全蝎纯化液对凝血酶诱导血管内皮细胞释放NO＼TFPI及表达TF的影响

目的探讨全蝎纯化液对凝血酶诱导血管内皮细胞释放一氧化氮（N0）、组织因子途径抑制物（TFPI）及表达组织因子（TF）的影响。方法对传代培养的人脐静脉细胞（HUVEC）（2代～3代）分别给予不同的处理,取上清液测定N0、TFPI,取细胞冻融液测TF活性。结果与空白对照组比较,凝血酶组能明显抑制血管内皮细胞释放TFPI（P〈0．01）,与凝血酶纽比较,全蝎纯化液各剂量组能拮抗TFPI的降低（P〈0．05）。凝血酶促进血管内皮细胞表达TF,较对照组明显增高（P〈0．01）,全蝎纯化各剂量组较凝血酶组则明显降低（P〈0．01）。全蝎纯化液各剂量组促进血管内皮细胞释放N0,较对照组、凝血酶组明显增高（P〈0．01）。结论全蝎纯化液能抑制凝血酶诱导血管内皮细胞表达TF,可拮抗凝血酶抑制TFPI释放,促进血管内皮细胞释放N0,提示全蝎纯化液对凝血酶诱导血管内皮细胞的损伤具有保护作用。     

川芎嗪对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的观察川芎嗪（Tetramethylpyrazine,TMP）对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell,VSMC）增殖的影响及可能机制。方法酶消化法培养兔胸主动脉VSMC。WST-8比色法、流式细胞仪及免疫细胞化学测定TMP对凝血酶诱导的VSMC增殖、细胞周期及c-fos表达的影响。结果TMP浓度依赖性地抑制凝血酶诱导的VSMC增殖,20mg/L TMP能够抑制凝血酶诱导的VSMC G0/G1期向S期的转变及c-fos表达。结论TMP浓度依赖性地抑制凝血酶诱导的VSMC增殖、机制与其抑制c-fos表达和抑制VSMC细胞周期G0/G1期向S期的转变有关。     

水蛭提取液对凝血酶诱导血管内皮细胞释放TFPI及表达TF的影响

目的：探讨水蛭提取液对凝血酶诱导血管内皮细胞（VEC）释放组织因子途径抑制物（TFPI）及表达组织因子（TF）的影响。方法将体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）随机分为5组,分别给予不同处理,培养12 h后,取上清液测定 TFPI活性,取细胞冻融液测定TF活性。结果凝血酶可促进血管内皮细胞表达TF,较空白对照组明显增高（P〈0.01）,水蛭各剂量组与凝血酶刺激组比较血管内皮细胞表达TF明显降低（P〈0.01）。与空白对照组比较,凝血酶刺激组可抑制血管内皮细胞释放 TFPI（P〈0.01）,水蛭各剂量组与凝血酶刺激组比较能明显促进血管内皮细胞释放 TFPI（P〈0.01）。结论水蛭提取液能抑制凝血酶诱导血管内皮细胞表达TF,并对抗凝血酶抑制VEC释放TFPI,其作用机制可能与水蛭抗凝、抗血栓形成以及对心脑血管疾病的治疗作用有关。     

山莨菪碱对血管内皮细胞表达组织因子的影响

通过研究山莨菪碱对内毒素脂多糖致血管内皮细胞组织因子表达的影响，探讨山莨菪碱抗血栓形成以及治疗感染性休克的机制。采用酶消化法培养人脐静脉内皮细胞；用一步凝固法检测培养的内皮细胞组织因子活性；Northem blot检测内皮细胞组织因子mRNA的表达；为了评估上述作用是否通过核因子κB途径转导，采用电泳迁移变动检测法检测培养的内皮细胞核提取物核因子κB DNA结合活性。结果发现，内毒素脂多糖使内皮细胞组织因子活性及其mRNA表达显著增强；加入山莨菪碱后，内毒素脂多糖的这种作用明显减弱，并与山莨菪碱呈量效关系。且山莨菪碱能完全阻止内毒素脂多糖致内皮细胞核提取物核因子κB DNA结合活性。结果提示，山莨菪碱治疗感染性休克的机制之一是通过拮抗内毒素脂多糖致血管内皮细胞组织因子的表达，且这种拮抗作用可能通过、至少部分通过核因子κB途径转导。     

