表达的减少与全身强直阵挛发作大鼠癫痫发病密切相关。     

羊膜负载表皮干细胞促进糖尿病大鼠创面的愈合

背景：表皮干细胞作为皮肤组织的特异性干细胞,具有强大增殖及多向分化潜能,与创面修复紧密相关。近期研究表明糖尿病皮肤创面愈合过程中表皮干细胞数量减少、活性降低是导致其创面难愈的重要原因。 目的：观察表皮干细胞在糖尿病大鼠创面愈合中的作用。 方法：分离培养及鉴定SD大鼠表皮干细胞,并以BrdU标记。建立糖尿病SD大鼠创面模型,抽签法随机分为3组：表皮干细胞组创面移植羊膜负载BrdU标记的表皮干细胞;羊膜组创面移植羊膜;空白对照组创面未给予干预。 观察创面愈合情况、计算创面愈合率,苏木精-伊红及免疫组织化学SP法检测创面愈合组织中BrdU及增殖细胞核抗原表达。用图像分析软件测量阳性细胞积分吸光度平均值。 结果与结论：表皮干细胞组治疗后7d创面缩小明显,治疗后14 d创面基本愈合,创面愈合率明显高于羊膜组、空白对照组 (P < 0.01)。表皮干细胞组创面及新生表皮中可见BrdU阳性细胞,而另两组皮肤创面组织中始终未见BrdU阳性细胞。各组创面组织中可见增殖细胞核抗原阳性细胞表达,但表皮干细胞组的阳性细胞积分吸光度平均值与羊膜组、空白对照组比较差异有显著性意义(P < 0.01)。结果证实糖尿病大鼠创面愈合过程中表皮干细胞与创缘表皮移行、创面的上皮化有直接关联,可有效促进其创面愈合。     

Stress and wound healing

Over the past decade it has become clear that stress can significantly slow wound healing: stressors ranging in magnitude and duration impair healing in humans and animals. For example, in humans, the chronic stress of caregiving as well as the relatively brief stress of academic examinations impedes healing. Similarly, restraint stress slows healing in mice. The interactive effects of glucocorticoids (e.g. cortisol and corticosterone) and proinflammatory cytokines [e.g. interleukin-1beta (IL-1beta), IL-1alpha, IL-6, IL-8, and tumor necrosis factor-alpha] are primary physiological mechanisms underlying the stress and healing connection. The effects of stress on healing have important implications in the context of surgery and naturally occurring wounds, particularly among at-risk and chronically ill populations. In research with clinical populations, greater attention to measurement of health behaviors is needed to better separate behavioral versus direct physiological effects of stress on healing. Recent evidence suggests that interventions designed to reduce stress and its concomitants (e.g., exercise, social support) can prevent stress-induced impairments in healing. Moreover, specific physiological mechanisms are associated with certain types of interventions. In future research, an increased focus on mechanisms will help to more clearly elucidate pathways linking stress and healing processes.     

Social facilitation of wound healing

It is well documented that psychological stress impairs wound healing in humans and rodents. However, most research effort into influences on wound healing has focused on factors that compromise, rather than promote, healing. In the present study, we determined if positive social interaction, which influences hypothalamic-pituitary-adrenal (HPA) axis activity in social rodents, promotes wound healing. Siberian hamsters received a cutaneous wound and then were exposed to immobilization stress. Stress increased cortisol concentrations and impaired wound healing in isolated, but not socially housed, hamsters. Removal of endogenous cortisol via adrenalectomy eliminated the effects of stress on wound healing in isolated hamsters. Treatment of isolated hamsters with oxytocin (OT), a hormone released during social contact and associated with social bonding, also blocked stress-induced increases in cortisol concentrations and facilitated wound healing. In contrast, treating socially housed hamsters with an OT antagonist delayed wound healing. Taken together, these data suggest that social interactions buffer against stress and promote wound healing through a mechanism that involves OT-induced suppression of the HPA axis. The data imply that social isolation impairs wound healing, whereas OT treatment may ameliorate some effects of social isolation on health.     

Sex hormones and mucosal wound healing

Wound healing studies, which have chiefly examined dermal tissues, have reported a female advantage in healing rates. In contrast, our laboratory recently demonstrated women heal mucosal wounds more slowly than men. We hypothesized sex hormones influence wound healing rates, possibly through their modulating effects on inflammation. This study involved 329 younger subjects aged 18–43 (165 women, 164 men) and 93 older subjects aged 50–88 (60 women, 33 men). A 3.5 mm diameter wound was created on the hard oral palate and videographed daily to assess wound closure. Blood collected at the time of wounding was used to assess circulating testosterone, progesterone and estradiol levels, and in vitro cytokine production in response to LPS. No strong associations were observed between healing times and estradiol or progesterone levels. However, in younger subjects, lower testosterone levels related to faster wound closure. Conversely, in older women higher testosterone levels related to (1) lower inflammatory responses; and (2) faster healing times. No such relationships were seen in older men, or in women taking oral contraceptives or hormone replacement therapy [HRT]. Older women (50–54 years) not yet experiencing menopause healed similarly to younger women and dissimilarly from age-matched post-menopausal women. This suggests that the deleterious effects of aging on wound healing occur secondary to the effects of menopause. Supporting this, there was evidence in post-menopausal women that HRT augmented wound closure. Overall, this study suggests that human mucosal healing rates are modulated by testosterone levels. Based upon when between-group differences were observed, testosterone may impact upon the proliferative phase of healing which involves immune processes such as re-epithelialization and angiogenesis.