川芎嗪抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用

目的观察川芎嗪注射液对血小板源性生长因子(PDGF)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)异常增殖过程中黏附分子信号传递的影响,以明确川芎嗪活血化瘀作用的新靶点。方法采用贴块法培养VSMC,建立PDGF诱导的VSMC增殖模型,用细胞计数法观察不同浓度川芎嗪对VSMC增殖的抑制作用。用Western印迹方法分别检测各组细胞间黏附分子(ICAM-1)及黏附分子信号传递蛋白——整合素耦联激酶(ILK)的表达变化及川芎嗪影响。结果与PDGF刺激组相比,川芎嗪呈剂量依赖性地抑制PDGF诱导的细胞增生,并显著降低ICAM-1〔仅相当于刺激组的44%,(P0.05)〕及ILK〔仅相当于刺激组的62%,(P0.05)〕的表达。结论川芎嗪通过抑制黏附信号传递及黏附分子的表达而发挥抗VSMC增生的作用。     

反基因寡核苷酸抑制内皮细胞组织因子表达的体外研究

目的：探讨形成三股螺旋的寡核苷酸(triple helix-forming oligonucleotide，TFO)对内皮细胞组织因子(tissue factor，TF)基因表达的抑制作用。方法：将针对TF基因启动子区的3个Spl/Egr-1位点合成的TFO，与含有人TF基因5’上游序列-244/ 122bp的荧光素酶报告基因质粒PL37，经脂质体转染内皮细胞，接受12dyn/cm^2切应力作用后，检测及分析报告基因活性。结果：反向硫代磷酸酯TFO(antiprarallel-phosphorothioated TFO，apTFO)显抑制荧光素酶表达．抑制率高达70.3％。结论：apTFO能有效抑制切应力诱导的TF基因表达。     

凝血酶对血管内皮细胞核因子κB活化及基质金属蛋白酶2表达的影响

研究凝血酶是否通过激活核因子κB信号传导途径，诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞上调基质金属蛋白酶2表达，以及重组水蛭素对该途径是否有拮抗作用。体外培养人脐静脉内皮细胞，用免疫细胞化学和免疫印迹法分析核因子κB活化时由细胞浆至细胞核的动态改变，用逆转录聚合酶链反应法评价基质金属蛋白酶2mRNA的表达。结果发现，凝血酶诱导脐静脉内皮细胞后15min即有核因子κB的活化，30min核内大量活化；凝血酶诱导脐静脉内皮细胞表达基质金属蛋白酶2mRNA，较高表达在6～24h。重组水蛭素可以抑制该过程。结果提示，通过参与核因子κB激活传导信号途径，凝血酶诱导脐静脉内皮细胞上调基质金属蛋白酶2mRNA表达。水蛭素可以有效地抑制凝血酶诱导脐静脉内皮细胞上调基质金属蛋白酶2表达，但不能完全抑制核因子κB的活化。     

凝血酶促血管平滑肌细胞增殖的信号转导研究进展

血管平滑肌细胞异常增殖在动脉粥样硬化和血管成形术后狭窄等血管增殖性疾病的发病机制中起着重要作用.近来研究表明,凝血酶具有生长激素样作用,参与了血管增殖性疾病的发展.本文就凝血酶及其受体的特性,促血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的信号转导作一综述.     

川芎嗪对百草枯中毒大鼠肾组织核因子-кB及iNOS表达的影响

目的探讨川芎嗪对急性百草枯中毒大鼠肾损伤时核因子-κB（NF-κB）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）活性的影响。方法将50只SD大鼠随机分成空白组、阴性对照组、阳性对照组、川芎嗪低剂量组和川芎嗪高剂量组,对肾组织标本进行组织病理学检查,同时测定肾组织NF-κB和iNOS活性。结果与阴性对照组相比,川芎嗪低剂量组肾组织病理显示肾间质充血明显减轻,NF—κB和iNOS也降低（P〈0．01）;而川芎嗪高剂量组无明显改善。结论NF-κB及iNOS在百草枯所致大鼠肾损伤中起重要作用,川芎嗪能降低肾组织NF-κB及iNOS水平,减轻百草枯中毒大鼠的肾组织损伤。     

切应力对内皮细胞组织因子表达上调的影响及其作用机制

研究切应力对内皮细胞组织因子表达的影响及其作用机制。利用原位杂交和免疫组织化学观察组织因子基因、Sp1和Egr 1的mRNA转录及蛋白表达。切应力作用采用平行板流动腔系统给予。结果发现 ,在静置培养内皮细胞中 ,组织因子基因mRNA及蛋白表达极低 ,促凝活性也低。Sp1蛋白表达在胞核较高 ,Sp1mRNA表达在胞浆较高。Egr 1在胞核和胞浆均无表达或表达极低。在切应力 (1.2、2 .4及 4 .8Pa)作用后 ,内皮细胞胞浆组织因子基因mRNA转录和蛋白合成及组织因子促凝活性升高 ,与对照组比较均有显著性差异 (P <0 .0 5 )。Sp1和Egr 1基因mRNA转录和蛋白合成均有增加 (P <0 .0 5 ) ,但以Egr 1增加更显著 (P <0 .0 5 ) ,其变化趋势与组织因子基因mRNA转录、组织因子基因蛋白合成、组织因子促凝活性的变化趋势相同。结果提示 ,切应力是内皮细胞组织因子基因表达上调的触发因素之一 ,其触发机制与转录因子Egr 1和Sp1介导有关。     

川芎嗪对血管平滑肌细胞增殖及表达c-myc基因的影响

为观察川芎嗪对血管平滑肌细胞增殖的影响,在建立凝血酶诱导的体外培养的兔主动脉血管平滑肌细胞增殖模型后,应用免疫细胞化学方法观察川芎嗪对血管平滑肌细胞表达ｃ－ｍｙｃ基因蛋白的影响;并用流式细胞术观察了血管平滑肌细胞增殖周期的变化。结果发现,川芎嗪能够显著抑制凝血酶诱导的血管平滑肌细胞ｃ－ｍｙｃ基因蛋白表达增加,使血管平滑肌处于ＧＩ期的细胞数显著增多,Ｓ期和Ｇ２＋Ｍ期的细胞数显著减少。结果提示,川芎嗪对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖有显著抑制作用,其机制与抑制ｃ－ｍｙｃ基因表达有关。     

醛固酮对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的醛固酮对人脐静脉内皮细胞增殖的影响及其机制。方法应用MTT法测试细胞的生长曲线,检测不同浓度的醛固酮对人脐静脉内皮细胞的增殖,流式细胞仪检测醛固酮对人脐静脉内皮细胞的凋亡,半定量RT-PCR及Western印迹分别检测人脐静脉内皮细胞的血管内皮生长因子mRNA水平及蛋白水平的表达。结果①MTT比色法显示,醛固酮对人脐静脉内皮细胞增殖具有抑制作用且呈浓度依赖性;②当醛固酮浓度增加到800μg/L后,其增殖抑制率不再升高,而此浓度时人脐静脉内皮细胞的凋亡率达到峰值的26.5%±3.3%;③经过醛固酮处理,人脐静脉内皮细胞的血管内皮生长因子mRNA及蛋白水平的表达量均显著下降。结论醛固酮通过降低人脐静脉内皮细胞的血管内皮生长因子表达抑制人脐静脉内皮细胞增殖并促进人脐静脉内皮细胞凋亡。     

凝血酶诱导CBP高表达刺激大鼠血管平滑肌细胞增殖的研究

目的:探讨凝血酶诱导大鼠CBP高表达影响大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的作用机制.方法:采用10-3、10-2、0.1、1、10 U/ml的凝血酶干预体外培养的VSMCs 30min.RT-PCR法、蛋白印记法分别检测rCBPmRNA和蛋白质的表达变化.流式细胞技术检测细胞周期,评价细胞增殖能力.结果:凝血酶可在...     

血管内皮生长因子对过氧化氢诱导的内皮细胞凋亡的影响及其机制

目的研究血管内皮生长因子对过氧化氢诱导的血管内皮细胞凋亡的影响,同时检测凋亡相关基因Bcl-2 mRNA与Fas mRNA表达的变化。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,随机分成对照组、过氧化氢组和过氧化氢 血管内皮生长因子组,12 h后,采用原位末端标记法和流式细胞仪分别观察各组细胞的凋亡数和凋亡率,通过逆转录聚合酶链反应观察各组细胞中凋亡相关基因Bcl-2 mRNA与Fas mRNA表达的变化。结果过氧化氢组凋亡细胞数(27.83±2.14)明显高于对照组(2.50±1.05)(P<0.01)和过氧化氢 血管内皮生长因子组(13.00±2.10)(P<0.01)。过氧化氢组细胞凋亡率(14.17%±0.45%)明显高于对照组(1.55%±0.87%)(P<0.01)和过氧化氢 血管内皮生长因子组(5.69%±0.38%)(P<0.01)。与过氧化氢组比较,过氧化氢 血管内皮生长因子组Fas mRNA表达明显减少(40.67%±2.16%比94.50%±3.45%,P<0.01),而Bcl-2 mRNA表达明显增加(60.33%±1.75%比23.17%±1.17%,P<0.01)。结论血管内皮生长因子能拮抗过氧化氢诱导的内皮细胞凋亡,其抗凋亡的机制可能与上调Bcl-2 mRNA表达与下调Fas mRNA表达有关。     

血小板CD40配体对内皮细胞表达组织因子的影响

目的探讨活化血小板CD40配体对内皮细胞表达组织因子、组织因子抑制物的影响及其分子机制。方法建立活化血小板与人脐静脉内皮细胞的共孵育体系(细胞比例10∶1),观察内皮细胞组织因子及其抑制物表达的变化,以及阻断CD40-CD40配体相互作用对上述效应的影响。结果活化血小板与脐静脉内皮细胞共育8 h后,内皮细胞组织因子mRNA及蛋白表达显著增高,而应用抗CD40配体的抗体和抗CD40抗体可分别抑制其表达(P<0.05)。但是组织因子抑制物mRNA无明显变化。结论活化血小板可通过其表达的CD40配体分子诱导内皮细胞产生组织因子,但并不能增强内皮细胞组织因子抑制物的表达,此效应对不稳定性斑块的形成可能具有促进作用。     

脂质体介导血管内皮生长因子基因在内皮细胞的稳定表达

建立稳定表达血管内皮生长因子的人脐静脉内皮细胞系 ,为其在组织化工程血管的应用奠定基础。将真核表达载体PCD2 VEGF1 2 1 用阳离子脂质体介导 ,转染人脐静脉内皮细胞系细胞 ,G4 18筛选 ,获得G4 18抗性单克隆细胞 ,扩增后分别用逆转录聚合酶链反应、免疫组织化学及血管通透性实验检测血管内皮生长因子的转录、蛋白质的表达及其生物学活性。结果发现 ,逆转录聚合酶链反应检测出了转录血管内皮生长因子的稳定转染细胞克隆 ,该单克隆细胞的免疫组织化学检测血管内皮生长因子蛋白质表达呈阳性 ,血管通透性实验和细胞生长实验发现其表达产物具有生物学活性 ,而作为对照的转空白质粒细胞和未转染细胞上述实验结果皆为阴性。结果表明 ,该方法成功建立了稳定表达血管内皮生长因子的人脐静脉内皮细胞系单克隆细胞     

凝血酶对大鼠血管平滑肌细胞血小板源性生长因子基因表达的影响

为了研究凝血酶对血管平滑肌细胞血小板源性生长因子基因表达的影响 ,探讨凝血酶刺激血管平滑肌细胞增殖的机制 ,通过培养SD大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞 ,以3 H -TdR掺入率作为评价凝血酶促血管平滑肌细胞增殖的指标 ;用反转录聚合酶链反应检测凝血酶对血管平滑肌细胞血小板源性生长因子A链mRNA表达的影响 ;用Dotblot检测凝血酶对血管平滑肌细胞血小板源性生长因子B链mRNA表达的影响。结果表明 ,凝血酶促血管平滑肌细胞增殖呈浓度依赖性和时间依赖性 ,血管平滑肌细胞在基础状态下可检测到血小板源性生长因子A和B链mRNA表达 ,凝血酶刺激血管平滑肌细胞后 2h血小板源性生长因子A链mRNA表达开始增加 ,4～ 6h达高峰 ,持续 12h ,2 4～ 48h恢复正常。提示凝血酶对血管平滑肌细胞具有较强的促增殖作用 ,凝血酶促血管平滑肌细胞的增殖作用部分可能是通过诱导血管平滑肌细胞血小板源性生长因子A链mRNA的表达来实现的。     

形成三螺旋DNA的寡核苷酸抑制内皮细胞组织因子基因的表达

为探讨形成三螺旋DNA的寡核苷酸是否对切应力诱导内皮细胞组织因子基因表达有抑制作用 ,针对内皮细胞组织因子基因启动子内切应力反应元件 ,设计反向脱氧寡核苷酸序列T2 1GTa,采用固相亚磷酰胺三酯固相法合成脱氧寡核苷酸。在脱氧寡核苷酸的 3’末端进行硫代磷酸酯修饰。应用电泳迁移分析观察寡核苷酸和硫代脱氧寡核苷酸的亲和性。在ECV30 4内皮细胞株观察γ 32P标记硫代磷酸酯三螺旋DNA寡核苷酸的细胞摄取及其对组织因子基因表达的影响。结果发现 ,硫代磷酸酯寡核苷酸T2 1GTa ps与靶序列能形成三链DNA ,其Kd值为 3 .6× 1 0 1 0 mol L。在内皮细胞株ECV30 4细胞 ,三螺旋DNA寡核苷酸 ps (T2 1GTa ps)的细胞吸收率为 1 1 .65 % ,主要分布在核沉淀 ,约占吸收总量的 77.2 5 % ,显著降低内皮细胞组织因子基因mRNA表达及组织因子蛋白合成的平均吸光度值 ,显著降低组织因子的促凝活性。此结果提示 ,硫代磷酸酯寡核苷酸T2 1GTa ps对内皮细胞组织因子基因表达具有较好的抑制作用